外周血CD4^(+)CD25^(+)Treg细胞、TLR4、hCMV-IgM与动脉粥样硬化型急性脑梗死患者颈动脉粥样硬化的关系

目的探讨外周血CD4^(+)CD25^(+)Treg细胞、TLR4、人巨细胞病毒(hCMV)-IgM与动脉粥样硬化型急性脑梗死(As-ACI)患者颈动脉粥样硬化的关系。方法选取89例As-ACI患者(脑梗死组),另选取健康体检者43例(对照组)。根据颈内动脉超声结果将As-ACI患者分为内膜正常组、内膜增厚组、斑块组、狭窄组。比较各组外周血CD4^(+)CD25^(+)Treg细胞水平、单个核细胞TLR4表达水平、hCMV-IgM抗体阳性率和内膜中膜厚度(IMT)。分析As-ACI患者颈动脉狭窄的危险因素,分析CD4^(+)CD25^(+)Treg细胞、TLR4与IMT的相关性及其对颈动脉狭窄的预测价值。结果脑梗死组CD4^(+)CD25^(+)Treg细胞、HDLC水平低于对照组,TLR4表达、hCMV-IgM抗体阳性率、TC、TG、LDLC、hs-CRP水平、IMT高于对照组(P<0.05)。内膜正常组、内膜增厚组、斑块组、狭窄组CD4^(+)CD25^(+)Treg细胞水平依次降低,TLR4表达、hCMV-IgM抗体阳性率、IMT依次增高(P<0.05)。CD4^(+)CD25^(+)Treg细胞水平与IMT呈负相关,TLR4表达与IMT呈正相关(P<0.05)。高血压、CD4^(+)CD25^(+)Treg表达、TLR4表达、hCMV-IgM抗体阳性是As-ACI患者颈动脉狭窄的危险因素(P<0.05)。CD4^(+)CD25^(+)Treg细胞、TLR4表达水平联合检测的预测价值高于单独检测(P<0.05)。结论外周血CD4^(+)CD25^(+)Treg细胞、TLR4、hCMV-IgM抗体阳性率与As-ACI患者颈动脉粥样硬化进展有关,外周血CD4^(+)CD25^(+)Treg细胞、TLR4联合可以较好预测病变过程。

Leptin在系统性红斑狼疮患者中表达及与CD4^+ CD25^+ Foxp3^+ Tregs细胞相关性的研究

目的研究瘦素(Leptin)在系统性红斑狼疮(SLE)患者中表达情况及与疾病活动度、临床和实验室指标及CD4^+CD25^+Foxp3^+Tregs的关系,探讨Leptin对Treg调节作用及对SLE发病的影响。方法选择47例女性SLE患者作为SLE组,另选择年龄、体质量指数与实验组相当的健康体检者25例作为健康组,采用ELISA方法和流式细胞学技术(FACS)测定2组血浆Leptin水平及外周血Tregs百分率,比较SLE组不同疾病活动度患者Leptin水平并分析Leptin与疾病活动评分(SLEDAI)、临床表现、实验室指标及外周血Tregs的相关性。分离SLE患者外周血单个核细胞(PBMC),FACS分析在有/无抗Leptin条件下体外培养40h及80h Tregs百分率。结果 SLE组血浆Leptin水平显著高于健康组(P<0.05);SLE患者中度活动组及重度活动组血浆Leptin水平均高于健康组(P均<0.05),且重度活动组Leptin水平明显高于中度及轻度活动组(P均<0.05);SLE患者血浆Leptin水平与SLEDAI呈正相关(r=0.316 2,P=0.030 4),而与外周血Tregs呈明显负相关(r=0.288 8,P=0.049 0);健康组血浆Leptin水平与外周血Tregs则无明显相关性(r=0.121 9,P=0.561 5)。体外实验中抗Leptin处理后Tregs数量显著增加(P<0.05)。结论 SLE患者血清Leptin水平显著升高,在某种程度上疾病活动程度越高,其血清Leptin水平越高;Leptin可能通过抑制Tregs增殖参与SLE发病。

CD4^(+)CD25^(+)Treg细胞在复发性自然流产中的作用及意义

目的探讨复发性自然流产患者外周血CD4^(+)CD25^(+)Treg细胞表达特点及其相关临床意义。方法选取2015年3月至2017年7月在我院妇产科就诊的复发性自然流产妇女100例作为复发性自然流产组(RSA组),另选择同期在我院妇产科就诊的正常妊娠产妇50例作为对照组(正常妊娠组)。采用流式细胞术检测两组外周血CD4^(+)CD25^(+)Treg细胞表达水平,并对两组结果进行比较分析。结果复发性自然流产组CD4^(+)CD25^(+)Treg细胞表达水平为(5.06±1.35)%,显著低于正常妊娠组的(10.43±2.59)%(P<0.05)。结论复发性自然流产患者外周血CD4^(+)CD25^(+)Treg细胞表达水平较正常孕产妇显著降低,提示CD4^(+)CD25^(+)Treg细胞参与了复发性自然流产的发生、发展过程。通过检测CD4^(+)CD25^(+)Treg细胞表达水平变化可为复发性自然流产的发病机制提供新的思路,为临床诊疗提供更多的治疗方法。

FOXP3^+CD4^+CD25^+Tregs细胞介导机体的肿瘤免疫逃逸研究进展

肿瘤的发生是通过多种途径引起机体免疫系统调节紊乱导致的,因此抗自身抗原的免疫反应保护机理可以使肿瘤细胞免于被自身免疫系统识别。而FOXP3作为CD4^+CD25^+调节T细胞(regulatory T cells,Tregs)表面的特征性标志,可以通过下调免疫活化细胞因子的表达和上调Tregs相关的细胞表面分子的表达赋予CD4^+CD25^+Tregs细胞免疫抑制功能,并有效抑制机体抗肿瘤免疫反应,参与肿瘤免疫逃逸。

补肾活血方联合地屈孕酮对复发性自然流产患者CD4^+CD25^+调节性T细胞及IL-10、TGF-β1表达的影响

目的:探讨补肾活血方联合地屈孕酮治疗复发性自然流产(RSA)的疗效及免疫调节机制。方法:选择肾虚血瘀型RSA妊娠患者62例,随机分为中药组(21例)、西药组(20例)、中西药组(21例)。中药组采用自拟补肾活血方治疗,西药组采用地屈孕酮治疗,中西药组采用两者联合治疗。同时选正常妊娠者20例为正常对照组,不予任何药物治疗。观察各组治疗前后临床疗效、流式细胞仪测定外周血CD4+CD25+调节性T细胞百分率,ELISA法检测血清IL-10、TGF-β1水平。结果:中西药组临床综合疗效优于其余两组,但差异无统计学意义(P>0.05),中药组和西药组疗效比较,差异亦无统计学意义(P>0.05)。治疗组各组治疗后较治疗前外周血CD4+CD25+调节性T细胞百分率、血清IL-10及TGF-β1水平均明显升高(P<0.05)。治疗后与中药组、西药组相比,中西药组外周血CD4+CD25+调节性T细胞百分率、血清IL-10及TGF-β1水平升高(P<0.05),中药组与西药组间比较,则均无统计学意义(P>0.05)。结论:补肾活血方联合地屈孕酮治疗肾虚血瘀型RSA临床疗效确切,从整体上调节免疫耐受状态,使妊娠得以维持。

慢性丙型病毒性肝炎患者CD4^+CD25^+ Treg细胞与自身抗体的相关性研究

目的探讨慢性丙型病毒性肝炎患者CD4^+CD25^+Treg细胞水平与自身抗体之间的关系及其临床意义。方法选取2013年10月至2015年2月该院收治的324例新入院且未经治疗的慢性丙型病毒性肝炎患者,利用间接免疫荧光和免疫印迹方法检测患者自身抗体谱的表达状况,同时使用流式细胞术计数患者外周血CD4^+CD25^+Treg细胞数量。结果 324例慢性丙型病毒性肝炎患者,有136例患者至少有1项自身抗体阳性,另有188例慢性丙型病毒性肝炎患者自身抗体谱表达均为阴性。自身抗体阳性组CD4^+CD25^+Treg细胞百分比明显低于自身抗体阴性组(P<0.05);同时慢性丙型肝炎患者CD4^+CD25^+Treg细胞水平随着自身抗体表达数的增加而降低,呈负相关。结论对HCV感染患者进行CD4^+CD25^+Treg细胞水平监测,能有效预判患者发生免疫耐受的可能性。

花姜酮对小鼠CD4^+CD25^+Treg细胞分化功能的影响及机制

目的:建立小鼠CD4^+CD25^+Treg细胞的体外诱导及培养方法,同时探讨花姜酮(Zerumbone)对Treg细胞的分化、分泌功能的影响及其机制。方法:从BABL/c小鼠的脾脏分离、纯化CD4^+CD62L^+T细胞,加入转化生长因子(transforming growth factor,TGF)-β(5 ng/mL)、白细胞介素(interleukin,IL)-2(30μg/mL)促进CD4^+CD62L^+T细胞向Treg细胞分化。Treg细胞被分为5组:正常组、模型对照组、Zerumbone(1μmol/L)组、Zerumbone(10μmol/L)组、Zerumbone(30μmol/L)组。流式细胞术检测各组Treg细胞的比例,酶联免疫吸附试验(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)方法检测IL-10含量,Foxp3、IL-10 mRNA的表达用实时荧光定量聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测。结果:本实验方法使Treg细胞的诱导比例明显升高(P<0.01)。与模型对照组相比,Zerumbone组的Treg细胞比例呈剂量依赖性升高(P均<0.05)。IL-10蛋白的表达与模型对照组比较也呈剂量依赖性升高(P均<0.05),Foxp3、IL-10 mRNA的表达同样升高(P<0.05),其中Zerumbone(30μmol/L)组升高最明显(P<0.01)。结论:在体外实验中,Zerumbone可以促进BABL/c小鼠体内的CD4^+CD62L^+T细胞向Treg细胞分化,并促进IL-10蛋白的表达,其机制可能与诱导CD4^+CD25^+Treg特异性转录因子Foxp3的表达有关。

CD4^(+)CD25^(+)Foxp3^(+)Treg及CD19^(+)CD69^(+)B细胞在狼疮性肾炎患者外周血中的水平变化及其与疾病活动度的关系

目的研究CD4^(+)CD25^(+)Foxp3^(+)Treg、CD19^(+)CD69^(+)B细胞在狼疮性肾炎中的水平变化与及其与病活动度的关系。方法选取我院于2018年10月至2020年10月收治的108例狼疮性肾炎患者作为研究组,根据系统性红斑狼疮的疾病活动指数(SLEDAI)分为轻度活动度组(38例)、中度活动度组(44例)、重度活动度组(26例),另选取同期于我院行肾穿刺活检证实为微小病变患者为对照组(50例)。检测受试者外周血中CD4^(+)CD25^(+)Foxp3^(+)Treg、CD19^(+)CD69^(+)B细胞水平,分析各组间细胞水平差异,采用ROC曲线分析CD4^(+)CD25^(+)Foxp3^(+)Treg、CD19^(+)CD69^(+)B细胞诊断狼疮性肾炎的价值,采用Pearson相关性分析各细胞与疾病活动度间的相关性。结果研究组患者外周血CD19^(+)CD69^(+)B细胞、TNF-α、CA199水平均显著高于对照组(P<0.05),而CD4^(+)CD25^(+)Foxp3^(+)Treg明显低于对照组(P<0.05)。不同严重程度狼疮性肾炎患者外周血CD4^(+)CD25^(+)Foxp3^(+)Treg、CD19^(+)CD69^(+)B细胞、TNF-α、CA199水平差异有统计学意义(P<0.05),其中重度组患者外周血CD19^(+)CD69^(+)B细胞、TNF-α、CA199水平最高。Pearson相关性分析显示,CD4^(+)CD25^(+)Foxp3^(+)Treg、CD19^(+)CD69^(+)B细胞分别与SLEDAI评分呈现负、正相关性,相关系数r分别为-0.458、0.468。采用ROC曲线分析显示,CD19^(+)CD69^(+)B细胞、CD4^(+)CD25^(+)Foxp3^(+)Treg诊断狼疮性肾炎的曲线下面积分别为0.801(95%CI=0.722~0.880)、0.839(95%CI=0.775~0.903)。两者联合诊断的曲线下面积为0.885(95%CI=0.826~0.944),高于单独检测(P<0.05)。结论CD4^(+)CD25^(+)Foxp3^(+)Treg、CD19^(+)CD69^(+)B细胞在狼疮性肾炎患者外周血中处于异常水平状态,且水平与疾病活动度相关,两者联合检测可作为诊断狼疮性肾炎的新指标。

CD4^+CD25^+Treg在急性淋巴细胞白血病患者外周血中的表达及其体外实验研究

目的初步探讨CD4+CD25+调节性T细胞(CD4+CD25+ regulatory T cells,CD4+CD25+Treg)在急性淋巴细胞白血病(acute lymphocytic leukemia,ALL)患者化疗前及化疗缓解后外周血中的表达水平,并研究患者血清能否诱导外周血CD4+CD25-T细胞转化为CD4+CD25+Treg。方法①采用流式细胞术分别检测ALL初诊组、化疗完全缓解或部分缓解组及正常对照组外周血中CD4+CD25+T细胞所占比例,然后通过荧光定量RT-PCR检测各组外周血中转录因子Foxp3mRNA的表达水平,并逐层分析比较。②采集正常人外周血单个核细胞后,对照组用正常人血清,实验组用患者血清并分别设浓度梯度进行培养,72h后采用流式细胞术、荧光定量RT-PCR分别检测CD4+CD25+T细胞和Foxp3mRNA表达。结果ALL化疗缓解组CD4+CD25+T细胞及Foxp3mRNA表达水平均明显高于ALL初诊组和正常对照组(P<0.05),后两者之间CD4+CD25+T细胞水平无统计学差异(P>0.05),但ALL初诊组Foxp3mRNA含量较正常对照组明显升高(P<0.01),差异具有统计学意义;并且血清培养对照组CD4+CD25+T细胞水平及Foxp3mRNA含量均明显低于实验组(P<0.05),且其表达并不随血清浓度的增加而升高。结论CD4+CD25+Foxp3+Treg在ALL初诊组及化疗缓解组患者外周血中比例明显升高,且初步表明患者血清中的可溶性物质可诱导外周血CD4+CD25+T细胞转化为CD4+CD25+Treg,提示CD4+CD25+Treg可能是ALL免疫抑制的一个重要原因。

五味温通除痹胶囊联合中药熏蒸对AS患者外周血CD4^+CD25^+CD127^(low/-)Treg表达的影响

目的:观察五味温通除痹胶囊联合中药熏蒸对督寒型强直性脊柱炎(AS)患者的临床疗效及对外周血CD4^+CD25^+CD127^(low/-)Treg表达的影响。方法:将78例督寒型AS患者按随机数字表法分为治疗组和对照组,治疗组给予五味温通除痹胶囊口服并联合中药熏蒸治疗;对照组给予柳氮磺胺吡啶口服,2组疗程均为8周。对2组中医证候评分、总体疗效评价、中医证候疗效评价及CD4^+CD25^+Treg等实验室指标进行观察。结果:治疗组第4、8周有效率明显高于对照组,中医证候显效率及总有效率高于对照组;与对照组比较,治疗组患者治疗后中医证候积分、总体以及腰背痛VAS评分、BASDAI、BASFI功能评分、ASDAS评分均显著降低。结论:五味温通除痹胶囊联合中药熏蒸能显著上调督寒型AS外周血CD4^+CD25^+CD127^(low/-)Treg表达,有效改善AS患者临床症状。

儿童AITP治疗前后CD_4^+CD_(25)^(High)Foxp3^+Treg细胞与Foxp3基因表达的变化

目的探讨CD4+CD25HighFoxp3+Treg细胞在儿童急性特发性血小板减少性紫癜(AITP)发病中的作用及对丙种球蛋白、激素治疗的效应关系。方法流式细胞仪检测AITP患儿治疗前后CD4+CD25HighFoxp3+Treg细胞比例变化,RT-PCR法检测外周血单个核细胞中Foxp3 mRNA的表达。结果单用激素或联用激素和丙种球蛋白治疗后AITP患儿CD4+CD25HighFoxp3+Treg细胞比例和Foxp3基因表达水平较治疗前和正常对照组明显增高(P<0.01),其中联用丙种球蛋白和激素组的增高水平更为明显(P<0.01)。结论CD4+CD25HighFoxp3+Treg细胞比例下降及Foxp3基因表达降低是AITP的发病机制之一,丙种球蛋白和激素可以通过诱导其扩增及活化发挥治疗AITP的作用。

外周血CD4^+CD25^+ Treg细胞与HBV携带者相关性的Meta分析

目的:探讨CD4+CD25+Treg细胞在乙型肝炎病毒(hepatitis B virus,HBV)携带者及相关感染状态中分布特征,以期揭示其与HBV携带者的相关性,为临床干预提供依据.方法:计算机检索Pubmed、SCI、Embase、CNKI、万方及维普等数据库,依据NewcastleOttawa Scale(NOS)标准评价文献质量,按照PICOS原则提取资料,采用RevMan5.1软件进行Meta分析.结果:纳入文献24篇.HBV携带者外周血Treg细胞含量较健康对照高(P=0.01);与HBV携带者比较,慢性乙型肝炎Treg细胞含量较高(P=0.12),急性乙型肝炎较低(P=0.15);慢性HBV携带者Treg细胞高于非活动性HBsAg携带者(P=0.01).Treg细胞含量与HBV DNA、丙氨酸转氨酶是否存在相关性,因研究一致性差,结论尚不能确定.结论:CD4+CD25+Treg细胞可能成为影响HBV携带者预后及转归的重要因素.

应用CD4^+CD25^+Treg细胞诱导大鼠肾移植免疫耐受的研究

目的应用供体抗原特异性CD4+CD25+Treg细胞诱导移植免疫耐受,抑制大鼠肾移植慢性排斥反应。方法以SD、Wister大鼠分别为供、受体建立同种异体肾移植慢性排斥反应动物模型;受体脾细胞悬液同供体肾组织抗原孵育培养,诱导获得对供体抗原的特异性;采用MACS法分选具有供体抗原特异性的CD4+ CD25+T细胞,FACS流式细胞法检测分选的CD4+CD25+T细胞及CD4+CD25+Treg细胞纯度;获得之供体抗原特异性CD4+CD25+Treg细胞于同种异体肾移植术后2、4、6、8、10周,分别经尾静脉注射入受者体内(实验组,n=12),选取未注射组为对照(n=12)。观察两组移植肾脏存活时间;术后第10、40、80天MTT法检测比较两组受体脾细胞对供体抗原刺激反应程度;术后第10、20、40、60、80天分别监测各组血肌酐水平。结果FACS流式细胞法检测分选的CD4+CD25+T细胞得率为4.13%,分离纯度为73.34%;CD4+CD25+Treg细胞纯度为65.22%。所分选之CD4+CD25+Treg细胞成功获得供体抗原特异性,对供体抗原的抑制率(IR)为85.4%。移植肾存活时间:治疗组移植肾存活时间为(98.83±6.66)d,显著长于对照组的(78.25±4.71)d,组间差异有统计学意义(P<0.05);术后第40、80天治疗组脾细胞对供体抗原刺激反应程度均明显低于对照组,两组间差异有统计学意义(P<0.05)。术后第20、40、60、80天对照组血肌酐指标明显高于治疗组,同治疗组间差异有统计学意义(P<0.05)。结论供体抗原特异性CD4+CD25+Treg细胞可特异性抑制受体对供体抗原的免疫反应,有效抑制了移植肾慢性排斥反应的发生。

活动期溃疡性结肠炎患者外周血CD4^+ CD25^+ Treg细胞与肠道炎性反应的相关性研究

溃疡性结肠炎（UC）是一种病因尚不完全清楚的慢性肠道炎性疾病。目前研究认为,肠道黏膜免疫系统紊乱在UC发病机制中起着至关重要的作用。导致免疫系统紊乱的原因主要是效应T细胞数量增多或免疫调节功能降低。机体内存在数种免疫调节系统,其中CD4^＋CD25^＋调节性T细胞（Treg cell）是发挥免疫调节功能的主要效应细胞。

加味三甲散对被动皮肤致敏型大鼠外周血单核细胞CD4^+CD25^+Treg mRNA表达的影响

目的:观察加味三甲散对被动皮肤致敏型大鼠外周血单核细胞CD4+CD25+Treg mRNA表达的影响。方法:60只成年SD大鼠随机分为正常对照组,模型对照组,氯雷他定组和加味三甲散高、中、低剂量组,后5组均制作被动皮肤致敏模型。造模后氯雷他定组按10 mL/kg剂量灌胃给予氯雷他定水溶液,加味三甲散高、中、低剂量组分别按38.0、19.0、9.5 g/kg剂量灌胃给予加味三甲散提取浓缩液,正常对照组和模型对照组灌胃给予等体积纯净水。每天1次,连续3周。实验结束时,收集各组大鼠血液,采用实时荧光定量PCR技术检测CD4+CD25+Treg mRNA的表达。结果:6组大鼠外周血单核细胞CD4+CD25+Treg mRNA的表达水平差异有统计学意义(F=92.170,P<0.001);与正常对照组比较,模型对照组大鼠外周血单核细胞CD4+CD25+Treg mRNA的表达降低;与模型对照组比较,加味三甲散高、中、低剂量组大鼠外周血单核细胞CD4+CD25+Treg mRNA的表达升高(P均<0.05)。结论:加味三甲散可上调被动皮肤致敏型大鼠外周血单核细胞异常下降的CD4+CD25+Treg mRNA的表达水平,对慢性荨麻疹患者外周血单核细胞中CD4+CD25+Treg细胞功能的缺陷可能具有一定的干预作用。

乙肝肝硬化患者外周血25-(OH)D3、Th17细胞、CD4^+Treg细胞的变化及意义

目的检测乙肝肝硬化患者外周血中25-(OH)D3、Th17、CD4^+Treg细胞变化,为维生素D治疗乙肝肝硬化提供依据。方法选取乙肝肝硬化患者21例,正常对照者15例,采用电化学发光免疫测定法检测25-(OH)D3水平,采用流式细胞仪检测Th17细胞、CD4^+Treg细胞水平,并计算Th17/Treg比率。结果健康对照组外周血25-(OH)D3为(31.87±5.97)ng/ml,乙肝肝硬化组25-(OH)D3明显降低,为(11.89±6.04)ng/ml,两者相比差异具有统计学意义(t=9.510,P=0.001)。与健康对照组相比,乙肝肝硬化组外周血Th17细胞百分比(0.913%±0.216%vs 2.498%±2.583%)增高,CD4^+Treg细胞百分比降低(3.964%±1.116%vs 2.333%±1.714%),Th17/Treg比率(1.199±0.973 vs 0.256±0.138)增高,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论乙肝肝硬化患者外周血25-(OH)D3水平显著降低,Th17增高,CD4^+Treg降低,存在CD4^+Treg、Th17、Treg/Th17免疫平衡紊乱,增加外周血25-(OH)D3水平有可能调节乙肝肝硬化患者体内CD4^+Treg、Th17、Treg/Th17变化,改变其免疫状态。

溃疡性结肠炎患者外周血CD4^+CD25^+Treg细胞的表达及其意义

探讨CD4+CD25+Treg细胞在溃疡性结肠炎(UC)发病中的作用及其与疾病活动性的关系。采用三色流式细胞术检测52例UC患者,30例其它肠病患者和30名对照者。UC患者中活动期的30例,稳定期的22例,使用和未使用激素和/或免疫抑制剂活动期UC患者分别为18例和12例。对以上各组外周血中CD4+CD25+Treg细胞亚群的百分率进行测定。结果显示,活动期UC患者外周血CD4+CD25+Treg细胞比例明显低于其他肠病和对照组(P<0.001);疾病活动期UC患者外周血CD4+CD25+Treg细胞比例明显低于疾病稳定期患者(P<0.001);活动期UC患者中使用激素和/或免疫抑制剂与未使用激素和/或免疫抑制剂结果差异有统计学意义;UC患者外周血CD4+CD25+Treg细胞表达率与疾病活动指数评分呈负相关性,提示UC患者外周血CD4+CD25+Treg细胞异常表达,可能参与疾病的发生发展,与疾病的活动性密切相关。

中药有效成分对荷视网膜母细胞瘤小鼠CD4^+CD25^+Foxp3^+Treg表达及血清细胞因子水平的影响

目的:观察黄芪、党参及其组方对荷视网膜母细胞瘤小鼠CD4+CD25+Foxp3+调节性T细胞(CD4+CD25+Foxp3+Treg)表达及血清细胞因子水平的影响。方法:复制C57BL/6小鼠Lewis荷视网膜母细胞瘤动物模型,动态观察黄芪、党参及其组方对抑瘤率、荷瘤转移抑制率、荷瘤小鼠体质量的影响。接种5、10、15、20d后用流式细胞仪检测荷视网膜母细胞瘤小鼠脾CD4+CD25+Foxp3+Treg的表达,20d采集小鼠血清,用流式微球阵列技术检测细胞因子IL-2、IL-6、IL-10、IL-12p70、IFN-γ水平。结果:20d黄芪组和黄芪+党参组小鼠体质量高于对照组(P<0.05),20d黄芪组和黄芪+党参组小鼠瘤重低于对照组(P<0.05),15d黄芪+党参组小鼠瘤重低于对照组(P<0.05);在抑瘤率方面黄芪组和黄芪+党参组明显高于党参组(P<0.01);黄芪+党参组肿瘤转移抑制率为46.61%;对照组小鼠CD4+CD25+Foxp3+Treg表达随荷瘤天数的增加呈上升趋势,而3个中药组则呈下调趋势;3个中药组与对照组比较均能明显下调IL-10水平(P<0.05)并上调IL-2和IFN-γ的水平(P<0.05)。结论:益气活血中药组方黄芪+党参可通过调控荷瘤小鼠CD4+CD25+Foxp3+Treg的表达显著改善其体内存在的免疫耐受状态,其作用效果明显优于单味中药。

心脏移植大鼠自发免疫耐受模型中CD4^+CD25^+Treg与FOXP3的变化

目的行Wistar(供体)到SD(受体)大鼠的腹部异位心脏移植建立自发免疫耐受模型,探讨CD4+CD25+Treg与FOXP3在同种异体心脏移植大鼠自发免疫耐受形成过程中的作用。方法以光镜、电镜观测移植心肌的病变特点、以流式细胞术检测外周血CD4+CD25+T淋巴细胞数量变化、RT-PCR检测其功能基因FOXP3的表达情况。结果CD4+CD25+T淋巴细胞在对照组中无明显变化,在心脏移植组(实验组)中CD4+CD25+T淋巴细胞术后第1天开始上升,第3天[(6.07±1.55)]达峰值,第5天[(5.44±1.47)]、第7天[(3.35±0.46)]逐渐下降,术后第3,5天明显高于对照组(P<0.05);FOXP3在对照组中无明显表达,在实验组中术后第3、5天表达明显,第7天表达下降。移植心脏的心肌病理改变在第1,3天逐渐加重,第5天时病变最重,第7天减轻,第7天移植心脏排斥反应减轻提示移植心脏产生免疫耐受。结论心脏移植大鼠自发免疫耐受模型中CD4+CD25+T与FOXP3均上调。且基本与移植心脏排斥反应呈负相关,提示CD4+CD25+T细胞的数量与功能变化可能参与自发免疫耐受的形成。

肿瘤细胞对CD4^+CD25^+Treg细胞数量和功能的影响

目的:探讨肿瘤细胞与免疫细胞相互作用对CD4+CD25+Treg细胞数量和功能的影响。方法:建立Lewis肺癌细胞与小鼠脾淋巴细胞共培养体系。Lewis肺癌细胞与不同浓度小鼠脾淋巴细胞共培养,分为4组:实验组Ⅰ(5×105个Lewis肺癌细胞与1×106个淋巴细胞共培养)、对照组Ⅰ(1×106个淋巴细胞单独培养)、实验组Ⅱ(5×105个Lewis肺癌细胞与2×106个淋巴细胞共培养)、对照组Ⅱ(2×106个淋巴细胞单独培养);Lewis肺癌细胞与淋巴细胞共培养不同时间,采用3个时间点:24、48和72h;Lewis肺癌细胞培养上清与淋巴细胞共培养,选择培养上清浓度为20%和50%。采用流式细胞术检测了Lewis肺癌细胞与脾淋巴细胞共培养系统中CD4+CD25+Treg细胞数量变化,通过RT-PCR方法检测了共培养对Foxp3 mRNA表达的影响。结果:与对照组比较,实验组Ⅰ中CD4+CD25+Treg细胞数量和Foxp3 mRNA表达明显增强(P<0.05),实验组Ⅱ中CD4+CD25+Treg细胞数量和Foxp3 mRNA表达无明显变化(P>0.05);Lewis肺癌细胞与淋巴细胞培养24及48h可见CD4+CD25+Treg细胞数量及Foxp3 mRNA表达明显升高(P<0.05),而72h后变化不明显;20%和50%Lewis肺癌细胞培养上清均可明显提高CD4+CD25+Treg数量及Foxp3 mRNA表达(P<0.05)。结论:肿瘤细胞及其培养上清可诱导CD4+CD25+Treg细胞数量增加、功能增强,由肿瘤细胞所引起的CD4+CD25+Treg细胞产生及功能增强可能是肿瘤逃避免疫监视机制之一。