精原干细胞自我更新及分化的调控机制研究进展

精原干细胞(SSC)是睾丸中最原始的生殖细胞,通过自我更新和连续分化最终成为成熟的精子,SSC对维持高效的精子发生起着至关重要的作用,与生精微环境(niche)之间复杂的分子和细胞相互作用构成了精子发生的基础。以往认为niche主要由睾丸支持细胞构成,而新近研究表明,睾丸内多种细胞、分子信号通路均参与调控SSC的自我更新及分化。本文就睾丸生精微环境调控SSC自我更新及分化的研究进展进行综述。

BMI1分子调控肿瘤干细胞自我更新及免疫逃逸的作用机制

B细胞特异性莫洛尼鼠白血病病毒整合位点1(BMI1)分子属于多梳家族(PcG)成员,作为重要的干细胞标志物之一,通过转录调控基因的表达维持机体的正常生理功能。研究报道,BMI1也是影响恶性肿瘤发生发展的关键分子,在肿瘤干细胞(CSCs)的自我更新、迁移侵袭、耐药及免疫逃逸中发挥重要的调控作用,参与肿瘤的复发、转移等过程。本文总结近年的研究进展,阐述BMI1的分子结构和生物学功能,分析BMI1分子对CSCs自我更新、迁移侵袭、耐药及免疫逃逸的调控作用,探讨BMI1作为新型靶点在肿瘤免疫治疗中的潜在价值。

CollagenⅤ在推拿促进长期大负荷运动大鼠肌肉干细胞自我更新中的作用研究

目的:观察推拿对长期大负荷运动大鼠骨骼肌损伤修复、后肢抓力及CollagenⅤ表达的影响,探讨推拿促进大鼠肌肉干细胞自我更新的机制。方法:32只雄性SD大鼠随机分为空白对照组(C组)、长期大负荷运动组(E组)、长期大负荷运动+推拿组(ET组)、长期大负荷运动+假推拿组(ES组)。C组不做任何处理,E组、ET组和ES组进行4周大负荷跑台运动制备长期大负荷运动损伤模型;E组不予任何干预;ET组于每次运动后6h予以推拿干预;ES组于每次运动后6h仅予以抚摸干预。测定初始及4周后大鼠的体重和后肢抓力。末次干预后24h取大鼠两侧腓肠肌,采用透射电镜观察肌纤维超微结构变化;免疫组织化学染色检测CollagenⅤ表达水平;实时荧光定量PCR检测Col5a1和Col5a3 mRNA表达水平;Western Blot检测Pax7、MyoD和Myf5蛋白表达水平;双重免疫荧光染色检测Pax7与CollagenⅤ共定位。结果:与C组相比,E组、ES组和ET组大鼠后肢抓力增加值差异显著(P<0.01),E组和ES组超微结构均出现肌原纤维断裂等变化,E组和ES组CollagenⅤ、Pax7、MyoD、Myf5、Col5a1和Col5a3 mRNA以及Pax7与CollagenⅤ共定位表达显著降低(P<0.05);与E组相比,ET组后肢抓力增加值差异显著(P<0.05),超微结构表现良好,CollagenⅤ、Pax7、MyoD、Myf5、Col5a3 mRNA以及Pax7与CollagenⅤ共定位表达显著升高(P<0.05)。结论:推拿可通过上调CollagenⅤ表达,促进大鼠骨骼肌肌肉干细胞自我更新,从而加速修复长期大负荷运动诱发的超微结构损伤,增强肌肉力量。

成年小鼠触液神经元体外分离培养及自我更新能力的鉴定

背景:课题组前期成功在体外分离培养乳鼠触液神经元,尚无研究报道有效分离培养高纯度成年小鼠触液神经元的方法,且触液神经元的自我更新能力是否随着年龄发生变化尚无研究。目的:建立一种高纯度成年小鼠触液神经元体外分离培养的方法,并鉴定成年小鼠触液神经元与乳鼠触液神经元在体外的自我更新能力。方法:从成年3月龄小鼠颈髓分离含有触液神经元的原代细胞贴壁培养并利用融合多模态成像基因的慢病毒转染细胞,通过嘌呤霉素筛选得到高纯度成年小鼠触液神经元细胞,在完全培养基中悬浮培养。通过免疫荧光检测成年小鼠触液神经元表达神经干细胞标记物巢蛋白(Nestin)及SOX2情况,观察成年小鼠触液神经元体外成球与传代能力;将同等数量(5×10^(3))的第3代成年小鼠及乳鼠触液神经元在同等条件下分为2组,分别接种在含有完全培养基的超低黏附培养板中,在体积分数5%CO_(2),37℃恒温箱悬浮培养,通过体外成球、CCK8实验、qPCR和Western blot鉴定成年小鼠及乳鼠触液神经元的自我更新能力。结果与结论:①实验成功在成年小鼠体内分离出高纯度触液神经元,在体外表达Nestin及SOX2,能形成神经球并连续传代。②成年小鼠触液神经元体外自我更新能力较乳鼠相比明显减弱,细胞培养到第4天时乳鼠触液神经元已经形成直径约为150μm的神经球,而成年小鼠触液神经元所形成的神经球直径仅为40μm(P<0.0001)。③CCK8增殖实验结果表明,成年小鼠触液神经元的增殖活性在培养后各时间点显著弱于乳鼠(P<0.0001)。④qPCR和Western blot检测发现成年小鼠触液神经元Nestin及SOX2的mRNA(P<0.0001)和蛋白表达量(P<0.01)较乳鼠显著下降。⑤上述结果证实,成年小鼠触液神经元的体外自我更新能力显著弱于乳鼠。

“自我革命”与“自我更新”的三维比较研究

中国共产党的“自我革命”和新加坡人民行动党的“自我更新”具有一定的相似性,对二者异同的比较研究,有助于我们加深对“自我革命”内涵、意义和价值的理解。具体来说,可以从三个维度的九个方面展开,即主体维度上的执行力、政治信仰及其实践逻辑、自觉性,理论维度上的理论生成、理论发展和理论范畴以及实践维度上的人民因素的参与、实施艰难的程度、动力及其逻辑链路等。

亚马逊(Amazon):客户驱动与自我更新的文化力量

1994年的西雅图,一位满怀创业激情的年轻人,在自家车库中燃起了亚马逊(Amazon)的星星之火。自那时起,亚马逊从一家普通的在线书店,踏上了一段从车库直至全球电商霸主的非凡旅程。这不仅是一个商业故事,更是一段关于企业文化塑造公司命运的瑰丽篇章。

左归降糖解郁方促进糖尿病并发抑郁症大鼠的海马齿状回神经干细胞的自我更新并激活Shh信号通路

目的研究左归降糖解郁方调节糖尿病并发抑郁症大鼠海马Shh信号通路,改善齿状回神经干细胞自我更新的机制。方法建立糖尿病并发抑郁症大鼠模型并随机分为5组,16只/组:模型组、阳性药(二甲双胍+氟西汀)组、左归降糖解郁方高、中、低剂量组;另设健康SD大鼠为正常组。其中,左归降糖解郁方高、中、低剂量组和阳性药组分别给予相应药物,对照组和模型组灌胃给予等体积蒸馏水。给药结束后,采用血糖试纸检测大鼠血糖,采用强迫游泳实验和水迷宫实验检测大鼠抑郁样行为和学习记忆功能,采用酶联免疫吸附法检测大鼠血清瘦素水平。采用双重免疫荧光法检测海马齿状回Nestin和Brdu蛋白表达;采用Western blot法检测海马神经干细胞自我更新标(P<0.01)志物及Shh信号蛋白的表达。结果与正常组比较,模型组大鼠血糖和瘦素水平显著升高(P<0.01),强迫游泳实验的不动时间显著延长(P<0.01),水迷宫实验中动物登台时间明显延长,寻台时间明显缩短,穿台次数明显减少(P<0.01);海马齿状回Nestin和Brdu表达显著减少(P<0.01),Cyclin D1、SOX2、Shh、Ptch1、Smo蛋白表达显著降低(P<0.01),Gli-3表达显著升高(P<0.01),细胞核内Gli-1蛋白表达显著减少(P<0.01)。与模型组比较,左归降糖解郁方高剂量可显著降低模型大鼠的血糖(P<0.01)和瘦素水平(P<0.05),缩短动物在强迫游泳实验中的不动时间(P<0.01)和在水迷宫实验中的登台时间(P<0.05),延长寻台时间并增加穿台次数(P<0.01)。同时,该方高剂量可显著增加齿状回Nestin和Brdu表达(P<0.01),增加海马Cyclin D1、SOX2、Shh、Ptch1、Smo蛋白表达(P<0.01),降低Gli-3表达(P<0.05),并增加Gli-1蛋白的核表达(P<0.01)。结论左归降糖解郁方可有效改善糖尿病并发抑郁症大鼠海马齿状回神经干细胞的自我更新能力,并激活干细胞Shh信号通路。

Bcl-2相关的永生基因4对胃癌干细胞自我更新能力的调控作用

目的:探讨Bcl-2相关的永生基因4(Bcl-2 associated athanogene 4,BAG4)在胃癌干细胞(gastric cancer stem cells,GCSCs)自我更新能力中的调控作用。方法:采用成球培养法分离/富集GCSCs,并对其生物学特征进行鉴定。采用慢病毒干扰技术构建沉默BAG4表达的MGC803胃癌细胞系,以平板克隆形成和成球实验分别检测沉默BAG4对胃癌细胞克隆形成和成球能力的影响。结果:成球培养法成功分离/富集出球细胞(sphere cell,SC)。与普通单层贴壁细胞相比,MGC803-SC高表达干性相关基因Sox2、Oct4和Bmi1,具有更强的克隆形成能力(198±17 vs.92±11,P<0.001),诱导分化后干性标志物CD44表达下降,在体外具有更强的侵袭能力(185±18 vs.84±11,P<0.01)。上述实验结果证实MGC803-SC具有GCSCs特性。BAG4在GCSCs中的表达水平明显高于普通贴壁胃癌细胞,沉默BAG4明显降低胃癌细胞的克隆形成和成球能力。结论:沉默BAG4基因能有效抑制GCSCs的自我更新能力,有望成为胃癌靶向治疗的新靶标。

二甲双胍通过抑制线粒体氧化磷酸化降低结直肠癌干细胞的自我更新能力

目的探讨二甲双胍抑制结直肠癌干细胞自我更新的作用及机制。方法通过Wnt报告基因慢病毒从人原代结直肠癌类器官中分选出癌干细胞(Wnt+)和癌分化细胞(Wnt-);用0、5、10、20、30μmol/L二甲双胍分别处理Wnt+细胞和Wnt-细胞,检测其对体外细胞球体形成能力的影响,并筛选合适的药物浓度。以该浓度二甲双胍处理Wnt+细胞,与空白对照相比,克隆形成实验和小鼠体内成瘤有限稀释实验检测体外和体内自我更新能力的改变;流式细胞术检测Wnt表达比例及其强度的变化;qRT-PCR检测干性、分化和Wnt信号通路下游关键基因的mRNA表达水平;Seahorse能量代谢分析仪检测细胞氧耗率和细胞外酸化率;TMRE探针检测线粒体膜电位;MitoSOX探针检测活性氧(ROS)水平。分别使用10 mmol/L半乳糖、10μmol/L二甲双胍、5 mmol/L N-乙酰-L-半胱氨酸和10 mmol/L半乳糖+10μmol/L二甲双胍调控Wnt+细胞ROS水平并用MitoSOX探针检测验证,细胞球体形成实验检测各组自我更新能力,流式细胞术检测各组Wnt比例和Wnt信号通路活性的改变。采用10μmol/L二甲双胍和空白对照分别与Wnt+细胞共培养,TMRE探针、MitoSOX探针、免疫荧光和流式细胞术分别检测转染酵母NADH脱氢酶NDI1和空白对照质粒对线粒体膜电位水平、细胞内ROS水平、Wnt表达比例及其信号强度的影响。结果二甲双胍可以显著抑制Wnt+细胞自我更新形成细胞球体(P<0.01),呈浓度依赖性,对Wnt-细胞无显著抑制效应(P>0.05)。与对照组相比,10μmol/L二甲双胍显著抑制结直肠癌干细胞形成单克隆和移植瘤的能力(P<0.001);显著降低其Wnt+细胞的比例和Wnt通路活性(P<0.01);显著降低其干性和Wnt通路相关基因的mRNA水平,并升高分化相关基因的mRNA水平(P<0.05)。糖代谢相关试验显示二甲双胍显著降低Wnt+细胞氧耗率、线粒体膜电位水平和ROS水平,显著增强其细胞外酸化率(P<0.001)。半乳糖显著增强结直肠癌干细胞细胞球体形成能力、细胞内ROS水平和Wnt+细胞比例及其Wnt活性(P<0.01);加入二甲双胍能显著抑制以上效应,并削弱半乳糖的促进效应(P<0.05)。转染NDI1替代人线粒体复合体I可显著削弱二甲双胍降低结直肠癌干细胞比例和Wnt信号通路活性的效应(P<0.001)。结论二甲双胍通过抑制人线粒体复合体I降低结直肠癌干细胞的线粒体氧化磷酸化及细胞内ROS水平,从而抑制其Wnt信号通路降低其自我更新能力。

基于农宅部品化的乡村自我更新研究——无锡市滨湖区马山街道和平社区更新实录

文章以农宅部品视角为切入点,以图底转化为理论基石,将乡村建设转至乡村更新的维度进行研究,建立起宅居单体、建筑群体、村落整体三级建构体系,回应城乡一体化发展,应对所面临的资金支持、地区差异和实施路径等诸多问题。通过对无锡马山和平社区乡村更新实践中的模式语言进行解读,可以发现:精准式乡村更新,不仅能使乡村资源再度整合、重构和优化,实现绿色长效发展,而且还能在改善乡村人居环境的同时,使可持续的乡土演进成为可能。

超大、特大城市自我更新发展空间变革路径研究--基于全球科技产业变革视角

每一轮经济长周期中,少数超大、特大城市既在全球科技产业变革中发挥了关键的驱动作用,也引领了城市发展范式的变革。这些变革在空间上往往集中在这些城市的“创新先锋区域”。中国的超大、特大城市肩负着带领国家竞争全球科技产业变革并跑、领跑地位的重任,应积极探索适合此轮科技产业变革的城市自我更新内生动力空间及其演进驱动路径。为此,需要从发展动力、发展空间、发展路径、价值增值以及方法论等角度,探索适应乃至引领信息时代城市变革新路径,重点包括:探索城市“实体—虚拟”相互映射空间体系构建路径、城市土地空间复合功能体系构建路径、城市空间价值可持续增值发展路径、城市空间的文化承继创新发展路径。

雌激素对乳腺癌干细胞增殖、自我更新的作用研究

目的探讨雌激素对乳腺癌干细胞(BCSC)增殖及自我更新的影响。方法以人乳腺癌细胞MCF-7培养BCSC,并采用细胞免疫荧光实验验证;用含0,1,5,10,20,100 nmol/L雌激素的完全培养基培养BCSC 0,24,48,72 h后,采用CCK-8法检测细胞增殖情况;用含0,10,20 nmol/L雌激素的完全培养基培养BCSC 24 h后,观察细胞形态并计算成球率;用含0,1,5,10 nmol/L雌激素的完全培养基培养BCSC 24 h后,采用荧光定量聚合酶链式反应(PCR)法检测磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)、蛋白激酶B(AKT)和哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)mRNA的表达情况。结果成功从MCF-7细胞中培养出BCSC。与0 nmol/L比较,1,5,10 nmol/L雌激素作用下,BCSC增殖能力显著增强(P<0.05),且与浓度和作用时间呈正相关;与0 nmol/L比较,10 nmol/L和20 nmol/L雌激素作用下,BCSC体积均显著增大,数量均显著增多(P<0.05);与0 nmol/L比较,1,5,10 nmol/L雌激素作用下,BCSC的PI3K,AKT,mTORmRNA表达水平均显著升高(P<0.05),且存在浓度依赖性。结论较低浓度(0~10 nmol/L)的雌激素具有促进BCSC生长的作用,其作用机制可能与活化PI3K/AKT/mTOR信号通路有关。

肺金生方对肺癌干细胞自我更新的抑制作用及其机制研究

目的:检测肺金生方对肺癌干细胞自我更新的抑制作用,并探究其可能的分子机制。方法:采用无血清培养法从人源A549肺癌细胞中诱导肺癌干细胞,建立肺癌干细胞体外培养体系;通过球落形成实验检测肺金生方对肺癌干细胞自我更新的作用;同时,检测肺金生方对肺癌干细胞相关分子造血干细胞抗原CD133、转录因子SOX2、八聚体结合转录因子4(OCT4)及Notch信号通路关键分子Notch1、Jagged1表达的影响。结果:无血清培养法培养的肺癌干细胞成球落状生长,肺癌干细胞表面标志物CD133及干细胞核转录因子SOX2、OCT4的表达增加,表明本研究成功建立了肺癌干细胞体外培养体系。肺金生方可显著减少肺癌干细胞的球落形成数量及体积。与对照组相比,肺金生方可显著抑制肺癌干细胞相关分子CD133、SOX2、OCT4及Notch信号通路关键分子Notch1、Jagged1的表达。结论:肺金生方可抑制肺癌干细胞自我更新,其作用机制可能与抑制Notch1信号通路相关分子有关。

Lgr5^(+)肠道干细胞自我更新和分化的调控机制

Lgr5^(+)肠道干细胞是位于肠道隐窝中具有自我更新和分化功能的干细胞,其通过不断更新肠道上皮保障肠道功能的正常行使。本文从信号通路和微环境两方面对近年来的相关文献进行综述,阐明信号通路参与调节肠道干细胞增殖分化的机制,以及免疫细胞、微生物群等微环境因素对肠道干细胞的影响,提出其在动物生产、营养实践、临床治疗等领域的应用价值。

自我更新

干物业,没有多么高深的学问,处处留心、多多思考,就能从外行变成内行。今天早上下楼的时候,看见一辆载有液压升降机的工程车停在路边,从车上下来四个人,撑开工程车的四只撑脚后,一个人站在液压升降平台上,操纵液压升降机升高并接近安装在高杆上的视频监控摄像机,再用裹着蓝色毛巾的杆子擦拭视频监控摄像机的外壳镜头玻璃罩,擦完之后,收起液压升降机和工程车的撑脚,一行四人便开车离开了。看到这里,只要是干过物业的都知道.

《儒林公案拈题》与晚清儒学的自我更新——以夏同龢题南湖先生扇面为例

晚清时期,中国传统儒学的文化主流地位受到挑战,腹背受敌,不仅要抗击外来西方学说对儒学的冲击,更要抵御内部所谓“异端”学说的“侵蚀”。但是儒学并没有就此沉沦,期间出现了许多有识之士对儒学进行改造,夏同龢正是其中一位,其题赠南湖先生的扇面所系的《儒林公案拈题》,涉及程颢与张载关于“定性”的辩论。其间所映射出的儒释道三元融合思想正是新儒学的要义,为探究晚清儒学的自我转向与衍化提供了一个生动案例。

长非编码RNA和环状RNA对精原干细胞自我更新调控的研究进展

精原干细胞(SSCs)是睾丸中的一组成体干细胞,是精子发生和维持男性生育能力的基础。SSCs能够自我更新以维持干细胞库的稳定性并分化产生成熟的精子。非编码RNA(ncRNAs)包括长非编码RNA(lncRNAs)和环状RNA(circRNAs),在雄性生殖细胞的基因表达和调控方面具有重要作用。NcRNAs在多种生物学过程中发挥重要作用,包括基因组印记、细胞分化、凋亡、干细胞多能性、X染色体失活和核转运。随着高通量测序技术的发展,大量的lncRNAs被发现与睾丸发育、维持精原干细胞的自我更新和分化、调节精母细胞减数分裂等多种生物学过程有关。本文就lncRNAs和circRNAs在调控精原干细胞自我更新方面的作用和机制进行综述,为男性不育症治疗的新分子靶点提供参考依据。

巨赞、吕澂与现代佛教“自我更新”论

晚清民国以来,由于中国传统社会的现代转型,中国佛教一直在应对由于"现代性"而引发的合法性危机,并相应有不同的佛教变革方案给出。而至20世纪中期,由于中国社会政治格局之变化,传统中国佛教之"制度空间"处于消解、压缩状态下,面临新一轮的合法性危机。缘此,中国佛学必须正面应对作为主流意识形态的"历史唯物主义",通过反思清理传统佛教中的消极因素,申张"现代佛学"之新形态,以开辟新的"制度空间"。本文即以巨赞法师、吕澂居士二人的思考作为典型,对比分析中国佛学的教、学二界对现代佛教自我"更新"的不同理解,以探讨现代佛教新形态的发展可能。

骨骼肌卫星细胞自我更新的研究进展

骨骼肌卫星细胞(skeletal satellite cells)是一类位于骨骼肌纤维细胞膜与基底膜之间的成体干细胞,在骨骼肌损伤修复过程中起着重要的作用。随着研究的不断深入,人们对骨骼肌卫星细胞的功能及其作用机制了解也越来越多,但目前仍存在着许多未解之谜。骨骼肌卫星细胞是如何进行自我更新调控的,研究者们提出了骨骼肌卫星细胞进行自我更新的模式假说及其可能的信号转导通路,作者对其最新研究进展作一概述。

人脑神经干细胞体外培养中增殖、自我更新及多向分化潜能的观察(英文)

背景:神经干细胞为神经系统损伤的修复开辟了新的途径,也是发现某些细胞因子和其作用机制的良好模型,神经干细胞的体外培养、增殖和诱导分化的探讨是这些研究的重要基础。目的:分离培养和鉴定人脑神经干细胞。设计和方法:采用无血清培养基分离和培养人胚胎脑皮质分离和培养神经干细胞,并应用免疫荧光技术进行细胞自我更新能力、巢蛋白表达和多向分化潜能的鉴定。地点和材料:实验在福建医科大学分子医学研究中心实施。实验材料为自然流产的孕龄6～8周的人胚胎脑组织。主要观察指标:人脑神经干细胞在体外培养条件中的增殖、自我更新能力、巢蛋白表达和多向分化潜能。结果:人胚胎脑组织分离培养的细胞具有神经干细胞的特征,并可在体外大量增殖,经诱导可分化为神经元、星形胶质细胞和少突胶质细胞。结论:从人胚胎脑皮质成功分离培养出的神经干细胞,是研究神经干细胞诱导分化的良好模型。