妊娠期糖尿病母亲新生儿脐血膜联蛋白A7水平与脑损伤的相关性研究

目的 分析妊娠期糖尿病母亲新生儿脐血膜联蛋白A7水平与脑损伤的相关性。方法 选取60例分娩的妊娠期糖尿病母亲新生儿为研究组,另选取60例分娩的妊娠期正常血糖母亲新生儿为对照组。两组新生儿均抽取脐血,运用酶联免疫吸附法检测脐血膜联蛋白A7水平, 3 d后运用新生儿20项行为神经评分法(NBNA)对新生儿进行神经行为评估;对比两组新生儿脐血膜联蛋白A7水平、NBNA评分以及脑损伤发生率,并运用Pearson相关性分析法分析脐血膜联蛋白A7水平与NBNA评分的相关性。结果 研究组新生儿脐血膜联蛋白A7(27.24±3.18)μg/L高于对照组的(22.95±2.69)μg/L, NBNA评分(36.34±1.27)分低于对照组的(38.25±1.56)分,脑损伤发生率13.33%高于对照组的1.67%(P<0.05)。Pearson相关性分析结果显示,脐血膜联蛋白A7水平与NBNA评分呈负相关性(r=-0.613,P<0.05)。结论 妊娠期糖尿病母亲新生儿脐血膜联蛋白A7水平与脑损伤之间存在一定的关联性,新生儿脐血膜联蛋白A7水平可作为预测新生儿脑损伤的参考指标。

补体C1q肿瘤坏死因子相关蛋白7在心血管代谢性疾病中的作用及机制

心血管代谢性疾病(cardiometabolic disease,CMD)是指代谢系统和心血管系统单一或者同时发生、可相互影响的病理改变,是代谢性疾病和心血管疾病的总称。包括肥胖、胰岛素抵抗、代谢综合征、糖尿病以及冠心病等。脂肪因子在CMD的发生发展中发挥关键性作用。补体C1q肿瘤坏死因子相关蛋白7(complement C1q TNF-related protein 7,CTRP7)是新近发现的脂肪因子,与肥胖、糖尿病及冠心病等CMD密切相关。本文围绕CTRP7生物学特性,综述其在CMD(包括肥胖、2型糖尿病和冠心病)发生发展中的作用,及可能的作用机制如多种途径调控糖脂代谢、降低胰岛素敏感性、促进炎症反应和增加氧化应激等,以期为CTRP7作为CMD的治疗靶标提供依据和参考。

膜相关环指蛋白7在上皮性卵巢癌组织和细胞中的表达及作用机制研究

目的:探究膜相关环指蛋白7(MARCH7)在上皮性卵巢癌(EOC)组织和细胞中的表达及作用机制。方法:选取就诊且经手术治疗的患者32例,包括EOC患者16例和卵巢组织正常患者16例,收集EOC患者和卵巢组织正常患者的卵巢组织标本,采用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测MARCH7 mRNA表达水平。构建过/低表达MARCH7的上皮性卵巢癌细胞(SKOV3、CAOV3)后,采用Transwell实验观察MARCH7对EOC细胞迁移和侵袭能力的影响,采用Western blot检测过/低表达MARCH7的EOC细胞上皮-间质转化(EMT)相关蛋白E-钙粘蛋白(E-cadherin)、N-钙粘蛋白(N-cadherin)、锌指转录因子1(Snail1)、锌指转录因子2(Slug)蛋白表达。结果:卵巢癌组织MARCH7 mRNA表达水平高于正常卵巢组(P<0.05)。在SKOV3和CAOV3细胞中,正常对照组与低表达对照组和过表达对照组细胞迁移和侵袭能力,以及MARCH7和EMT相关蛋白E-cadherin、N-cadherin、Snail1和Slug蛋白表达比较无统计学差异(均P>0.05);与低表达对照组比较,沉默MARCH7的细胞迁移和侵袭能力降低,E-cadherin蛋白表达升高,N-cadherin、Snail1和Slug蛋白表达降低(均P<0.01);与过表达对照组比较,过表达MARCH7的细胞迁移和侵袭能力升高,E-cadherin蛋白表达降低,N-cadherin、Snail1和Slug蛋白表达升高(均P<0.01)。结论:MARCH7在EOC组织和细胞中呈高表达,可能通过促进EOC细胞的EMT过程,增强EOC细胞的侵袭和迁移能力。

miR-130a-3p通过靶向调节自噬相关蛋白7影响儿童支气管哮喘的Th1/Th2平衡和气道重塑

目的检测儿童支气管哮喘肺泡灌洗液(BALF)中miR-130a-3p与自噬相关蛋白7(ATG 7)的靶向调节关系,进一步探讨miR-130a-3p靶向调节ATG 7对炎症因子和气道重塑相关因子的影响。方法收集2018年1月—2021年8月145例接受治疗的儿童支气管哮喘的临床资料,将患儿分为轻度哮喘组(n=45)、中度哮喘组(n=58)和重度及危重度哮喘组(n=42),并收集同时期健康儿童40例为对照组。比较组间miR-130a-3p、ATG 7、炎症因子和气道重塑相关因子的水平。双荧光素酶报告基因实验预测miR-130a-3p与ATG 7的靶向关系。采用转染技术敲低支气管上皮细胞16HBE中ATG 7的水平,并检测其对炎症因子和气道重塑相关因子的影响。结果重度及危重度哮喘组的miR-130a-3p、干扰素-γ(IFN-γ)水平低于对照组、轻度哮喘组和中度哮喘组;重度及危重度哮喘组的ATG 7 mRNA、白细胞介素-4(IL-4)、免疫球蛋白E(IgE)、IL-5和IL-13水平高于对照组、轻度哮喘组和中度哮喘组,组间比较差别均有统计学意义(P<0.05)。重度及危重度哮喘组的Ⅰ型胶原蛋白mRNA、内皮素-1(ET-1)、基质金属蛋白酶2(MMP-2)、MMP-9和转化生长因子-β1(TGF-β1)水平高于对照组、轻度哮喘组和中度哮喘组,组间比较差别均有统计学意义(P<0.05)。miR-130a-3p与ATG 7存在靶向结合位点。敲低ATG 7的表达后IFN-γ水平增加,ATG 7、Ⅰ型胶原蛋白的mRNA、IL-4、IgE、IL-5、IL-13、ET-1、MMP-2、MMP-9和TGF-β1的表达水平降低,组间比较差别均有统计学意义(P<0.05)。结论在儿童支气管哮喘中,miR-130a-3p可能通过靶向调节ATG 7的水平,调节辅助性T细胞1/辅助性T细胞2平衡、减弱气道炎症反应和抑制气道重塑,为儿童支气管哮喘靶向治疗提供方向。

血清CTRP1、CTRP5和CTRP7水平与冠心病的相关性研究

目的分析冠心病(CAD)患者血清补体C1q/肿瘤坏死因子相关蛋白(CTRP)1、CTRP5和CTRP7水平的变化,探讨各指标水平与CAD的相关性。方法选取在开滦总医院行冠状动脉造影的247例患者为研究对象,根据冠状动脉造影结果将其分为CAD组(200例)和非CAD组(47例),根据Gensini积分(GS积分)的中位数将CAD组分为轻度狭窄组(GS积分≤42,102例)和重度狭窄组(GS积分>42,98例)。比较各组临床资料和血清CTRP1、CTRP5和CTRP7水平,运用多因素Logistic回归分析确定CAD的独立危险因素,受试者工作特征(ROC)曲线分析CTRP1、CTRP5和CTRP7对CAD的诊断效能。结果CAD组血清CTRP1、CTRP5和CTRP7水平明显高于非CAD组(P<0.05),重度狭窄组血清CTRP1、CTRP5和CTRP7水平明显高于轻度狭窄组(P<0.05);多因素Logistic回归分析显示,CTRP1是CAD发生的独立危险因素(P<0.05)。ROC曲线分析显示,血清CTRP1、CTRP5和CTRP7预测CAD的曲线下面积分别为0.747、0.640和0.599,CTRP1的特异度较高(76.6%),CTRP5的灵敏度较高(81.0%)。结论CAD患者血清CTRP1、CTRP5和CTRP7水平升高,且其水平与CAD严重程度有关,检测三者水平有助于CAD的筛查和病情评估。

结直肠癌组织中miR-138-5p、miR-876-5p、DCAF7蛋白的表达变化及其意义

目的观察结直肠癌(CRC)组织中miR-138-5p、miR-876-5p、DNA损伤结合蛋白1和CUL4相关因子7(DCAF7)蛋白的表达变化,并探讨其临床意义。方法CRC患者98例,均接受手术治疗,术中留取CRC组织和癌旁组织,采用Real-time PCR法检测CRC组织和癌旁组织中miR-138-5p、miR-876-5p,采用蛋白印迹法检测CRC组织和癌旁组织中DCAF7蛋白,分析miR-138-5p、miR-876-5p、DCAF7蛋白相对表达量与CRC患者临床病理参数的关系。以CRC组织中miR-138-5p、miR-876-5p、DCAF7蛋白相对表达量的中位数为临界值,将CRC患者分为miR-138-5p高表达组和miR-138-5p低表达组、miR-876-5p高表达组和miR-876-5p低表达组、DCAF7蛋白高表达组和DCAF7蛋白低表达组,并分析miR-138-5p、miR-876-5p、DCAF7蛋白相对表达量与CRC患者预后的关系。结果CRC组织中miR-138-5p、miR-876-5p、DCAF7蛋白相对表达量分别为1.36±0.29、1.41±0.36、0.59±0.19,癌旁组织中miR-138-5p、miR-876-5p、DCAF7蛋白相对表达量分别为2.15±0.48、2.08±0.44、0.20±0.08,两者相比,P均<0.05。miR-138-5p、miR-876-5p、DCAF7蛋白相对表达量与CRC患者是否合并淋巴结转移、TNM分期、浸润深度有关(P均<0.05)。miR-138-5p低表达组3年总体生存率为67.3%,miR-138-5p高表达组3年总体生存率为86.6%,两组相比,P<0.05。miR-876-5p低表达组3年总体生存率为66.7%,miR-876-5p高表达组3年总体生存率为85.1%,两组相比,P<0.05。DCAF7蛋白高表达组3年总体生存率为67.2%,DCAF7蛋白低表达组3年总体生存率为87.5%,两组相比,P<0.05。结论CRC组织中miR-138-5p低表达、miR-876-5p低表达、DCAF7蛋白高表达,miR-138-5p、miR-876-5p、DCAF7蛋白相对表达量与CRC患者是否合并淋巴结转移、TNM分期、浸润深度有关。与miR-138-5p高表达、miR-876-5p高表达、DCAF7蛋白低表达的CRC患者相比,miR-138-5p低表达、miR-876-5p低表达、DCAF7蛋白高表达的CRC患者术后3年总体生存率低。

骨形态发生蛋白7通过下调Ajuba减轻糖尿病肾病大鼠肾纤维化

目的:探讨在糖尿病肾病(DKD)大鼠模型中,骨形态发生蛋白7(BMP7)是否通过下调Ajuba水平,降低Yes相关蛋白1(YAP1)的表达,进而减轻细胞外基质(ECM)沉积从而减轻DKD大鼠肾组织纤维化程度。方法:18只SD大鼠随机分为正常对照组(NC组)、糖尿病组(DM组)和DM+过表达BMP7腺相关病毒组(DM+rAAVBMP7组),每组6只。采用尾静脉注射55 mg/kg链脲佐菌素(STZ)建立DM大鼠模型。NRK-52E细胞分为正常糖组、高糖(HG)组和HG+rhBMP7组。HE和天狼星红染色观察大鼠肾皮质病理形态学变化;免疫组织化学染色检测肾皮质Ajuba、YAP1的表达部位;Western blot法检测大鼠肾皮质及NRK-52E细胞中BMP7、Ajuba和YAP1、Ⅲ型胶原(Col-Ⅲ)和纤维连接蛋白(FN)的蛋白表达水平;RT-qPCR检测大鼠肾皮质Ajuba和YAP1 mRNA的表达水平。结果:生化指标检测显示DM组大鼠血糖、血肌酐、甘油三酯、总胆固醇及24 h尿蛋白水平较NC组显著升高(P<0.05),尿肌酐较NC组显著降低(P<0.05);与DM组相比,DM+rAAV-BMP7组大鼠血肌酐、24 h尿蛋白定量水平、甘油三酯和总胆固醇显著降低(P<0.05),尿肌酐显著升高(P<0.05);病理染色显示DM组肾间质出现炎症细胞浸润及胶原纤维沉积,肾小管萎缩且排列紊乱,DM+rAAV-BMP7组的病理变化较DM组显著改善;免疫组化结果显示在肾皮质中Ajuba和YAP1主要表达于细胞质和细胞核,且在DM组高表达,但DM+rAAV-BMP7组其表达则显著降低;Western blot结果显示DM组或HG组中FN、Col-Ⅲ、Ajuba和YAP1的蛋白水平上调(P<0.05),但在DM+rAAV-BMP7组中上述蛋白表达水平又显著降低(P<0.05);RT-qPCR结果显示DM组Ajuba、YAP1的mRNA水平较NC组显著上升(P<0.05),DM+rAAV-BMP7组Ajuba、YAP1的mRNA水平较DM组又显著降低(P<0.05)。结论:过表达BMP7可减轻DKD大鼠的肾纤维化,其机制可能与下调Ajuba,减少YAP1的表达,从而抑制了ECM的沉积有关。

温针灸对兔膝骨关节炎软骨中ASC、Caspase-1和P2X7蛋白表达的影响

目的 观察温针灸对膝骨关节炎(KOA)模型兔关节软骨组织中凋亡相关斑点样蛋白(ASC)、半胱氨酸蛋白酶-1(Caspase-1)、嘌呤能离子通道型受体7(P2X7)表达的影响,研究温针灸治疗KOA的作用机制。方法 取40只雄性新西兰兔随机分为空白组、模型组、抑制剂组和温针灸组,每组10只。除空白组外,其余各组采用经典右后肢膝关节伸直位,用石膏管型固定4周制备兔KOA模型。造模成功后,各组给予相应干预措施。应用Lequesne MG评分量表评估兔膝关节状态改变与行为学改变,HE染色观察膝关节软骨病理形态学改变,免疫组织化学法和Western blot法检测软骨组织中ASC、Caspase-1、P2X7蛋白的表达,免疫荧光检测Caspase-1蛋白的表达。结果 造模前,各组实验兔Lequesne MG评分差异无统计学意义(P>0.05);造模后,与空白组相比,其余组Lequesne MG评分均上升(P<0.05);干预治疗后,与模型组比较,温针灸组和抑制剂组评分降低(P<0.05)。HE染色显示,空白组软骨表面结构完整,软骨细胞排列均匀;模型组软骨表面粗糙不平,软骨受损明显,软骨细胞形态大小不一,排列紊乱;抑制剂组和温针灸组软骨表面相对光滑、完整,软骨细胞分布较为均匀,软骨层结构相对清晰。与空白组比较,模型组Mankin’s评分升高(P<0.05);与模型组比较,温针灸组和抑制剂组Mankin’s评分降低(P<0.05)。免疫组织化学法、免疫荧光及Western blot检测结果显示,与空白组比较,模型组ASC、Caspase-1、P2X7的表达均升高(P<0.05);与模型组比较,温针灸组和抑制剂组ASC、Caspase-1、P2X7的表达均降低(P<0.05);温针灸组和抑制剂组相比,ASC、Caspase-1、P2X7表达差异均无统计学意义(P均>0.05)。结论 温针灸可减轻兔KOA软骨损伤,其机制可能与ASC、Caspase-1、P2X7表达降低及细胞焦亡抑制有关。

老年重症肺炎患者血清FOXO1、ATG7水平及与短期预后的关系

目的 探讨老年重症肺炎患者血清叉头状转录因子1(FOXO1)、自噬相关基因7(ATG7)的表达水平及与短期预后的关系。方法 选取2020年8月至2022年8月该院收治的122例老年重症肺炎患者作为病例组,另选取同期来该院进行健康体检的105例老年人作为对照组。采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测血清FOXO1、ATG7的表达水平。根据患者重症肺炎确诊后28 d内是否死亡分为存活组(n=91)和死亡组(n=31)。采用受试者工作特征(ROC)曲线评估血清FOXO1、ATG7表达水平对老年重症肺炎短期死亡的预测价值,采用多因素Logistic回归分析探讨老年重症肺炎短期死亡的影响因素。结果 病例组患者血清FOXO1、ATG7表达水平明显高于对照组,差异有统计学意义(t=7.615、29.591,P<0.05);老年重症肺炎死亡组患者血清FOXO1、ATG7表达水平均高于生存组,差异有统计学意义(t=10.029、9.399,P<0.05)。血清FOXO1、ATG7预测老年重症肺炎患者短期死亡的曲线下面积(AUC)分别为0.733(95%CI:0.673~0.799)、0.826(95%CI:0.756~0.893),两者联合预测的AUC为0.908(95%CI:0.862~0.949)。FOXO1、ATG7与急性生理与慢性健康评估(APACHEⅡ)评分呈正相关(r=0.693、0.627,均P<0.05)。多因素Logistic回归分析显示,APACHEⅡ评分≥22.56分(OR=3.589,95%CI:1.714~7.515),FOXO1≥10.67 ng/mL(OR=2.529,95%CI:1.232~5.193),ATG7≥16.35 pg/mL(OR=2.875,95%CI:1.414~5.845)是老年重症肺炎患者死亡的危险因素(P<0.05)。结论 老年重症肺炎患者血清FOXO1、ATG7表达水平明显升高,二者可用于评估老年重症肺炎患者的短期预后。

人自噬相关蛋白ATG7的原核表达及纯化鉴定

目的:原核表达并纯化自噬相关蛋白ATG7,初步鉴定其生物学活性。方法:利用PCR技术从人乳腺文库中扩增出人ATG7基因的编码序列,插入载体p ET-28a(+)得到重组质粒,经Bam HⅠ和NotⅠ双酶切鉴定后转化大肠杆菌Rossate菌株进行小量诱导,纯化融合蛋白His-ATG7,通过Western印迹和SDS-PAGE检测融合蛋白的纯化效果。结果:用PCR技术从人乳腺文库中扩增得到约2031 bp的目的片段,插入载体p ET-28a(+)后构建出His-ATG7重组质粒,并经酶切鉴定及测序证实无误;转化大肠杆菌Rossate并进行小量诱导,纯化后SDS-PAGE检测显示获得相对分子质量约为78×103的融合蛋白。结论:纯化得到原核系统表达的His-ATG7融合蛋白,为后续研究ATG7在自噬中的作用机制奠定了实验基础。

血清MMP-7、ADAM17在结缔组织病相关间质性肺病中的表达及相关性研究

目的:探讨基质金属蛋白酶-7(MMP-7)、解整合素金属蛋白酶17(ADAM17)在结缔组织病(CTD)相关间质性肺病(ILD)中的表达水平及相关性研究。方法:收集2021年12月至2023年7月在包头医学院第一及第二附属医院风湿免疫科诊治的CTD-ILD患者40例为CTD-ILD组,不合并ILD的CTD患者30例为CTD组,以及26例同期健康体检者为对照组,收集患者基本资料,酶联免疫吸附法(ELISA)检测3组血清MMP-7、ADAM17的表达水平;按一氧化碳弥散量占预计值的百分比[DLCO(%pred)]将CTD-ILD分为轻度、中度和重度,分析CTD-ILD不同亚组、不同肺功能组血清MMP-7、ADAM17的表达水平,阐释MMP-7、ADAM17与各指标的相关性及评估它们在诊断CTD-ILD中的价值。结果:①CTD-ILD组与CTD组、对照组比较,血清MMP-7、ADAM17显著升高(P<0.01);②CTD-ILD不同亚组中,与SS-ILD组比较,血清MMP-7、ADAM17水平在SSc-ILD组中较高(P<0.05);③CTD-ILD不同肺功能组中,血清MMP-7水平为重度>中度>轻度(P<0.01),血清ADAM17水平在中、重度组>轻度组(P<0.01);④相关性分析得出,CTD-ILD患者中MMP-7与CT评分、CPI及年龄呈正相关(P<0.05),ADAM17与CT评分、CPI呈正相关(P<0.01),MMP-7、ADAM17与第一秒用力呼吸容积、用力肺活量、DLCO(%pred)、P(O_(2))均呈负相关(P<0.05)。结论:血清MMP-7、ADAM17可能参与了CTD-ILD的发生、发展,对CTD-ILD病情严重程度的评估有一定的预测价值。

黄芩素通过miR-141-3p/sirt7介导的线粒体自噬发挥帕金森病神经保护作用的机制研究

目的探讨黄芩素(Baicalein)对帕金森病(PD)神经保护的可能机制。方法在本研究中,采用6-羟基多巴胺(6-OHDA)诱导小鼠的PD模型,研究黄岑素的保护作用机制。首先,对黄芩素干预后的PD模型小鼠进行神经学评分,高效液相色谱电化学法检测纹状体多巴胺含量,TUNEL和Fluoro-Jade B染色检测凋亡细胞及神经元。采用自噬抑制剂3-甲基腺嘌呤(3-MA)抑制PD模型小鼠线粒体自噬,通过Jc-1染色检测黄芩素干预后的PD模型小鼠的线粒体膜电位,通过Western blot检测自噬相关蛋白LC3、P62。在PD模型体内转染agomiR-141-3p,通过qRT-PCR检测转染效率,通过Jc-1和Wb检测线粒体膜电位和自噬相关蛋白的变化情况。通过Starbase网站(https://starbase.sysu.edu.cn/)、双荧光素酶切报告实验在293T细胞中分析miR-141-3p和SIRT7的靶向关系,qRT-PCR检测SIRT7在PD模型体内的表达水平。结果PD严重影响了小鼠的神经功能,下调了线粒体膜电位水平及线粒体自噬相关蛋白LC3的表达水平、上调了P62的表达水平。而黄芩素提高了PD模型小鼠的神经学评分,一定程度上还原了多巴胺与神经元的数目,恢复了线粒体膜电位水平及LC3和P62的表达水平;黄芩素抑制了PD小鼠miR-141-3p的表达,上调miR-141-3p可以逆转黄芩素促线粒体膜电位上升、LC3 z-Ⅱ/LC3-Ⅰ比值上升及P62表达下降;而miR-141-3p可以靶向负调控SIRT7,通过下调SIRT7同样可以逆转黄芩素促线粒体膜电位上升、LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比值上调及P62表达下调;黄芩素可以使SIRT7表达上调,而过表达miR-141-3p可以抑制SIRT7的表达。结论黄芩素通过下调miR-141-3p靶向负调控SIRT7介导线粒体自噬,从而对PD神经发生保护。

miR-17在动脉粥样硬化中下调ATG7蛋白水平抑制巨噬细胞的自噬功能

目的在动脉粥样硬化患者的血液中检测自噬相关miRNA的水平变化,探究差异miRNA是否参与巨噬细胞的自噬过程,并影响巨噬细胞的凋亡及炎症表达。方法在动脉粥样硬化患者的血液中,用荧光定量PCR的方法检测miRNA的水平。在转染miR-17后,通过蛋白质免疫印迹的方法检测巨噬细胞中ATG7蛋白以及自噬标志物LC3Ⅱ表达。同时,使用MTT实验检测转染miR-17后双氧水诱导巨噬细胞凋亡的改变,通过荧光定量PCR检测炎性因子水平探究转染miR-17后巨噬细胞的炎症表达。结果在动脉粥样硬化患者的血液中,miR-17的水平特异升高。而转染miR-17后,巨噬细胞中miR-17靶向蛋白ATG7和自噬标志物LC3Ⅱ表达下降。miR-17在巨噬细胞中的升高同时促进了双氧水诱导的细胞凋亡,并增强了TNF-α等炎性因子的表达。结论 miR-17水平在动脉粥样硬化患者的血液中特异升高,并在巨噬细胞通过靶向ATG7介导细胞自噬水平降低,进而增强巨噬细胞的炎症表达并促进其凋亡。

自噬相关基因Atg7的表达对乙型肝炎病毒复制的影响

目的探讨Atg7的表达对乙型肝炎病毒感染肝细胞中HBV复制的影响。方法选取2019年4~5月首都医科大学附属北京市佑安医院慢性乙型肝炎病毒感染者的肝组织石蜡切片,采用免疫荧光染色观察Atg7、LC3和HBs的表达情况;利用Atg7表达质粒和小干扰RNA在HepG2.2.15细胞中建立Atg7过表达组及Atg7减少组,给予不同时间段的饥饿处理,利用蛋白质免疫印迹和实时定量PCR观察两组模型中自噬及HBV病毒复制水平的变化。采用SPSS 17.0统计学软件进行数据分析。结果在HBs阳性细胞中,Atg7和LC3的表达量高于HBs阴性细胞;Atg7过表达饥饿处理后,自噬水平、HBc和HBV-DNA表达量高于对照,且自噬和HBV的复制水平在饥饿6 h增加最显著,差异有高度统计学意义(P<0.01)。Atg7敲减饥饿处理后,细胞自噬水平、HBc和HBV DNA表达量均低于对照,在饥饿6 h减少最为显著,差异有高度统计学意义(P<0.01)。结论HBV感染引起Atg7的表达增加,自噬增强;在自噬早期干预Atg7的表达会显著影响HBV复制。

Calpain 2调节自噬相关基因ATG7的表达在非酒精性脂肪性肝病中的作用

目的明确Calpain 2及自噬相关基因7(autophagy related gene 7,ATG7)在非酒精性脂肪性肝病中的表达变化及意义。方法应用高脂饮食喂养SD大鼠建立非酒精性脂肪性肝病(non-alcoholic fatty liver disease,NAFLD)在体模型,并按时相点分为4、8、12周及16周组,同时设立正常饮食组为对照组,每组6只。检测各组大鼠血清ALT、AST、FFA水平,通过HE染色观察肝脏脂肪变情况,利用Real-time PCR及Western blot检测Calpain 2及ATG7的表达变化。结果①HE染色提示肝脏脂肪变程度随高脂饮食喂养时间的延长而加重。NAFLD大鼠模型各时相点血清ALT、AST、FFA水平均较对照组有不同程度的升高,在16周组时分别为(165.95±7.24)U/L、(249.52±4.20)U/L、(0.83±0.05)mmol/L,与对照组比较均有明显的升高(P<0.01)。②以正常饮食组为对照组,肝组织Calpain 2 mRNA相对表达量在高脂饮食喂养后开始上调,在16周时升高最为明显(9.83±0.85,P<0.01);ATG7的mRNA相对表达量在4周组(0.82±0.02)即开始下降,在16周组(0.20±0.03)降至最低,与对照组比较降低显著(P<0.01)。③与对照组比较,Calpain 2蛋白相对表达水平与mRNA表达水平一致,4周组(2.32±0.45)时开始上调,16周组明显上升(9.87±1.20,P<0.01)。而ATG7的蛋白相对表达水平则随肝脏脂肪变性的进展明显下降,16周时降低最为明显(0.18±0.05,P<0.01)。结论脂肪肝发生过程中,Calpain 2的表达上调抑制了自噬相关基因ATG7的表达,进而减弱了自噬对细胞的保护作用,导致肝细胞的损伤加重,自噬可能参与了NAFLD的发生。

基于蛋白质组学探讨RAB7对肾小球足细胞线粒体自噬的影响

目的通过蛋白质组学探究RAB7作为线粒体自噬生物标志物对肾小球足细胞线粒体自噬的影响。方法将6只SD大鼠随机分为对照组和模型组(n=3),尾静脉注射阿霉素复制慢性肾小球肾炎(CGN)模型。采用蛋白质组学技术联合自噬数据库鉴定CGN大鼠的差异自噬相关蛋白。体内采用Western blot方法验证相关蛋白的表达,体外采用嘌呤霉素氨基核苷(PAN)诱导肾小球足细胞损伤模型,使用免疫荧光、透射电镜、Western blot等方法检测线粒体自噬变化。结果共筛选出12个自噬相关蛋白,其中RAB7 degree值最高。体内经Western blot验证的SNRPE、CTNNBI、CAT、RAB7A、SOD2蛋白表达水平与蛋白质组学数据一致。体外实验中,与正常组比较,模型组中RAB7、Parkin和PINK1蛋白表达水平降低(P<0.01);RAB7过表达后,与正常组比较,模型组中自噬标志物LC3Ⅱ/LC3Ⅰ、Beclin1蛋白表达水平升高(P<0.01),P62蛋白表达水平降低(P<0.01)。结论RAB7可能是CGN中线粒体自噬生物标志物,影响肾小球足细胞线粒体自噬。

巨噬细胞移动抑制因子和基质金属蛋白酶-7在卵巢癌中的表达及相关性研究

目的探讨巨噬细胞移动抑制因子(MIF)和基质金属蛋白酶-7(MMP-7)在卵巢癌中的表达及相关性。方法收集46例卵巢癌组织标本和10例癌旁正常卵巢组织标本,采用免疫组织化学技术检测两类标本中MIF和MMP-7的表达水平与其临床病理资料相结合,进行综合分析。结果 MIF和MMP-7在正常卵巢组织中不表达;在卵巢癌组织中高表达,且MIF和MMP-7在卵巢癌组织中的表达存在显著正相关(r=0.9250,P<0.01)。MIF和MMP-7蛋白表达与卵巢癌患者年龄、病理类型无关(P>0.05),与组织学分级、临床分期和淋巴结转移有关(P<0.05)。结论 MIF和MMP-7均在卵巢癌组织中高表达,且两者表达间显著正相关;MIF和MMP-7在乳腺癌的生成、侵袭和转移中起促进作用。

角蛋白7、p53蛋白与膀胱癌临床病理及预后的相关性

目的分析角蛋白7(KRT7)、p53蛋白与膀胱癌临床病理及预后的相关性。方法回顾性分析2016年2月—2019年3月江苏省连云港市第二人民医院病理科收治的膀胱癌患者105例的临床资料,患者均接受膀胱癌根治术,术中取癌组织与癌旁组织,采用免疫组化法检测癌组织与癌旁组织KRT7与p53蛋白表达水平,分析癌组织中KRT7蛋白、p53蛋白表达在不同临床病理特征中的差异,Cox分析膀胱癌患者预后的影响因素,Kaplan-Meier法分析KRT7蛋白、p53蛋白表达与膀胱癌患者预后的关系。结果癌组织KRT7蛋白阳性率低于癌旁组织(χ^(2)/P=23.786/<0.001),p53蛋白阳性率高于癌旁组织(χ^(2)/P=28.651/<0.001);T 2~T 4期低分化、肿瘤直径≥3 cm、患者癌组织中KRT7蛋白阳性率低于T a~T 1期中高分化、肿瘤直径<3 cm患者(χ^(2)/P=4.940/0.026、11.299/<0.001、5.379/0.020),p53蛋白阳性率显著高于T a~T 1期中高分化、肿瘤直径<3 cm患者(χ^(2)/P=22.459/<0.001、12.093/<0.001、25.527/<0.001);随访3年,105例膀胱癌患者失访4例,剩余101例患者中死亡34例,病死率为33.66%。Cox分析结果显示,T 2~T 4期、低分化、肿瘤直径≥3 cm、KRT7蛋白阴性、p53蛋白阳性为膀胱癌患者不良预后的危险因素[HR(95%CI)=3.935(1.730~8.952)、3.575(1.572~8.133)、3.515(1.545~7.996)、4.933(2.169~11.222)、3.762(1.654~8.558)]。KRT7蛋白阳性存活率高于KRT7蛋白阴性患者(χ^(2)=5.238,P=0.022);p53蛋白阴性存活率高于p53蛋白阳性患者(χ^(2)=5.115,P=0.024)。结论膀胱癌患者癌组织中KRT7、p53蛋白表达与分化程度、肿瘤直径、临床分期及预后密切相关。

miR-223-3p靶向自噬相关蛋白7调控鼻咽癌细胞自噬

目的 探讨miR-223-3p是否靶向自噬相关蛋白7(Autophagy-related 7,ATG7)以调节鼻咽癌细胞的自噬。方法 使用TargetScan分析miR-223-3p与ATG7的相关性。荧光素酶测定法用于检测miR-223-3p是否靶向ATG7。通过Western blot检测miR-223-3p在鼻咽癌细胞CNE2中的过度表达或敲低,检测鼻咽癌细胞CNE2中ATG7的表达以及自噬标记蛋白P62和LC3-Ⅱ的表达。结果 miR-223-3p靶向ATG7的3’UTR位于2791-2798和1583-1589位;当miR-223-3p过表达时,ATG7的表达降低(P<0.05),自噬相关蛋白的表达显著降低(P<0.05),P62和LC3-Ⅱ的表达水平降低,自噬水平降低。敲除miR-223-3p后,ATG7的表达显著增加(P<0.05),自噬相关蛋白P62和LC3-Ⅱ的表达水平显著增加(P<0.05),并且自噬水平增加。结论 miR-223-3p可靶向ATG7 3’UTR的2791-2798和1583-1589位,并抑制人鼻咽癌细胞CNE2的自噬。

急性胰腺炎患儿血清中ATG7的表达及疾病进展的相关性研究

目的探讨急性胰腺炎(AP)患儿血清中自噬相关基因7(ATG7)的表达水平,并分析其与疾病相关进展的研究。方法选取2021年1月~2022年4月在本院就诊的79例AP患儿,另选取同期健康体检的儿童71例作为对照组。采用酶联免疫吸附(ELISA)检测试剂盒测定血清ATG7水平;试剂盒检测血清淀粉酶(AMY)、血清脂肪酶(LIP)、降钙素原(PCT)检测试剂盒、C-反应蛋白(CRP)、血尿素氮(BUN)水平,对AP患儿进行急性生理学与慢性健康状况评分系统Ⅱ(APACHEⅡ)评分。采用Person法分析AP患儿血清ATG7表达与生化指标及疾病严重程度评分相关性;受试者工作特征曲线(ROC)曲线分析ATG7对AP疾病进展的预测价值。结果AP组血清ATG7[(6.76±1.24)ng/mL]、AMY[(206.83±17.59)U/L]、LIP[(126.71±9.53)U/L]、PCT[(2.38±0.18)ng/mL]、CRP[(13.58±2.73)mg/L]、BUN水平[(18.58±3.36)mg/dL]和APACHEⅡ评分升高相比于对照组[(2.38±0.39)ng/mL、(30.48±4.32)U/L、(38.62±4.79)U/L、(0.02±0.01)ng/mL、(2.97±0.32)mg/L、(4.02±0.52)mg/dL]显著升高(P<0.05)。21例SAP患者中,发生呼吸衰竭10例(47.62%),肾功能衰竭3例(14.29%),循环衰竭1例(4.76%),肝功能衰竭4例(19.05%),凝血功能衰竭2例(9.52%),中枢神经衰竭2例(9.52%)。SAP组血清ATG7、AMY、LIP、PCT、CRP、BUN水平及APACHEⅡ评分相比于MAP组、MSAP组显著升高(P<0.05)。血清ATG7与AMY、LIP、PCT、CRP、BUN及APACHEⅡ评分呈正相关。ROC结果显示,血清ATG7和APACHEⅡ评分预测SAP发生的曲线下面积(AUC)分别为0.899、0.893,灵敏度为85.71%、80.95%,特异性为84.03%、94.83%。结论AP患儿血清ATG7的表达升高,与AP疾病进展密切相关,有望作为评估AP疾病进展的生物标志物。