利用自裂解肽T2A共表达猴B病毒糖蛋白gB和gD

目的:探讨自裂解肽T2A对猴B病毒g D和g B蛋白共表达的可行性。方法:利用一点褐翅蛾病毒(Ta V)的2A元件(T2A)连接猴B病毒膜蛋白g D和g B基因,构建多顺反子表达质粒,制备CHO-S工程细胞,采用Western印迹和ELISA检测蛋白表达及重组蛋白的免疫学特性。结果:g D和g B蛋白实现了共表达且保持了独立和完整的分子结构,但g B的表达水平明显低于g D;ELISA结果显示,单独表达的g D和g B以及共表达产物都能与B病毒阳性血清反应,但共表达产物的反应强度高于单独表达的g D和g B;重组蛋白经变性处理后,g B蛋白的吸光度值降幅最大。结论:自裂解肽T2A能够实现不同分子共表达且保持独立和完整的分子结构;共表达猴B病毒g D和g B分子有利于提高抗体检测的敏感性。

利用自裂解多肽T2A在牛耳皮肤成纤维细胞中实现多基因共同表达

目的:探讨利用自裂解多肽2A构建的多顺反子载体能否在牛耳皮肤成纤维细胞中实现多基因的有效表达。方法:利用来自一点褐翅蛾病毒(TaV)的2A元件(T2A)将GFP和Neo基因连接到同一载体中,构建pCMV-GFP-T2A-Neo质粒,将其转染牛耳皮肤成纤维细胞,以FACS检测GFP基因的表达,RT-qPCR检测GFP、T2A和Neo的表达。结果:由T2A连接的GFP和Neo基因在mRNA水平上都有显著表达,且表达水平相当。结论:以T2A连接的基因在转入细胞后能正常翻译和表达,显示T2A在牛耳皮肤成纤维细胞中具有自裂解功能,可作为一种构建多顺反子载体的有效工具用于牛耳皮肤成纤维细胞的基因转移,为其将来在转基因牛研制中的应用奠定了基础。