嵌合抗原受体自然杀伤细胞疗法研究进展及展望

自然杀伤(NK)细胞是先天免疫系统的主要组成部分。基于其对肿瘤细胞的有效杀伤能力和对健康细胞的良好耐受性,NK细胞已成功地用于过继细胞疗法以治疗肿瘤患者。近年来,嵌合抗原受体(CAR)-T细胞的临床成功,证明了基因修饰的免疫细胞在抗肿瘤领域的巨大潜力。NK细胞凭借优越的低免疫原性也迅速成为基于CAR修饰疗法的新型免疫工具细胞。目前已经开展的多项临床试验中,多种来源的CAR-NK细胞均展现出较为优越的治疗效果和安全性,但靶向实体瘤CAR-NK细胞治疗仍处于初始阶段。本文系统梳理了CAR-NK细胞在临床上取得阶段性进展,同时也指出CAR-NK细胞疗法的局限性,旨在为进一步优化和升级CAR-NK细胞疗法提供参考。

嵌合抗原受体自然杀伤细胞免疫治疗多发性骨髓瘤研究进展

尽管新药的进展使多发性骨髓瘤(MM)患者的生存得到明显改善,但复发难治MM仍缺乏有效治疗方案,且预后差。嵌合抗原受体T细胞(CAR-T)免疫治疗技术虽然在复发难治MM中有不错的疗效,但仍存在局限性,如细胞因子释放综合征、神经毒性等不良反应和脱靶效应等。自然杀伤(NK)细胞作为机体固有免疫的重要成分,在肿瘤免疫监视中发挥重要功能,因此基于NK细胞的嵌合抗原受体自然杀伤细胞(CAR-NK)免疫治疗技术也越来越受到关注。目前CAR-NK免疫治疗MM的研究显示,多个靶点可作为CAR-NK免疫治疗技术特异性治疗靶点,并且在MM细胞及动物实验中也证实其抗肿瘤效应。本文总结了MM肿瘤微环境中NK细胞抗肿瘤机制、生物学特点和功能缺陷情况,以及CAR-NK免疫治疗MM的基础和临床研究进展。

自然杀伤(NK)细胞应对结核分枝杆菌感染的研究进展

结核病(TB)是由结核分枝杆菌(MTB)感染引起的严重威胁人类健康的慢性传染病。自然杀伤(NK)细胞作为先天免疫的重要组成部分,在应对MTB感染时,NK细胞可分化出不同亚群,表现出受体和功能的多样性;并通过分泌细胞因子,串联其他免疫细胞发挥对MTB的抗感染作用,从而增强机体的抗MTB免疫应答反应。

自然杀伤细胞毒性受体抗肝细胞癌的研究进展

肝细胞癌（HCC）是全球常见的肿瘤之一，发病率约为6．7／10万人；2012年全球HCC患者高达78．2万人，每年有74．6万人死于肝癌，HCC已经成为全球第二的癌症死因；我国每年约有38．3万人因肝癌死亡，占全球HCC死亡的51％，已经成为我国癌症中的第二号杀手。随着医学免疫学研究的不断深入，诸多的免疫细胞过继疗法应用于临床。

慢性丙型病毒性肝炎患者抗病毒治疗前后自然杀伤细胞CD100表达水平变化

目的观察慢性丙型病毒性肝炎患者抗病毒治疗前后外周血中NK细胞、NK细胞亚群百分率及活化因子CD100表达水平变化。方法流式细胞术检测慢性丙型肝炎病毒(HCV)感染者外周血中NK细胞、NK细胞亚群频率及膜型CD100表达水平;ELISA检测血清中可溶性CD100水平;采用Spearman相关检验分析CD100与谷丙转氨酶(ALT)、HCV-RNA之间的相关性。结果与健康对照组相比,慢性HCV感染患者CD56dimNK亚群百分率降低,而CD56neg亚群比率升高(P<0.05);抗病毒治疗后获得早期病毒学应答(EVR)者,CD56bright亚群百分率升高,CD56neg亚群比率显著降低(P<0.05);停药后获得持续性病毒学应答(SVR)者,总NK细胞及亚群频率恢复正常。与健康对照组相比,慢性HCV感染患者血清中sCD100水平显著降低(P<0.05);膜型CD100表达轻度降低,但无统计学差异;经抗病毒治疗获得EVR者,sCD100及膜型CD100水平均显著升高(P<0.05),获得SVR者又降至正常水平。Spearman相关性分析发现,NK细胞CD100表达与ALT水平呈正相关,与HCV-RNA滴度呈负相关(P<0.05)。结论 CD100表达降低与HCV持续感染有一定关系,并参与NK细胞对HCV清除。

年龄对人细胞毒性T淋巴细胞和自然杀伤细胞中穿孔素表达的影响

目的 通过研究健康儿童、成人和老年人外周血淋巴细胞 (PBL)中细胞毒效应分子穿孔素 (PFP)的表达水平的变化 ,了解细胞毒性T细胞 (CTL )的杀伤活性随年龄增长而下降的分子机制。方法 利用抗人PFP、抗人CD3和抗人CD5 6单克隆抗体 (mAb) ,采用单标记免疫组化染色法 ,检测外周血单个核细胞 (PBMC)中PFP的表达。采用双标记免疫组化染色法 ,检测上述细胞表面标志CD3或CD5 6的表达和细胞内PFP的表达。结果 儿童组、成人组及老年组PBL中表达PFP阳性细胞的百分率 (% ) ,分别为 (2 6 .4± 2 .7) % ,(2 1.6± 3.2 ) %和 (13.4± 2 .0 ) % ,老年组明显下降 ,与其他两组相比较P <0 .0 0 1。 3个年龄组CD3+ T细胞表达PFP的阳性率 (% ) ,分别为 (30 .1± 4 .8) %、(2 1.4± 7.3) %和 (18.8± 4 .2 ) % ,随年龄的增长而显著下降。3个年龄组CD5 6 +NK细胞PFP的表达差别不显著。结论 健康人PBL中PFP的表达随年龄增长而递减 ,CD3+ T细胞亚群PFP表达水平的下降尤其显著。

α7尼古丁受体介导100Hz电针调节自然杀伤细胞活性的实验研究

目的在已有的实验基础上,进一步寻求α7尼古丁受体(α7nAChR)介导100Hz电针(EA)调节自然杀伤细胞(NK)细胞活性的新证据。方法应用α7nAChR抗体和特异性的α7nAChR拮抗剂α-银环蛇毒(α-Bgt),探讨α7nAChR在EA对NK细胞活性中的作用。结果与100Hz EA组相比,100Hz EA+α7nAChR抗体组脾脏NK细胞活性明显增强,差异有统计学意义(P<0.05);与100Hz EA组相比,1.5和3.0μgα-Bgt+100Hz EA组均NK细胞活性明显增强,差异有统计学意义(P<0.01)。结论α7nAChR介导了100Hz EA调节免疫功能的作用,这为进一步明确和扩展EA的临床应用提供理论和实践依据。

小鼠肝脏自然杀伤细胞分离纯化及受体表达分析

目的：建立一种有效分离纯化小鼠肝脏自然杀伤细胞（NK细胞）的方法,并对其表面几种NK细胞受体（NKP46、NKG2D、NKG2A/C/E和Ly49A/C/I）的表达进行分析。方法：首先利用Percoll不连续密度梯度离心分离小鼠肝脏淋巴细胞,进一步经CD5（Ly-1）磁珠阳性分选清除CD3^＋DX5^＋T细胞,最后利用CD49b（DX5）磁珠阳性分选肝脏NK（CD3^-DX5^＋）细胞。分离后的细胞经台盼蓝染色检测细胞存活率,流式细胞术检测肝脏NK细胞纯度及几种NK细胞受体的表达百分率。结果：不连续密度梯度离心能有效分离出肝脏淋巴细胞,CD5（Ly-1）磁珠清除CD3^＋DX5^＋T细胞后再用CD49b（DX5）磁珠阳性分选出肝脏NK（CD3^-DX5^＋）细胞,纯度可达到（94.8±1.0）%,存活率为92%～95%。NK细胞受体NKP46、NKG2D、NKG2A/C/E和Ly49A/C/I在小鼠肝脏NK细胞上的表达百分率分别为（97.9±0.7）%、（93.2±1.7）%、（57.2±0.9）%和（63.3±1.9）%。结论：成功建立了一种有效分离纯化小鼠肝脏NK细胞的方法,掌握了正常小鼠肝脏NK细胞上几种重要受体的表达情况,为进一步在病毒性肝炎小鼠模型中进行肝脏NK细胞功能学研究及受体基因芯片分析奠定了基础。

青海高原藏族胃癌患者自然杀伤细胞活化性受体D及其配体MICA表达的研究

目的:研究高原藏族胃癌患者外周血NK细胞表面活化性受体D(NKG2D)的表达及局部肿瘤组织和癌旁正常组织中相应配体MICA的表达,探讨宿主NKG2D在抗胃癌中的作用及其与肿瘤免疫逃逸的关系。方法:对33例高原藏族胃癌患者及20例健康人,采用流式细胞术检测外周血NKG2D的表达状况,RT-PCR和免疫组织化学技术检测在局部肿瘤组织和癌旁正常组织标本中MICA的表达。结果:高原藏族胃癌患者外周血NKG2D的表达为(13.47±5.26)%,明显低于正常组(32.62±10.08)%,2组之间差异显著(P<0.05);藏族胃癌组织MICAmRNA的表达水平显著高于癌旁正常组织(P<0.05)。胃癌组织MICA蛋白表达在癌旁正常组织中为(21.21%,7/33),胃癌组织阳性率为(78.79%,26/33),高分化组(60.00%,3/5),中分化组(72.73%,8/11),低分化组(88.24%,15/17),组间差异显著(P<0.05),而与肿瘤的大小、性别、年龄、淋巴结转移无关(P>0.05)。Spearman相关分析显示,MICA表达水平与mRNA的表达水平显著正相关(r=0.903,P<0.01)。结论:高原藏族胃癌的免疫逃逸可能与NKG2D表达下调及其配体MICA的表达升高有关,高原藏族胃癌患者外周血NK细胞活性降低,其NKG2D表达的下降是NK细胞活性下降的原因之一。NKG2D配体MICA的基因表达可能与高原胃癌患者的恶性转化有一定的相关性。

HLA相合亲缘供受者自然杀伤细胞免疫球蛋白样受体基因的分析

本研究分析HLA相合亲缘关系供受者自然杀伤细胞免疫球蛋白样受体(KIR)基因分布情况并探讨其KIR相合的可能性。采用Luminex流式技术和测序方法检测HLA-A,-B,-Cw和-DRB1位点;利用序列特异性引物PCR法(PCR-SSP)检测KIR基因。结果表明:在HLA-A,-B,-Cw和-DRB1等8个位点相合的27对亲缘关系供受者样本中检出17个KIR基因,其中KIR3DL3、KIR3DP1、KIR2DL4和KIR3DL2基因存在于所有个体;检出20种KIR基因型和12种单倍体,常见基因型为2,2,频率为29.6%;最常见单倍体是2,频率为53.0%,样本以A型单倍体为主,频率为67.2%;12对(44.4%)供者KIR与受者KIR基因型和单倍体完全相同,13对(48.1%)供者KIR与受者KIR存在1个单倍体相同,2对(7.4%)供者KIR与受者KIR基因型和单倍体完全不同;1对供者KIR2DL1与受者HLA-Cw(Lys80)配基完全相合,17对供者KIR2DL2/2DL3与受者HLA-Cw(Asn80)配基完全相合,5对供者KIR3DL1与受者HLA-B(Bw4)配基完全相合。结论:HLA相合亲缘关系供受者KIR匹配的错配率比较高。

自然杀伤细胞受体与功能的研究进展

自然杀伤(natural killer,NK)细胞是由多种亚类组成的淋巴细胞,具有多种不同受体,表现出多种功能,同时具有先天性免疫细胞和后天免疫细胞,特别是杀伤性T细胞的特性,在免疫记忆、自然杀伤、抗病毒和抗肿瘤方面都有重要作用。本文综述了NK细胞的分类、受体和功能的研究进展。

中药抗炎1号注射液对急性湿疹患者自然杀伤细胞、白介素2和可溶性白介素2受体的影响

目的观察中药抗炎1号注射液治疗急性湿疹的临床疗效并探讨对患者自然杀伤细胞(NK)、白介素2(IL-2)和可溶性白介素2受体(sIL-2R)的影响,为临床应用提供依据。方法应用抗炎1号注射液静脉滴注治疗30例急性湿疹,在观察疗效同时对治疗前后患者外周血中NK细胞及IL-2、sIL-2R水平进行检测。结果治疗30例患者中,痊愈6例,显效16例,有效6例,无效2例,总有效率达73.33%。同时比较患者治疗前后血清中NK细胞,有显著性差异(P<0.05),治疗后血清中NK细胞有所提高;而治疗后IL-2水平较治疗前升高,sLI-2R水平较治疗前降低,统计学检验有差异(P<0.05)。结论中药抗炎1号注射液治疗急性湿疹有显著疗效。急性湿疹患者存在细胞免疫功能的紊乱。中药抗炎1号注射液有改善急性湿疹患者细胞免疫功能的作用。

人自然杀伤细胞抑制性受体P58.2基因克隆与鉴定

目的 :P5 8.2基因克隆与鉴定。方法 :采用RT -PCR技术 ,从正常人外周血单个核细胞中扩增自然杀伤细胞抑制性受体P5 8.2基因全长cDNA ,经酶切后构建重组克隆载体 ,双酶切和测序鉴定。结果 :RT -PCR获得了预期的扩增产物P5 8.2全长cDNA ,成功构建了 pSPORT1-P5 8.2重组克隆载体 ,酶切、酶谱分析与预期结果相符。DNA测序结果与GenBank登记的人P5 8.2cDNA全长碱基序列一致。结论 :pSPORT1-P5 8.2重组克隆载体构建成功 ;P5 8.2基因序列与文献报道一致 ,为下一步构建表达载体和基因转染等工作打下良好的基础。

病毒性肝炎中医辨证各型的自然杀伤细胞活性的探讨

本文对５１例乙型病毒性肝炎（乙肝）进行中医辨证分型，采用ＬＤＨ释放法析测其外周血中的自然杀伤细胞（ＮＫ）活性，３４名建康人做为对照。结果是以虚证为主的肝肾阴虚证、脾肾阳虚证和瘀血阻络证ＮＫ细胞活性明显低于对照组，Ｐ＜０．０５～０．０１。以实证为主的热重于湿证、湿热并重证、湿阻脾胃证、湿热中阻证和肝郁脾虚证的ＮＫ细胞活性较正常对照组无明显差异，Ｐ＞０．０５。说明肝炎患者免疫功能低下与病程长短、病位深浅、病情轻重密切相关。提示ＮＫ细胞活性检测，可做为中医辨证虚实的客观指标；肝炎早期如采用中医辨证治疗，可能是防止肝炎慢性化、肝硬化和肝癌的措施之一。

子宫内膜自然杀伤细胞受体研究进展

自然杀伤(natural killer,NK)细胞是一类不需要抗原刺激和抗体参与即能发挥杀伤作用的非T非B类淋巴细胞。子宫内膜和蜕膜中均含有NK细胞,从增生晚期到分泌晚期NK细胞的比例由26.4%上升到83.2%。近年研究表明,母体免疫系统尤其是子宫局部的免疫细胞能否识别并耐受胚胎抗原,直接影响妊娠的建立与维持,而子宫NK细胞参与蜕膜发生及子宫血管的重铸,在正常妊娠中起着十分重要的作用。NK细胞表面表达多种能与主要组织相容性复合物或非主要组织相容性复合物类配体结合的受体,调节自然杀伤细胞的功能、影响妊娠。

自然杀伤细胞受体及抗肿瘤研究进展

自然杀伤(NK)细胞受体研究的进展对NK细胞如何选择性的识别和杀伤肿瘤细胞、病毒感染细胞而避免杀伤正常细胞的认识发生了革命性的变化。NK细胞表面的主要抑制性和活化性受体包括杀伤细胞免疫球蛋白样受体,C型凝集素受体家族,自然细胞毒受体等。临床资料显示,异基因骨髓移植中供受者之间杀伤细胞免疫球蛋白样受体-配体错配引发的异源反应性NK细胞活性可以防止白血病细胞复发。本文主要阐述NK细胞的受体是如何调控NK细胞的杀伤活性及调控NK受体-配体间相互作用提高抗肿瘤效应的方法。

自然杀伤细胞及其受体与结核病研究进展

结核病的发生、发展和转归不仅取决于结核分枝杆菌的数量和毒力,在很大程度上还取决于机体的免疫状态,其中自然杀伤(natural killer,NK)细胞在抗结核感染免疫中发挥重要作用。NK细胞是参与机体固有免疫的重要细胞,可非特异性地识别靶细胞,产生细胞毒作用破坏溶解靶细胞,分泌细胞因子和趋化因子,同时具有免疫调节功能。通过抑制型和激活型两类受体识别靶细胞表面的主要组织相容复合物Ⅰ类抗原(MHC-Ⅰ),是NK细胞鉴别自我与非我、发挥作用的重要方式。研究NK细胞及其受体在结核病中的变化及机制将为结核病的免疫治疗提供新思路。

复发性流产和种植失败妇女外周血自然杀伤细胞亚群的天然细胞毒性受体及a2V-ATPase的表达

自然杀伤（NK）细胞在人类妊娠过程中发挥着重要作用，占外周血淋巴细胞的5%～10%。NK细胞与其他细胞区别的特征性表面标志是CD56^＋。人类NK细胞亚群不是表达CD56^bright、就是表达CD56dim。在外周血中主要是NKT细胞，在蜕膜和胎盘部位主要是CD56^bright细胞。

自然杀伤细胞受体家族NKG2D研究进展

NKG2D是自然杀伤细胞的一种激活性受体 ,与其配体MICA和MICB结合后 ,在多肽DAP 10P的介导下激活自然杀伤细胞 ,导致表达MHC和MICA/B分子的靶细胞被杀伤 ,在肿瘤的免疫监视中发挥重要的作用。UL16结合蛋白 (ULBPs)是NKG2D的另一种新的配体分子 。

病毒性肺炎患儿外周血自然杀伤细胞和T淋巴细胞亚群变化分析

目的探讨了病毒性肺炎患儿急性期和恢复期外周血中自然杀伤细胞(NK细胞)和T淋巴细胞亚群的变化。方法选取2009年5月至2011年6月我院收治的154例病毒性肺炎患儿作为研究对象(为观察组),同时选取102例健康儿童作为对照研究(为对照组),分别采集研究组和对照组外周血,采用流式细胞术对CD16、CD56CD16、CD56 NK细胞和CD3、CD4和CD8 T淋巴细胞亚群变化进行分析;结果与对照组比较,观察组患儿外周血CD16和CD56CD16 NK细胞比例明显下降,CD56 NK细胞明显增加,差异具有显著统计学意义(P<0.05)。与对照组比较,观察组CD3、CD4淋巴细胞亚群及CD4/CD8比值明显下降,CD8明显增加,差异均具有显著统计学意义(P<0.05)。结论病毒性肺炎患儿免疫系统严重紊乱,注重患儿免疫特点的变化,对患儿的临床诊断和治疗具有重要意义。