诱导/封闭自噬相关基因7对肾癌786-0细胞自噬的调控作用研究

目的探讨诱导/封闭Atg7对肾癌786-0细胞自噬的调控作用。方法构建上调Atg7的慢病毒载体plenti6.3-Atg7,下调Atg7的慢病毒载体sh-Atg-1lv、sh-Atg-2lv,空载对照慢病毒载体sh-scramb-con lv、plenti6.3-GFP,分别转染肾癌786-0细胞系,未转染的786-0细胞系为空白对照。RT-PCR和Western blot检测各组Atg7的表达,研究plenti6.3-Atg7激活Atg7效率和sh-Atg-1lv、sh-Atg-2lv抑制Atg7效率。Western blot检测上述各组细胞LCII/LC3I蛋白比值,研究上调及下调Atg7对肾癌786-0细胞自噬的激活及抑制作用。结果经过筛选,成功构建稳定上调Atg7的786-0/plenti6.3-Atg7xbx细胞系、稳定下调Atg7的786-0/sh-Atg-2lv细胞系、空载对照786-0/sh-scramb-con lv、786-0/plenti6.3-GFP细胞系。与空白对照组比较,Atg7上调组786-0细胞LCII/LC3I比值显著升高(3.31±0.12 vs.2.23±0.10 P<0.01),具有稳定的自噬激活作用;Atg7下调组的786-0细胞LCII/LC3I比值显著降低(1.45±0.11 vs.2.23±0.10 P<0.01),具有稳定自噬抑制作用。结论上调Atg7对肾癌786-0细胞系具有自噬激活作用,下调Atg7对肾癌786-0细胞系具有自噬抑制作用。

支气管哮喘患儿基质金属蛋白酶-16、自噬相关基因5和自噬相关基因7的表达及其与肺功能的相关性

目的探讨支气管哮喘患儿外周血单个核细胞中基质金属蛋白酶-16(MMP-16)、自噬相关基因5(ATG5)、自噬相关基因7(ATG7)表达水平与肺功能的相关性。方法选取哮喘患儿80例作为观察组,健康体检儿童80例作为对照组。采集观察组和对照组患儿血样,检测第1秒用力呼气容积占预计值百分比(FEV_(1)%)、用力肺活量(FVC)、最大呼气峰流速占预计值百分比(PEF%),计算第1秒用力呼气容积占用力肺活量的比率(FEV_(1)/FVC)。采用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)法检测外周血单个核细胞MMP-16 mRNA、ATG5 mRNA和ATG7 mRNA水平;采用Pearson法分析急性发作期哮喘患儿MMP-16 mRNA、ATG5 mRNA、ATG7 mRNA与肺功能指标的相关性。结果MMP-16 mRNA、ATG5 mRNA、ATG7 mRNA水平在对照组患儿和观察组临床缓解期患儿及急性发作期患儿中呈依次显著升高趋势(P<0.05);FEV_(1)%、FEV_(1)/FVC和PEF%在对照组患儿和观察组临床缓解期患儿及急性发作期患儿中呈依次显著降低趋势(P<0.05)。急性发作期哮喘患儿外周血单个核细胞MMP-16 mRNA与ATG5 mRNA、MMP-16 mRNA与ATG7 mRNA、ATG5 mRNA与ATG7 mRNA均呈显著正相关(r=0.536、0.542、0.534,P<0.05),且MMP-16 mRNA、ATG5 mRNA、ATG7 mRNA均与FEV_(1)%、FEV_(1)/FVC、PEF%呈显著负相关(P<0.05)。与轻度组比较,中重度组外周血单个核细胞MMP-16 mRNA、ATG5 mRNA、ATG7 mRNA水平较高,FEV_(1)%、FEV_(1)/FVC、PEF%较低,差异有统计学意义(P<0.05)。结论哮喘患儿外周血单个核细胞MMP-16 mRNA、ATG5 mRNA、ATG7 mRNA水平较高,且均与肺功能有密切联系。

Calpain 2调节自噬相关基因ATG7的表达在非酒精性脂肪性肝病中的作用

目的明确Calpain 2及自噬相关基因7(autophagy related gene 7,ATG7)在非酒精性脂肪性肝病中的表达变化及意义。方法应用高脂饮食喂养SD大鼠建立非酒精性脂肪性肝病(non-alcoholic fatty liver disease,NAFLD)在体模型,并按时相点分为4、8、12周及16周组,同时设立正常饮食组为对照组,每组6只。检测各组大鼠血清ALT、AST、FFA水平,通过HE染色观察肝脏脂肪变情况,利用Real-time PCR及Western blot检测Calpain 2及ATG7的表达变化。结果①HE染色提示肝脏脂肪变程度随高脂饮食喂养时间的延长而加重。NAFLD大鼠模型各时相点血清ALT、AST、FFA水平均较对照组有不同程度的升高,在16周组时分别为(165.95±7.24)U/L、(249.52±4.20)U/L、(0.83±0.05)mmol/L,与对照组比较均有明显的升高(P<0.01)。②以正常饮食组为对照组,肝组织Calpain 2 mRNA相对表达量在高脂饮食喂养后开始上调,在16周时升高最为明显(9.83±0.85,P<0.01);ATG7的mRNA相对表达量在4周组(0.82±0.02)即开始下降,在16周组(0.20±0.03)降至最低,与对照组比较降低显著(P<0.01)。③与对照组比较,Calpain 2蛋白相对表达水平与mRNA表达水平一致,4周组(2.32±0.45)时开始上调,16周组明显上升(9.87±1.20,P<0.01)。而ATG7的蛋白相对表达水平则随肝脏脂肪变性的进展明显下降,16周时降低最为明显(0.18±0.05,P<0.01)。结论脂肪肝发生过程中,Calpain 2的表达上调抑制了自噬相关基因ATG7的表达,进而减弱了自噬对细胞的保护作用,导致肝细胞的损伤加重,自噬可能参与了NAFLD的发生。

血清微小RNA-20a和自噬相关基因7对急性ST段抬高型心肌梗死患者经皮冠状动脉介入治疗后主要不良心血管事件的预测

目的探讨血清微小RNA(miR)-20a和自噬相关基因7(ATG7)对急性ST段抬高型心肌梗死(STEMI)患者经皮冠状动脉介入治疗(PCI)后主要不良心血管事件(MACE)的预测价值。方法纳入行PCI的初发急性STEMI患者233例,根据院内预后情况分为MACE组64例和非MACE组169例。比较两组患者血清氨基末端脑钠肽前体(NT-proBNP)、Ⅲ型前胶原氨端肽(PⅢNP)、ATG7及miR-20a水平并分析其相关性。结果MACE组患者年龄、NT-proBNP、PⅢNP、ATG7水平及Killip心功能Ⅳ级患者比例均高于非MACE组,血清miR-20a水平低于非MACE组(P<0.05)。多因素logistic回归分析结果显示,高龄、Killip心功能Ⅳ级、NT-proBNP、PⅢNP及ATG7水平升高是急性STEMI患者PCI后发生院内MACE的独立危险因素,而血清miR-20a水平升高是其独立保护因素(P<0.05)。Pearson相关分析结果显示,血清miR-20a与ATG7、NT-proBNP、PⅢNP均呈负相关(P<0.05),而血清ATG7与NT-proBNP、PⅢNP均呈正相关(P<0.05)。受试者工作特征(ROC)曲线分析结果显示,血清miR-20a联合ATG7预测急性STEMI患者PCI后发生院内MACE的价值高于血清miR-20a和ATG7。结论血清miR-20a和ATG7均与NT-proBNP、PⅢNP密切相关,是急性STEMI患者PCI后发生院内MACE的独立预测因素。

自噬相关基因Atg7的表达对乙型肝炎病毒复制的影响

目的探讨Atg7的表达对乙型肝炎病毒感染肝细胞中HBV复制的影响。方法选取2019年4~5月首都医科大学附属北京市佑安医院慢性乙型肝炎病毒感染者的肝组织石蜡切片,采用免疫荧光染色观察Atg7、LC3和HBs的表达情况;利用Atg7表达质粒和小干扰RNA在HepG2.2.15细胞中建立Atg7过表达组及Atg7减少组,给予不同时间段的饥饿处理,利用蛋白质免疫印迹和实时定量PCR观察两组模型中自噬及HBV病毒复制水平的变化。采用SPSS 17.0统计学软件进行数据分析。结果在HBs阳性细胞中,Atg7和LC3的表达量高于HBs阴性细胞;Atg7过表达饥饿处理后,自噬水平、HBc和HBV-DNA表达量高于对照,且自噬和HBV的复制水平在饥饿6 h增加最显著,差异有高度统计学意义(P<0.01)。Atg7敲减饥饿处理后,细胞自噬水平、HBc和HBV DNA表达量均低于对照,在饥饿6 h减少最为显著,差异有高度统计学意义(P<0.01)。结论HBV感染引起Atg7的表达增加,自噬增强;在自噬早期干预Atg7的表达会显著影响HBV复制。

急性心肌梗死患者自噬相关基因-7与心电图QRS波时限的相关性分析

目的检测急性心肌梗死患者血清中自噬相关基因-7(ATG-7)与心电图QRS波时限情况,分析二者的相关性。方法选择2017年1月至2018年6月于河南科技大学第一附属医院心内科收治的120例急性心肌梗死患者为研究对象,按照心电图QRS波时限分为QRS波时限≥110 ms组(n=69)和QRS波时限<110 ms组(n=51),根据随访期间是否发生主要不良心血管事件分为未发生组(n=72)和发生组(n=48)。收集两组患者的一般资料并进行分析;酶联免疫吸附(ELISA)法检测血清中ATG-7水平;Pearson法分析患者QRS波时限与血清ATG-7水平的相关性;分析急性心肌梗死患者血清中ATG-7水平与主要不良心血管事件发生率的关系。结果与QRS波时限<110 ms组相比,QRS波时限≥110 ms组患者血清中ATG-7水平升高(P<0.05),急性肺水肿、恶性心律失常比例增加(P<0.05)。急性心肌梗死患者血清中ATG-7水平与QRS波时限呈正相关(P<0.05)。与QRS波时限<110 ms相比,120 ms≤QRS波时限<130 ms、QRS波时限≥130 ms主要不良心血管事件发生率升高(P<0.05);与110 ms≤QRS波时限<120 ms相比,QRS波时限≥130 ms主要不良心血管事件发生率升高(P<0.05)。与未发生组相比,发生组患者血清中ATG-7水平升高(P<0.05)。结论急性心肌梗死患者血清ATG-7水平与QRS波时限呈正相关,二者与主要不良心血管事件发生情况关系密切,尽早检测血清中ATG-7水平对于急性心肌梗死具有一定意义。

急性胰腺炎患儿血清中ATG7的表达及疾病进展的相关性研究

目的探讨急性胰腺炎(AP)患儿血清中自噬相关基因7(ATG7)的表达水平,并分析其与疾病相关进展的研究。方法选取2021年1月~2022年4月在本院就诊的79例AP患儿,另选取同期健康体检的儿童71例作为对照组。采用酶联免疫吸附(ELISA)检测试剂盒测定血清ATG7水平;试剂盒检测血清淀粉酶(AMY)、血清脂肪酶(LIP)、降钙素原(PCT)检测试剂盒、C-反应蛋白(CRP)、血尿素氮(BUN)水平,对AP患儿进行急性生理学与慢性健康状况评分系统Ⅱ(APACHEⅡ)评分。采用Person法分析AP患儿血清ATG7表达与生化指标及疾病严重程度评分相关性;受试者工作特征曲线(ROC)曲线分析ATG7对AP疾病进展的预测价值。结果AP组血清ATG7[(6.76±1.24)ng/mL]、AMY[(206.83±17.59)U/L]、LIP[(126.71±9.53)U/L]、PCT[(2.38±0.18)ng/mL]、CRP[(13.58±2.73)mg/L]、BUN水平[(18.58±3.36)mg/dL]和APACHEⅡ评分升高相比于对照组[(2.38±0.39)ng/mL、(30.48±4.32)U/L、(38.62±4.79)U/L、(0.02±0.01)ng/mL、(2.97±0.32)mg/L、(4.02±0.52)mg/dL]显著升高(P<0.05)。21例SAP患者中,发生呼吸衰竭10例(47.62%),肾功能衰竭3例(14.29%),循环衰竭1例(4.76%),肝功能衰竭4例(19.05%),凝血功能衰竭2例(9.52%),中枢神经衰竭2例(9.52%)。SAP组血清ATG7、AMY、LIP、PCT、CRP、BUN水平及APACHEⅡ评分相比于MAP组、MSAP组显著升高(P<0.05)。血清ATG7与AMY、LIP、PCT、CRP、BUN及APACHEⅡ评分呈正相关。ROC结果显示,血清ATG7和APACHEⅡ评分预测SAP发生的曲线下面积(AUC)分别为0.899、0.893,灵敏度为85.71%、80.95%,特异性为84.03%、94.83%。结论AP患儿血清ATG7的表达升高,与AP疾病进展密切相关,有望作为评估AP疾病进展的生物标志物。

MTDH基因和ATG7基因在结直肠癌中的表达及临床意义

目的探讨异黏蛋白(MTDH)基因和自噬相关基因7 (ATG7)在结直肠癌(CRC)中的表达及临床意义。方法选取66例CRC患者的CRC组织及癌旁组织,比较CRC组织及癌旁组织中的MTDH mRNA和ATG7mRNA的相对表达量;比较不同临床特征CRC患者的CRC组织/癌旁组织MTDH mRNA、ATG7 mRNA的相对表达量;采用受试者工作特征(ROC)曲线分析CRC组织/癌旁组织中MTODH mRNA和ATG7 mRNA对结直肠癌的诊断价值,并分析MTDH mRNA与ATG7 mRNA的相关性。结果 CRC组织中MTDH mRNA和ATG7 mRNA相对表达量显著高于癌旁组织(P <0.01);TNM分期为Ⅲ~Ⅳ和有肝转移的CRC患者中,CRC组织/癌旁组织中的MTDH mRNA和ATG7 mRNA相对表达量均显著高于Ⅰ~Ⅱ期和无肝转移的CRC患者,低分化程度的CRC患者中CRC组织/癌旁组织中的MTDH mRNA和ATG7 mRNA相对表达量最高(P <0.01)。ROC曲线分析结果 CRC组织/癌旁组织中MTDH mRNA、ATG7 mRNA的AUC面积分别是0.934、0.900,诊断敏感度分别为90.91%、89.39%,特异度分别为86.37%、84.35%。Pearson分析结果表明CRC中MTDH的表达与ATG7的表达呈正相关(r=0.372,P=0.002)。结论 CRC组织中MTDH mRNA、ATG7 mRNA的表达高于癌旁组织。CRC组织中MTDH mRNA、ATG7 mRNA与TNM分期、分化程度、伴肝转移相关。CRC组织中MTDH mRNA、ATG7 mRNA具有诊断价值且两者具有正相关。

miR-34a通过靶向ATG7调节结直肠癌细胞自噬与增殖

目的探讨miR-34a对结直肠癌细胞自噬和增殖的调控机制。方法采用实时定量反转录PCR检测2019年5月至2020年5月期间中国医科大学附属第四医院结直肠癌手术切除的30例结直肠癌组织以及相应癌旁组织中miR-34a的表达水平,同时检测结直肠癌细胞(RKO、LoVo、SW480和SW620)和人正常结肠上皮细胞(FHC)中miR-34a的表达水平。通过pcDNA3.1-miR-34a转染结直肠癌细胞株SW480以过表达miR-34a。CCK-8法检测细胞活性。Western blot检测自噬相关蛋白微管相关蛋白1轻链3(microtubular associated protein 1 light chain 3,LC3)-Ⅱ/LC3-Ⅰ和自噬相关基因7(autophagy associated gene7,ATG7)的表达。免疫荧光检测LC3荧光斑点表达。Starbase数据库分析miR-34a与ATG7的相关性,并采用荧光素酶报告基因实验验证miR-34a与ATG7的结合情况。SW480细胞共转染pcDNA3.1-miR-34a和pcDNA3.1-ATG7后,CCK-8法检测细胞活性,克隆形成实验检测细胞增殖水平。结果miR-34a在结直肠癌组织的表达低于相应癌旁组织,在结直肠癌细胞(RKO、LoVo、SW480和SW620)中的表达低于FHC细胞(均P<0.05)。过表达miR-34a72h后SW480细胞活性降低(P<0.01),自噬相关蛋白LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ降低(P<0.01),免疫荧光显示LC3荧光斑点减少(P<0.01)。过表达miR-34a 24 h后SW480细胞ATG7mRNA表达降低(P<0.01)。Starbase分析结果表明,miR-34a可以靶向结合ATG7。荧光素酶报告基因实验显示,miR-34a抑制野生型ATG7-3’UTR质粒转染的荧光素酶活性(P<0.01),而对突变型ATG7-3’UTR质粒转染的荧光素酶活性无影响(P>0.05)。共转染pcDNA3.1-miR-34a和pcDNA3.1-ATG772h后,SW480细胞活性相对增加(P<0.01),细胞增殖能力增强(P<0.01)。结论miR-34a通过靶向ATG7抑制结直肠癌细胞自噬和增殖。

Atg7介导Toll样受体4对脓毒症小鼠心肌自噬的影响和机制

目的:探究自噬相关基因7(Atg7)介导Toll样受体4(TLR4)在脓毒症心肌自噬的可能机制。方法:通过盲肠结扎穿孔术(CLP)制备脓毒症小鼠模型,造模后于0、8、16、24 h分别眼球取血检测血白细胞和炎症因子的变化;采用Western blot法检测心肌组织TLR4、Atg7、p53、p53上调凋亡调节因子(Puma)蛋白的变化;HE和Masson染色观察小鼠心肌组织的变化。结果:随着时间推移,小鼠血清中炎症因子(IL-β、IL-6、TNF-α)含量逐渐上升,血白细胞浓度下降,表明脓毒症模型建立成功。心肌HE和Masson染色表现出心肌损伤逐渐加重。与0 h比较,8、16、24 h小鼠心肌组织中TLR4、Atg7、p53、Puma的蛋白表达明显增加(P<0.05);与8 h比较,16和24 h心肌组织中TLR4、Atg7、p53、Puma的蛋白表达也明显增加(P<0.05)。结论:Atg7介导TLR4可能通过上调p53和Puma参与了脓毒症自噬引起的心肌损伤。

miR-543调控ATG-7影响肝癌细胞HepG2凋亡

目的探讨microRNA-543(miR-543)通过调控其靶基因自噬相关基因7(ATG-7)对肝癌细胞凋亡的影响。方法通过荧光定量PCR及western blot实验观察多株肝癌细胞株里miR-543和ATG-7的表达情况;选取与人源胚胎肾细胞(293T)相比ATG-7高表达的HepG2肝癌细胞分组,瞬时转染miR-543摸拟物和miR-543抑制剂,在HepG2细胞中使用Western blot方法检测ATG-7蛋白表达变化,再使用qRT-PCR检测miR-543和ATG-7的mRNA水平;经过microRNA数据库预测miR-543与ATG-7的结合区域,构建ATG-73’UTR野生型及突变型的荧光素酶质粒和miR-543质粒后,通过荧光素酶报告基因实验观察野生型及突变型的荧光素酶活性变化;用流式细胞仪检测转染miR-543模拟物和ATG-7质粒的HepG2细胞凋亡情况。结果多株肝癌细胞株中ATG-7蛋白水平表达情况不一,ATG-7的mRNA和miR-543表达水平呈负相关;选用ATG-7相对高表达的HepG2细胞,过表达miR-543后发现miR-543 mRNA升高后,ATG-7蛋白和mRNA水平随之降低;降低miR-543,ATG-7蛋白和mRNA水平随之升高;通过荧光素酶报告基因证实miR-543结合ATG-7 mRNA 3’UTR区域的特定序列来降低ATG-7的mRNA水平;通过细胞凋亡实验证实miR-543通过下调ATG-7抑制肝癌细胞凋亡。结论在肝癌细胞中miR-543下调ATG-7抑制肝癌细胞的凋亡。

免疫性血小板减少症(ITP)患儿外周血调节性T细胞数量减少伴随自噬的降低

目的检测自身抗体阳性的免疫性血小板减少症(ITP)患儿CD4^+CD25^+FOXP3^+调节性T细胞(Treg)数量以及自噬相关蛋白的表达。方法通过流式细胞术分选出初诊ITP患儿和健康对照儿童外周血中的Treg,根据抗体的平均荧光强度分别统计自噬相关基因5(ATG5)和ATG7蛋白水平,Western blot法检测CD4^+CD25^+Treg的蛋白激酶B(AKT)和细胞外信号调节激酶(ERK)的磷酸化水平。结果与健康对照儿童相比,ITP患儿Treg数量显著降低,ATG5和ATG7表达降低,AKT和ERK的磷酸化水平均显著降低。结论在初诊自身抗体阳性的ITP患儿中,Treg数量降低,伴随增殖相关蛋白磷酸化水平及细胞自噬水平的降低。

一例早发性卵巢功能不全患者的ATG7新发变异分析

早发性卵巢功能不全(POI)是女性生育力下降的重要原因之一.POI的病因复杂多样,大部分患者的病因仍待研究,其中遗传因素占POI病因的20%~25%.本研究通过全外显子组测序(WES)技术在一位汉族散发POI患者中发现ATG7基因的杂合c.1372G>A(p.V458M)变异.ATG7(autophagy-related 7)是自噬相关基因,已有研究揭示该基因缺陷可导致小鼠出现POI表型.本研究发现的ATG7 c.1372G>A变异在千人基因组、ExAC和gnomAD 3个数据库的东亚人群中均无报道,SIFT、PolyPhen-2、MutationTaster和CADD 4种不同算法均预测其有害.根据美国医学遗传学和基因组学会发布的序列变异解读标准与指南,该变异属于致病变异.家系回访揭示该变异属于新发变异,健康父母均为野生型纯合子.生物信息学预测发现该变异对应的氨基酸位于蛋白质的α螺旋区域,且在多物种中高度保守,提示该变异很可能诱导蛋白质功能受损.

饥饿诱导三阴性乳腺癌细胞株MDA-MB-231的自噬应答观察

目的观察饥饿诱导三阴性乳腺癌细胞株MDA-MB-231的自噬应答情况,并探讨其相关分子机制。方法将MDA-MB-231细胞分为四组,对照组加入DMEM培养液正常培养;Baf-A1组在DMEM培养液中加入100 nM的Baf-A1;EBSS(饥饿)组加入EBSS培养液;EBSS+Baf-A1(自噬阻断)组在EBSS培养液中加入100 nM的Baf-A1,四组均处理8 h后,分别采用实时荧光定量法和Western blotting法检测各组微管相关蛋白轻链3(LC3B)、自噬相关蛋白7(ATG7)和自噬相关蛋白4A(ATG4A)的mRNA及蛋白。结果与对照组比较,EBSS组LC3B、ATG7 mRNA相对表达量升高,ATG4A mRNA相对表达量降低;与EBSS组比较,EBSS+Baf-A1组LC3B mRNA相对表达量升高、ATG7 mRNA相对表达量降低,与Baf-A1组对比,EBSS+Baf-A1组中LC3B mRNA相对表达量增加,ATG7和ATG4A mRNA相对表达量降低。与对照组比较,EBSS组LC3BⅡ/LC3BⅠ升高,ATG4A蛋白表达降低;与EBSS组比较,EBSS+Baf-A1组LC3BⅡ/LC3BⅠ增加,ATG7蛋白表达降低;与Baf-A1组相比,EBSS+Baf-A1组LC3BⅡ/LC3BⅠ增加,ATG7蛋白表达降低。结论EBSS处理的MDA-MB-231细胞自噬水平升高,细胞自噬体形成增多,在此过程中EBSS可能通过增加ATG7 mRNA的表达量增加细胞自噬水平。

ATG5和ATG7基因多态性与儿童精神发育迟滞的相关性分析

目的探讨精神发育迟滞(MR)患者自噬相关基因与(ATG5)和ATG7基因多态性,并分析其与MR发生的相关性。方法选取2015年2月-2017年2月宁波大学医学院附属鄞州医院确诊的宁波地区MR患儿264例为研究组,选取同时间进行体检的正常儿童200例作为对照组;提取各受试者外周血基因组DNA,选取ATG5的SNP位点有:rs6568431、rs2299863、rs573775、rs510432及rs3804338;ATG7的SNP位点有:rs346078、rs1470612、rs11706903、rs2606750、rs2594972及rs4684787;获取目的基因序列,利用荧光探针检测SNP位点多态性。结果对照组ATG5基因和ATG7基因SNP位点基因型分布符合HWE分布,差异无统计学意义(P>0.05);ATG5基因的SNP位点中,rs6568431的等位基因频率和基因型频率在MR组和对照组中差异有统计学意义(P<0.05),其他位点差异无统计学意义(P>0.05)。ATG7基因的SNP位点中,rs1470612和rs2594972的等位基因频率和基因型频率在MR组和对照组中差异显著(P<0.05),其他位点无显著差异(P>0.05)。MR组患者ATG5基因的rs6568431和rs510432位点以及ATG7基因的rs1470612和rs2594972位点的基因型频率存在HWE偏离(P<0.05);ATG5的SNP位点间均存在较高的连锁不平衡(D1>0.8),ATG7的SNP位点间均存在较高的连锁不平衡,差异有统计学意义(D1>0.8);ATG5基因构建的单倍型中,CTC和ATC单倍型是MR发病危险因素,差异有统计学意义(P<0.05);ATG7基因SNP构建单倍型中,TGT单倍型是MR发病危险因素,差异有统计学意义(P<0.05)。结论MR患者ATG7和ATG5基因多态性可能与MR发病有关。

老年重症肺炎患者血清FOXO1、ATG7水平及与短期预后的关系

目的 探讨老年重症肺炎患者血清叉头状转录因子1(FOXO1)、自噬相关基因7(ATG7)的表达水平及与短期预后的关系。方法 选取2020年8月至2022年8月该院收治的122例老年重症肺炎患者作为病例组,另选取同期来该院进行健康体检的105例老年人作为对照组。采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测血清FOXO1、ATG7的表达水平。根据患者重症肺炎确诊后28 d内是否死亡分为存活组(n=91)和死亡组(n=31)。采用受试者工作特征(ROC)曲线评估血清FOXO1、ATG7表达水平对老年重症肺炎短期死亡的预测价值,采用多因素Logistic回归分析探讨老年重症肺炎短期死亡的影响因素。结果 病例组患者血清FOXO1、ATG7表达水平明显高于对照组,差异有统计学意义(t=7.615、29.591,P<0.05);老年重症肺炎死亡组患者血清FOXO1、ATG7表达水平均高于生存组,差异有统计学意义(t=10.029、9.399,P<0.05)。血清FOXO1、ATG7预测老年重症肺炎患者短期死亡的曲线下面积(AUC)分别为0.733(95%CI:0.673~0.799)、0.826(95%CI:0.756~0.893),两者联合预测的AUC为0.908(95%CI:0.862~0.949)。FOXO1、ATG7与急性生理与慢性健康评估(APACHEⅡ)评分呈正相关(r=0.693、0.627,均P<0.05)。多因素Logistic回归分析显示,APACHEⅡ评分≥22.56分(OR=3.589,95%CI:1.714~7.515),FOXO1≥10.67 ng/mL(OR=2.529,95%CI:1.232~5.193),ATG7≥16.35 pg/mL(OR=2.875,95%CI:1.414~5.845)是老年重症肺炎患者死亡的危险因素(P<0.05)。结论 老年重症肺炎患者血清FOXO1、ATG7表达水平明显升高,二者可用于评估老年重症肺炎患者的短期预后。

Atg7-siRNA通过调节精氨酸循环干扰食管癌ECA109细胞放疗敏感性

目的探讨siRNA干扰自噬相关基因7(Atg7)后,对ECA109细胞放疗敏感性的影响以及对精氨酸循环相关通路的调控。方法食管癌ECA109细胞分为Ctrl组、siRNA组、Ctrl+R8Gy组(8Gy放射剂量处理的转染Atg7-Ctrl的ECA109细胞)和siRNA+R8Gy组(8Gy放射剂量处理的转染Atg7-siRNA的ECA109细胞);采用Western blotting法分别检测各组细胞Atg7、Beclin-1、微管相关蛋白1轻链3Ⅱ(LC3Ⅱ)、精氨酸琥珀酸合成酶1(ASS1)和精氨酸琥珀酸裂解酶(ASL)蛋白的表达。CCK8实验检测精氨酸对ECA109细胞的影响,绘制不同浓度(0、8、16、32、64、128 mmol/L)精氨酸处理下的细胞存活曲线,并计算其IC50和IC10,将IC10作为后续实验的作用浓度。采用精氨酸和siRNA分别处理细胞,对细胞进行8Gy照射,24 h后通过计算细胞数量评估细胞的死亡率。结果无论放疗前后,siRNA干扰均可使细胞的Atg7蛋白下调(P<0.01)。与Ctrl组相比,Ctrl+R8Gy组自噬相关蛋白Beclin-1和LC3Ⅱ上调(P<0.01);与Ctrl+R8Gy组相比,siRNA+R8Gy组自噬相关蛋白Beclin-1和LC3Ⅱ下调(P<0.01)。与Ctrl+R8Gy组相比,siRNA+R8Gy组精氨酸循环相关通路蛋白ASS1和ASL上调(P<0.01)。精氨酸对ECA109细胞具有增殖抑制作用,且呈浓度和时间依赖性。放疗后24 h,细胞死亡量分析显示,siRNA干扰可以提高细胞死亡率(F=73.59,P<0.001),添加精氨酸可以提高细胞死亡率(F=158.72,P<0.001),siRNA和精氨酸同时作用时细胞死亡率最高(F=7.88,P=0.02)。结论放疗可以诱导ECA109细胞发生自噬,Atg7敲低可以拮抗放疗诱导的自噬,提高放疗诱导的ECA109细胞死亡率,增加ECA109细胞对放疗的敏感性。Atg7敲低可以调控ECA109细胞放疗后精氨酸循环相关通路蛋白,提高精氨酸浓度增加ECA109细胞的放射敏感性。