基于自然杀伤(NK)细胞的肝癌免疫疗法研究进展

肝细胞肝癌(HCC)异质性高,晚期诊断和化疗耐药使其成为我国难治性肿瘤之一。自然杀伤(NK)细胞在机体的免疫监视过程中充当重要角色。但在肝癌的进展过程中,NK细胞的功能受损致肿瘤免疫逃逸。该文总结了HCC中基于NK细胞的不同免疫治疗策略,包括直接输注过继性NK细胞免疫疗法、基因工程NK细胞免疫疗法、靶向NK细胞受体免疫疗法、改变免疫抑制微环境免疫疗法、细胞因子增强NK细胞肿瘤毒性免疫疗法以及中医药增强NK细胞肿瘤毒性免疫疗法,这些基于NK细胞的免疫治疗策略已显示出巨大的治疗潜力。

自然杀伤细胞2组成员A、程序性死亡因子配体1表达检测对PD-L1阻断免疫治疗肌层浸润性膀胱癌反应性的预测价值

目的:探究自然杀伤细胞2组成员A(NKG2A)及程序性死亡因子配体1(PD-L1)表达检测对PD-L1阻断免疫治疗肌层浸润性膀胱癌反应性的预测价值。方法:选取100例肌层浸润性膀胱癌患者作为研究对象,对其行PD-L1阻断免疫治疗后,根据治疗反应性将其分为缓解组和未缓解组;对缓解组患者随访3个月,将其分为复发组和未复发组。比较两组患者NKG2A和PD-L1在CD4^(+)和CD8^(+)上的表达水平,采用ROC曲线分析NKG2A和PD-L1预测膀胱癌患者治疗反应性的价值。结果:100例研究对象中,缓解组患者72例(72.00%),未缓解组患者28例(28.00%),两组性别、年龄比较无统计学差异(均P>0.05),但缓解组患者肿瘤直径小于未缓解组,NKG2A、PD-L1/CD4^(+)和PD-L1/CD8^(+)表达水平均低于未缓解组(均P<0.05)。膀胱癌患者NKG2A、PD-L1/CD4^(+)和PD-L1/CD8^(+)表达预测免疫治疗后缓解的AUC值分别为0.771、0.724、0.710;联合诊断的AUC为0.836。72例缓解患者中,出现复发29例(40.28%),未出现复发43例(59.72%),两组性别、年龄以及肿瘤直径比较无统计学差异(均P>0.05),但复发组NKG2A、PD-L1/CD4^(+)和PD-L1/CD8^(+)表达水平均高于未复发组(均P<0.05)。NKG2A、PD-L1/CD4^(+)和PD-L1/CD8^(+)表达预测膀胱癌患者缓解后复发的AUC值分别为0.775、0.740、0.728;联合诊断的AUC为0.874。结论:NKG2A、PD-L1/CD4^(+)和PD-L1/CD8^(+)在不同治疗反应性肌层浸润性膀胱癌患者外周血中表达水平不同,三者对于膀胱癌患者PD-L1阻断免疫治疗反应性均有一定的预测价值,且三者联合预测效能最佳。

肿瘤浸润性自然杀伤细胞在免疫治疗中的研究进展

自然杀伤(NK)细胞是一种具有强大细胞毒性和活性的先天淋巴细胞。基于NK细胞的免疫疗法在血液系统肿瘤的治疗中取得显著疗效,但在实体恶性肿瘤的治疗中疗效较低。该文就NK细胞的功能、表型及其肿瘤免疫治疗的研究进展作一综述。

膀胱癌细胞高表达E2因子转录因子家族成员3a(E2F3a)通过上调CD24抑制NK细胞的杀伤

目的 探讨膀胱癌细胞过表达E2因子转录因子家族成员3a(E2F3a)后是否影响自然杀伤(NK)细胞的活化及杀伤并探讨其具体机制。方法 利用慢病毒载体构建E2F3a稳定过表达的人及小鼠膀胱癌细胞株并将其与NK细胞共孵育,乳酸脱氢酶释放实验及流式细胞术检测NK细胞活化及杀伤能力的变化。转录组测序分析膀胱癌细胞E2F3a过表达组与对照组之间的基因表达差异,免疫组织化学染色法检测膀胱癌组织中E2F3a与差异基因在蛋白水平上表达的相关性。进一步利用染色质免疫沉淀(ChIP)、实时定量PCR、 Western blot法及小干扰RNA(siRNA)等方法探索膀胱癌细胞过表达E2F3a后对NK细胞活化及杀伤影响的具体机制。结果 在膀胱癌细胞中过表达E2F3a能显著抑制NK细胞的活化及杀伤。膀胱癌细胞过表达E2F3a可显著上调CD24基因的表达,膀胱癌组织中E2F3a和CD24蛋白的表达呈显著正相关。CHIP结果显示,E2F3a能够结合CD24的启动子区并促进CD24基因的转录。干涉E2F3a过表达膀胱癌细胞中的CD24表达后,发现膀胱癌细胞E2F3a过表达所介导的NK细胞活化及杀伤抑制被显著缓解。结论 在膀胱癌细胞中E2F3a可结合CD24的启动子区促进CD24基因的转录及CD24蛋白的表达。膀胱癌细胞E2F3a通过上调CD24表达来抑制NK细胞的活化及杀伤。

自然杀伤细胞在抗肿瘤免疫中的应用

自然杀伤细胞是具有细胞毒性的淋巴样细胞,能够直接和间接发挥抗肿瘤作用。既往研究证明过继自然杀伤细胞治疗肿瘤具有一定的可行、安全及有效性,深入研究自然杀伤细胞过继疗法的抗实体瘤潜力成为现今研究热点之一。本文对当前自然杀伤细胞抗肿瘤免疫及细胞过继疗法中的研究进展作一综述。

结外自然杀伤/T细胞淋巴瘤的治疗研究进展

结外自然杀伤/T细胞淋巴瘤(ENKTCL)是一种少见的与EB病毒感染相关的恶性肿瘤,具有较强的侵袭性。目前,对于晚期或复发/难治性ENKTCL,常规推荐使用含左旋门冬酰胺酶的非蒽环类药物联合其他药物进行化学治疗,但长期生存率仍较低。近年来,造血干细胞移植、免疫治疗和靶向治疗受到了广泛关注,为ENKTCL的治疗提供了新的选择。本文就造血干细胞移植、免疫治疗和靶向治疗在ENKTCL治疗中的应用进展进行综述。

CD3^(+)和CD4^(+)与CD8^(+)T细胞亚群及自然杀伤细胞的表达对治疗结核病的临床研究

目的探讨CD3^(+)、CD4^(+)、CD8^(+)T细胞亚群及自然杀伤细胞(NK)的表达对治疗肺结核病的临床研究。方法选取2020年6—11月萍乡市第二人民医院收治的活动性肺结核患者(结核组)、结核潜伏感染者(结核潜伏感染组)、健康对照者(健康对照组)作为研究对象,每组30例。采用流式细胞术检查3组CD3^(+)、CD3^(+)CD4^(+)、CD3^(+)CD8^(+)、NK细胞计数与百分比情况。结果结核组CD3^(+)、CD3^(+)CD4^(+)、CD3^(+)CD8^(+)、NK细胞计数水平均低于结核潜伏感染组、健康对照组,差异有统计学意义(P<0.05);结核潜伏感染组CD3^(+)CD4^(+)、NK细胞计数水平均高于健康对照组,差异有统计学意义(P<0.05);健康对照组与结核潜伏感染组CD3^(+)、CD3^(+)CD8^(+)细胞计数水平比较差异无统计学意义。3组CD3^(+)CD4^(+)、CD3^(+)CD8^(+)、NK细胞百分比情况比较差异无统计学意义;结核组CD3^(+)细胞百分比水平低于健康对照组、结核潜伏感染组,差异有统计学意义(P<0.05);结核潜伏感染组CD3^(+)百分比水平与健康对照组比较差异无统计学意义。结核组复诊时CD3^(+)、CD3^(+)CD4^(+)、CD3^(+)CD8^(+)、NK细胞计数水平高于初诊时,差异有统计学意义(P<0.05);结核组复诊时CD3^(+)、NK细胞计数水平低于健康对照组,差异有统计学意义(P<0.05);结核组复诊时CD3^(+)CD4^(+)、CD3^(+)CD8^(+)与健康对照组比较差异无统计学意义;结核潜伏感染组复诊时CD3^(+)、CD3^(+)CD4^(+)、NK细胞计数水平低于初诊时,差异有统计学意义(P<0.05),CD3^(+)CD8^(+)与初诊时比较差异无统计学意义;健康对照组、结核潜伏感染组复诊时CD3^(+)、CD3^(+)CD4^(+)、CD3^(+)CD8^(+)、NK细胞计数水平比较差异无统计学意义。结核组复诊时CD3^(+)细胞百分比水平低于初诊时,差异有统计学意义(P<0.05);其他组内组间各指标两两比较差异无统计学意义。结论肺结核、肺结核潜伏期患者存在T细胞亚群及NK细胞表达异常情况,可结合各指标变化情况进行治疗指导及预后评估。

基于WGCNA筛选胃癌相关自然杀伤细胞基因及潜在中药预测

目的:通过加权基因共表达网络分析(WGCNA)筛选胃癌相关自然杀伤细胞基因,探讨自然杀伤细胞相关基因与胃癌预后相关性,预测潜在治疗的中药。方法:运用WGCNA分别构建TCGA-STAD数据集和GSE84437数据集胃癌自然杀伤细胞相关基因共表达网络,获得自然杀伤细胞相关基因。通过单因素Cox回归分析获得与预后相关基因,对预后相关基因进行生存分析,获得与生存相关的基因,以GSE84433作为验证集。运用CIBERSORT反卷积算法计算生存相关基因在22种免疫细胞中的浸润情况。将预后相关的基因映射到Coremine Medical数据库,获得潜在中药,并对筛选中药进行四气、五味、归经及功效的频数统计。结果:通过WGCNA及差异分析,筛选出98个与自然杀伤细胞相关基因,单因素Cox分析共获得22个与预后相关的基因,通过生存分析,发现5个基因与生存显著相关,且与大部分免疫细胞存在相关性,并在GSE84433数据集得到验证。将预后相关基因映射到Coremine Medical数据库,获得潜在治疗中药186味,其中姜黄、郁金等10味中药出现频数较高,药性以温、寒为主,药味以苦、辛、甘为主,归经以肝经、肺经、胃经、脾经为主,功效以补虚药、清热药为主。结论:IL32、IRF8、INFG、SNX10、BATF2等5个胃癌相关自然杀伤细胞基因与胃癌预后相关,姜黄、郁金等中药可能通过提高自然杀伤细胞的活性和数量改善胃癌的预后。本研究揭示中药可能通过改变肿瘤免疫微环境改善患者生存预后,为后续中药研究提供思路。

表现为食管溃疡的结外自然杀伤/T细胞淋巴瘤1例并文献复习

本文回顾性分析1例表现为食管溃疡的结外自然杀伤/T细胞淋巴瘤患者的病例资料及诊治经过,并结合相关文献进行分析讨论,以期为此类患者的诊断治疗提供参考。该例患者入院后完善胃镜提示食管多发溃疡,黏膜活检病理结果确诊为结外自然杀伤/T细胞淋巴瘤,予以培门冬酶+吉西他滨+奥沙利铂方案治疗。患者经过5个化疗疗程后再次复查胃镜未见食管溃疡,黏膜活检未见异型细胞,提示完全缓解。

大规模扩增人外周血来源自然杀伤细胞体系的筛选

目的:探讨人外周血来源的单个核细胞经三种体外培养体系活化扩增后的自然杀伤细胞(NK细胞)在扩增倍数、生物学表型和细胞毒性上的异同。方法:收集健康供者捐赠的外周血,经淋巴细胞分离液介导的密度梯度离心法富集单个核细胞。使用含自体血浆、重组人细胞因子的无血清培养液,各体系均添加IL-2和IL-15,体系B额外添加抗人CD3单抗,体系C额外添加IL-18,在相同条件下培养扩增14 d,比较不同培养体系的NK细胞在细胞表型、细胞活力及细胞毒性的异同。结果:体系A、B、C中NK细胞扩增倍数分别为811.43±30.07、2800.79±36.42和1047.97±85.21,表明抗人CD3单抗可以增强NK细胞的扩增。三种体系培养NK细胞在细胞表型、细胞周期、细胞活力和细胞毒性方面无统计学差异。结论:使用含自体血浆、重组人IL-2、IL-15细胞因子和抗人CD3单抗的无血清培养液,在37℃、5%CO_(2)条件下可以实现NK细胞大规模培养,获取高纯度的NK细胞。

具NK细胞的溶瘤病毒疗法的模型分析

本文建立了一类包含自然杀伤细胞(NK细胞)免疫反应的肿瘤病毒相互作用模型。首先分析了系统的边界性态,将系统的平衡点进行完整的分类,讨论了边界平衡点的局部稳定性,并从数值上验证了周期解的存在性,最后讨论了NK细胞在病毒治疗中所起到的作用。数值结果表明:a)整体肿瘤大小与病毒感染率成反比,与肿瘤生长速率成正比;b)对于NK细胞相关参数,NK细胞从淋巴结的流入速率越大,最终肿瘤越小;若产生NK细胞增殖,当增殖速率比较小时,相较于无NK增殖时,最终肿瘤变大,即较小的NK细胞增殖对治疗产生负面的影响,但当NK细胞的增殖速率过高时,将会导致肿瘤和病毒的完全清除。

非小细胞肺癌患者血清CA211水平和NK细胞数与预后相关

目的 探究非小细胞肺癌(NSCLC)患者血清糖类抗原211(CA211)表达水平和自然杀伤(NK)细胞数与预后的相关性。方法 选取杭州师范大学附属医院2019年6月至2022年7月收治的132例NSCLC患者作为实验组,另选取同期收治的132例肺部良性病变患者作为对照组。从检验科收集数据分析NSCLC患者血清CA211表达水平和NK细胞数与患者预后关系以及影响NSCLC患者预后的相关因素。结果 实验组中性粒细胞/淋巴细胞值(NLR值)和血清CA211表达水平高于对照组(P<0.05),NK细胞数低于对照组(P<0.05);实验组血清CA211表达水平和NK细胞数呈负相关(r=-0.405,P<0.001);不同血清CA211表达水平和NK细胞数的患者淋巴结转移情况以及TNM分期存在显著性差异(P<0.05);CA211低表达者1年生存率高于CA211高表达者(P<0.05),NK细胞高水平者1年生存率高于NK细胞低水平者(P<0.05);淋巴结转移、TNM分期、CA211是影响NSCLC患者预后的危险因素(P<0.05),NK细胞是NSCLC患者预后的保护因素(P<0.05)。结论 NSCLC患者血清CA211表达水平及NK细胞数与临床病理特征及预后有密切联系。

根治性肝叶切除术治疗肝细胞癌患者外周血自然杀伤细胞活力变化及其临床意义探讨

目的探讨肝细胞癌(HCC)患者根治性肝叶切除术后外周血自然杀伤(NK)细胞活性变化及其临床意义。方法2019年5月~2021年5月我院收治的127例HCC患者,所有患者均接受根治性肝叶切除术治疗,随访2年。使用流式细胞仪检测外周血NK细胞百分比。进行影像学检查,将复发肿瘤分为Ⅰ期、Ⅱ期和Ⅲ期。结果术后,127例HCC患者外周血CD3^(-)CD56^(+)和CD3^(-)CD16^(+)CD56^(+)细胞百分比分别为(27.3±1.6)%和(16.3±1.4)%,均显著高于术前【分别为(16.4±1.4)%和(12.5±1.5)%,P<0.05】;术后随访发现肿瘤复发53例,肿瘤复发组外周血CD3^(-)CD56^(+)、CD3^(-)CD16^(+)CD56^(+)和D3^(-)CD161^(+)NK细胞百分比分别为(21.4±2.3)%、(14.8±1.5)%和(19.4±2.6)%,均显著低于未复发患者【分别为(25.4±2.6)%、(17.1±1.6)%和(22.6±2.8)%,P<0.05】;15例Ⅲ期复发肿瘤患者外周血CD3^(-)CD56^(+)、CD3^(-)CD16^(+)CD56^(+)和D3^(-)CD161^(+)NK细胞百分比分别为(15.3±1.6)%、(13.2±1.5)%和(17.3±1.2)%,显著低于21例Ⅱ期患者【分别为(20.2±1.4)%、(16.7±1.5)%和(20.4±2.5)%,P<0.05】或17例Ⅰ期患者【分别为(23.4±2.5)%、(17.1±1.7)%和(21.4±2.4)%,P<0.05】。结论HCC患者存在细胞免疫功能下降,在根治性肝叶切除术后患者自然杀伤细胞百分比上升,可能对防止肿瘤复发起一定的作用,值得进一步研究。

过表达PAX6抑制肝癌细胞生长和促进自然杀伤细胞杀伤能力的机制

目的:配对盒基因6(paired box gene 6,PAX6)主要在胚胎发育中发挥调控作用,其异常表达与多种肿瘤的发生、发展有关,在不同肿瘤中可发挥促癌或抑癌的作用。本研究旨在观察过表达PAX6对肝癌细胞生长及自然杀伤(natural killer,NK)细胞对肝癌细胞杀伤能力的影响及其分子机制。方法:采用ELISA技术检测68例肝细胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)患者和10例健康人外周血的PAX6、可溶性主要组织相容性复合体I类样蛋白A(soluble major histocompatibility complex class I-like protein A,sMICA)和可溶性UL16结合蛋白2(soluble UL16 binding protein 2,sULBP2)的表达水平;体外培养肝癌细胞HepG2和LM3及人正常肝细胞LO2,将PAX6过表达质粒(PAX6-OE)和空载体(NC)转入HepG2和LM3细胞中构建稳定细胞株,分别采用real-time PCR、蛋白质印迹法、免疫荧光等方法检测HepG2和LM3细胞中PAX6的表达水平;在HepG2和LM3细胞中过表达PAX6,采用CCK-8法和细胞划痕实验检测细胞生长和迁移能力,ELISA法检测其上清液中sMICA和sULBP2的分泌水平,蛋白质印迹法检测基质金属蛋白酶2(matrix metalloproteinase 2,MMP2)、基质金属蛋白酶9(matrix metalloproteinase 9,MMP9)、去整合素样金属蛋白酶10(disintegrin and metalloproteinase 10,ADAM10)的蛋白质表达水平;采用流式细胞术检测NK细胞对2种肝癌细胞的杀伤能力。结果:与健康人相比较,HCC患者血清中PAX6表达水平显著降低(P=0.002),而sMICA和sULBP2的表达水平显著增高(P=0.004和P<0.001)。Real-time PCR、蛋白质印迹法结果显示:与正常肝细胞LO2相比,HepG2和LM3细胞PAX6的mRNA和蛋白质表达水平均显著降低(均P<0.05)。免疫荧光结果亦可见肝癌细胞HepG2和LM3中PAX6的表达均低于正常肝细胞LO2。与NC组比较,PAX6-OE组肝癌细胞HepG2和LM3的增殖及迁移能力下降(均P<0.05);PAX6-OE组的HepG2和LM3细胞中MMP2、MMP9、ADAM10的蛋白质表达水平均显著降低(均P<0.05),且PAX6-OE组的HepG2和LM3细胞上清液中sMICA和sULBP2的分泌水平均显著低于NC组(均P<0.05)。流式细胞术显示:与NC组比较,PAX6-OE组NK细胞对HepG2和LM3细胞的杀伤率显著增高(均P<0.05)。结论:PAX6在HCC患者血清及肝癌细胞系中表达降低,过表达PAX6可抑制肝癌细胞生长,增强NK细胞对肝癌细胞的杀伤效率,其机制与PAX6抑制金属蛋白酶的表达、降低sMICA和sULBP2的分泌水平有关。

成人传染性单核细胞增多症相关肝损伤患者自然杀伤细胞亚群的比例和功能变化

目的:分析成人传染性单核细胞增多症(IM)相关肝损伤患者自然杀伤(NK)细胞亚群比例和功能的变化。方法:入组17例健康对照者、26例传染性单核细胞增多症无肝损伤患者、21例IM合并肝损伤患者,采集外周血,分离血浆和外周血单个核细胞(PBMC),酶联免疫吸附试验检测血浆白细胞介素-15(IL-15)水平,流式细胞术检测CD56^(+)CD16-、CD56^(+)CD16^(+)、CD56-CD16^(+)3个NK细胞亚群比例。PBMC分别与721.221细胞、K562细胞、P815-Ab细胞共培养,流式细胞术检测NK细胞中CD107a的表达和CD16平均荧光强度(MFI)。使用抗IL-15中和抗体刺激IM合并肝损伤患者PBMC,观察NK细胞功能变化。组间比较采用单因素方差分析或配对t检验。结果:CD56^(+)CD16-NK细胞在IM合并肝损伤组(7.36±0.92)%和IM无肝损伤组(10.67±1.37)%的比例均明显低于对照组(12.02±2.51)%(P<0.05),IM合并肝损伤组CD56^(+)CD16-NK细胞比例低于IM无肝损伤组(P<0.0001)。CD56^(+)CD16^(+)NK细胞在IM合并肝损伤组(62.03±8.78)%和IM无肝损伤组(44.74±13.03)%的比例高于对照组(40.74±10.15)%(P<0.05),IM合并肝损伤组CD56^(+)CD16^(+)NK细胞比例高于IM无肝损伤组(P<0.0001)。CD56-CD16^(+)NK细胞比例在3组之间的差异无统计学意义(P=0.427)。血浆IL-15在IM合并肝损伤组(309.1±68.00)pg/ml的水平明显高于IM无肝损伤组(269.6±53.57)pg/ml和对照组(257.4±73.93)pg/ml(P<0.05)。NK细胞通过不同受体介导杀伤相应靶细胞后,IM合并肝损伤组NK细胞中CD107a阳性细胞比例明显高于IM无肝损伤组和对照组(P<0.05),CD16 MFI明显低于IM无肝损伤组和对照组(P<0.05)。抗IL-15中和抗体刺激IM合并肝损伤患者PBMC后,NK细胞中CD107a比例明显降低(P<0.05)。结论:IM合并肝损伤患者中存在NK细胞亚群失衡和功能增强,IM合并肝损伤患者中IL-15水平升高可能增强NK细胞的毒性作用。

不同的细胞保存液对自然杀伤细胞和自然杀伤T细胞短期保存的影响

目的:探讨4℃运输保存条件下,自然杀伤细胞(natural killer cell,NK细胞)和自然杀伤T细胞(natural killer T,NKT细胞)在不同的保存液中保存0、6、12、24 h后其生物学性质的变化,为开展免疫细胞保存运输提供可靠的实验依据。方法:采集4份40 ml血液标本,将同一外周血来源的细胞分别按照NK细胞、NKT细胞培养方案分成2份培养。将已经培养好的8份NK细胞、NKT细胞分别收集并应用生理盐水(保存液A)、生理盐水+5%人血白蛋白(保存液B)、生理盐水+5%人血白蛋白+1%低分子右旋糖苷(保存液C) 3种保存液分别保存。于0、6、12、24 h分别进行细胞活率及结团率、流式细胞术检测及细胞杀伤实验检测。结果:存放12 h时,A组的细胞活率已低于85%,与其他2组比较差异有统计学意义(P<0.05);存放24 h时,各组细胞活率均低于85%,但A组保存液中的细胞活率明显低于B、C组(P<0.05)。存放12、24 h时,B组和C组保存液中细胞结团率均低于A组,且存放24 h时,C组的结团率低于B组(P<0.05)。直至24 h,各处理组中流式细胞术检测结果均未出现明显变化。存放12 h时NK细胞和NKT细胞的A组细胞与C组比较,杀伤作用明显减弱(P<0.05);随着保存时间的延长,至24 h各组细胞的杀伤力均出现显著下降,A组、B组细胞的杀伤力与C组比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论:4℃条件下,NK细胞和NKT细胞保存时间最好不超过24 h,且以生理盐水+5%人血白蛋白+1%低分子右旋糖苷保存效果最佳。

自然杀伤细胞在抗感染和肿瘤治疗中的作用

自然杀伤(NK)细胞是机体固有免疫系统的重要组成部分,作为抵抗病原体的第一道防线,需要在各种细胞信号分子和转录因子的调控下,转变为成熟状态而发挥细胞毒作用和免疫调节作用。在表面活化型受体与抑制型受体相互作用下,NK细胞活化,通过分泌穿孔素和颗粒酶,行使直接的细胞杀伤作用,或者通过分泌各种细胞因子,如Ⅰ型和Ⅱ型干扰素,间接清除体内的病原微生物。NK细胞的这些作用在抗病毒和抗自身免疫性疾病等,尤其是在抗肿瘤方面具有非常重要的作用。

肺鳞状细胞癌中解聚素-金属蛋白酶17下调对自然杀伤细胞杀伤作用的影响

目的:探讨肺鳞状细胞癌中解聚素-金属蛋白酶17(Human A disintegrin and metalloprotease 17,ADAM17)下调对自然杀伤细胞(Natural killer cell,NK)杀伤作用的影响。方法:体外培养人NCI-H520细胞株,分为正常对照组(未转染)、阴性对照组(转染nonsense siRNA)和ADAM17下调组(转染ADAM17 siRNA)。qRT-PCR和Western blotting检测各组细胞ADAM17 mRNA和蛋白表达。制备NK细胞,加入各组NCI-H520细胞中,Western blotting检测各组细胞γ干扰素(Interferon-γ,IFN-γ)、颗粒酶B(Granzyme B,GraB)、穿孔素(Pore-forming protein,PFP)蛋白表达。结果:与正常对照组相比,阴性对照组ADAM17 mRNA和蛋白表达无明显差异,ADAM17下调组ADAM17 mRNA和蛋白表达减少(P<0.01);与正常对照组相比,阴性对照组NCI-H520细胞生存率无明显差异,ADAM17下调组NCI-H520细胞生存率降低(P<0.01);与正常对照组相比,阴性对照组IFN-γ、GraB、PFP蛋白表达均无明显差异,ADAM17下调组IFN-γ、GraB、PFP蛋白表达上调(P<0.01)。结论:肺鳞状细胞癌NCI-H520细胞中ADAM17下调能增强NK细胞的杀伤作用。

细粒棘球蚴感染早期对小鼠肝脏NKT细胞及其相关因子的影响

目的探讨细粒棘球蚴感染早期对小鼠肝脏自然杀伤T(Natural killer T,NKT)细胞及其相关因子的影响。方法将24只雌性C57BL/6小鼠随机分为对照组与感染组,每组12只。感染组经肝门静脉接种细粒棘球蚴原头蚴,对照组注射等量生理盐水,4周后,每组各取6只小鼠的肝脏组织进行Masson染色,另外6只小鼠的肝脏组织用于分离淋巴细胞以进行流式细胞术检测小鼠肝脏不同NKT细胞亚群比例和相关细胞因子干扰素-γ(Interforn-γ,IFN-γ)、肿瘤坏死因子-α(Tumour necrosis factor-α,TNF-α)、白细胞介素-4(Interleukin-4,IL-4)、白细胞介素-10(Interleukin-10,IL-10)和白细胞介素-17A(Interleukin-17A,IL-17A)的表达。结果与对照组纤维占比比较,感染组肝脏侵袭部位及其邻近肝脏组织呈现结缔组织病变,纤维化明显,纤维占比显著增加,且分布较广,包绕肉芽肿四周形成条索状纤维间隔。与对照组比较,感染组小鼠肝脏NKT细胞比例和CD4^(+)NKT细胞比例显著降低,差异均有统计学意义(P均<0.01);与对照组比较,感染组小鼠肝脏NKT细胞分泌TNF-α的比例、CD4^(+)NKT细胞分泌TNF-α的比例显著升高,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论细粒棘球蚴感染早期小鼠肝脏纤维化程度增加,肝脏NKT细胞及其亚群CD4^(+)NKT细胞产生TNF-α的水平增加,提示肝脏NKT细胞可能参与细粒棘球蚴感染早期肝脏免疫应答反应。

肿瘤患者自然杀伤细胞受体NKG2A和NKG2D的表达

目的通过研究肿瘤患者外周血自然杀伤(NK)细胞表面NKG2A和NKG2D的表达情况,探讨二者表达失衡与肿瘤免疫逃逸的关系。方法采用流式细胞术检测40例肿瘤患者和10名正常对照者外周血NK细胞表面NKG2A和NKG2D的表达情况。用全自动五分类血液分析仪测定各病例的血常规。结果肿瘤患者和正常对照组白细胞数值差异无统计学意义;肿瘤患者淋巴细胞比率低于对照组,而NK细胞明显高于对照组;肿瘤患者NK细胞表面抑制性受体NKG2A和活化性受体NKG2D均明显高于对照组,但肿瘤患者NKG2D荧光强度呈降低趋势。结论肿瘤患者NK细胞表面NKG2A/NKG2D表达失衡,可能是肿瘤免疫逃逸的机制之一。