人骨髓中自然抑制细胞对肿瘤细胞体外增殖的抑制作用

自然抑制(NS)活性是一类尚未完全定性的细胞所具有的对多种免疫反应的非特异抑制作用.NS细胞表面不存在成熟B细胞、T细胞及巨噬细胞的表面标记,为此,我们研究了NS细胞和造血干细胞(HSC)间的关系,结果证明,NS细胞是处于增殖周期中的HSC,并证明小鼠NS细胞具有抑制肿瘤细胞增殖的作用.本实验中,我们研究人骨髓中NS细胞的体外抗肿瘤活性,并确定其作用模式和生物学特性.

人骨髓中自然抑制细胞的抑瘤活性

目的研究人骨髓细胞中自然抑制细胞的抗肿瘤效应。方法分离并培养人骨髓中不同的细胞亚群，将不同的骨髓细胞亚群或其培养上清加入HL-6O或Kato-3肿瘤细胞培养体系中，检测肿瘤细胞的增殖反应，并检测电离辐射及蛋白质合成阻断剂对骨髓自然抑制活性的影响。结果具有自然抑制活性的骨髓细胞主要为CD34+CD33-细胞，其不但可以抑制丝裂素原刺激的人外周血单个核细胞的增殖，而且可以抑制肿瘤细胞株的增殖。自然抑制细胞发挥其自然抑制活性不需要细胞接触，但是蛋白质的合成则是这一过程所必需的，因为嘌呤霉素阻断自然抑制细胞发挥其自然抑制活性。此外，我们的结果表明，自然抑制细胞可分泌一种可溶性因子，IL－3和GM－GSF可以促进这一可溶性因子的产生。结论人骨髓细胞中自然抑制细胞具有显著的抗肿瘤效应。

自然抑制细胞的生物学特性

NS细胞属于大颗粒低密度淋巴细胞群,多数克隆的NS细胞表型为CD3^+CD4^-CD8^-,带有T细胞受体.NS细胞抑制多种免疫反应,无抗原特异性,无MHC限制,可由其分泌的抑制因子介导.已分离出一些活性相似的抑制因子,分别被命名为SIF,NSF,SF等.晚近证明,用PHA预处理的NS细胞及其培养物可促进胸腺细胞的增殖,此因子命名为TCSF.故此,NS细胞可能是处于免疫反馈循环中一重要环节上.NS细胞研究对免疫疾病的诊断和治疗有潜在的意义.

人自然杀伤细胞抑制性受体P58.2基因克隆与鉴定

目的 :P5 8.2基因克隆与鉴定。方法 :采用RT -PCR技术 ,从正常人外周血单个核细胞中扩增自然杀伤细胞抑制性受体P5 8.2基因全长cDNA ,经酶切后构建重组克隆载体 ,双酶切和测序鉴定。结果 :RT -PCR获得了预期的扩增产物P5 8.2全长cDNA ,成功构建了 pSPORT1-P5 8.2重组克隆载体 ,酶切、酶谱分析与预期结果相符。DNA测序结果与GenBank登记的人P5 8.2cDNA全长碱基序列一致。结论 :pSPORT1-P5 8.2重组克隆载体构建成功 ;P5 8.2基因序列与文献报道一致 ,为下一步构建表达载体和基因转染等工作打下良好的基础。

人自然杀伤细胞抑制性受体P58.1基因的克隆与鉴定

目的 克隆及鉴定P58.1基因。方法 采用RT-PCR技术,从正常人外周血单个核细胞中扩增P58.1基因全长cDNA,经酶切后构建重组克隆载体,测序鉴定。结果 RT-PCR获得预期的扩增产物P58.1全长cDNA,成功构建pSPORT1-P58.1重组克隆载体,酶切、酶谱分析与预期结果相符。DNA测序结果与GenBank登记的人P58.1cDNA全长碱基序列一致。结论 pSPORT1-58.1重组克隆载体构建成功;P58.1基因序列与文献报道一致,为下一步构建表达载体和基因转染等工作打下良好的基础。

重型β地中海贫血儿童自然杀伤细胞活性及受体表达分析

目的分析重型β地中海贫血(地贫)儿童体内自然杀伤(NK)细胞活性及受体表达,探讨输血诱导的NK细胞免疫抑制的机制。方法利用多色流式细胞技术,检测20例重型β地贫儿童、20例轻型β地贫儿童和20例健康儿童的外周血NK细胞CD107a(杀伤活性)、活化型受体(NKP30、NKP46、NKG2D)及抑制型受体(NKG2A、CD158a)的表达;使用细胞内细胞因子染色检测NK细胞分泌IFN-γ的水平。结果与轻型β地贫儿童和正常儿童相比,接受长期输血的重型β地贫儿童外周血NK细胞CD107a表达明显下调(P均<0.01),NK细胞抑制性受体NKG2A表达明显上调(P均<0.01),NKP30、NKP46、NKG2D、CD158a及IFN-γ的表达比较差异无统计学意义(P均>0.05)。结论 NK细胞抑制型受体NKG2A在重型β地贫输血诱导的NK细胞免疫抑制中可能发挥重要作用。

CD8^+T淋巴细胞表面抑制性受体NKG2A高表达在肺腺癌组织中的临床研究

目的分析CD8^+T淋巴细胞表面抑制性受体NKG2A表达与肺腺癌患者临床病理特征及5年生存期的相关性,并探讨其临床意义及预后价值。方法选择2014年1月~2015年3月河南科技大学第一附属医院手术切除的130例表皮生长因子受体(EGFR)为阳性的肺腺癌患者癌组织及相应癌旁肺组织石蜡包埋标本为研究对象,采用免疫组织化学方法检测其组织中浸润的CD8^+T淋巴细胞表面NKG2A蛋白表达情况,并分析NKG2A的表达与肺腺癌患者临床病理特征及5年生存期的相关性;采用Cox回归法分析各因素对预后的影响;采用Kaplan-Meier法分析NKG2A蛋白高表达与生存时间之间相关性。结果肺腺癌及相应癌旁肺组织中浸润的CD8^+T淋巴细胞胞膜均可见NKG2A蛋白表达,在肺腺癌组织中,中、低分化NKG2A免疫组化评分高于高分化,且低分化高于中分化(P <0.05)。NKG2A蛋白高表达与肺腺癌患者的分化程度、淋巴结转移、临床分期及5年生存情况具有相关性(P <0.05)。NKG2A蛋白高表达为影响肺腺癌患者预后的独立危险因素。且NKG2A蛋白高表达患者的5年生存率及中位生存时间均明显低于低表达,差异有统计学意义(P <0.05)。结论 CD8^+T淋巴细胞表面抑制性受体NKG2A高表达,可能通过削弱其抗肿瘤免疫,促进了肺腺癌的发生发展。抑制NKG2A表达可能为肺腺癌的免疫治疗提供新的思路和有效治疗手段。

妊娠期高血压疾病与KIR、HLA-G的相关性研究

目的通过检测妊娠期高血压疾病患者血清中自然杀伤细胞抑制性受体(KIR)和胎盘组织中人类白细胞抗原G(HLA-G)的表达水平,探讨妊娠期高血压疾病的发生与KIR、HLA-G的相关性。方法于2017年3月-2018年3月,选择在甘肃省妇幼保健院确诊为妊娠期高血压疾病的患者120例,按妊娠期高血压疾病、子痫前期轻度及子痫前期重度分为3组,每组40例患者。另选取同期正常妊娠妇女40例作为对照组。4组患者于分娩前分别抽取清晨空腹外周静脉血3 ml,采用酶联免疫法(ELISA)检测血清中KIR水平,于胎盘娩出10 min后,取大小为3 cm×3 cm×3 cm胎盘中心组织,切片后采用免疫组化检测其中HLA-G的表达水平。结果妊娠期高血压疾病患者的血清KIR水平显著高于对照组(P<0.05),KIR表达水平与妊娠期高血压疾病病情严重程度呈正相关(P<0.05);妊娠期高血压疾病各组患者胎盘组织中HLA-G表达阳性率和表达水平显著低于对照组(P<0.05),且其表达水平与病情严重程度呈负相关(P<0.05)。结论KIR在妊娠期高血压疾病患者血清中表达水平显著上升且有助于反映妊娠期高血压疾病的严重程度,HLA-G在妊娠期高血压疾病患者胎盘组织中低表达且与疾病严重程度呈负相关。KIR及HLA-G的检测有助于妊娠期高血压疾病的早期诊断及分级,对于治疗及改善妊娠期高血压疾病患者的预后具有重要价值。