青海高原藏族胃癌患者自然杀伤细胞活化性受体D及其配体MICA表达的研究

目的:研究高原藏族胃癌患者外周血NK细胞表面活化性受体D(NKG2D)的表达及局部肿瘤组织和癌旁正常组织中相应配体MICA的表达,探讨宿主NKG2D在抗胃癌中的作用及其与肿瘤免疫逃逸的关系。方法:对33例高原藏族胃癌患者及20例健康人,采用流式细胞术检测外周血NKG2D的表达状况,RT-PCR和免疫组织化学技术检测在局部肿瘤组织和癌旁正常组织标本中MICA的表达。结果:高原藏族胃癌患者外周血NKG2D的表达为(13.47±5.26)%,明显低于正常组(32.62±10.08)%,2组之间差异显著(P<0.05);藏族胃癌组织MICAmRNA的表达水平显著高于癌旁正常组织(P<0.05)。胃癌组织MICA蛋白表达在癌旁正常组织中为(21.21%,7/33),胃癌组织阳性率为(78.79%,26/33),高分化组(60.00%,3/5),中分化组(72.73%,8/11),低分化组(88.24%,15/17),组间差异显著(P<0.05),而与肿瘤的大小、性别、年龄、淋巴结转移无关(P>0.05)。Spearman相关分析显示,MICA表达水平与mRNA的表达水平显著正相关(r=0.903,P<0.01)。结论:高原藏族胃癌的免疫逃逸可能与NKG2D表达下调及其配体MICA的表达升高有关,高原藏族胃癌患者外周血NK细胞活性降低,其NKG2D表达的下降是NK细胞活性下降的原因之一。NKG2D配体MICA的基因表达可能与高原胃癌患者的恶性转化有一定的相关性。

NKG2D CAR-NK92细胞构建及其对多发性骨髓瘤细胞的杀伤作用

目的 构建并鉴定靶向自然杀伤细胞2组成员D配体(NKG2DL)的嵌合抗原受体NK92(CAR-NK92)细胞[分泌白细胞介素15受体a与白细胞介素15的复合物(IL-15Ra-IL-15)],并验证NKG2D CAR-NK92细胞对多发性骨髓瘤细胞的杀伤活性。方法 通过筛选NKG2D的胞外段连接4-1BB、 CD3ζ、 IL-15Ra-IL-15序列构建CAR载体,包装慢病毒并转导NK92细胞,获得NKG2D CAR-NK92细胞;CCK-8法检测NKG2D CAR-NK92细胞的增殖能力,ELISA检测其IL-15Ra的分泌,乳酸脱氢酶(LDH)法检测其杀伤效率;流式细胞术检测细胞活化性受体NK细胞受体p30(NKp30)、 NKp44、 NKp46的表达,凋亡细胞群的比例以及CD107α表达、胞内颗粒酶B(granzyme B)和穿孔素(perforin)的释放,以进一步验证NKG2D CAR-NK92细胞对肿瘤的细胞毒性作用机制;通过NKG2D抗体抑制效应细胞、组胺抑制肿瘤细胞后,LDH法检测对细胞杀伤效率的影响;构建NCG(NOD-Prkdcem26Cd52Il2rgem26Cd22/Nju)小鼠多发性骨髓瘤异体移植模型,验证其体内抗肿瘤活性。结果 慢病毒转导后,NK92细胞的NKG2D表达显著增加;与NK92细胞相比,NKG2D CAR-NK92细胞的增殖能力稍弱,早期凋亡细胞群少于其亲本NK92细胞;NKG2D CAR-NK92对多发性骨髓瘤细胞的细胞毒性更强,在其培养上清液中可检测到IL-15Ra的分泌;NKp44蛋白在NKG2D CAR-NK92细胞上的表达量显著增加,活化效应增强;抑制试验显示,CAR-NK92细胞对MHC-Ⅰ类链相关蛋白A(MICA)和MICB阳性的肿瘤细胞的细胞毒性作用更依赖于NKG2D CAR和NKG2DL的相互作用;NKG2D CAR-NK92细胞经肿瘤细胞刺激后,granzyme B和perforin表达增加,且NK细胞显著上调CD107α的表达;在高度免疫缺陷NCG小鼠多发性骨髓瘤异体移植模型中,经NKG2D CAR-NK92细胞治疗的小鼠肿瘤明显缩小,且体质量无明显下降。结论 成功构建一种靶向NKG2DL的CAR-NK92细胞(分泌IL-15Ra-IL-15),其对多发性骨髓细胞的杀伤作用明显。

自然杀伤细胞受体家族NKG2D研究进展

NKG2D是自然杀伤细胞的一种激活性受体 ,与其配体MICA和MICB结合后 ,在多肽DAP 10P的介导下激活自然杀伤细胞 ,导致表达MHC和MICA/B分子的靶细胞被杀伤 ,在肿瘤的免疫监视中发挥重要的作用。UL16结合蛋白 (ULBPs)是NKG2D的另一种新的配体分子 。

主要组织相容性复合体-Ⅰ类分子链相关蛋白A-自然杀伤细胞2族成员D通路及其在头颈部鳞状细胞癌中的研究进展

主要组织相容性复合体-Ⅰ类分子链相关蛋白A(MICA)作为自然杀伤细胞2族成员D(NKG2D)的配体,与其特异性结合,活化以自然杀伤细胞为主的免疫效应细胞,发挥免疫监视作用。本文就近5年来有关MICA-NKG2D通路的表达、调控及其在头颈部鳞状细胞癌中的研究进展作一综述。

自然杀伤细胞活性及其受体和配体的调节在复发性流产中的作用研究进展

自然杀伤(NK)细胞的活性失衡是复发性流产(RSA)发生的关键因素之一,NK细胞的受体、配体以及相关免疫细胞和趋化因子等能够通过活化或抑制NK细胞信号传导通路而调节NK细胞的活性。本文就NK细胞活性及其受体、配体等分子的调节在RSA中的作用研究进展进行综述,旨在为今后对与NK细胞活性相关的RSA的诊断与免疫治疗的研究提供资料。

人类自然杀伤细胞活化性配体ULBPs的表达与调控

人类自然杀伤细胞活化性配体UL16结合蛋白(UL16-binding proteins,ULBPs)家族至少由6个成员组成,其中ULBP1、ULBP2、ULBP3(ULl6-binding protein 1-3)分子含有α1和α2结构域,通过糖基磷脂酰肌醇(giycosylphosphatidylinositol,GPI)与细胞膜相连。ULBP4(UL16-binding protein 4)分子含有跨膜和胞质结构域。正常组织中广泛表达ULBPs。T淋巴细胞瘤、结肠癌、卵巢癌等肿瘤细胞表面也有ULBPs的高表达。化学药物、细胞因子、细菌和病毒感染等众多因素都可以调控ULBPs的表达,其中紫外线辐射、化疗药物等诱发的DNA损伤反应可以活化3-磷脂酰肌醇激酶家族类成员(ataxia-telangiecta- sia mutated,ATM)或(ataxia-telangiectasia and Rad3-related,ATR)激酶,进一步活化下游的Chk1、Chk2节点激酶和其他的凋亡相关分子,从而诱导ULBPs的表达,引起肿瘤细胞的生长周期停滞,诱导细胞凋亡,发挥抗肿瘤作用。另外,ULBP1启动子中CRE1位点活化也是上调ULBP1转录和表达的关键因素。对ULBPs表达与调控因素的深入探讨将为阐明肿瘤逃逸机制、寻求抗肿瘤有效药物提供新的作用靶点和思路。

结肠直肠癌患者围手术期NK细胞活化性受体NKG2D与其配体MICA/B的表达

目的观察结肠直肠癌(CRC)患者手术前后自然杀伤细胞(NK细胞)活化性受体NKG2D与其配体MICA/B的表达,探讨NKG2D-MIC系统与肿瘤逃避免疫监视的关系。方法流式细胞术检测45例CRC患者和35例健康体检者(对照组)外周血NK细胞活化性受体NKG2D的表达,组织MICA/B的表达;ELISA检测血清MICA(sMICA)的浓度。结果 CRC组术前NKG2D、MICA/B的表达均降低,sMICA浓度增高,与对照组比较差异均有统计学意义(P<0.05)。术后NKG2D的表达无显著增高,sMICA浓度无显著降低,与对照组比较差异均无统计学意义(P>0.05)。结论 CRC患者血清高水平的sMICA,抑制了NKG2D-MIC介导的抗肿瘤免疫,导致CRC患者NK细胞抗肿瘤免疫低下。NKG2D低表达,sMICA高浓度的情况术后短期内不能迅速逆转。

苦参碱通过诱导NKG2D配体高表达增强NK细胞对ABCG2high耐药鼻咽癌细胞杀伤活性

目的探讨苦参碱提高ABCG2High[三磷酸腺苷(ATP)结合转运蛋白G超家族成员2]耐药鼻咽癌细胞对Allo-NK细胞杀伤敏感性的机制。方法利用免疫磁珠技术分离ABCG2HighCNE2/DDP细胞及Allo-NK细胞,流式细胞技术检测分离后细胞纯度及经苦参碱处理前后靶细胞NKG2D配体表达率,LDH释放测定法检测经苦参碱处理前后ABCG2HighCNE2/DDP细胞对Allo-NK细胞的杀伤敏感性。结果ABCG2HighCNE2/DDP细胞分离后ABCG2表达率为(91.40±2.32)%,分选后NK细胞CD3-CD16+CD56+细胞的纯度达90%以上,经苦参碱处理之后靶细胞MICA、MICB、ULBP1、ULBP2、ULBP3表达率,由药物处理之前的(2.92±0.33)%、(4.27±0.33)%、(5.80±0.62)%、(11.10±3.15)%、(7.75±1.14)%分别上升到(11.30±0.89)%、(14.29±2.61)%、(12.56±1.06)%、(43.24±4.43)%、(12.77±1.06)%。在效靶比为10:1、20:1,Allo-NK细胞对苦参碱处理前后ABCG2HighCNE2/DDP细胞的杀伤率分别为(15.32±1.34)%、(27.26±6.81)%及(28.53±1.37)%、(42.72±2.80)%。处理前后杀伤率有显著性差异(F=29.05,P=0.000)。结论苦参碱通过诱导肿瘤细胞高表达NKG2D配体(MICA/B、ULBP1-3),使肿瘤细胞对Allo-NK细胞的杀伤敏感性增强。

人鼻咽癌细胞株CNE2对NK细胞KIR/NKG2D受体的免疫编辑作用及其对NK细胞杀伤功能的影响

目的探讨NK细胞与表达NKG2D配体的人鼻咽癌细胞株CNE2混合培养后4、24、48h时KIR、NKG2D的变化及其对NK细胞杀伤CNE2细胞活性的影响。方法PCR-SSP法检测CNE2细胞HLA-A、B、Cw表型、NK细胞KIR表型(选择3例健康者为试验对象),流式细胞仪检测对照组(新鲜分离的NK细胞)KIR2DL1、KIR2DL3、KIR3DL1、NKG2D的表达情况。IL2组(IL2培养的NK细胞)、CNE2组(CNE2、IL2、NK细胞混合培养)培养后4、24、48h时KIR2DL1、KIR2DL3、KIR3DL1、NKG2D的表达情况,LDH释放法测定IL2组及CNE2组培养24h后的NK细胞对CNE2细胞的杀伤活性。结果CNE2细胞表面HLA-A、B、Cw表型为A2,24;B18,35;Cw4,7。3例健康者均表达KIR2DL1、KIR2DL3、KIR3DL1。CNE2组4、24、48h时KIR2DL1、KIR2DL3表达较对照组、IL2组明显升高(P<0.01),NKG2D表达较对照组、IL2组明显降低(P<0.01),KIR3DL1表达与对照组、IL2组相比无明显变化(P>0.05)。IL2组4、24、48h时KIR2DL1、KIR2DL3、KIR3DL1及NKG2D表达与对照组相比无明显变化(P>0.05)。IL2组、CNE2组培养24h后的NK细胞对CNE2细胞的杀伤活性在效靶比10∶1时分别为(26.96±1.47)%和(2.74±1.64)%,两者相比差异有统计学意义(P<0.01);效靶比20∶1时分别为(35.74±3.59)%和(4.57±2.41)%,两者相比差异有统计学意义(P<0.01)。结论NK细胞与NKG2D配体阳性的肿瘤细胞持续性接触,下调NK细胞表面NKG2D表达,上调NK细胞表面与HLAI类分子相结合的KIR表达,导致NK细胞对靶细胞杀伤活性减低。本研究阐明了编辑后的NK细胞杀伤活性减低的分子基础,同时提示阻断HLAI类分子与KIR的结合或者增强NK细胞表面NKG2D的表达将有利于提高NK细胞杀伤肿瘤细胞的活性。

NKG2D配体在耐药鼻咽癌细胞的表达及其对NK细胞杀伤活性的影响

目的探讨NKG2D的主要活化性配体在鼻咽癌亲本细胞CNE2和多药耐药细胞CNE2DDP的表达及其对自然杀伤(NK)细胞杀伤活性的影响。方法流式细胞仪检测NKG2D的主要活化性配体MHC-I类链相关蛋白A和B(MICA、MICB)、UL16结合蛋白1-3(ULBP1、ULBP2、ULBP3)在CNE2、CNE2DDP细胞的表达情况;PCR-SSP法检测CNE2、CNE2DDP细胞HLA-A、B、Cw分型和NK细胞KIR分型;LDH释放法测定5例健康者的NK细胞在不同效靶比时对CNE2、CNE2DDP细胞的杀伤活性;效靶比20∶1时观察不同单抗对NK细胞杀伤CNE2、CNE2DDP细胞活性的阻断作用。结果CNE2、CNE2DDP细胞HLA分型为A2,24,B18,35,Cw4,7;5例健康者的NK细胞表达KIR2DL1,KIR2DL3,KIR3DL1,KIR3DL2与CNE2、CNE2DDP细胞表面的HLA-I类分子之间存在错配。CNE2、CNE2DDP细胞均表达NKG2D的配体MICA、MICB、ULBP2,均不表达ULBP1、ULBP3;CNE2细胞MICA、MICB的表达率与CNE2DDP细胞相比差异有统计学意义(P<0.01)。效靶比5∶1、10∶1、20∶1、30∶1时NK细胞对CNE2、CNE2DDP细胞的杀伤活性分别是(10.50±2.17)%、(4.98±0.95)%;(27.68±1.47)%、(15.48±2.10)%;(36.99±3.13)%、(28.46±4.30)%;(55.00±2.20)%、(40.95±2.21)%。在各效靶比时NK细胞对CNE2细胞的杀伤活性与CNE2DDP细胞相比差异有统计学意义(P<0.01);效靶比20∶1时anti-MICA、anti-MICB、anti-ULBP2单抗可明显抑制NK细胞对CNE2、CNE2DDP细胞的杀伤活性,与阻断前相比差异有统计学意义(P<0.05);anti-ULBP1、anti-ULBP3单抗不能阻断NK细胞对CNE2、CNE2DDP细胞的杀伤活性。结论NKG2D的主要活化性配体MICA、MICB在CNE2、CNE2DDP细胞的表达差异与NK细胞的杀伤活性有关,肿瘤细胞在发生多药耐药的同时获得了免疫逃避能力。

银屑病患者维生素D受体基因多态性与外周血NK细胞、T淋巴细胞亚群分析

目的:探讨银屑病患者的维生素D受体(VDR)基因多态性与外周血自然杀伤(NK)细胞、T淋巴细胞亚群的关系。方法:采用聚合酶链反应(PCR)、限制性内切酶酶切技术(RFLP),以及流式细胞仪对112例无血缘关系的银屑病患者和108名无血缘关系的健康人VDR基因型进行分析,并对其外周血NK、CD3、CD4、CD8细胞进行测定。结果:银屑病患者与健康人的VDR基因型的分布情况有明显不同,纯合子AA﹑杂合子Bb基因型在银屑病患者中出现的频率明显高于健康人。银屑病患者CD4、CD8细胞均显著高于健康人,而Bb基因型患者的NK细胞显著高于健康人,CD3细胞明显低于健康人。结论:纯合子AA基因型或杂合子Bb基因型的出现可能增加汉族人患银屑病的危险性。Bb基因型患者可能存在免疫缺陷。

吉非替尼上调NKG2D配体表达增强A549细胞对NK细胞杀伤的敏感性

目的:研究表皮生长因子受体酪氨酸激酶抑制剂吉非替尼对人肺腺癌A549细胞NKG2D配体表达及NK细胞杀伤活性的影响及其分子机制。方法:MTT法测定吉非替尼对A549细胞增殖抑制率,流式细胞仪检测吉非替尼、EGFR下游分子LY294002(PI3-K抑制剂)、SB203580(MAPK抑制剂)、STAT21(STAT3抑制剂)、Rottlerin(PKC抑制剂)作用A549细胞24小时后A549细胞NKG2D配体的表达。乳酸脱氢酶释放法检测不同效靶比时,NK细胞对吉非替尼作用前、后A549细胞的杀伤活性。结果:吉非替尼上调A549细胞MICB、ULBP1表达,增强A549细胞对NK细胞杀伤的敏感性,EGFR下游分子MAPK、STAT3抑制剂不影响A549细胞NKG2D配体的表达,PI3-K抑制剂下调A549细胞MICA表达,PKC抑制剂上调ULBP1表达。结论:吉非替尼上调NKG2D配体表达增强A549细胞对NK细胞杀伤的敏感性。

自然杀伤细胞活化信号的转导和效应

新近研究发现,NK细胞活化受体与靶细胞表面相应配体交联结合后,可通过以SLP-76和WASP为核心的信号传递复合体及PI3K途径发挥作用。SLP-76活化后,通过募集结合PLC-γ、Itk和Vav,形成SLP-76信号转导复合体;WASP活化后,通过募集结合Grb2、Vav、WIP、Arp2/3和Cdc42-GTP等,形成WASP信号转导复合体。上述2种信号转导复合体经Nck相连后,与浆膜上的LAT作用,进而活化其中的PLC-γ和Arp2/3复合体,最终导致转录因子NFAT活化、细胞因子(GM-CSF、IFN-γ等)分泌和肌动蛋白聚合。PI3K介导Rac/PAK/MEK/ERK途径,导致NK细胞脱颗粒,释放穿孔素和颗粒酶,诱导靶细胞凋亡。

CD4^(+)NKG2D^(+)T细胞在幼年特发性关节炎疾病活动中的作用

目的分析幼年特发性关节炎(juvenile idiopathic arthritis,JIA)活动期及稳定期CD4^(+)NKG2D^(+)T细胞及NKG2D可溶性配体,即可溶性MHC-Ⅰ类链相关分子A和B(soluble MHC classⅠchain-related molecules A/B,sMICA/sMICB)表达水平,探讨其在JIA疾病活动中的作用。方法前瞻性纳入2019年11月—2021年12月重庆医科大学附属儿童医院确诊的全身型JIA 19例和关节型JIA 20例,6例健康儿童为对照组。收集外周血标本,采用酶联免疫吸附法测定sMICA和sMICB水平,采用流式细胞术检测CD4^(+)NKG2D^(+)T细胞比例,采用全身型幼年关节炎疾病活动评分-27(systemic Juvenile Arthritis Disease Activity Score,sJADAS-27)/幼年关节炎疾病活动评分-27(Juvenile Arthritis Disease Activity Score-27,JADAS-27)评估JIA患儿的疾病活动性。采用Pearson相关分析法、受试者工作特征曲线分析CD4^(+)NKG2D^(+)T细胞及sMICA、sMICB在JIA疾病活动中的作用。结果全身型JIA活动期组及关节型JIA活动期组CD4^(+)NKG2D^(+)T细胞比例较对照组及各自稳定期组升高(P<0.05)。JIA各组sMICA和sMICB水平均高于对照组(P<0.05)。关节型JIA活动期组sMICB水平高于关节型JIA稳定期组(P<0.05)。JIA患儿CD4^(+)NKG2D^(+)T细胞比例及sMICA、sMICB水平与sJADAS-27/JADAS-27评分呈正相关(P<0.05)。sMICB对JIA疾病活动性评估的曲线下面积为0.755,特异度为0.90,灵敏度为0.64。结论JIA患儿CD4^(+)NKG2D^(+)T细胞比例及sMICA、sMICB水平较健康儿童升高,且与疾病活动性呈正相关,提示CD4^(+)NKG2D^(+)T细胞及NKG2D配体可作为JIA疾病活动性评估的新指标。

自然杀伤细胞受体的研究进展

自然杀伤细胞(NK细胞)可表达两类功能相悖的识别受体,即活化受体(KAR)和抑制受体(KIR)。KIR能识别自身细胞上的MHCⅠ类分子与自身或外来肽形成的复合物,所产生的抑制信号可阻断KAR的活化,以此抑制NK细胞的细胞毒作用。如果靶细胞失去KIR所识别的配体,NK细胞即可通过KAR对靶细胞进行攻击。本文将介绍此类受体的结构及其识别与信号转导机制的研究进展。

蜕膜自然杀伤细胞受体与自然流产研究进展

人类妊娠的生理过程极其复杂,子宫蜕膜自然杀伤细胞是妊娠早期子宫蜕膜中最主要的淋巴细胞,其功能明显区别于外周血自然杀伤细胞,妊娠期间参与蜕膜发生、子宫血管重铸和母胎免疫平衡的调节.蜕膜自然杀伤细胞表面表达多种抑制性和活化性受体,能与主要组织相容性复合物或非主要组织相容性复合物类配体结合,介导自然杀伤细胞处于抑制或活化状态.自然杀伤细胞的功能缺陷可导致复发性流产等病理性妊娠的发生.

沙利度胺对白血病细胞NKG2D配体表达及NK细胞杀伤敏感性的影响

目的:探究沙利度胺对白血病细胞自然杀伤细胞及活性受体D(natural killer cell group 2 member D,NKG2D)配体表达及自然杀伤细胞(natural killer,NK)杀伤敏感性的影响。方法:取对数生长期白血病细胞株HL-60、K562细胞,以不同浓度沙利度胺作用48h,并设置未经沙利度胺处理的细胞为对照组,采用细胞计数实验(cell counting kit-8,CCK-8)检测沙利度胺对细胞的半抑制浓度(half-inhibitory concentration,IC50),实时荧光定量聚合酶链反应(real-time fluorescence quantitative polymerase chain reaction,RT-PCR)和流式细胞术检测细胞NKG2D配体[MHC-I类链相关分子A(major histocompatibility complex classⅠchain-related protein A,MICA)、MICB]及人巨细胞病毒UL16蛋白的结合蛋白[(UL16-binding proteins,ULBPs:ULBP1、ULBP2、ULBP3)]表达情况,乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)释放法检测沙利度胺对NK-92MI细胞的杀伤效率。结果:沙利度胺干预HL-60、K562细胞,IC50分别为30.06、31.95μg/mL,且随着沙利度胺浓度的升高,抑制作用越明显;与对照组比较,沙利度胺组MICB、ULBP1、ULBP2基因mRNA水平明显升高(P<0.05),但MICA和ULBP3 mRNA水平无明显变化(P>0.05);与对照组比较,沙利度胺组MICB、ULBP1、ULBP2表达明显升高(P<0.05),但MICA和ULBP3表达无明显变化(P>0.05);效靶比分别为1:1、5:1、10:1时,与对照组比较,沙利度胺组NK-92MI对细胞的杀伤效率明显升高(P<0.05)。结论:沙利度胺可能通过提高NKG2D配体MICB、ULBP1、ULBP2表达,提高HL-60、K562细胞对NK-92MI的杀伤敏感性。

非小细胞肺癌患者外周血自然杀伤细胞受体表达及与肿瘤标志物的关系研究

目的分析非小细胞肺癌(NSCLC)患者外周血自然杀伤(NK)细胞受体的表达及与肿瘤标志物的关系。方法收集122例NSCLC患者作为NSCLC组,选取同期46例健康体检者作为对照组,采集两组研究对象空腹外周静脉血,采用流式细胞仪检测外周血NK细胞受体[自然杀伤细胞2族成员D(NKG2D)、自然杀伤细胞活化性受体p30(NKp30)、自然杀伤细胞活化性受体p44(NKp44)、自然杀伤细胞2族成员A(NKG2A)、CD158a、CD158b]表达,采用酶联免疫吸附法检测血清肿瘤标志物[癌胚抗原(CEA)、细胞角质蛋白19片段抗原21-1(CYFRA21-1)、神经元特异性烯醇化酶(NSE)]水平,并采用Pearson相关分析法分析NSCLC患者外周血NK细胞受体表达与肿瘤标志物的关系。结果NSCLC组患者NK细胞活化性受体NKG2D、NKp30、NKp44表达水平均明显低于对照组,抑制性受体NKG2A、CD158a、CD158b表达水平均明显高于对照组,差异均有统计学意义(P﹤0.01)。Ⅲ~Ⅳ期NSCLC患者NK细胞活化性受体NKG2D、NKp30、NKp44表达水平均明显低于Ⅰ~Ⅱ期患者,抑制性受体NKG2A、CD158a、CD158b表达水平均明显高于Ⅰ~Ⅱ期患者,差异均有统计学意义(P﹤0.01)。NSCLC组患者血清肿瘤标志物CEA、CYFRA21-1、NSE水平均明显高于对照组,差异均有统计学意义(P﹤0.01)。Pearson相关性分析显示,NSCLC患者抑制性受体NKG2A表达与CEA水平呈正相关(P﹤0.05)。结论NSCLC患者外周血NK细胞活化性受体表达降低,抑制性受体表达升高,其中活化性受体表达与肿瘤标志物无相关性,抑制性受体NKG2A表达与肿瘤标志物CEA呈正相关。

NKG2D介导NK细胞对鼻咽癌细胞杀伤作用的体外研究

目的探讨鼻咽癌CNE2细胞表面HLA-I类分子表型和NKG2D配体的表达情况,进一步了解其对同种异体NK细胞杀伤活性的影响。方法流式细胞仪检测NKG2D的配体MICA、MICB、ULBP1、ULBP2、ULBP3在K562、CNE2细胞的表达情况。PCR-SSP法分析CNE2细胞HLA-A、B、Cw分型和NK细胞KIR分型。LDH释放法测定5例健康者NK细胞在不同效靶比时对K562、CNE2细胞的杀伤活性,效靶比20∶1时观察抗NKG2D配体的单抗对NK细胞杀伤K562、CNE2细胞活性的影响。结果CNE2细胞表达MICA、MICB、ULBP2,不表达ULBP1、ULBP3。K562细胞表面表达MICA、MICB、ULBP1、ULBP2、ULBP3。5例健康者NK细胞抑制性KIR与CNE2细胞表面的HLA-I类分子之间存在错配。效靶比5∶1、10∶1、20∶1、30∶1时NK细胞对K562、CNE2细胞的杀伤活性分别为(29.02±0.45)%、(10.50±2.17)%;(44.43±1.36)%、(27.68±1.47)%;(57.82±1.35)%、(36.99±3.13)%;(71.24±2.36)%、(55.00±2.20)%,在各效靶比时NK细胞对K562细胞的杀伤活性较CNE2细胞明显增强(P=0.000);在效靶比20∶1时anti-MICA、anti-MICB、anti-ULBP1、anti-ULBP2、anti-ULBP3可明显抑制NK细胞对K562细胞的杀伤活性,与阻断前相比有显著性差异(P=0.000);anti-MICA、anti-MICB、anti-ULBP2可明显抑制NK细胞对CNE2细胞的杀伤活性,与阻断前相比有显著性差异(P<0.01),但anti-ULBP1、anti-ULBP3不能阻断NK细胞对CNE2细胞的杀伤活性。结论NKG2D配体影响NK细胞对靶细胞的杀伤活性,提高NKG2D配体的表达有可能提高NK细胞的抗肿瘤活性。