微小RNA-452-5p及SRY盒相关基因7在食管癌组织中的表达水平及与临床病理参数和预后的关系研究

目的 探讨微小RNA-452-5p(miR-452-5p)及SRY盒相关基因7(SOX7)在食管癌组织中的表达水平以及临床病理参数和预后的关系。方法 选取2017年6月至2019年5月期间我院收治的106例食管癌患者作为研究对象。检测食管癌患者miR-452-5p、SOX7 mRNA的表达,分析癌组织中miR-452-5p、SOX7 mRNA表达与临床病理参数的关系,采用Kaplan-Meier法进行生存分析,并采用COX单因素和多因素分析影响食管癌预后的危险因素。结果 相比于癌旁组织,癌组织中的miR-452-5p表达水平更高(P<0.05),SOX7 mRNA表达水平更低(P<0.05)。相比于肿瘤Ⅰ~Ⅱ期、无淋巴结转移、浸润深度(Tis~T2)食管癌患者,miR-452-5p在有淋巴结转移、肿瘤分期Ⅲ期、浸润深度(T3~T4)癌组织中有更高的表达水平,SOX7 mRNA表达水平更低(P<0.05)。Kaplan-Meier生存曲线分析显示,患者3年总生存率miR-452-5p高表达组为30.4%(17/56),miR-452-5p低表达组为54.0%(27/50),累积总生存率差异有统计学意义(Log-rankχ^(2)=6.082,P=0.014);SOX7 mRNA高表达组和SOX7 mRNA低表达组患者患者3年总生存率分别为53.7%(29/54)、28.8%(15/52),累积总生存率差异有统计学意义(Log-rank χ^(2)=6.742,P=0.009)。COX单因素回归分析结果显示,miR-452-5p、SOX7 mRNA、肿瘤分期、浸润深度、淋巴结转移与食管癌预后有关。COX多因素回归分析结果显示,影响食管癌预后的独立因素有淋巴结转移、SOX7 mRNA低表达、肿瘤分期Ⅲ期、miR-452-5p高表达、浸润深度(T3~T4)。结论 miR-452-5p在食管癌组织中呈高表达、SOX7 mRNA在食管癌组织中呈低表达,其水平与淋巴结转移、肿瘤分期、浸润深度有关,且密切关联食管癌患者预后。

自噬相关基因5在人恶性胸膜间皮瘤中的表达及其意义

目的探讨自噬相关基因5(ATG5)在人恶性胸膜间皮瘤(MPM)细胞和组织中的表达情况,分析ATG5与MPM患者临床病理参数和预后的相关性。方法实时定量PCR(RT-qPCR)和Western blotting检测正常人胸膜间皮细胞和MPM细胞、非MPM胸膜间皮组织和MPM组织中ATG5的表达差异。应用TCGA数据库分析ATG5与MPM患者临床病理特征和预后的相关性。构建Cox回归模型,分析影响MPM患者预后的因素。GEPIA数据库评估ATG5与MPM肿瘤标志物和新型血清标志物的相关性。TIMER数据库分析ATG5与MPM免疫细胞浸润和关键免疫调节基因的相关性。结果ATG5在MPM细胞和组织中显著高表达,且与MPM患者的肿瘤分期呈正相关(P<0.05)。生存分析显示,ATG5高表达组MPM患者的预后更差,肿瘤病理类型可能是患者预后不良的危险因素(P<0.05)。ATG5与多种MPM肿瘤标志物(MTAP、SETD2、NF2、FIB3)和新型血清标志物(HMGB1、SMPR、THBS2、KRAS)显著相关(P<0.05)。ATG5表达与MPM中免疫细胞浸润(B细胞、CD4^(+)T细胞和巨噬细胞)和免疫相关基因(CD28、CUL48B、CD166、MMP14)呈显著正相关(P<0.05)。结论ATG5在MPM中表达上调,且与患者不良预后和免疫浸润水平相关,有望成为MPM早期筛查、诊断和预后评估的重要生物标志物。

乳腺癌组织lncRNA CASC2、miR-532-3p表达水平与患者术后5年内生存的相关性

目的探究乳腺癌(BC)组织长链非编码RNA癌易感性候选基因2(lncRNA CASC2)、微小RNA-532-3p(miR-532-3p)表达与患者术后5年内生存的相关性。方法选择2015年1月—2018年6月大同市第五人民医院普通外科收治BC患者127例,术中收集BC组织及癌旁正常组织,荧光定量PCR法检测BC组织和癌旁正常组织中lncRNA CASC2、miR-532-3p表达;对BC患者术后进行为期5年的随访,记录患者5年内生存和死亡情况。比较癌旁正常组织和BC组织lncRNA CASC2及miR-532-3p表达,BC组织中lncRNA CASC2和miR-532-3p表达在不同临床病理特征中的差异,生存组和死亡组临床病理特征和BC组织中lncRNA CASC2及miR-532-3p表达的差异。分析BC组织lncRNA CASC2、miR-532-3p表达的相关性;BC组织中lncRNA CASC2和miR-532-3p表达与术后5年内生存的关系;影响BC患者术后5年内生存的因素;lncRNA CASC2、miR-532-3p对BC患者术后5年内生存的预测价值。结果BC组织中lncRNA CASC2表达水平低于癌旁正常组织,miR-532-3p表达水平高于癌旁正常组织(t/P=38.239/<0.001,49.406/<0.001);肿瘤直径≥2 cm、TNM分期Ⅲ期、肿瘤低分化、淋巴结转移者比例lncRNA CASC2低表达组高于高表达组,而miR-532-3p低表达组低于高表达组(lncRNA CASC2:χ^(2)/P=17.361/<0.001、17.052/<0.001、14.694/<0.001、13.173/<0.001;miR-532-3p:χ^(2)/P=10.733/0.001、9.813/0.002、10.134/0.001、7.444/0.006);127例BC患者术后随访5年,生存99例(生存组),死亡28例(死亡组),肿瘤直径≥2 cm、TNM分期Ⅲ期、肿瘤低分化、淋巴结转移者比例及miR-532-3p表达水平死亡组高于生存组,而lncRNA CASC2表达水平死亡组低于生存组[χ^(2)(t)/P=5.211/0.022、27.149/<0.001、27.990/<0.001、4.590/0.032、19.155/<0.001、10.818/<0.001];BC组织中lncRNA CASC2与miR-532-3p表达呈负相关(r/P=-0.561/<0.001);lncRNA CASC2高表达组BC患者术后5年内总生存率为89.23%(58/65),高于lncRNA CASC2低表达组66.13%(41/62)(χ^(2)/P=9.854/0.002);miR-532-3p高表达组BC患者术后5年内总生存率为65.57%(40/61),低于miR-532-3p低表达组89.39%(59/66)(χ^(2)/P=10.466/0.001);肿瘤直径≥2 cm、TNM分期Ⅲ期、肿瘤低分化、有淋巴结转移、lncRNA CASC2低表达、miR-532-3p高表达均是影响BC患者术后5年内生存的独立危险因素[HR(95%CI)=2.255(1.192~4.263)、2.143(1.252~3.666)、3.089(1.386~6.887)、2.219(1.223~4.026)、2.606(1.174~5.788)、2.855(1.592~5.120)];lncRNA CASC2、miR-532-3p及二者联合预测BC患者术后5年内生存的AUC分别为0.840、0.852、0.908,二者联合预测的AUC大于lncRNA CASC2、miR-532-3p各自单独预测的AUC(Z/P=2.246/0.025、2.033/0.042)。结论BC组织中lncRNA CASC2表达下调,miR-532-3p表达上调,且术后5年内死亡的BC患者较存活患者变化更显著,二者表达与临床病理特征相关,对预测BC患者术后5年内生存情况价值较高。

大黄鱼ATG5基因的分子特征及促进病毒增殖的作用

为探究大黄鱼自噬相关基因5(LcATG5)在病毒感染中免疫应答中的作用,本实验从大黄鱼中克隆得到了自噬相关基因ATG5(LcATG5),其开放阅读框(ORF)全长828个核苷酸,编码275个氨基酸的蛋白质,预测的分子量为32.3 ku,等电点为5.7。氨基酸序列比对和系统进化分析结果显示,Lc ATG5与其他物种ATG5之间的序列一致性较高,含有1个高度保守的APG5结构域,并且与棘头梅童鱼ATG5的亲缘关系最近。荧光定量PCR结果显示,LcATG5在所检测的11个组织或器官中均有表达,在血液中表达量最高,在脾脏中表达量最低;LcATG5在来源于大黄鱼头肾组织的原代粒细胞、淋巴细胞和巨噬细胞以及细胞系LYCK细胞中也均有表达,在原代粒细胞中表达量相对较高,而在巨噬细胞中相对较低;病毒类似物poly(I:C)刺激后,这4种免疫细胞中LcATG5的表达水平都显著上调,其在LYCK细胞中变化最为显著,刺激后12 h上调了3.93倍。过表达Lc ATG5的鲤上皮瘤(epithelioma papulosum cyprini,EPC)细胞受鲤春病毒血症病毒(spring viremia of carp virus,SVCV)感染48 h后,细胞病变效应(cytopathic effects,CPE)明显高于对照组,细胞培养上清中SVCV的滴度为10^(13.82)TCID_(50)/mL,高于对照组10^(9.27)TCID_(50)/mL,同时细胞内SVCV标志基因SVCV-G、SVCV-M和SVCV-P的表达量分别上调了13.77倍、15.72倍和11.39倍,表明Lc ATG5过表达促进了EPC细胞中SVCV病毒增殖,上述结果为深入研究自噬和自噬相关基因在鱼类病毒感染过程中的作用及机制奠定了基础。

ATG5基因单核苷酸多态性与中国西南地区汉族人群肺结核易感性的相关性研究

目的探讨自噬相关基因-5(ATG5)单核苷酸多态性与中国西南地区汉族人群肺结核发病风险的相关性。方法2014年1月至2016年2月,纳入四川大学华西医院的900例活动性肺结核患者(肺结核组)和1534例健康对照者(健康对照组)进行研究。采用新型多重酶连接反应基因分型技术对ATG5基因上的9个单核苷酸多态性(SNP)位点(rs10484575、rs11754416、rs9486302、rs2284193、rs117827198、rs633724、rs79454666、rs77441653、rs3804338)进行基因分型。比较9个SNP位点的等位基因频率、基因型及遗传模型分布在肺结核组和健康对照组之间的差异,并采用Haploview 4.2软件进行连锁不平衡及单倍型分析。结果肺结核组与健康对照组ATG5基因rs10484575、rs11754416基因型频率差异有统计学意义(P=0.035、0.045),rs10484575携带A等位基因的个体患肺结核的风险降低(OR=0.711,95%CI:0.546~0.926,P=0.011),rs11754416携带A等位基因的个体患肺结核的风险降低(OR=0.717,95%CI:0.549~0.936,P=0.014)。遗传模型分析显示,rs10484575、rs11754416加性和显性模型与肺结核易感性降低有关。同时,rs10484575、rs11754416之间存在强连锁不平衡(r 2>96%),两种单倍型模型分布差异有统计学意义(P=0.011、0.016)。ATG5其余7个SNP位点在肺结核组和健康对照组中差异均无统计学意义(P>0.05)。结论ATG5的基因SNP rs10484575、rs11754416可能与中国西南地区汉族人群肺结核易感性有关。

自噬相关基因5通过影响p53信号通路促进肝细胞癌发展

目的探讨自噬相关基因5(autophagy-related gene 5,ATG5)在肝细胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)进展中的作用及其影响的下游信号通路。方法通过肿瘤基因组图谱(The Cancer Genome Atlas,TCGA)数据库查找ATG5在HCC患者的组织表达及其亚组的差异分析。采用免疫印迹法明确ATG5在HCC细胞系中的表达水平。通过CCK-8实验、划痕实验和Transwell实验观察敲减ATG5基因后对HCC细胞系(HCCLM3和MHCC97-H)增殖、迁移和侵袭功能的变化。在HCC细胞系MHCC97-H敲减ATG5基因后,使用有参转录组测序分析下游相关信号通路的变化。结果TCGA数据库分析显示,在m RNA水平,ATG5在HCC组织的表达明显高于正常肝组织(P<0.0001),HCC 3期患者的ATG5水平高于1期患者的水平(P=0.013),p53变异组患者癌组织的ATG5水平高于非变异组(P<0.0001)。免疫印迹结果显示,与正常肝细胞L02相比,ATG5蛋白水平在检测的HCC细胞株中均明显高表达。将ATG5基因敲减后发现,HCC细胞的增殖、迁移、侵袭的能力下降,有参测序发现其明显影响p53信号通路的基因表达,富集分析发现与细胞周期有关,同时影响了自噬相关基因的差异表达。结论ATG5下调可抑制HCC细胞的增殖、迁移和侵袭,同时可通过影响p53信号通路促进HCC发展。

小儿脑性瘫痪与ATG5多态性的关联性及危险因素分析

目的分析自噬相关基因5(ATG5)多态性与小儿脑性瘫痪(CP)的关联性,探究影响CP发生的危险因素。方法选择2022年1月—2024年1月我院收治的118例CP患儿为研究对象,纳入研究组;选择同期收治的200例非CP小儿纳入对照组。应用聚合酶链式反应-限制性酶切片段长度多态性(PCR-RFLP)技术检测ATG5基因单核苷酸多态性(SNP)位点rs510432、rs573775、rs2299863、rs3804338、rs6568431多态性,采用酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测2组儿童血浆ATG5水平,采用logistic回归分析ATG5基因多态性与小儿CP易感性的关系。结果研究组和对照组ATG5基因rs6568431位点AA、AC、CC基因型频率分别为25.42%、40.68%、33.90%和8.00%、40.00%、52.00%,差异有统计学意义(P<0.05),2组儿童rs510432、rs573775、rs2299863、rs3804338位点各基因型频率比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。研究组和对照组儿童ATG5基因rs6568431位点A、C等位基因频率分别为45.76%、54.24%和28.00%、72.00%,差异有统计学意义(P<0.05),rs510432、rs573775、rs2299863、rs3804338位点各等位基因频率比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。研究组儿童血浆ATG5水平为(8.42±0.95)ng/mL,明显低于对照组的(10.67±0.99)ng/mL,差异有统计学意义(t=19.872,P<0.05),且携带AA基因型儿童的血浆ATG5水平明显低于携带AC+CC基因型儿童,差异有统计学意义(P<0.05)。单因素分析结果显示,2组儿童母亲既往不良孕产史、母亲妊娠期高血压、母亲孕期羊水异常、宫内窘迫、病理性黄疸以及缺血缺氧性脑病情况的差异均有统计学意义(P<0.05)。多因素logistic回归分析结果显示,母亲有既往不良孕产史、母亲孕期羊水异常、宫内窘迫、病理性黄疸、缺血缺氧性脑病以及ATG5基因rs6568431位点多态性是CP发生的影响因素,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论ATG5基因rs6568431位点多态性与小儿CP易感性存在关联性,且携带AA基因型可能增加小儿CP发生风险。此外,小儿CP的发生还与母亲既往不良孕产史、母亲孕期羊水异常、宫内窘迫、病理性黄疸以及缺血缺氧性脑病等多种因素有关,故针对高危因素进行积极预防,有助于减少小儿CP的发生。

miR-30a靶向ATG5轴调控自噬信号在支气管哮喘中的作用

目的 探究miR-30a靶向ATG5轴调控自噬信号在支气管哮喘中的作用。方法 采用10%卵清蛋白(OVA)预致敏,4%OVA雾化致SD大鼠发生哮喘。miR-30a agomir气管注射治疗支气管哮喘大鼠,以NC agomir给药作为阴性对照。模型组和对照组给予相同剂量的0.9%氯化钠液,连续一周。处死大鼠后,ELISA检测肺泡灌洗液中炎症细胞因子及促纤维化相关因子含量;HE染色与Masson染色评估肺组织气道损伤与胶原纤维沉积,检测气道形态学指标评估气道重塑;PCR法检测miR-30a与ATG5表达;透射电镜观察肺泡上皮细胞自噬小体数量;WB检测LC3-Ⅰ、LC3-Ⅱ、Beclin1及ATG5的表达。结果 miR-30a agomir治疗减少了支气管上皮细胞脱落、间质内炎性细胞浸润、胶原纤维沉积与气道狭窄。与模型+NC agomir组对比,经miR-30a agomir治疗后,miR-30a表达增加(P<0.01),ATG5表达降低(P<0.05)。miR-30a agomir治疗能降低肺泡灌洗液中IL-4、IL-13、TGF-β1、VEGF及PDGF的含量(P均<0.05)。miR-30a agomir治疗后肺组织中自噬小体数量减少。LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ、Beclin1和ATG5蛋白表达水平降低(P均<0.05)。结论 miR-30a靶向抑制ATG5的表达抑制肺组织自噬,从而缓解支气管哮喘。

自噬相关基因ATG5在感染和炎症性疾病中的作用

自噬对生物体维持细胞内环境具有至关重要的作用。目前已经证实自噬广泛参与多种疾病的发生发展过程,例如肿瘤、免疫性疾病以及炎症性疾病等,其与炎症性疾病相关性更加密切,也是近年来的研究热点。自噬相关基因(ATGs)参与调节自噬的许多方面,其中ATG5主要参与自噬小体的双层膜弯曲,对自噬的发生起决定性作用。本文主要概述近年研究发现ATG5在炎症性疾病中的机制,并探讨自噬其作为炎症性疾病治疗方向的可能性,为炎症性疾病的诊治提供新的思路。

肌萎缩侧索硬化症转基因小鼠脊髓中自噬相关基因ATG5表达降低

目的明确自噬相关基因ATG5在肌萎缩侧索硬化症(amyotrophic lateral sclerosis,ALS)转基因鼠脊髓中的表达情况.方法取95d、108d和122d ALS转基因小鼠和野生型小鼠脊髓,应用免疫荧光、Western blot和RT-PCR技术,检测ATG5在脊髓中的表达.结果免疫荧光染色检测显示,在脊髓内,ATG5免疫反应产物主要定位于神经元;与同窝野生型小鼠比较,脊髓内ATG5免疫反应性在95d转基因小鼠无明显差异,而在108d和122d转基因小鼠明显降低.Western blot和RT-PCR分析显示,与同窝野生型小鼠比较,脊髓内ATG5 mRNA和蛋白表达水平在95d无明显变化,但在108d和122d时,转基因小鼠脊髓内ATG5 mRNA和蛋白表达均显著低于同窝野生型小鼠.结论ATG5在ALS转基因鼠脊髓中表达降低,提示ATG5表达异常与ALS发生密切相关.

自噬相关基因Atg5与前列腺腺癌发生的相关性分析

目的:探讨自噬相关基因5(Atg5)与前列腺腺癌发生的相关性。方法:实时荧光定量PCR及免疫组化方法检测50例前列腺上皮内瘤变(PIN)、69例前列腺腺癌及30例良性前列腺增生(BPH)组织标本中Atg5的表达情况。结果:实时定量PCR结果显示,PIN及PCa组织中Atg5 mRNA的相对表达量显著高于BPH组织(5.270±0.230 vs 1.723±0.017,5.131±0.252 vs 1.723±0.017,P<0.01)。免疫组化结果显示Atg5在BPH、PIN及PCa组织中的阳性表达率分别为6.7%、94%及88.4%,BPH组织中Atg5的阳性表达率明显低于PIN及PCa,且差异具有统计学意义(P<0.001),PIN与PCa组别之间无显著差异(P>0.05)。Atg5的表达与前列腺腺癌的Gleason评分分级无显著相关性(P>0.05)。结论:前列腺组织中Atg5的高表达可能对前列腺腺癌的发生起着一定作用。

血清SIRT1、Fibulin-5、Bcl-2/Bax与颈动脉粥样硬化斑块破裂所致脑梗死的关系及联合检测价值

目的 探讨血清沉默信息调节蛋白1 (SIRT1)、衰老关键蛋白抗原-5 (Fibulin-5)、B淋巴细胞瘤基因-2(Bcl-2)/B淋巴细胞瘤基因-2相关X蛋白(Bax)与颈动脉粥样硬化(CAS)斑块破裂所致脑梗死(ACI)的关系及联合检测价值。方法 选取新疆维吾尔自治区人民医院2021年1月至2023年2月CAS斑块破裂所致ACI患者98例作为研究组,另选取同期CAS斑块未破裂患者98例作为对照组,比较两组血清SIRT1、Fibulin-5、Bcl-2、Bax水平,分析各血清指标对CAS斑块破裂所致ACI风险的影响及与病情的关系,并评价各血清学指标单独及联合预测CAS斑块破裂所致ACI的价值。结果 研究组血清SIRT1、Bcl-2水平低于对照组,Fibulin-5、Bax水平高于对照组(P<0.05);大面积梗死(MCI)患者血清SIRT1、Bcl-2水平<小面积梗死患者<腔隙性梗死(LI)患者,Fibulin-5、Bax水平>小面积梗死患者> LI患者(P<0.05);重度神经功能缺损患者血清SIRT1、Bcl-2水平<中度神经功能缺损患者<轻度神经功能缺损患者,Fibulin-5、Bax水平>中度神经功能缺损患者>轻度神经功能缺损患者(P<0.05);血清SIRT1、Bcl-2低水平患者CAS斑块破裂所致ACI风险是高水平患者的2.311倍、2.921倍,Fibulin-5、Bax高水平患者CAS斑块破裂所致ACI风险是低水平患者的3.470倍、3.184倍(P<0.05);血清SIRT1、Bcl-2与梗死面积、神经功能缺损程度呈负相关,Fibulin-5、Bax与梗死面积、神经功能缺损程度呈正相关(P<0.05);血清SIRT1、Fibulin-5、Bcl-2、Bax预测CAS斑块破裂所致ACI的AUC分别为0.716 (95%CI:0.648~0.778)、0.796 (95%CI:0.733~0.850)、0.728 (95%CI:0.660~0.789)、0.763 (95%CI:0.698~0.821),联合预测CAS斑块破裂所致ACI的AUC为0.909 (95%CI:0.860~0.945),优于各血清指标单独预测。结论 血清SIRT1、Fibulin-5、Bcl-2/Bax与CAS斑块破裂所致ACI及其病情程度密切相关,联合预测价值可靠,对临床开展防治工作具有指导意义。

早期一线联合托法替布治疗重症抗黑色素瘤分化相关基因-5抗体阳性皮肌炎相关快速进展型间质性肺炎1例并文献复习

目的 报告1例联合托法替布治疗有效的重症抗黑色素瘤分化相关基因-5抗体阳性皮肌炎相关快速进展型间质性肺炎(抗MDA5-Ab^(+)-DM-RP-ILD)病例,并进行文献复习,了解联合托法替布对重症抗MDA5-Ab^(+)-DM-RP-ILD的有效性。方法 采用自身前后对照研究方法,介绍2020年1月23日广州医科大学附属第一医院收治的1例重症抗MDA5-Ab^(+)-DM-RP-ILD患者的诊治经过及随访资料。以“快速进展型间质性肺炎、MDA5、皮肌炎、托法替布”为主题检索Medline数据库,评估联合托法替布治疗抗MDA5-Ab^(+)-DM-RP-ILD以及重症亚组患者的应用价值。结果 患者为49岁男性,因“皮疹、乏力1月余,呼吸困难1 d”入院,特征性体征为Gottron征、Gottron疹,高分辨率计算机断层扫描(HRCT)提示双肺多发磨玻璃影和实变。患者入院2 d接受小潮气量肺保护机械通气治疗,给予甲泼尼龙(2.22 mg·kg^(-1)·d^(-1))治疗后间质性肺炎缓解,因并发消化道大出血停药,半个月后间质性肺炎急性加重,予甲泼尼龙(0.56 mg·kg^(-1)·d^(-1))联合托法替布(10 mg/d)综合治疗,间质性肺炎逐渐缓解,成功脱机拔管,4个月后患者间质性肺炎明显缓解。分析9例联合托法替布治疗抗MDA5-Ab^(+)-DM-RP-ILD病例,间质性肺炎的缓解率为55.6%,病死率为37.5%,对照组病死率为84.6%;重症亚组的间质性肺炎缓解率为33.3%,病死率为50.0%。结论 联合托法替布治疗抗MDA5-Ab^(+)-DM-RP-ILD,患者病死率明显下降,但对重症患者的治疗有效率明显下降,早期一线联合托法替布以及早期肺保护策略可能有助于改善预后。

抑制PI3K/Akt/mTOR信号通路对MPP+处理的SH-SY5Y细胞自噬、凋亡及PD特征蛋白表达的影响

目的探讨抑制磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)/蛋白激酶B(Akt)/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)信号通路对1-甲基-4-苯基吡啶离子(MPP+)处理的SH-SY5Y细胞自噬、凋亡及帕金森病(PD)特征蛋白α-突触核蛋白(α-syn)、酪氨酸羟化酶(TH)表达的影响。方法以MPP+、PI3K/Akt激活剂胰岛素样生长因子-1(IGF-1)、PI3K/Akt抑制剂LY294002作用于人神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞,CCK-8检测细胞存活率;流式细胞术检测细胞凋亡率;吖啶橙(AO)染色检测自噬空泡;Western blot检测α-syn、TH、p62、微管相关蛋白1轻链3B(LC3B)、p-mTOR、mTOR、p-PI3K、PI3K、p-Akt、Akt蛋白水平。结果MPP+干预显著降低SH-SY5Y细胞存活率,且呈现剂量依赖性(P<0.05)。MPP+和IGF-1处理后SH-SY5Y细胞存活率降低,凋亡率增高(P<0.05);细胞中自噬空泡减少,LC3BⅡ/Ⅰ降低,p62蛋白水平增高(P<0.05);TH蛋白水平降低,α-syn蛋白水平增高(P<0.05);p-PI3K/PI3K、p-Akt/Akt与p-mTOR/mTOR增高(P<0.05)。LY294002对SH-SY5Y细胞的影响与MPP+和IGF-1相反,且LY294002可在一定程度上逆转MPP+对SH-SY5Y细胞的影响(P<0.05)。结论抑制PI3K/Akt/mTOR信号通路可能对MPP+诱导的SH-SY5Y细胞毒性具有保护作用。

ATG5和PDIA3在宫颈癌组织中的表达及其临床意义

目的:探究免疫原性细胞死亡相关基因——自噬相关基因5(ATG5)和蛋白质二硫键异构酶A3(PDIA3)在宫颈癌组织中的表达及其与患者临床病理特征和预后的相关性、相关信号通路及药物敏感性。方法:收集自2016年1月至2023年12月间青岛大学附属医院60例宫颈癌癌组织标本作为实验组,26例因子宫肌瘤、子宫腺肌症切除的正常宫颈组织标本作为对照组,并收集相应的临床资料。采用免疫组化法检测宫颈癌组织和正常宫颈组织中ATG5、PDIA3蛋白的表达差异,分析其表达与各项临床病理参数之间的关系。基于基因表达水平值的交互式分析平台(GEPIA)在线分析宫颈癌组织中ATG5、PDIA3的表达水平对患者预后的影响,使用基因本体论(GO)、京都基因与基因组百科全书(KEGG)、基因集富集分析(GSEA)探究ATG5和PDIA3基因可能涉及的生物学功能及信号通路,用p RRophetic包分析宫颈癌患者癌组织中ATG5、PDIA3高低表达与患者对化疗药物的敏感性。结果:ATG5、PDIA3在宫颈癌组织中的表达率均显著高于正常宫颈组织(83.3%vs 11.5%,χ^(2)=39.538,P=0.001;75.0%vs 46.2%,χ^(2)=6.753,P=0.009),ATG5的表达水平在肿瘤直径、FIGO分期、淋巴结转移方面的差异显著(均P<0.01);PDIA3的表达水平在肿瘤直径、分化程度、FIGO分期和淋巴结转移方面的差异显著(P<0.05或P<0.01)。ATG5和PDIA3的表达水平呈正相关(r=0.679,P<0.001)。GEPIA在线分析网站预后分析显示,ATG5和PDIA3高表达宫颈癌患者的预后差(均P<0.05)。ATG5和PDIA3主要富集的功能及信号通路包括细胞增殖与分化、抗原加工与提呈、P53结合、Wnt信号通路、MAPK信号通路及mTOR信号通路。结论:ATG5和PDIA3在宫颈癌组织中呈高表达,两者高表达与患者不良预后有关,ATG5和PDIA3参与细胞增殖与分化、抗原加工提呈及多种信号通路,有望成为宫颈癌治疗的潜在靶点。

自噬相关基因LC3和ATG5在胃癌中的表达及临床意义

目的探讨自噬相关基因微管相关蛋白1轻链3(microtubule-associated protein 1 light chain 3,LC3)和自噬相关基因-5(autophagy related gene-5,ATG5)在胃癌细胞发生发展不同阶段的表达情况并分析其临床意义。方法选取胃黏膜正常细胞、胃黏膜不典型增生细胞、胃癌细胞共58例,分别记为正常组(17例)、不典型组(19例)、胃癌组(22例),采用qRT-PCR、Western Blot、免疫组织化学法检测每组中自噬相关基因LC3和ATG5的mRNA及蛋白表达水平,应用SPSS 23.0软件分析正常组、不典型组、胃癌组3组间LC3和ATG5的mRNA及蛋白表达情况,并分析LC3和ATG5蛋白表达的相关性以及LC3和ATG5蛋白表达与胃癌患者临床病理学参数的关系。结果正常组、不典型组、胃癌组中LC3和ATG5 mRNA及蛋白表达水平逐渐升高,各组间差异均有统计学意义(P<0.05)。LC3蛋白表达情况与性别、年龄、浸润深度、分化程度及淋巴结状态均不存在相关性。ATG5蛋白表达情况与浸润深度、分化程度及淋巴结状态均有相关性。LC3和ATG5蛋白在3组中均呈正相关(P<0.05)。结论细胞自噬可促进胃癌的发生发展,其机制可能与LC3、ATG5过度表达有关。LC3、ATG5在促进胃癌的发生发展中起相互协同的作用。

ATG3和ATG5在尖锐湿疣患者皮损组织中的表达及其临床意义

目的探讨尖锐湿疣患者皮损组织中自噬相关基因3(ATG3)与自噬相关基因5(ATG5)的表达水平及临床意义。方法选取青岛市城阳区人民医院收治的92例尖锐湿疣患者作为研究组。选取同期因其他原因切除外生殖器正常皮肤组织的63例健康者作为对照组,其中45例男性行包皮环切术,18例女性行外阴整形术。收集并记录所有研究对象的一般资料,检测皮损组织中ATG3和ATG5的表达水平,采用Pearson法分析ATG3和ATG5表达水平的相关性,采用受试者工作特征(ROC)曲线分析ATG3、ATG5表达水平预测尖锐湿疣复发的效能。结果研究组患者皮损组织中ATG3(1.28±0.27)和ATG5(0.91±0.23)表达水平较对照组(1.86±0.39,1.34±0.31)显著降低(P<0.05)。皮损组织ATG3和ATG5表达水平与疣体团块直径及人乳头瘤病毒(HPV)类型有关(P<0.05)。Pearson法相关分析显示,尖锐湿疣患者皮损组织中ATG3和ATG5表达水平呈正相关(r=0.527,P<0.05)。复发组皮损组织中ATG3和ATG5表达水平显著低于未复发组(P<0.05)。皮损组织中ATG3、ATG5单独及联合预测尖锐湿疣复发的AUC分别为0.729、0.785和0.907,二者联合优于ATG3、ATG5单一指标预测(Z_(ATG3-联合)=2.876、Z_(ATG5-联合)=2.064,P<0.05)。结论ATG3和ATG5在尖锐湿疣患者皮损组织中表达水平显著降低,二者联合可用于预测尖锐湿疣的复发,临床应用价值较大。

支气管哮喘患儿基质金属蛋白酶-16、自噬相关基因5和自噬相关基因7的表达及其与肺功能的相关性

目的探讨支气管哮喘患儿外周血单个核细胞中基质金属蛋白酶-16(MMP-16)、自噬相关基因5(ATG5)、自噬相关基因7(ATG7)表达水平与肺功能的相关性。方法选取哮喘患儿80例作为观察组,健康体检儿童80例作为对照组。采集观察组和对照组患儿血样,检测第1秒用力呼气容积占预计值百分比(FEV_(1)%)、用力肺活量(FVC)、最大呼气峰流速占预计值百分比(PEF%),计算第1秒用力呼气容积占用力肺活量的比率(FEV_(1)/FVC)。采用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)法检测外周血单个核细胞MMP-16 mRNA、ATG5 mRNA和ATG7 mRNA水平;采用Pearson法分析急性发作期哮喘患儿MMP-16 mRNA、ATG5 mRNA、ATG7 mRNA与肺功能指标的相关性。结果MMP-16 mRNA、ATG5 mRNA、ATG7 mRNA水平在对照组患儿和观察组临床缓解期患儿及急性发作期患儿中呈依次显著升高趋势(P<0.05);FEV_(1)%、FEV_(1)/FVC和PEF%在对照组患儿和观察组临床缓解期患儿及急性发作期患儿中呈依次显著降低趋势(P<0.05)。急性发作期哮喘患儿外周血单个核细胞MMP-16 mRNA与ATG5 mRNA、MMP-16 mRNA与ATG7 mRNA、ATG5 mRNA与ATG7 mRNA均呈显著正相关(r=0.536、0.542、0.534,P<0.05),且MMP-16 mRNA、ATG5 mRNA、ATG7 mRNA均与FEV_(1)%、FEV_(1)/FVC、PEF%呈显著负相关(P<0.05)。与轻度组比较,中重度组外周血单个核细胞MMP-16 mRNA、ATG5 mRNA、ATG7 mRNA水平较高,FEV_(1)%、FEV_(1)/FVC、PEF%较低,差异有统计学意义(P<0.05)。结论哮喘患儿外周血单个核细胞MMP-16 mRNA、ATG5 mRNA、ATG7 mRNA水平较高,且均与肺功能有密切联系。

白花蛇舌草提取物通过AMPK/ATG5信号通路对急性胰腺炎大鼠肺损伤的保护作用机制研究

目的:通过5’-单磷酸腺苷活化蛋白激酶(AMPK)/自噬相关蛋白5(ATG5)信号通路,探讨白花蛇舌草提取物减轻急性胰腺炎(AP)大鼠肺损伤的机制。方法:建立AP肺损伤大鼠模型,随机分为模型组、提取物(白花蛇舌草提取物)组、3-MA(自噬抑制剂3-甲基腺嘌呤)组、AICAR(AMPK激活剂)组、提取物+AICAR组,每组15只,另取15只大鼠作为假手术组;ELISA检测血清淀粉酶(AMY)、IL-1β、IL-6、IL-18水平;检测大鼠腹水量及肺湿/干重比(W/D);HE观察胰腺及肺组织病理损伤;Western blot检测溶酶体相关膜蛋白2(LAMP2)、自噬底物p62、IL-1β前体蛋白(pro-IL-1β)、胰蛋白酶原活化肽(TAP)、AMPK、p-AMPK、ATG5、自噬标志物LC3-Ⅱ/Ⅰ、泛素特异性蛋白酶10(UPS10)表达。结果:与假手术组相比,模型组大鼠腹水量、肺W/D、胰腺和肺组织病理损伤评分、血清AMY、IL-1β、IL-6、IL-18水平、胰腺组织p62、TAP、pro-IL-1β表达、肺组织pAMPK/AMPK、ATG5、LC3-Ⅱ/Ⅰ、UPS10、pro-IL-1β表达均升高(P<0.05),胰腺和肺组织LAMP2蛋白表达降低(P<0.05);模型大鼠经白花蛇舌草提取物或自噬抑制剂3-MA干预后,上述指标均得到显著改善(P<0.05),且白花蛇舌草提取物的改善效果优于3-MA(P<0.05);而AMPK激活剂AICAR可削弱白花蛇舌草提取物对AP大鼠肺损伤的改善作用(P<0.05)。结论:白花蛇舌草提取物可通过抑制AMPK/ATG5信号通路减轻炎症反应、降低自噬水平改善AP大鼠肺损伤。

CGRP通过ALKBH5/m6A抑制自噬促进缺氧/复氧心肌细胞增殖

目的探讨CGRP通过ALKBH5/m6A调控自噬对缺氧/复氧心肌细胞增殖和凋亡的影响。方法将心肌细胞H9c2随机分为Control组(H9c2细胞正常培养基培养)、H/R组(制备缺氧/复氧H9c2细胞损伤模型组)、CGRP组(缺氧/复氧模型前加入1×10^(-1)mol/L的CGRP作用20 min)和CGRP+sh-ALKBH5组(将sh-ALKBH5转染至H9c2细胞中,培养24 h后加入1×10^(-1)mol/L CGRP作用20 min,后制备缺氧/复氧模型)。采用CCK-8和EdU染色检测H9c2细胞活力;流式细胞仪检测细胞凋亡率;检测心肌细胞中乳酸脱氢酶(LDH)活性;Dot blot检测m6A甲基化水平;蛋白质印迹法和RT-PCR检测细胞中ALKBH5、Beclin-1、p62、LC3Ⅱ、LC3Ι蛋白和m RNA表达。结果与Control组比较,H/R组细胞存活率[(46.27±4.09)%]、EdU阳性细胞率[(3.89±0.87)%]明显降低,细胞凋亡率[(13.62±1.27)%]、LDH浓度(276.32±25.14)、m6A相对表达量(2.46±0.18)明显增加(P<0.05);与H/R组比较,CGRP组细胞存活率[(87.31±6.24)%]、EdU阳性细胞率[(40.71±2.53)%]均明显增加,细胞凋亡率[(3.17±0.82)%]、LDH浓度(78.24±7.19)、m6A相对表达量(1.42±0.13)明显降低(P<0.05);CGRP+sh-ALKBH5组细胞存活率[(61.04±5.48)%]、EdU阳性细胞率[(8.76±1.24)%]均明显低于CGRP组,细胞凋亡率[(10.19±0.95)%]、LDH浓度(229.06±22.43)、m6A相对表达量(2.09±0.15)明显高于CGRP组(P<0.05)。与Control组比较,H/R组细胞中ALKBH5(0.34±0.03)、p62蛋白(0.32±0.04)和mRNA表达(0.21±0.04)明显降低,Beclin-1蛋白(0.97±0.13)及mRNA表达(2.14±0.17)和LC3Ⅱ/LC3Ι比值(0.64±0.08)明显升高(P<0.05);与H/R组比较,CGRP组细胞中ALKBH5(0.78±0.09)、p62蛋白(0.71±0.08)和m RNA(0.87±0.08)表达明显增加,Beclin-1蛋白(0.41±0.06)及mRNA表达(1.26±0.12)和LC3Ⅱ/LC3Ι比值(0.23±0.03)明显降低(P<0.05);与CGRP组比较,CGRP+sh-ALKBH5组细胞中ALKBH5(0.50±0.07)、p62蛋白(0.40±0.05)和mRNA表达(0.30±0.05)明显降低,Beclin-1蛋白(0.86±0.10)及mRNA表达(1.95±0.14)和LC3Ⅱ/LC3Ι比值(0.58±0.06)明显升高(P<0.05)。结论CGRP可能通过促进m6A去甲基酶ALKBH5的表达来发挥作用,抑制心肌细胞在缺氧/复氧条件下的自噬和凋亡,从而提高心肌细胞的存活率。