粪便自诱导分子-2在新生儿坏死性小肠结肠炎临床病情监测中的价值

目的初步探讨粪便自诱导分子-2(AI-2)监测新生儿坏死性小肠结肠炎(NEC)病情变化的价值。方法以2017年10月至2018年4月收治的12例NEC患儿为研究对象,并按照胎龄、日龄、生产方式、喂养方式、抗生素使用等选择12例与NEC组患儿匹配的非NEC新生儿为对照组。NEC诊断时定为急性期,再次开奶3天后定为恢复期。采集NEC急性期、恢复期和对照组的粪便标本,以BB170生物荧光检测法检测粪便AI-2浓度,采用16srDNA高通量测序分析粪便菌群。结果在菌门水平,拟杆菌门比例在NEC组急性期、恢复期和对照组之间差异有统计学意义(P<0.05),其中NEC恢复期比例最低。在菌属水平,肠球菌属、拟杆菌属比例在三组之间差异均有统计学意义(P<0.05),其中NEC急性期肠球菌属比例最低,恢复期拟杆菌属比例最低。三组粪便AI-2浓度差异有统计学意义(P<0.05),以NEC急性期为最低。结论AI-2在监测NEC病情变化方面具有潜在临床应用价值。

变形链球菌UA159合成自诱导分子2及其影响因素的实验研究

目的：原核表达纯化变形链球菌（S．mutans）UA159 LuxS 蛋白，体外合成有活性的自诱导分子2（AI-2）并观察其合成的影响因素。方法：用基因重组的方法构建表达载体 pET21 a（＋）-luxS，在大肠杆菌（E．coli）BL21（DE3）中诱导表达 S-核糖基高半胱氨酸酶（LuxS）融合蛋白，镍柱亲和层析纯化、蛋白质印迹法分析鉴定 LuxS 蛋白，透析复性。纯化的 LuxS 蛋白和 S-腺苷高半胱氨酸核苷酶（Pfs）蛋白催化 S-腺苷 L 高半胱氨酸[SAH]合成 AI-2，哈氏弧菌 BB170检测 AI-2活性，并观察 LuxS 蛋白浓度、pH、氟化钠对 AI-2合成的影响。结果：与对照组相比，随着 LuxS 蛋白浓度的升高，体外合成的 AI-2活性增大（P ＜0．001）；当 pH 介于6～10之间时，AI-2活性最强，超出此 pH 范围，AI-2活性明显降低（P ＜0．001）；当氟化钠浓度≥0．3％时，AI-2活性显著降低（P ＜0．05）。结论：利用基因工程技术可以合成具有生物活性的 S．mutans UA159 AI-2；AI-2合成的最适 pH 在6～10之间；氟化钠浓度≥0．3％对 AI-2的合成有抑制作用。

2型群体感应自诱导分子对牙周炎影响的研究进展

口腔环境中,作为牙周组织炎症的始动因子——牙菌斑细菌,在牙周炎的发生发展过程中起到重要作用,群体感应信号分子是细菌之间进行信号传导从而有效地调节种群密度和促进生物膜发展的重要分子。不同种类细菌其群体感应系统不同,但2型自诱导分子系统是牙周致病菌通用群体感应系统。近年来,许多研究表明群体感应抑制剂可以有效减弱牙周致病菌群体感应并抑制菌斑生物膜的形成和毒力因子的表达。本文就2型自诱导分子对牙周炎影响的研究进展进行综述。

鼻渊舒口服液对慢性鼻-鼻窦炎患者鼻腔表皮葡萄球菌细菌生物膜形成的影响

目的探讨鼻渊舒口服液对慢性鼻-鼻窦炎(CRS)患者表皮葡萄球菌细菌生物膜形成及其调控因子的影响。方法采集72名CRS患者及20名正常人窦口鼻道复合体处分泌物,鉴定并分离鼻腔优势菌种表皮葡萄球菌,比较鼻渊舒口服液治疗CRS前后表皮葡萄球菌细菌生物膜形成情况。同时,BB170法检测细菌生物膜种间信号AI-2活性变化,RT-PCR法分析治疗前后luxS转录水平情况。结果正常人及CRS患者治疗前后鼻腔优势菌种均以表皮葡萄球菌为主。正常人鼻腔表皮葡萄球菌细菌生物膜形成率为33%,CRS患者为73%,治疗后患者鼻腔优势表皮葡萄球菌细菌生物膜形成率为41%;治疗后细菌生物膜信号AI-2活性降低,持续时间短;治疗后比治疗前luxS转录水平降低。结论鼻渊舒口服液通过降低luxS转录水平及AI-2活性等多种途径,降低细菌生物膜形成,改善CRS患者鼻腔微环境。

粪便AI-2测定对应用广谱抗生素后新生儿肠道菌群变化的预测价值

目的探讨使用抗生素后粪便中自诱导分子2(AI-2)的变化及其对肠道菌群变化的监测价值。方法选取2018年1-7月重庆医科大学附属儿童医院新生儿中心收治的34例患儿,分为抗生素组(n=17)与对照组(n=17)。两组患儿按照胎龄、日龄、生产方式、喂养方式等进行匹配。采集患儿的粪便标本,用BB170生物荧光检测法检测粪便样品中AI-2的活性。采用16S rDNA高通量测序分析粪便样本的微生物菌群。结果抗生素组AI-2的相对发光值明显低于对照组[57.68(50.56,103.13)vs.112.63(87.20,163.57)],差异有统计学意义(Z=3.62,P<0.001)。菌群分析结果显示,使用抗生素3 d时,抗生素组与对照组患儿的肠道菌群香农威纳指数(0.83±0.45 vs.1.02±0.46)、Chao指数(31.9±18.55 vs.33.63±25.35)差异均无统计学意义(P>0.05)。菌群组成分析中,在门水平上,两组间差异无统计学意义(P>0.05);在属水平上,抗生素组中肠球菌属明显高于对照组(P=0.002),而柠檬酸杆菌属明显低于对照组(P=0.017),其余菌群构成变化差异均无统计学意义(P>0.05)。结论使用广谱抗生素能够改变肠道群菌组成,菌群变化早期即伴有肠道AI-2的变化。

拮抗铜绿假单胞菌的乳酸菌筛选及机制研究

目的:以铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa,PA)为指示菌,基于群体感应系统筛选拮抗PA作用的乳酸菌(Lactic acid bacteria,LAB)并探讨拮抗机制。方法:通过牛津杯法筛选抑制PA生长的LAB,测定LAB的AI-2表达量,LAB抑制PA生物膜形成力、绿脓菌素表达量及LAB无菌上清液与PA共培养时AI-2信号分子的表达量,并利用皮尔森相关性分析探讨LAB拮抗PA机制。结果:格氏乳杆菌LGchen和唾液乳杆菌S-5-6的整体抗菌效果比较强,抑菌圈达到20 mm以上,AI-2相对荧光值达到1.2以上,抑制PA的绿脓菌素表达率达50%以上,抑制PA生物膜形成率达70%左右。LAB抑制PA生长的能力与LAB的表达AI-2的能力、抑制PA的生物膜形成能力呈正相关,与PA的绿脓菌素表达呈负相关。结论:LAB可以通过提高AI-2表达,抑制PA生物膜形成和绿脓菌素表达来抑制PA的生长。

粪便HMGB1、AI-2和HBD2在新生儿坏死性小肠结肠炎中的临床意义及与肠道菌群的关系

目的探讨粪便高迁移率族蛋白B1(HMGB1)、自诱导分子-2(AI-2)和人β-防御素2(HBD2)在新生儿坏死性小肠结肠炎(NEC)中的临床意义及其与肠道菌群的关系。方法选取2017年9月至2019年9月重庆市大渡口区人民医院收治的105例NEC患儿作为NEC组,以及同期出生的50例健康新生儿作为对照组。依据改良Bell-NEC分期标准将NEC患儿分为轻度NEC组及重度NEC组,根据病程分为急性期和恢复期,根据肠道菌群紊乱程度分为Ⅰ度失调组、Ⅱ度失调组及Ⅲ度失调组。检测受试新生儿粪便HMGB1、AI-2和HBD2水平,比较对照组和不同严重程度、不同NEC时期、不同肠道菌群紊乱程度的NEC患儿HMGB1、AI-2和HBD2水平。采用Spearman相关分析HMGB1、AI-2、HBD2水平与急性期NEC病情严重程度、肠道菌群紊乱程度的相关性。结果轻度NEC组和重度NEC组粪便HMGB1水平均高于对照组,且重度NEC组高于轻度NEC组(P<0.05);轻度NEC组和重度NEC组粪便AI-2和HBD2水平均低于对照组,且重度NEC组低于轻NEC度组(P<0.05)。粪便HMGB1水平与NEC病情严重程度呈正相关(r=0.412,P<0.05),AI-2和HBD2水平均与NEC病情严重程度均呈负相关(r=-0.405、-0.381,P<0.05)。NEC急性期和恢复期粪便HMGB1水平均高于对照组,且急性期高于恢复期(P<0.05);急性期粪便AI-2水平低于对照组和恢复期,且恢复期高于对照组(P<0.05);急性期和恢复期粪便HBD2水平均低于对照组,且恢复期高于急性期(P<0.05)。对照组粪便HMGB1水平<Ⅰ度失调组<Ⅱ度失调组<Ⅲ度失调组(P<0.05),而对照组粪便AI-2和HBD2水平>Ⅰ度失调组>Ⅱ度失调组>Ⅲ度失调组(P<0.05);粪便HMGB1水平与肠道菌群紊乱程度呈正相关(r=0.368,P<0.05),AI-2和HBD2水平与肠道菌群紊乱程度均呈负相关(r=-0.432、-0.406,P<0.05)。结论粪便中HMGB1、HBD2和AI-2水平与NEC的病情严重程度有关,并可以反映肠道菌群紊乱情况,而HMGB1水平降低、HBD2和AI-2水平升高则预示着病情好转。

细菌生物膜耐药机制与治疗的研究进展

细菌生物膜因存在广泛、影响较大而又难以通过有效手段得以治疗而被广为研究。文章对当前关于细菌生物膜耐药机制形成的研究和治疗进展进行综述,以帮助后来的研究者对其有更好的认识,并为治疗手段的研发提供思路。

AI-2、HBD在早产儿坏死性小肠结肠炎病情监测中的价值

目的探讨粪便自诱导分子-2(AI-2)、粪便人β-防御素(HBD)在早产儿坏死性小肠结肠炎(NEC)中的水平及其监测病情变化的价值。方法选取2016年3月至2020年1月三二○一医院新生儿科收治的33例NEC早产儿作为NEC组,其中NEC诊断时定为急性期,再次开奶3 d后定为恢复期;选取同期41例非NEC早产儿作为非NEC组。采用酶联免疫吸附试验测定两组HBD水平,生物荧光检测法测定两组AI-2水平;分析两组肠道菌群紊乱情况,比较NEC急性期组、NEC恢复期组、非NEC组的纲/属水平香农-威纳指数(Shannon-Weiner指数)和前三位的菌群丰度情况,以及HBD1、HBD2、AI-2水平。结果经对症支持治疗后,本研究纳入病例均康复出院,无死亡病例出现。NEC组肠道菌群紊乱发生率高于非NEC组[81.82%(27/33)比41.46%(17/41)](P<0.01),NEC组肠道菌群紊乱分级优于非NEC组(P<0.01)。NEC恢复期组纲水平、种属水平Shannon-Weiner指数低于非NEC组和NEC急性期组(P<0.05)。NEC急性期组变形菌门、厚壁菌门相对丰度高于非NEC组,而拟杆菌门相对丰度低于非NEC组(P<0.05);NEC恢复期组变形菌门、拟杆菌门相对丰度均低于非NEC组和NEC急性期组,而厚壁菌门相对丰度高于非NEC组(P<0.05)。NEC急性期组克雷伯菌属相对丰度高于非NEC组,而肠杆菌属相对丰度低于非NEC组(P<0.05);NEC恢复期组克雷伯菌属相对丰度低于NEC急性期组和非NEC组,而肠杆菌属相对丰度高于NEC急性期组和非NEC组(P<0.05)。NEC急性期组HBD1、HBD2及AI-2水平均低于非NEC组(P<0.05);NEC恢复期组HBD1、HBD2及AI-2水平均低于非NEC组和NEC急性期组(P<0.05)。结论NEC患儿AI-2及HBD的表达水平较低,AI-2及HBD在NEC早产儿病情监测中具有一定的潜在价值。

AI-2对鸭疫里氏杆菌粘附入侵Vero细胞及其相关基因转录水平的影响

【目的】自诱导信号分子AI-2(Autoinducer-2,AI-2)作为细菌间的通用自诱导信号分子,参与细菌众多生理功能的调控。本研究通过开展AI-2在鸭疫里氏杆菌(Riemerella antatipestifer,RA)CH3株对非洲绿猴肾细胞(Vero细胞)的粘附、入侵以及对RA相关基因调控作用的研究,为进一步研究AI-2对RA的调控作用奠定基础。【方法】在CH3(血清型1型)对Vero细胞的粘附、入侵过程中加入不同浓度的AI-2,研究其对CH3粘附、入侵Vero的影响;在添加184.0μmol/L AI-2的胰蛋白胨大豆肉汤(TSB)中培养RA CH3菌株,利用real-time PCR来检测AI-2对RA相关基因转录水平的影响。【结果】结果表明,AI-2浓度为18.4μmol/L时,AI-2对CH3粘附Vero细胞的抑制性最强,为62%,当AI-2浓度为184.0μmol/L时,AI-2对CH3入侵Vero细胞的促进性最强为194%。荧光定量PCR结果表明AI-2对部分基因的转录有促进作用,对部分基因的转录有抑制作用。【结论】AI-2参与调控RA粘附、入侵Vero细胞及RA毒力因子、免疫原性蛋白基因以及代谢相关基因转录水平的调控。

群感效应与链霉菌次生代谢调控

群感效应是细菌协调群体行为的一种外界信号传递机制,在细菌中普遍存在,参与细胞的多种生理过程。链霉菌中也存在群感效应,在抗生素等次生代谢产物的生物合成中起重要的调控作用;从自诱导信号分子的结构到信号传递机制都存在一定多样性,其中以A-因子为代表的γ-丁酸内酯类信号分子的作用机制研究最为深入。近几年在链霉菌中发现的PI-因子、M-因子以及一些特定的代谢产物则代表几类结构较新颖的信号分子,通过群感效应机制调控次生代谢过程;链霉菌中还发现胆固醇氧化酶、甘油等分子具有信号分子特征,不排除是通过群感效应来参与抗生素生物合成调控。本文主要就参与链霉菌次生代谢调控的几类群感效应系统的研究状况进行综述,重点阐述各类群感信号分子的结构和信号传递机制的不同,并对链霉菌群感效应的研究趋势以及在抗生素高产菌遗传育种中的应用前景进行了展望。