黄瓜花叶病毒2b蛋白自身互作结构域的研究

黄瓜花叶病毒（Cucumber mosaic virus,CMV）寄主范围广,在全球分布广泛,可为害多种蔬菜和园艺作物,造成重大经济损失。CMV株系或分离物被划分为亚组IA、IB和亚组II。CMV 2b蛋白是重要的致病因子,也是最早被鉴定的RNA沉默抑制子之一,CMV亚组I株系的2b蛋白在植物体内能发生自身互作。通过双分子荧光互补试验发现亚组II株系LS-CMV编码的2b蛋白在植物体内不能发生自身互作;进一步通过重叠PCR技术对编码Fny 2b和LS 2b蛋白的基因序列进行片段重组交换,利用双分子荧光互补技术初步明确,2b蛋白发生自身互作的关键结构域位于N端的第13~37位氨基酸序列。

对虾传染性皮下及造血组织坏死病毒编码蛋白的相互作用研究

采用Matchmaker酵母双杂交系统,将对虾传染性皮下及造血组织坏死病毒(Infection hypodermal and hematopoietic necrosis virus,IHHNV)编码蛋白NS1、NS2和CP序列分别构建到酵母猎物载体p GADT7和诱饵载体p GBKT7上,分别转化至酵母AH109以检测重组猎物载体和诱饵载体的自激活作用及对宿主的毒性作用,发现无自激活作用和毒性作用,随后将重组猎物载体和诱饵载体两两共转至酵母AH109中,涂布于SD/-Leu/-Trp固体培养基上,再点种至SD/-Ade/-His/-Leu/-Trp/X-α-gal固体培养基以鉴定编码蛋白间的相互作用。表型鉴定结果显示,只有共转化有p GADT7-CP/p GBKT7-CP的酵母重组子能够在SD/-Ade/-His/-Leu/-Trp/X-α-gal上生长并显蓝,而其它重组子均不能在其上生长,表明病毒的CP能够自身互作,而其他编码蛋白间无相互作用。为了进一步研究病毒CP自身互作的作用位点,分别从CP的N端和C端截短若干个氨基酸序列,结果发现CP的自身互作是高度敏感的,任何较少氨基酸序列的缺失都将导致其自身互作的丧失。本研究为深入探讨病毒的组装机制和致病机理奠定了理论基础。