自然杀伤细胞表面抗原在无症状人免疫缺陷病毒感染者/艾滋病患者中的表达

目的 研究无症状人免疫缺陷病毒 (HIV)感染者和艾滋病患者外周血中自然杀伤(NK)细胞亚群在白细胞分化抗原 (CD) 3 - 淋巴细胞所占百分比的变化状况。方法 用流式细胞技术检测三色荧光抗体标记的 2 3例HIV感染者及 8名健康人外周血中各类NK亚群细胞表面抗原的表达和CD4 + T淋巴细胞绝对计数。结果 无症状HIV感染者和艾滋病患者外周血中的CD5 6 + CD16 +CD3- NK细胞亚群百分比 (均值分别为 2 4 69% ,2 4 90 % )均低于健康人 (均值 3 9 99% ,P <0 0 5) ;无症状HIV感染者CD5 6 - CD16 + CD3 - NK细胞亚群百分比 (均值 12 58% )明显高于健康对照组 (均值 6 51% ,P <0 0 1) ;艾滋病患者外周血中的CD5 6- CD16+ CD3- NK细胞亚群百分比 (均值15 47% )明显高于健康人 (均值 6 51% ,P <0 0 5) ;艾滋病患者的CD5 6 + CD16 - CD3 - NK细胞亚群百分比 (均值 3 50 % )明显低于无症状HIV感染者 (均值 6 75% ,P <0 0 5)。结论 HIV感染使NK细胞不同亚群在外周血中百分比发生变化 。

嵌合抗原受体自然杀伤细胞疗法研究进展及展望

自然杀伤(NK)细胞是先天免疫系统的主要组成部分。基于其对肿瘤细胞的有效杀伤能力和对健康细胞的良好耐受性,NK细胞已成功地用于过继细胞疗法以治疗肿瘤患者。近年来,嵌合抗原受体(CAR)-T细胞的临床成功,证明了基因修饰的免疫细胞在抗肿瘤领域的巨大潜力。NK细胞凭借优越的低免疫原性也迅速成为基于CAR修饰疗法的新型免疫工具细胞。目前已经开展的多项临床试验中,多种来源的CAR-NK细胞均展现出较为优越的治疗效果和安全性,但靶向实体瘤CAR-NK细胞治疗仍处于初始阶段。本文系统梳理了CAR-NK细胞在临床上取得阶段性进展,同时也指出CAR-NK细胞疗法的局限性,旨在为进一步优化和升级CAR-NK细胞疗法提供参考。

荧光素标记检测乙型肝炎病毒表面抗原特异性杀伤性T淋巴细胞方法的探讨

用绿色荧光前体化合物CalceinAM标记靶细胞,经过与杀伤性T淋巴细胞(CTL)效应细胞数小时的孵育,通过分析培养上清中的荧光强度检测CTL效应。通过对一系列标记条件的研究:不同浓度CalceinAM标记靶细胞、不同洗涤缓冲液、不同标记细胞浓度、不同洗涤次数、不同裂解液配方,确定CalceinAM荧光素标记法的最佳条件。用该方法检测乙型肝炎病毒表面抗原的DNA疫苗免疫Balb/c小鼠对P815S细胞的CTL效应,E/T比为10时,杀伤效率接近饱和,达到65%。通过荧光显微镜直接观察杀伤后的P815S细胞,细胞破裂程度与计算出的杀伤效率有一定相关性。

白癜风患者外周血黑素细胞抗原特异性T细胞、调节性T细胞及自然杀伤T细胞水平及意义

目的探讨白癜风患者外周血黑素抗原特异性CD8^+T细胞、调节性T细胞及自然杀伤T细胞的变化及意义。方法采用流式细胞术对初诊123例白癜风患者(观察组)和30例正常人(对照组)外周血中黑素细胞抗原特异性T细胞(CD8^+Melan-A^+/Tyrosinase^+CTL)、调节性T细胞(CD4^+CD125^+CD127^-Tregs)及自然杀伤T细胞(CD3^+TCRα24^+β11^+NKT)进行定量分析并进行比较。结果观察组CD8^+Melan-A^+/Tyrosinase^+CTL水平显著高于对照组(P<0.05);CD4^+CD125^+CD127-Tregs、CD3^+TCRα24^+β11^+NKT水平均低于对照组(均P<0.05。不同分期白癜风患者外周血各种T细胞表达水平比较中,CD8^+Melan-A^+/Tyrosinase^+CTL在各期中均高于对照组(均P<0.05);CD4^+CD125^+CD127^-Tregs、CD3^+TCRα24^+311^+NKT水平仅在进展期中均低于对照组(均P<0.05),稳定期则无统计学差异。3种细胞水平与患者的白斑面积明显相关(r=0.929、-0.982、-0.957,均P<0.01。结论 CD8^+Melan-A^+/Tyrosinase^+CTL、CD4^+CD125^+CD127^-Tregs、CD3^+TCRα24^+β11^+NKT水平的异常导致白癜风患者体内免疫调节功能失衡,与白癜风的发生、发展有密切关系。

可溶性组织相容性抗原-G1抑制人自然杀伤细胞释放穿孔素颗粒酶介导异种排斥反应

目的:研究可溶性组织相容性抗原-G1(sHLA-G1)抑制人自然杀伤细胞(NK细胞)释放穿孔素、颗粒酶,从而降低人NK细胞对猪血管内皮细胞的杀伤作用。方法:利用核转染技术将质粒pcDNA3-sHLA-G1转入LCL721.221细胞株,并提取sHLA-G1。以RT-PCR、斑点酶联免疫吸附(Dot-ELISA)技术分别在基因水平和蛋白水平检测sHLA-G1的表达;以人类NK细胞系(NK92)为效应细胞,猪内皮细胞系PED为靶细胞,用β-己糖氨酶释放实验检测sHLA-G1抑制NK92释放穿孔素、颗粒酶;单四唑(MTT)法检测sHLA-G1抑制NK细胞的杀伤活性。结果:与未加入sHLA-G1的对照组相比,NK92释放的β-己糖氨酶显著减少(P<0.05),且对sHLA-G1组PED的杀伤效率均有明显降低(P<0.01)。结论:sHLA-G1可通过抑制NK92释放穿孔素、颗粒酶以减轻NK92对PED的杀伤作用。

嵌合抗原受体自然杀伤细胞免疫治疗多发性骨髓瘤研究进展

尽管新药的进展使多发性骨髓瘤(MM)患者的生存得到明显改善,但复发难治MM仍缺乏有效治疗方案,且预后差。嵌合抗原受体T细胞(CAR-T)免疫治疗技术虽然在复发难治MM中有不错的疗效,但仍存在局限性,如细胞因子释放综合征、神经毒性等不良反应和脱靶效应等。自然杀伤(NK)细胞作为机体固有免疫的重要成分,在肿瘤免疫监视中发挥重要功能,因此基于NK细胞的嵌合抗原受体自然杀伤细胞(CAR-NK)免疫治疗技术也越来越受到关注。目前CAR-NK免疫治疗MM的研究显示,多个靶点可作为CAR-NK免疫治疗技术特异性治疗靶点,并且在MM细胞及动物实验中也证实其抗肿瘤效应。本文总结了MM肿瘤微环境中NK细胞抗肿瘤机制、生物学特点和功能缺陷情况,以及CAR-NK免疫治疗MM的基础和临床研究进展。

自然杀伤(NK)细胞表面受体表达谱及其功能的研究进展

自然杀伤(NK)细胞抵御感染和肿瘤的能力,越来越受到研究者们的重视。NK细胞无需外界抗原刺激,即可发挥杀伤靶细胞的作用。NK细胞主要通过其表面多种激活和抑制性受体的调节,对抗肿瘤细胞和靶细胞的入侵。此外,NK细胞的两个主要亚型,为其抵御靶细胞提供物质基础:其中,CD56^dimCD16^+NK细胞,主要发挥细胞毒作用;CD56^brightCD16^-NK细胞,具有高分泌细胞因子的作用。NK细胞此种特异性,为其提供更多肿瘤免疫治疗的方向。我们阐述了NK细胞表面受体表达谱、主要识别机制和针对NK细胞的免疫治疗,以期为临床研究提供思路和方向。

人白细胞抗原-G在子宫腺肌症患者子宫内膜腺细胞中通过白细胞介素-10诱导后对自然杀伤细胞的影响

目的:从临床提取子宫腺肌症患者子宫内膜组织与同时提取的相应患者的外周血自然杀伤(natural killer,NK)细胞共培养,加入白细胞介素-10(interleukin-10,IL-10)干预,从而产生人白细胞抗原-G(human leucocyte antigen-G,HLA-G),观察前者对NK细胞的影响。方法:首先从临床先后提取20例子宫腺肌症患者的子宫内膜组织,将组织细胞分离,弃去间质细胞,剩余的腺细胞分为A、B、C3组,同时每一组分为2个部分,即干预组和非干预组,用含有10%胎牛血清和1%的双抗DMEM F12培养基体外培养以上3组细胞。同时干预组加入20 ng/m L的IL-10,非干预组添加等量的培养基。24 h后,A组细胞利用酶联免疫吸附试验(enzymelinkedimmunosorbentassay,ELISA)分别测定干预组与非干预组的HLA-G的表达程度。随后应用免疫磁珠法从人外周血单个核细胞中分选出CD56+单核细胞,即NK细胞,将NK细胞与B组、C组细胞共培养,48 h后,B组用流式细胞仪检测干预组与非干预组的NK细胞凋亡率。C组用单纯计数法计数干预组与非干预组的NK细胞数量。结果:A组中,干预组HLA-G浓度平均为11.2 ng/m L,非干预组HLA-G浓度平均为3.2 ng/m L。B组中,加入IL-10的干预组与非干预组的NK细胞凋亡率分别平均为8.5%与4.2%。C组中,干预组与非干预组的NK细胞计数分别平均为2.5×105个/m L与1.7×105个/m L,48 h后干预组与非干预组的NK细胞计数分别平均为1.5×105个/m L与1.6×105个/m L。结论:IL-10增加了HLA-G表达,同时HLAG的表达对NK细胞的凋亡影响并不明显,但NK细胞数量减少,说明HLA-G对NK细胞有一定的抑制作用。

肺结核患者外周血自然杀伤细胞和T细胞数量和细胞因子水平变化

抗结核免疫低下是结核易感及发展为活动性病变的主要因素。小儿和老人是结核病的好发人群，可能是因为小儿免疫系统不成熟而老人免疫功能渐渐衰退所致。机体对抗外来病原体的入侵首先是依赖先天免疫做出快速而强烈的反应，随后才是具有抗原特异性的获得性免疫反应。在结核病状态下，

β-arrestin2在吗啡抑制自然杀伤细胞活性中的作用

吗啡是目前临床上最常用的阿片类镇痛药物,广泛用于癌痛治疗和肿瘤手术后镇痛.但大量的研究显示吗啡可抑制自然杀伤细胞（natural killer cell,NK）免疫功能从而促进肿瘤的复发与转移[1,2].因此研究吗啡抑制NK细胞免疫功能机制具有重要的临床意义.NK细胞表面可表达多种受体,识别和杀伤靶细胞与其表面受体特性密切相关[3,4].根据所介导的功能不同,将NK细胞受体分为抑制性受体和活化性受体.

有丝分裂原体外活化成人外周血自然杀伤细胞CD69表达的研究

目的 :利用自然杀伤细胞 (NK)的早期活化标记CD69的表达探讨NK细胞体外活化的规律 ,促进这类细胞的临床应用 方法 :用Ficoll-Hypaque梯度离心法分离出正常成人外周血单个核细胞 (PBMC) ,分别在两种不同的有丝分裂原 ,植物血凝素 (PHA ,2 0 μg/mL)和佛波醇酯 (PDB ,10 - 7mol/L)存在的条件下进行培养 ,于 0、2、12、2 4h收获细胞后进行双色免疫荧光标记 ,以流式细胞术对NK细胞的CD69分子表达情况进行分析 结果 :NK细胞在PHA、PDB刺激 2h后CD69的表达明显上升 ,而且随时间的延长CD69的表达率逐渐增加 ,2 4h分别达到 ( 84 .96± 9.2 4 ) %、( 91 85± 2 .94 ) % ;PDB刺激组CD69的表达率在不同的时间点均比PHA组高 结论 :体外条件下 ,PHA、PDB均能快速上调NK细胞CD69表达 ,而且PDB( 10 - 7mol/L)作用明显强于PHA( 2 0 μg/mL)

嵌合抗原受体T细胞免疫疗法在晚期胃癌中的应用进展

胃癌是最常见的恶性肿瘤之一,当前我国胃癌就诊患者仍以进展期为主,晚期患者就诊时多已失去手术治疗的机会,而传统的放疗、化疗和靶向治疗效果并不理想。嵌合抗原受体(CAR)-T细胞(CAR-T)免疫疗法作为一种新的治疗手段,在血液系统恶性肿瘤中疗效显著,也为胃癌的免疫治疗开辟了新途径。然而,由于胃癌的异质性、肿瘤微环境免疫抑制、肿瘤靶抗原逃逸及脱靶毒性等问题,使得CAR-T免疫疗法在胃癌治疗中的应用存在挑战。本文综述了CAR的结构及CAR-T治疗原理、CAR-T治疗晚期胃癌的主要靶点及治疗现状,并探讨了CAR-T治疗胃癌面临的挑战,旨在为晚期胃癌的临床免疫治疗提供新思路。

自然杀伤细胞和T淋巴细胞在银屑病发病中作用的研究

用免疫组化法检侧10例银屑病患者皮损、皮损周围外观正常皮肤和正常对照组自然杀伤细胞(NK细胞)、T细胞表面抗原的表达。结果表明:患者皮损处真皮乳头NK细胞表面抗原CD16、CD56、CD57、CD94、CD158a,T细胞表面抗原CD2、CD3、CD4、CD8和皮肤白细胞相关抗原(CLA)阳性表达的细胞数,较皮损周围外观正常皮肤和正常对照组明显增多(P<0.05或<0.01)。作者认为:T细胞、NK细胞共同参入银屑病的发病,并分析了二者之间相互关系。

自然杀伤细胞活化信号的转导和效应

新近研究发现,NK细胞活化受体与靶细胞表面相应配体交联结合后,可通过以SLP-76和WASP为核心的信号传递复合体及PI3K途径发挥作用。SLP-76活化后,通过募集结合PLC-γ、Itk和Vav,形成SLP-76信号转导复合体;WASP活化后,通过募集结合Grb2、Vav、WIP、Arp2/3和Cdc42-GTP等,形成WASP信号转导复合体。上述2种信号转导复合体经Nck相连后,与浆膜上的LAT作用,进而活化其中的PLC-γ和Arp2/3复合体,最终导致转录因子NFAT活化、细胞因子(GM-CSF、IFN-γ等)分泌和肌动蛋白聚合。PI3K介导Rac/PAK/MEK/ERK途径,导致NK细胞脱颗粒,释放穿孔素和颗粒酶,诱导靶细胞凋亡。

自然杀伤T细胞在病毒感染性疾病中的特征及研究进展

自然杀伤T细胞(natural killer T cells,NKT细胞)属于T淋巴细胞,能特异性识别抗原递呈细胞表面主要组织相容性复合体I类样分子CD1d递呈的糖脂类抗原。活化的NKT细胞能发挥抗病毒感染和抗肿瘤等作用,参与机体重要的免疫反应。本文对NKT细胞抗病毒作用的相关进展进行综述,同时分析NKT细胞参与肝损伤等慢性病毒感染的发病进程。

自然杀伤细胞与体外受精-胚胎移植反复种植失败

外周血和子宫内膜中自然杀伤(NK)细胞是妊娠早期出现最多的淋巴细胞,在着床过程中发挥着重要的作用。NK细胞数量、表面受体及其分泌的细胞因子与体外受精-胚胎移植(IVF-ET)后,胚胎反复种植失败有关。当机体暴露于超生理水平的性激素下,免疫状态对胚胎种植的影响有不同的观点。将最近有关对生殖系统NK细胞研究的新发现、外周血和子宫内膜NK细胞组成及其表面受体的变化对胚胎种植,高性激素水平对生殖免疫的影响,以及针对NK细胞的免疫治疗等做一综述。

重症肺炎患者外周血自然杀伤细胞变化的意义

目的观察重症肺炎患者外周血中自然杀伤细胞的变化,探讨其在评估重症肺炎的病情及预后中的意义。方法采用流式细胞仪检测轻症肺炎40例和重症肺炎56例的外周血自然杀伤细胞占淋巴细胞比例的变化。结果轻、重症肺炎患者的NK细胞绝对数及比值与对照组相比均降低,均有显著性差异(P<0.01),轻、重症肺炎两组相比,有显著性差异(P<0.01);MODS组NK细胞绝对值及比值明显低于非MODS组,有显著性差异(P<0.01);死亡患者的NK细胞绝对值及比值明显低于存活组,两者有显著性差异(P<0.05)。结论检测外周血NK细胞绝对数及其占淋巴细胞的比例对评估重症肺炎的病情和预后有重要的临床意义。

自然杀伤细胞与病毒感染性疾病的研究进展

自然杀伤细胞（natural killer cells。NK细胞）是机体重要的天然免疫细胞．根据NK细胞表面表达CD16和CD56分子水平的差别可将之分为3个亚群：

重症肺炎患者外周血自然杀伤细胞检测的临床意义

目的监测重症肺炎患者外周血中自然杀伤细胞的变化,探讨其在评估重症肺炎患者的病情及预后中的意义。方法采用流式细胞术检测40例轻症肺炎患者和56例重症肺炎患者的外周血NK细胞占淋巴细胞比例的变化。结果重症肺炎组外周血NK细胞比例(6.36±2.71%)明显低于对照组(10.01±4.07%)(P【0.05),发生多功能器官功能障碍综合症(MODS)者的外周血NK细胞比例(4.11±0.85%)低于未发生MODS者(8.05±2.38%)(P【0.05)。结论重症肺炎患者外周血NK细胞占淋巴细胞比例可作为评估其疾病进程及预后的一种参数指标。

乙型肝炎病毒表面抗原对实体肿瘤患者CIK细胞诱导培养及表型分析的影响

目的探讨乙型肝炎病毒表面抗原阳性患者与阴性患者细胞因子诱导的杀伤细胞(cytokine induced killer cells,CIK)体外培养过程中个细胞增殖情况和淋巴细胞亚群的变化。方法选取海军总医院2012年10月-2013年6月住院的肿瘤患者,共50例.根据乙型肝炎病毒表面抗原表达情况分为阴性组和阳性组。分别抽取患者外周血进行CIK细胞诱导培养,在第1、5、7、9、11、13、15天进行细胞活力检测并计数,第5、7、10、13、15天进行各细胞亚群的表达分析。结果两组患者CIK增殖情况单个时间点比较无显著性差异,但是在第15天的增殖倍数阳性组显著高于阴性组(280倍比180倍);细胞亚群分析中CD3^+T细胞、CD8^+T细胞、CD3^+CD8^+T细胞、CD3^+CD56^+T细胞比例均随培养时间延长而升高,CD4^+T细胞、CD3^+CD4^+T细胞随培养时间延长而降低,阳性组更显著;其中CD8~6T细胞和CD3^+CD4^+T细胞在两组间比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论乙型肝炎病毒表面抗原阳性患者CIK细胞较阴性患者扩增能力更强,效应细胞表型表达更有利于杀伤作用的发挥。