肺炎链球菌小片段自溶素蛋白LytA′的体外抗菌活性探讨

目的构建肺炎链球菌(ATCC49619)小片段自溶素基因lytA′的原核表达载体,通过大肠埃希菌表达系统进行原核表达获得一种新型肺炎链球菌小片段自溶素重组蛋白LytA′,初步探讨该蛋白的体外抗菌活性,并与青霉素G同时进行比较。方法设计lytA基因的特异性引物,并通过PCR方法从肺炎链球菌(ATCC49619)中扩增lytA基因,并将其插入原核表达载体PGM-T中,构建PGM-T/lytA重组质粒,使用限制性核酸内切酶BamHⅠ和HindⅢ消化PGM-T/lytA获得小片段自溶素基因lytA′。再构建表达质粒pET-32a(+)/lytA′并转化到感受态细胞大肠埃希菌BL21(DE3)中,经IPTG诱导表达目的蛋白,使用透析袋等电点洗脱技术纯化回收目的蛋白LytA′;采用微量肉汤稀释法分别测定LytA′和青霉素G对肺炎链球菌(ATCC49619)的最小抑菌浓度(MIC),并将其作用于青霉素G敏感菌株肺炎链球菌(ATCC49619),初步探讨小片段自溶素蛋白LytA′的体外抗菌活性。结果成功构建重组质粒PGM-T/lytA和pET-32a(+)/lytA′。小片段自溶素重组蛋白表达良好,并显示出预期的抗菌活性。与生长对照组相比,LytA′和青霉素G在3 h时显示出明显的抗菌活性(t=14.2430,P<0.0110;t=7.4000,P<0.0220),抑菌效应持续至7 h(t=20.8380,P<0.0080;t=17.8890,P<0.0170),抑菌效应逐渐增强。此外,在7 h时,LytA′的抑菌活性明显强于青霉素G(t=6.7640,P<0.0270)。结论小片段自溶素重组蛋白LytA′对青霉素G敏感肺炎链球菌显示出一定的体外抑菌活性,且持续时间久,有成为抗肺炎链球菌感染治疗药物的可能性。