鉴别猪流行性腹泻病毒ORF3基因截短株常规PCR及双重荧光PCR方法的建立及初步应用

猪流行性腹泻(PED)是由猪流行性腹泻病毒(PEDV)引起的一种以水样腹泻、呕吐和脱水为主要特征的猪急性肠道传染病。PEDV细胞适应性毒株与其他毒株之间的区别主要发生在ORF3基因,该基因的缺失可作为病毒适应细胞的标志。本实验室前期分离获得了1株广西自然截短的PEDV毒株17GXCZ-1ORF3d,为更好地鉴别不同类型毒株,本研究建立了可鉴别PEDV ORF3基因自然截短株的常规PCR以及双重荧光PCR检测方法。结果显示,2种方法均能鉴别PEDV ORF3基因截短株,且特异性好。另外,双重荧光PCR的检测下限为10^(0.59) PFU/mL,比所建立的常规PCR方法灵敏100倍,敏感性高。对收集的221份临床样品进行初步应用,常规PCR检出126份阳性样品,其中鉴别出14份ORF3基因截短株单独感染样品,而双重荧光PCR检出阳性样品145份,同样鉴别出14份ORF3基因截短株单独感染样品。本研究建立的2种PCR方法特异性强、灵敏度高、重复性好,对PEDV ORF3基因截短株的快速鉴别与检测具有重要意义。