采用自聚肽承载的脂肪源性干细胞移植法对急性心肌梗死大鼠进行治疗的效果

目的:探讨采用自聚肽承载的脂肪源性干细胞移植法对急性心肌梗死大鼠进行治疗的临床效果。方法:将40只清洁级健康雄性大鼠作为研究对象,对这些大鼠进行急性心肌梗死建模。完成建模后,将这些大鼠随机平均分为干细胞移植组(n=20)和自聚肽干细胞移植组(n=20)。对干细胞移植组大鼠采用常规的脂肪源性干细胞移植法进行治疗。对自聚肽干细胞移植组大鼠采用自聚肽承载的脂肪源性干细胞移植法进行治疗。然后,比较治疗2周后两组大鼠左心室的射血分数(EF)、缩短分数(FS)。结果:治疗2周后,自聚肽干细胞移植组大鼠左心室的EF高于干细胞移植组大鼠左心室的EF,P<0.05;自聚肽干细胞移植组大鼠左心室的FS高于干细胞移植组大鼠左心室的FS,P<0.05。结论:采用自聚肽承载的脂肪源性干细胞移植法对急性心肌梗死大鼠进行治疗的效果较好,可有效地修复其梗死的心肌。

自聚肽纳米纤维支架承载骨髓源性心肌干细胞移植治疗心肌梗死的实验研究

目的探讨自聚肽纳米纤维支架承载骨髓源性心肌干细胞(MCSC)移植对大鼠心肌梗死后心功能恢复的影响,寻找一种更适合承载心肌干细胞治疗心肌梗死的可注射性生物材料。方法通过单细胞克隆培养技术,从骨髓间充质干细胞中筛选具有心肌特异分化潜能的MCSC,固相合成自聚多肽。将雌性大鼠心肌梗死模型随机分为3组:对照组、MCSC移植组、支架承载MCSC移植组。细胞移植后4周,用M型超声心动图检测心功能恢复情况;对心脏组织切片进行Masson染色,利用图像分析检测胶原纤维比率;用原位荧光杂交法标记心肌组织中Y染色体细胞,并检测其心肌肌钙蛋白T(cTnT)的表达。结果支架承载MCSC移植组与MCSC移植组相比,大鼠的心功能指数明显提高,胶原纤维比率明显减小,Y染色体阳性细胞数明显增多,差异均具有统计学意义。结论支架承载MCSC移植治疗心肌梗死,有利于移植细胞在受损心肌内的存活和向功能性心肌分化,并促进心功能恢复,其疗效优于单纯干细胞移植。

静电纺丝聚乳酸/聚己内酯共混纤维支架与兔脂肪源干细胞的体外生物相容性研究

目的利用兔脂肪源干细胞评价静电纺丝聚乳酸/聚己内酯共混纤维支架的生物相容性。方法脂肪源干细胞取自新西兰白兔皮下脂肪组织,经分离、培养后接种到待检支架上,使用倒置相差显微镜和扫描电镜观察细胞在支架上的生长形态;MTT法比较支架上培养和常规培养条件下的脂肪源干细胞生长曲线与倍增时间。结果脂肪源干细胞在纤维支架上生长良好,生长曲线与常规培养时基本一致,两组间细胞倍增时间差异无统计学意义(P>0.05)。结论脂肪源干细胞能够在静电纺丝聚乳酸/聚己内酯共混纤维支架材料上正常生长增殖,该支架材料生物相容性好。

自聚肽纳米纤维支架对骨髓源性心肌干细胞的作用研究

目的研究白聚肽纳米纤维支架对骨髓源性心肌干细胞（MCSCs）生长和存活的作用。方法设计和同相合成自聚肽，扫描电镜和原子力显微镜下观察其白组装后的形态结构和与MCSCs的相互关系；通过CCK-8法和免疫荧光染色检测纳米纤维支架对MCSCs增殖和分化情况。结果1％多肽溶液自组装成直径约10nm，长度为100～300nm纳米纤维，并相互交织成孔径为50～200nm的网状结构；MCSCs在纤维支架中培养1d后，可见细胞呈长梭形，位于三维纳米纤维支架的网孔中，生长状态良好；生长曲线显示细胞在纤维支架中的增殖能力明显高于对照组；MCSCs在纤维支架中诱导培养4周时，形态和排列方式均发生明显改变。结论纤维支架与MCSCs有良好生物相容性，纤维支架有利于MCSCs的生长和定向分化。

地黄低聚糖对人脂肪组织源性间充质干细胞分泌血管内皮细胞生长因子的影响

目的探讨地黄低聚糖(RGO)对分离、培养的人脂肪组织源性间充质干细胞(ADMSCs)分泌血管内皮细胞生长因子(VEGF)的影响。方法人脂肪组织用2.5 g/L胶原蛋白酶Ⅰ消化、分离ADMSCs。取沉淀的细胞进行培养,用免疫细胞化学染色法鉴定其表面CD44、CD105、CD45和CD34分子的表达。以IMDM培养基作为空白对照,加入RGO配成不同浓度(0、1、10、100及400 mg/L)的IMDM分别培养ADMSCs,用MTT比色法检测ADMSCs的增殖。培养72 h后,用ELISA法测定不同培养基中VEGF的含量。结果免疫细胞化学染色显示,分离培养的细胞表面CD44+、CD105+、CD34-、CD45-。MTT比色法的结果显示,与空白对照组相比,1和10 mg/L组无明显差别,100及400 mg/L组明显升高(均P<0.01),且100 mg/L组明显高于400 mg/L组(P<0.05)。0、1、10、100、400 mg/L5个组VEGF的含量,分别为(627.88±33.86)、(655.50±40.29)、(666.50±43.20)、(843.50±53.05)和(722.88±51.34)ng/L。结论RGO对ADMSCs的增殖有促进作用,且呈一定的浓度依赖性,并导致其分泌VEGF的作用增强。

基于脂肪源性干细胞的alphastatin肽胶质瘤靶向载体的构建及其对血管生成的抑制作用

目的 构建基于脂肪源性干细胞的alphastatin肽胶质瘤靶向载体并检测其体外抗血管生成作用。方法 构建alphastatin肽慢病毒表达载体并转染脂肪源性干细胞(adipose derived stem cell, ADSCs),构建基于ADSCs的alphastatin肽胶质瘤靶向载体,流式细胞仪检测alphastatin肽胶质瘤靶向载体干细胞表面标志物表达情况,Western blotting及ELISA法分别检测alphastatin肽胶质瘤靶向载体中及细胞培养上清液中alphastatin肽表达情况;细胞迁移实验检测alphastatin肽胶质瘤靶向载体对CD133+胶质瘤干细胞趋向性;体外管腔形成实验检测alphastatin肽胶质瘤靶向载体在体外对内皮细胞血管生成的影响。结果 经转染后alphastatin肽胶质瘤靶向载体表达干细胞表面标志物与普通脂肪源性干细胞相比无明显变化;Western blotting结果显示,alphastatin肽胶质瘤靶向载体能够成功表达alphastatin肽;ELISA结果显示,在alphastatin肽胶质瘤靶向载体培养上清液中可检出alphastatin肽分泌[FLAG质量浓度(54.65±5.63)mg/L];细胞迁移实验显示,alphastatin肽胶质瘤靶向载体与普通脂肪源性干细胞对CD133+胶质瘤干细胞趋向性差异无统计学意义[迁移细胞数(106.67±2.41)个/HPF vs.(109.47±2.55)个/HPF,P>0.05];管腔形成实验显示,alphastatin肽胶质瘤靶向载体在体外能抑制内皮细胞介导的血管生成[管腔计数(7.27±0.31)个/HPF vs.(19.40±1.71)个/HPF,P<0.01]。结论 在构建基于ADSCs的alphastatin肽胶质瘤靶向载体过程中,靶向载体干细胞生物学特性及肿瘤趋向性无明显改变,且能够稳定表达并分泌alphastatin肽并在体外对内皮细胞介导的血管生成具有抑制作用。

地黄低聚糖对脂肪间充质干细胞增殖的影响

目的分离培养人脂肪源性间充质干细胞(human adipose tissue-derived mesenchymal stromal cells,hADMSCs),探讨地黄低聚糖对其体外增殖的影响。方法腹部外科手术患者术后废弃的脂肪组织用胶原蛋白酶Ⅰ消化后培养,免疫组织化学方法鉴定其表面分子CD44、CD105、CD45、CD34的表达,鉴定细胞为hADMSCs后,应用不同浓度的地黄低聚糖IMDM(1、10、100、400mg·L-1)体外培养hADMSCs,应用MTT比色法检测RGOs对ADMSCs增殖能力的影响。结果1、10mg·L-1组与对照组相比无显著性差别,100、400mg·L-1组的地黄低聚糖培养基对hADMSCs的增殖有明显的促进作用,且100mg·L-1RGOs的促hADMSCs增殖作用最强(P<0.01)。结论一定浓度的地黄低聚糖对hADMSCs的增殖能力具有促进作用。