自噬相关基因Atg7的表达对乙型肝炎病毒复制的影响

目的探讨Atg7的表达对乙型肝炎病毒感染肝细胞中HBV复制的影响。方法选取2019年4~5月首都医科大学附属北京市佑安医院慢性乙型肝炎病毒感染者的肝组织石蜡切片,采用免疫荧光染色观察Atg7、LC3和HBs的表达情况;利用Atg7表达质粒和小干扰RNA在HepG2.2.15细胞中建立Atg7过表达组及Atg7减少组,给予不同时间段的饥饿处理,利用蛋白质免疫印迹和实时定量PCR观察两组模型中自噬及HBV病毒复制水平的变化。采用SPSS 17.0统计学软件进行数据分析。结果在HBs阳性细胞中,Atg7和LC3的表达量高于HBs阴性细胞;Atg7过表达饥饿处理后,自噬水平、HBc和HBV-DNA表达量高于对照,且自噬和HBV的复制水平在饥饿6 h增加最显著,差异有高度统计学意义(P<0.01)。Atg7敲减饥饿处理后,细胞自噬水平、HBc和HBV DNA表达量均低于对照,在饥饿6 h减少最为显著,差异有高度统计学意义(P<0.01)。结论HBV感染引起Atg7的表达增加,自噬增强;在自噬早期干预Atg7的表达会显著影响HBV复制。

Calpain 2调节自噬相关基因ATG7的表达在非酒精性脂肪性肝病中的作用

目的明确Calpain 2及自噬相关基因7(autophagy related gene 7,ATG7)在非酒精性脂肪性肝病中的表达变化及意义。方法应用高脂饮食喂养SD大鼠建立非酒精性脂肪性肝病(non-alcoholic fatty liver disease,NAFLD)在体模型,并按时相点分为4、8、12周及16周组,同时设立正常饮食组为对照组,每组6只。检测各组大鼠血清ALT、AST、FFA水平,通过HE染色观察肝脏脂肪变情况,利用Real-time PCR及Western blot检测Calpain 2及ATG7的表达变化。结果①HE染色提示肝脏脂肪变程度随高脂饮食喂养时间的延长而加重。NAFLD大鼠模型各时相点血清ALT、AST、FFA水平均较对照组有不同程度的升高,在16周组时分别为(165.95±7.24)U/L、(249.52±4.20)U/L、(0.83±0.05)mmol/L,与对照组比较均有明显的升高(P<0.01)。②以正常饮食组为对照组,肝组织Calpain 2 mRNA相对表达量在高脂饮食喂养后开始上调,在16周时升高最为明显(9.83±0.85,P<0.01);ATG7的mRNA相对表达量在4周组(0.82±0.02)即开始下降,在16周组(0.20±0.03)降至最低,与对照组比较降低显著(P<0.01)。③与对照组比较,Calpain 2蛋白相对表达水平与mRNA表达水平一致,4周组(2.32±0.45)时开始上调,16周组明显上升(9.87±1.20,P<0.01)。而ATG7的蛋白相对表达水平则随肝脏脂肪变性的进展明显下降,16周时降低最为明显(0.18±0.05,P<0.01)。结论脂肪肝发生过程中,Calpain 2的表达上调抑制了自噬相关基因ATG7的表达,进而减弱了自噬对细胞的保护作用,导致肝细胞的损伤加重,自噬可能参与了NAFLD的发生。

晚发散发性帕金森病与自噬相关基因Atg7 rs2606757位点基因多态性的关联研究

目的探讨晚发散发性帕金森病(PD)与自噬相关基因Atg7基因rs2606757位点多态性的关联。方法在124例晚发散发性PD患者(病例组)和同期105例年龄、性别匹配的健康体检者(对照组)中,应用聚合酶链式反应-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)及对部分标本基因测序的方法检测Atg7基因rs2606757位点的基因型频率,并分析其基因型及等位基因频率在两组中的分布特点。结果病例组和对照组AA基因型频率分别为34.7%(43/124)和53.3%(56/105),(χ^2=8.063,P=0.005),OR值为0.465(95%CI:0.273~0.791)。性别分层分析发现携带rs2606757 AA基因型的男性发生晚发散发性PD的风险降低[病例组33.3%(23/69)比对照组53.2%(33/62)](χ^2=5.280,P=0.022),OR值为0.439(95%CI:0.217~0.891)。Logistics回归分析发现,两组间Atg7基因rs2606757位点AA基因型频率差异有统计学意义(P=0.004),OR值为2.210(95%CI:1.289~3.789)。结论Atg7基因rs2606757位点AA基因型可能与男性晚发散发性PD患病风险降低有关。

风湿性心脏病患者血清类风湿因子、自噬相关基因7水平与心功能、免疫炎症的关系

目的探讨类风湿因子(RF)、自噬相关基因7(Atg7)在风湿性心脏病患者血清中的表达及与心功能、免疫炎症的相关性。方法选取2018年5月至2021年5月长江大学附属仙桃市第一人民医院收治的102例风湿性心脏病患者为观察组,并根据纽约心脏协会心功能分级将患者分为Ⅳ级组(34例)、Ⅲ级组(36例)、Ⅱ级组(32例)。按照年龄、性别随机选择100例健康体检者为对照组。收集一般资料,检测血清RF、Atg7、免疫炎症相关指标水平并进行心脏超声检查。Pearson法分析RF、Atg7与心功能、免疫炎症指标的相关性。利用ROC曲线评价血清RF、Atg7水平对风湿性心脏病患者的诊断价值。结果观察组患者血清中RF、Atg7表达水平均高于对照组,差异有统计学意义(t=72.872、15.973,均P<0.05);心功能Ⅳ级组和Ⅲ级组患者RF、Atg7、左心室舒张末期内径(LVEDD)水平均高于Ⅱ级患者,左心室射血分数(LVEF)均低于Ⅱ级组患者,差异有统计学意义(P<0.05);心功能Ⅳ级组患者RF、Atg7、LVEDD水平高于Ⅲ级组患者,LVEF低于Ⅲ级组患者,差异有统计学意义(P<0.05);风湿性心脏病患者血清中RF与Atg7表达呈正相关(r=0.463,P<0.05);风湿性心脏病患者血清中RF、Atg7表达与超敏C反应蛋白、肿瘤坏死因子-α、白介素6、红细胞沉降率、免疫球蛋白A、免疫球蛋白G、免疫球蛋白M、LVEDD均呈正相关,与LVEF均呈负相关(P<0.05);血清RF、Atg7水平预测风湿性心脏病患者的ROC曲线下面积分别为0.856(95%CI=0.799~0.901)、0.843(95%CI=0.786~0.890),对应的敏感度分别为84.31%、86.27%,特异度分别为89.00%、83.00%。两者联合检测风湿性心脏病患者的ROC曲线下面积为0.933(95%CI=0.889~0.963),敏感度和特异度分别为87.25%、86.00%。结论RF、Atg7在风湿性心脏病患者血清中高表达,与患者心功能及免疫炎症密切相关。

自噬相关基因ATG5在感染和炎症性疾病中的作用

自噬对生物体维持细胞内环境具有至关重要的作用。目前已经证实自噬广泛参与多种疾病的发生发展过程,例如肿瘤、免疫性疾病以及炎症性疾病等,其与炎症性疾病相关性更加密切,也是近年来的研究热点。自噬相关基因(ATGs)参与调节自噬的许多方面,其中ATG5主要参与自噬小体的双层膜弯曲,对自噬的发生起决定性作用。本文主要概述近年研究发现ATG5在炎症性疾病中的机制,并探讨自噬其作为炎症性疾病治疗方向的可能性,为炎症性疾病的诊治提供新的思路。

过表达或抑制肿瘤相关巨噬细胞B7-H1基因对卵巢癌增殖侵袭的机制研究

目的:探讨过表达或抑制肿瘤相关巨噬细胞(TAM)B7-H1基因对卵巢癌增殖侵袭的影响及机制。方法:在体外刺激人单核THP-1细胞成为巨噬细胞,并诱导为TAM,通过腺病毒载体系统过表达(Ad-B7-H1)或抑制(Ad-si B7-H1)TAM中的B7-H1基因,通过Western blot检测转染后的TAM中的B7-H1表达;单独培养(Alone组)与过表达(si B7-H1-TAM组)或抑制(B7-H1-TAM组)B7-H1基因的TAM共培养后,CCK8法检测CAOV3细胞的活力。Transwell小室检测细胞的迁移能力;Western blot检测Ki67、基质金属蛋白酶2(MMP-2)、基质金属蛋白酶9(MMP-9)、磷酸化的蛋白酪氨酸激酶2(p-JAK2)、磷酸化的信号转导与转录因子3(p-STAT3)。结果:Ad-si B7-H1组B7-H1的表达显著低于对照组,Ad-B7-H1组B7-H1的表达显著高于对照组(P<0.05);与单独培养组比较,TAM组细胞活力、细胞侵袭能力及Ki67、MMP-2、MMP-9、p-JAK2和p-STAT3的蛋白表达均显著升高(P<0.05),与RFP-TAM组比较,si B7-H1-TAM组的细胞活力、细胞侵袭能力及Ki67、MMP-2、MMP-9、pJAK2和p-STAT3的蛋白表达均显著降低,B7-H1-TAM组的细胞活力、细胞侵袭能力及Ki67、MMP-2、MMP-9、p-JAK2和pSTAT3的蛋白表达均显著升高(P<0.05)。结论:抑制肿瘤相关巨噬细胞B7-H1基因可抑制卵巢癌细胞活力及侵袭能力,下调JAK2/STAT3信号通路,过表达B7-H1基因反之。

诱导/封闭自噬相关基因7对肾癌786-0细胞自噬的调控作用研究

目的探讨诱导/封闭Atg7对肾癌786-0细胞自噬的调控作用。方法构建上调Atg7的慢病毒载体plenti6.3-Atg7,下调Atg7的慢病毒载体sh-Atg-1lv、sh-Atg-2lv,空载对照慢病毒载体sh-scramb-con lv、plenti6.3-GFP,分别转染肾癌786-0细胞系,未转染的786-0细胞系为空白对照。RT-PCR和Western blot检测各组Atg7的表达,研究plenti6.3-Atg7激活Atg7效率和sh-Atg-1lv、sh-Atg-2lv抑制Atg7效率。Western blot检测上述各组细胞LCII/LC3I蛋白比值,研究上调及下调Atg7对肾癌786-0细胞自噬的激活及抑制作用。结果经过筛选,成功构建稳定上调Atg7的786-0/plenti6.3-Atg7xbx细胞系、稳定下调Atg7的786-0/sh-Atg-2lv细胞系、空载对照786-0/sh-scramb-con lv、786-0/plenti6.3-GFP细胞系。与空白对照组比较,Atg7上调组786-0细胞LCII/LC3I比值显著升高(3.31±0.12 vs.2.23±0.10 P<0.01),具有稳定的自噬激活作用;Atg7下调组的786-0细胞LCII/LC3I比值显著降低(1.45±0.11 vs.2.23±0.10 P<0.01),具有稳定自噬抑制作用。结论上调Atg7对肾癌786-0细胞系具有自噬激活作用,下调Atg7对肾癌786-0细胞系具有自噬抑制作用。

急性心肌梗死患者自噬相关基因-7与心电图QRS波时限的相关性分析

目的检测急性心肌梗死患者血清中自噬相关基因-7(ATG-7)与心电图QRS波时限情况,分析二者的相关性。方法选择2017年1月至2018年6月于河南科技大学第一附属医院心内科收治的120例急性心肌梗死患者为研究对象,按照心电图QRS波时限分为QRS波时限≥110 ms组(n=69)和QRS波时限<110 ms组(n=51),根据随访期间是否发生主要不良心血管事件分为未发生组(n=72)和发生组(n=48)。收集两组患者的一般资料并进行分析;酶联免疫吸附(ELISA)法检测血清中ATG-7水平;Pearson法分析患者QRS波时限与血清ATG-7水平的相关性;分析急性心肌梗死患者血清中ATG-7水平与主要不良心血管事件发生率的关系。结果与QRS波时限<110 ms组相比,QRS波时限≥110 ms组患者血清中ATG-7水平升高(P<0.05),急性肺水肿、恶性心律失常比例增加(P<0.05)。急性心肌梗死患者血清中ATG-7水平与QRS波时限呈正相关(P<0.05)。与QRS波时限<110 ms相比,120 ms≤QRS波时限<130 ms、QRS波时限≥130 ms主要不良心血管事件发生率升高(P<0.05);与110 ms≤QRS波时限<120 ms相比,QRS波时限≥130 ms主要不良心血管事件发生率升高(P<0.05)。与未发生组相比,发生组患者血清中ATG-7水平升高(P<0.05)。结论急性心肌梗死患者血清ATG-7水平与QRS波时限呈正相关,二者与主要不良心血管事件发生情况关系密切,尽早检测血清中ATG-7水平对于急性心肌梗死具有一定意义。

自噬相关基因LC3和ATG5在胃癌中的表达及临床意义

目的探讨自噬相关基因微管相关蛋白1轻链3(microtubule-associated protein 1 light chain 3,LC3)和自噬相关基因-5(autophagy related gene-5,ATG5)在胃癌细胞发生发展不同阶段的表达情况并分析其临床意义。方法选取胃黏膜正常细胞、胃黏膜不典型增生细胞、胃癌细胞共58例,分别记为正常组(17例)、不典型组(19例)、胃癌组(22例),采用qRT-PCR、Western Blot、免疫组织化学法检测每组中自噬相关基因LC3和ATG5的mRNA及蛋白表达水平,应用SPSS 23.0软件分析正常组、不典型组、胃癌组3组间LC3和ATG5的mRNA及蛋白表达情况,并分析LC3和ATG5蛋白表达的相关性以及LC3和ATG5蛋白表达与胃癌患者临床病理学参数的关系。结果正常组、不典型组、胃癌组中LC3和ATG5 mRNA及蛋白表达水平逐渐升高,各组间差异均有统计学意义(P<0.05)。LC3蛋白表达情况与性别、年龄、浸润深度、分化程度及淋巴结状态均不存在相关性。ATG5蛋白表达情况与浸润深度、分化程度及淋巴结状态均有相关性。LC3和ATG5蛋白在3组中均呈正相关(P<0.05)。结论细胞自噬可促进胃癌的发生发展,其机制可能与LC3、ATG5过度表达有关。LC3、ATG5在促进胃癌的发生发展中起相互协同的作用。

支气管哮喘患儿基质金属蛋白酶-16、自噬相关基因5和自噬相关基因7的表达及其与肺功能的相关性

目的探讨支气管哮喘患儿外周血单个核细胞中基质金属蛋白酶-16(MMP-16)、自噬相关基因5(ATG5)、自噬相关基因7(ATG7)表达水平与肺功能的相关性。方法选取哮喘患儿80例作为观察组,健康体检儿童80例作为对照组。采集观察组和对照组患儿血样,检测第1秒用力呼气容积占预计值百分比(FEV_(1)%)、用力肺活量(FVC)、最大呼气峰流速占预计值百分比(PEF%),计算第1秒用力呼气容积占用力肺活量的比率(FEV_(1)/FVC)。采用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)法检测外周血单个核细胞MMP-16 mRNA、ATG5 mRNA和ATG7 mRNA水平;采用Pearson法分析急性发作期哮喘患儿MMP-16 mRNA、ATG5 mRNA、ATG7 mRNA与肺功能指标的相关性。结果MMP-16 mRNA、ATG5 mRNA、ATG7 mRNA水平在对照组患儿和观察组临床缓解期患儿及急性发作期患儿中呈依次显著升高趋势(P<0.05);FEV_(1)%、FEV_(1)/FVC和PEF%在对照组患儿和观察组临床缓解期患儿及急性发作期患儿中呈依次显著降低趋势(P<0.05)。急性发作期哮喘患儿外周血单个核细胞MMP-16 mRNA与ATG5 mRNA、MMP-16 mRNA与ATG7 mRNA、ATG5 mRNA与ATG7 mRNA均呈显著正相关(r=0.536、0.542、0.534,P<0.05),且MMP-16 mRNA、ATG5 mRNA、ATG7 mRNA均与FEV_(1)%、FEV_(1)/FVC、PEF%呈显著负相关(P<0.05)。与轻度组比较,中重度组外周血单个核细胞MMP-16 mRNA、ATG5 mRNA、ATG7 mRNA水平较高,FEV_(1)%、FEV_(1)/FVC、PEF%较低,差异有统计学意义(P<0.05)。结论哮喘患儿外周血单个核细胞MMP-16 mRNA、ATG5 mRNA、ATG7 mRNA水平较高,且均与肺功能有密切联系。

人自噬相关蛋白ATG7的原核表达及纯化鉴定

目的:原核表达并纯化自噬相关蛋白ATG7,初步鉴定其生物学活性。方法:利用PCR技术从人乳腺文库中扩增出人ATG7基因的编码序列,插入载体p ET-28a(+)得到重组质粒,经Bam HⅠ和NotⅠ双酶切鉴定后转化大肠杆菌Rossate菌株进行小量诱导,纯化融合蛋白His-ATG7,通过Western印迹和SDS-PAGE检测融合蛋白的纯化效果。结果:用PCR技术从人乳腺文库中扩增得到约2031 bp的目的片段,插入载体p ET-28a(+)后构建出His-ATG7重组质粒,并经酶切鉴定及测序证实无误;转化大肠杆菌Rossate并进行小量诱导,纯化后SDS-PAGE检测显示获得相对分子质量约为78×103的融合蛋白。结论:纯化得到原核系统表达的His-ATG7融合蛋白,为后续研究ATG7在自噬中的作用机制奠定了实验基础。

血清微小RNA-20a和自噬相关基因7对急性ST段抬高型心肌梗死患者经皮冠状动脉介入治疗后主要不良心血管事件的预测

目的探讨血清微小RNA(miR)-20a和自噬相关基因7(ATG7)对急性ST段抬高型心肌梗死(STEMI)患者经皮冠状动脉介入治疗(PCI)后主要不良心血管事件(MACE)的预测价值。方法纳入行PCI的初发急性STEMI患者233例,根据院内预后情况分为MACE组64例和非MACE组169例。比较两组患者血清氨基末端脑钠肽前体(NT-proBNP)、Ⅲ型前胶原氨端肽(PⅢNP)、ATG7及miR-20a水平并分析其相关性。结果MACE组患者年龄、NT-proBNP、PⅢNP、ATG7水平及Killip心功能Ⅳ级患者比例均高于非MACE组,血清miR-20a水平低于非MACE组(P<0.05)。多因素logistic回归分析结果显示,高龄、Killip心功能Ⅳ级、NT-proBNP、PⅢNP及ATG7水平升高是急性STEMI患者PCI后发生院内MACE的独立危险因素,而血清miR-20a水平升高是其独立保护因素(P<0.05)。Pearson相关分析结果显示,血清miR-20a与ATG7、NT-proBNP、PⅢNP均呈负相关(P<0.05),而血清ATG7与NT-proBNP、PⅢNP均呈正相关(P<0.05)。受试者工作特征(ROC)曲线分析结果显示,血清miR-20a联合ATG7预测急性STEMI患者PCI后发生院内MACE的价值高于血清miR-20a和ATG7。结论血清miR-20a和ATG7均与NT-proBNP、PⅢNP密切相关,是急性STEMI患者PCI后发生院内MACE的独立预测因素。

miR-148b-3p通过靶向自噬相关基因14(ATG14)抑制急性髓系白血病细胞增殖与自噬

目的探讨微小RNA-148b-3p(miR-148b-3p)对急性髓系白血病(AML)细胞增殖和自噬的影响及其机制。方法基于基因表达数据集(GEO)和癌症基因组图谱(TCGA),采用生物信息学软件分析miR-148b-3p在AML细胞中的表达及其与患者临床预后的关系;实时荧光定量PCR检测AML细胞中miR-148b-3p表达。用脂质体法将miR-148b-3p模拟物(miR-148b-3p mimic)和miR-148b-3p抑制物(miR-148b-3p inhibitor)分别瞬时转入THP-1和NB4细胞,采用CCK-8法和5-乙炔基-2′脱氧尿嘧啶核苷(EdU)法检测细胞增殖,Western blot法检测B细胞淋巴瘤因子2(Bcl2)、Bcl2相关X蛋白(BAX)、自噬标志物微管相关蛋白1轻链3(LC3)、P62和自噬相关基因14(ATG14)蛋白水平;双荧光素酶报告基因实验检测miR-148b-3p对ATG14的靶向结合,回复实验观察miR-148b-3p/ATG14轴对AML细胞表型的影响。结果AML患者细胞低表达miR-148b-3p,miR-148b-3p低表达的AML患者总体生存率较对照组显著降低;过表达miR-148b-3p可抑制THP-1细胞增殖和促进凋亡、并下调LC3Ⅱ、ATG14及上调P62蛋白水平,而抑制NB4细胞中miR-148b-3p表达则观察到相反的作用;此外,miR-148b-3p能显著降低野生型ATG14表达载体的荧光素酶活性,回复实验结果显示过表达ATG14可逆转miR-148b-3p上调对细胞增殖和自噬的抑制作用,而抑制ATG14表达则能减弱miR-148b-3p下调对细胞表型的促进作用。结论miR-148b-3p通过靶向结合ATG14抑制AML细胞的体外增殖和自噬。

茄子自噬相关基因ATG8家族鉴定及表达分析

自噬相关基因ATG8在调节植物生长发育和胁迫响应中发挥着关键作用。为初步探究ATG8基因在茄子生长发育和胁迫响应中的作用,本研究通过生物信息学技术分析ATG8在茄子基因组中的分布、结构及进化等,并利用实时荧光定量PCR技术研究其在茄子不同组织、外源激素和冷处理下的表达情况。结果表明,从茄子基因组中共鉴定到7个ATG8基因,分布在6条染色体上。理化性质分析显示,茄子ATG8基因编码的蛋白包含118~166个氨基酸残基,等电点在6.29~9.16之间;基因结构和保守基序分析表明,ATG8基因家族成员具有保守的基因结构和蛋白基序;启动子区域含有多种激素响应和逆境响应的顺式作用元件;茄子中有3对ATG8基因存在共线关系;茄子与拟南芥和番茄ATG8基因家族成员间分别存在10对和11对共线关系。组织表达分析表明茄子ATG8主要在不同的花器官中表达,表明其可能与茄子花发育有关;此外,表达模式分析结果显示,7个茄子ATG8基因对冷胁迫和ABA、MeJA、SA等外源激素均有不同程度的响应,表明ATG8基因家族在茄子生长发育、胁迫和激素响应中具有重要的功能。本研究结果为深入探讨ATG8基因在茄子生长发育和胁迫响应中的功能和机理奠定理论基础。

ATG3 rs2638029、rs3732817基因多态性与广西地区抗中性粒细胞胞质抗体相关性小血管炎的相关性

目的探讨广西地区人群自噬相关基因(ATG)3 rs2638029、rs3732817位点多态性与原发抗中性粒细胞胞质抗体相关性小血管炎(AAV)的关联关系。方法采用多重PCR结合高通量测序技术检测194例AAV患者(AAV组)和195例健康成人(对照组)ATG3 rs2638029、ATG3 rs3732817位点的基因型,并收集受试者相关临床资料,分析其基因多态性与AAV易感性、临床症状的关系。结果ATG3 rs2638029、ATG3 rs3732817等位基因和基因型在AAV组和对照组分布差异无统计学意义(P>0.05),两位点存在连锁不平衡(D′=0.969,r^(2)=0.249),两位点可构建3个常见单体型,在AAV组和对照组中,各单体型分布差异无统计学意义(P>0.05)。ATG3 rs2638029及rs3732817不同基因型之间,水肿、血尿、蛋白尿症状发生率比较差异无统计学意义(P>0.05)。ATG3 rs2638029位点不同基因型IgG水平分布差异有统计学意义(P<0.05)。ATG3 rs3732817位点不同基因型白蛋白水平分布差异有统计学意义(P<0.05)。结论广西人群中的AAV患者ATG3基因多态性可能与IgG水平升高、低白蛋白血症相关联,但可能与AAV患者的遗传易感性无明显关联性。

血清Nox2、ATG7水平对新生儿窒息心肌损伤的评估价值

目的探讨自噬相关基因-7(ATG7)、烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸氧化酶2(Nox2)在新生儿窒息病儿血清中的表达及早期诊断价值。方法选取2019年1月至2021年12月在郑州大学第三附属医院产科分娩的75例新生儿窒息病儿为研究组,根据是否合并心肌损伤将病儿分为窒息心肌损伤组31例,窒息非心肌损伤组44例。同期选择50例健康足月新生儿为对照组。收集一般资料,采用酶联免疫吸附测定(ELISA)测量血清ATG7水平,采用蛋白质印迹法检测Nox2水平,以Nox2/β肌动蛋白的灰度比值为Nox2表达量;采用Pearson法分析ATG7、Nox2表达的相关性及与各指标的相关性;利用受试者操作特征曲线(ROC曲线)评价Nox2、ATG7水平对新生儿窒息心肌损伤的诊断价值。结果与对照组[0.26±0.06、(4.83±0.61)ng/L]比较,新生儿窒息病儿血清Nox2(0.65±0.09)、ATG7[(21.04±3.66)ng/L]表达水平升高,且窒息心肌损伤组[0.85±0.11、(24.23±3.98)ng/L]病儿血清中Nox2、ATG7水平高于窒息非心肌损伤组[0.51±0.08、(18.80±3.43)ng/L](P<0.05);窒息心肌损伤病儿血清中Nox2、ATG7表达呈显著正相关(r=0.57,P<0.05);病儿血清中Nox2和ATG7表达与肌酸激酶同工酶(CK-MB)、缺血修饰白蛋白(IMA)、超敏C-反应蛋白(hs-CRP)、氨基末端脑钠肽前体(NT-ProBNP)、肌钙蛋白I(cTnI)、肌红蛋白表达均呈正相关(P<0.05);ROC曲线结果显示,血清Nox2、ATG7水平预测新生儿窒息合并心肌损伤的曲线下面积(AUC)及其95%CI分别为0.91(0.82,0.96)、0.89(0.80,0.95),对应的灵敏度分别为83.87%、87.10%,特异度分别为84.09%、75.00%,二者联合预测的AUC及其95%CI为0.92(0.84,0.97),灵敏度为90.32%,特异度为81.82%。结论窒息心肌损伤病儿血清中Nox2、ATG7表达均上调,二者联合检测对窒息心肌损伤有一定的诊断价值。

miR-7-5p靶向调控ATG4A介导自噬对子宫内膜癌细胞增殖、侵袭的影响

目的观察miR-7-5p在子宫内膜癌组织中的表达情况,并探讨miR-7-5p对子宫内膜癌细胞(HEC-1B)增殖、侵袭的影响及其机制。方法利用逆转录聚合酶链反应法(qRT-PCR)实验检测42例子宫内膜癌患者子宫内膜癌组织和癌旁正常组织中miR-7-5p的表达水平,并分析其与临床病理学特征的关系;CCK-8法及Tran⁃swell试验检测过表达miR-7-5p后HEC-1B细胞增殖及侵袭情况;通过生物信息学预测网站预测到自噬相关基因4A(ATG4A)与miR-7-5p有互补结合位点,并利用双荧光素酶报告系统鉴定它们的靶向关系;再通过Western blot实验检测上调miR-7-5p表达后HEC-1B细胞中ATG4A、LC3-Ⅱ、p62的表达情况,以及敲低ATG4A表达后LC3-Ⅱ、p62的表达情况。结果miR-7-5p在子宫内膜癌组织中相对表达量明显低于癌旁组织(t=18.65,P<0.05),其表达量与FIGO分期、肿瘤浸润深度及淋巴结转移密切相关(t分别=2.45、3.40、2.27,P均<0.05);上调miR-7-5p表达能明显抑制HEC-1B细胞的增殖能力以及侵袭能力(t分别=59.89、8.99,P均<0.05);miR-7-5p靶向调控ATG4A的表达,上调miR-7-5p水平能降低ATG4A、LC3-Ⅱ的表达(t分别=7.82、12.88,P均<0.05),升高p62的表达(t=-10.42,P<0.05),而敲低ATG4A水平后LC3-Ⅱ表达降低(t=11.41,P<0.05),p62表达升高(t=-23.13,P<0.05)。结论miR-7-5p与子宫内膜癌的发展及预后密切相关,miR-7-5p可通过靶向调控ATG4A基因的表达,抑制细胞自噬活性,从而降低HEC-1B细胞的增殖及侵袭水平。

日本三角涡虫细胞自噬基因Atg5的克隆和功能研究

细胞自噬相关基因Atg5在细胞自噬过程中发挥重要作用,其功能丧失损坏神经发生和轴突再生。涡虫是研究脑再生的良好模型,其头部切除后1周就能再生出1个新的脑结构。因此,研究Atg5基因在涡虫脑再生中的作用对探究自噬调控神经再生具有重要意义。本研究克隆了日本三角涡虫Atg5基因(DjAtg5)的全长cDNA序列,并利用RNAi技术研究了其在涡虫再生中作用。结果显示,DjAtg5 cDNA全长1014 bp,编码284个氨基酸。DjATG5含有ATG5蛋白质家族的Pfam结构域和高度保守的ATG5-ATG12相互结合位点。切割虫体后,DjAtg5表达显著增加。再生3~5天,其转录本主要在新再生的脑结构表达。但是,敲降DjAtg5并未引起涡虫脑再生异常,且对涡虫干细胞的增殖也未见明显影响。研究结果表明,DjAtg5参与涡虫脑结构的重新形成,但不是涡虫再生的重要调控因子。然而,自噬抑制剂3-MA能够阻止涡虫再生,说明细胞自噬机制对涡虫再生非常重要。

MTDH基因和ATG7基因在结直肠癌中的表达及临床意义

目的探讨异黏蛋白(MTDH)基因和自噬相关基因7 (ATG7)在结直肠癌(CRC)中的表达及临床意义。方法选取66例CRC患者的CRC组织及癌旁组织,比较CRC组织及癌旁组织中的MTDH mRNA和ATG7mRNA的相对表达量;比较不同临床特征CRC患者的CRC组织/癌旁组织MTDH mRNA、ATG7 mRNA的相对表达量;采用受试者工作特征(ROC)曲线分析CRC组织/癌旁组织中MTODH mRNA和ATG7 mRNA对结直肠癌的诊断价值,并分析MTDH mRNA与ATG7 mRNA的相关性。结果 CRC组织中MTDH mRNA和ATG7 mRNA相对表达量显著高于癌旁组织(P <0.01);TNM分期为Ⅲ~Ⅳ和有肝转移的CRC患者中,CRC组织/癌旁组织中的MTDH mRNA和ATG7 mRNA相对表达量均显著高于Ⅰ~Ⅱ期和无肝转移的CRC患者,低分化程度的CRC患者中CRC组织/癌旁组织中的MTDH mRNA和ATG7 mRNA相对表达量最高(P <0.01)。ROC曲线分析结果 CRC组织/癌旁组织中MTDH mRNA、ATG7 mRNA的AUC面积分别是0.934、0.900,诊断敏感度分别为90.91%、89.39%,特异度分别为86.37%、84.35%。Pearson分析结果表明CRC中MTDH的表达与ATG7的表达呈正相关(r=0.372,P=0.002)。结论 CRC组织中MTDH mRNA、ATG7 mRNA的表达高于癌旁组织。CRC组织中MTDH mRNA、ATG7 mRNA与TNM分期、分化程度、伴肝转移相关。CRC组织中MTDH mRNA、ATG7 mRNA具有诊断价值且两者具有正相关。

黑色素瘤分化相关基因-7研究进展

黑色素瘤分化相关基因 7(MDA 7)是一分泌型肿瘤细胞抑制因子。许多肿瘤细胞MDA 7mRNA水平明显高于原发和转移的人黑色素瘤细胞。MDA 7通过抑制血管生成、激活GADD等信号传导途径 ,促进肿瘤细胞的生长抑制和凋亡 ,而对正常细胞无明显影响。MDA 7是第一个被报道的具有白介素作用的肿瘤抑制分子。