MOG抗原诱导的自身免疫性脑脊髓炎模型的建立及组织蛋白酶抑制剂cystatin F的表达

[目的]研究组织蛋白酶抑制剂cystatin F在少突胶质细胞糖蛋白(MOG)35-55诱导的自身免疫性脑脊髓炎(EAE)模型中的表达。[方法]利用MOG 35-55建立EAE模型,通过行为学观察对其进行神经功能评分;利用免疫组织化学方法证明髓鞘脱失情况;通过连续切片分析,及原位杂交和免疫组化技术对小胶质细胞活化和cystatinF的表达进行研究。[结果]利用MOG35-55可成功制备EAE模型;cystatin F在正常小鼠中枢神经系统内没有表达,但在脱髓斑块周围可见其表达。通过系列连续切片分析,其表达与在脱髓斑块周围积聚的小胶质细胞具有高度的一致性。[结论]cystatin F在MOG诱导的EAE中具有表达,其表达与积聚的小胶质细胞具有高度的一致性。

C57BL/6J小鼠实验性自身免疫性脑脊髓炎模型的建立及其病理特征

目的探讨C57BL/6J小鼠建立实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)模型的可能性及其发病特点。方法使用PLP139-151抗原及其C57BL/6J小鼠自制脑脊髓匀浆(spinal cord homogenate,SCH)免疫C57BL/6J小鼠,使用完全福(氏)免疫佐剂为免疫佐剂,并在尾静脉注射百日咳杆菌,建立EAE模型,与经典的PLP139-151免疫的SJL/J小鼠EAE模型进行对比。结果PLP139-151免疫C57BL/6J小鼠仅有一只小鼠表现为尾部张力明显降低;自制SCH免疫C57BL/6J小鼠可见明显脱髓鞘改变。与PLP139-151免疫SJL/J小鼠组相比发病率较低(P<0.05),神经功能评分比较没有明显差异(P>0.05),但发病时间长于PLP139-151免疫SJL/J小鼠组(P<0.05)。结论SCH免疫C57BL/6J小鼠的EAE动物模型,主要表现为急性单相病程,从临床表现和病理学特点来看符合人类MS的病理特点,值得在以后的研究中进一步研究探讨。

Wistar大鼠实验性自身免疫性脑脊髓炎模型的建立

目的:建立Wistar大鼠实验性自身免疫性脑脊髓炎(experimental autoimmune encephalo-myelitis,EAE)模型,并检测可溶性血管细胞黏附分子-1(soluble vascular cell adhesion molecule-l,sVCAM-1)在EAE大鼠中的动态表达。方法:将豚鼠麻醉后,不用磷酸盐缓冲液(PBS)灌注,直接取新鲜豚鼠全脊髓制备匀浆(Guinea Pig Spinal Cord Homoge-nate,GPSCH)为抗原,免疫Wistar大鼠建立EAE的动物模型。观察其体重及神经功能评分的变化;取脑、脊髓组织石腊包埋,病理切片,光镜观察;采用双抗体夹心法酶联免疫吸附实验(ELISA)检测血清中sVCAM-1的表达。结果:Wist-ar大鼠在免疫后10天出现明显的神经系统体征,发病率达100%;脑脊髓组织可见血管周围炎细胞呈袖套样浸润;sV-CAM-1的表达与对照组比较有显著性升高(P<0.01)。结论:采用非灌注法制备的豚鼠全脊髓匀浆作为抗原,能够成功诱发Wistar大鼠的EAE模型,为研究多发性硬化(multiple sclerosis,MS)的发病机制及治疗奠定了一定的基础。

C57BL/6小鼠实验性自身免疫性脑脊髓炎模型的建立

目的:建立实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)的小鼠模型,为探讨多发性硬化的免疫病理机制和实验性治疗提供依据。方法:C57BL/6小鼠40只,分为3组。EAE组25只,采用皮下注射完全弗氏佐剂与300μg MOG35-55制备的乳化抗原,辅以腹腔注射109个/ml百日咳疫苗的方法诱导发病;佐剂组8只,用生理盐水代替抗原肽制备免疫乳剂,余同EAE组;正常对照组7只,仅注射生理盐水。采用H-E和LFB染色的方法观察小鼠EAE模型的组织学改变。结果:从免疫后11 d开始,EAE组小鼠有22只陆续出现EAE临床症状,发病率为88%。佐剂组与正常对照组小鼠均未出现临床神经系统症状。光镜下可见EAE组小鼠的大脑和脊髓组织中有大量的炎性细胞浸润,白质脱髓鞘改变明显。结论:此种造模方法简单可行,模型稳定,可在国内广泛推广。

SOCS1-JAK2-STAT3信号通路在C57BL/6小鼠实验性自身免疫性脑脊髓炎模型中作用机制探讨

目的:探讨SOCS1-JAK2-STAT3通路在C57BL/6小鼠实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)发病中的作用机制,为多发性硬化(MS)的治疗寻找新的靶点。方法:对比AG490干预组、EAE模型组和空白对照组各组小鼠发病情况,各组发病初期和发病高峰期胸腺组织HE染色,及胸腺中IL-17、RORγt、SOCS1及p-STAT3免疫组化阳性细胞表达。结果:AG490干预组发病时间迟于EAE组(P<0.05),其高峰期神经功能评分显著低于EAE组(P<0.05),AG490干预组胸腺组织中IL-17、RORγt、SOCS1及p-STAT3的表达与EAE组比较明显下降(P<0.05),但各组发病高峰期均较发病初期含量增高(P<0.05)。结论:①AG490可以通过抑制SOCS1-JAK2-STAT3信号通路,降低特异性免疫应答,减少炎症反应。②SOCS1-JAK2-STAT3信号通路在EAE中发挥重要作用,可以作为治疗的新靶点。

不同剂量MOG抗原免疫诱导小鼠自身免疫性脑脊髓炎模型的比较

目的比较不同剂量髓鞘少突胶质细胞糖蛋白(myelin oligodendrocyte glycoprotein,MOG35-55)免疫诱导C57BL/6小鼠实验性自身免疫性脑脊髓炎(experimental autoimmune encephalomyelitis,EAE)的作用。方法将C57BL/6小鼠分为正常组和三组不同剂量MOG35-55诱导的EAE模型组,共4组。模型组分别以每只200、100、50μg的MOG35-55与完全弗氏佐剂(complete Freund s adjuvant,CFA)混合的乳化抗原皮下注射免疫诱导EAE模型,正常组以生理盐水替代。观察不同剂量MOG35-55对C57BL/6小鼠体重、发病率以及神经功能评分等影响,同时取小鼠脑和脊髓,利用光镜和透射电镜观察小鼠病理组织学改变。结果三组不同剂量MOG35-55均能诱导EAE模型,发病率为100%,呈慢性单相病程,病理学观察发现小鼠脑和脊髓有炎性细胞浸润、脱髓鞘及轴突损伤等改变。但小剂量组在体重减轻、临床症状评分及病理学改变等方面均较中、大剂量组明显。结论用MOG35-5550μg剂量免疫诱导的C57BL/6小鼠EAE模型稳定,可在今后的研究中应用。

髓鞘蛋白脂质蛋白多肽不同抗原决定簇对实验性自身免疫性脑脊髓炎模型神经功能评分及形态学改变的影响

目的:试图观察髓鞘蛋白脂质蛋白多肽(proteolipidprotein,PLP)两种不同肽段PLP193～151和PLP178～191抗原决定簇对实验性自身免疫性脑脊髓炎(experimentalautoimmuneencephalomyelitis,EAE)模型建立的影响。方法:实验于2004-02/06在解放军总医院神经病理研究室进行。应用PLP193～151和PLP178～191免疫雌性SJL/J小鼠,制作复发缓解型实验性自身免疫性脑脊髓炎(relapseremittingEAE,RR-EAE)模型,观察其神经功能评分的变化及组织形态学改变;用不同浓度的两种肽段体外刺激经两种肽段免疫后的小鼠的淋巴细胞,并观察其增殖强度。结果:两种PLP肽段免疫的小鼠发病均具有缓解-复发的特点,并出现血管鞘形成、炎性细胞浸润及脱髓鞘等特征性改变;但是,PLP178～191诱导的模型发病时间早(P<0.01),症状较重,表现多样。不同PLP肽段及其浓度间的差异有统计学意义(P=0.000)。PLP178～191在5mg/L时A值最高(2.36±0.14),而PLP139～151在50和100mg/L的A值增高有统计学意义(P=0.000)。结论:PLP两种肽段均可诱发RR-EAE模型,但二者诱发的模型各具特点,这是由其不同抗原决定簇决定的。

3种大鼠实验性自身免疫性脑脊髓炎模型的差异

目的比较3种大鼠实验性自身免疫性脑脊髓炎模型的差异。方法采用皮下注射豚鼠脊髓匀浆+完全福氏佐剂,并辅以注射百日咳疫苗,诱导制备SD大鼠、Wistar大鼠和Lewis大鼠EAE模型,比较3组大鼠EAE的神经症状及中枢神经不同部位病理学变化。结果与Lewis大鼠相比,SD大鼠和Wistar大鼠潜伏期均延长(P<0.05),达峰时间相应推迟(P<0.05),神经症状以Lewis大鼠最严重,其次为SD大鼠(P<0.05);病理结果显示,3组大鼠CNS均以脑干病理改变最为严重,其次颈髓,而大脑病变最轻;CNS各部位的炎症改变,以Lewis大鼠最明显,而Wistar大鼠最轻。结论 SD大鼠与Lewis大鼠EAE比较,疾病发生率接近,中枢炎症病理改变相似,两者均以脑干炎症变化最严重,故SD大鼠是国内适合制备EAE模型的实验动物。

小剂量豚鼠脊髓匀浆诱导Wistar大鼠实验性自身免疫性脑脊髓炎模型的建立

目的探索以小剂量豚鼠脊髓匀浆为抗原,建立Wistar大鼠实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)模型,并观察其病理改变。方法按脊髓湿重与冰盐水体积为1:10的比例制备豚鼠脊髓匀浆抗原,免疫Wistar大鼠,建立EAE模型;留取脑和脊髓进行HE染色及三色染色,光镜下观察病理改变。结果Wistar大鼠免疫后第17.20±6.48天第一次发病,发病形式多样,除表现EAE常见症状外,尚出现痉挛状态、斜颈等特殊症状。HE染色发现神经组织内炎细胞浸润,血管"袖套"样病灶形成;三色染色可见轴突肿胀,呈串珠状,且不连续,着色不均匀;髓鞘结构层次紊乱,疏松,崩解。结论小剂量脊髓匀浆诱导的EAE模型,病程及发病表现更接近于人类多发性硬化的表现,且经济实用,是研究多发性硬化的理想动物模型。

外源性TGF-β1对实验性自身免疫性脑脊髓炎模型小鼠中IL-23/Th17炎症轴的影响

目的:观察外源性TGF-β1对实验性自身免疫性脑脊髓炎模型小鼠IL-23/Th17炎症轴的影响,探讨其可能的作用机制。方法:以MOG35-55免疫C57BL/6小鼠制作EAE模型,多时间点皮下注射TGF-β1作为干预,RT-PCR和ELISA检测IL-23、IL-17和IL-6的表达。结果:与EAE组相比,干预组在发病初IL-23、IL-17、IL-6表达均升高(P<0.05,P<0.05,P<0.05);在高峰期IL-23表达下降(P<0.05),IL-17、IL-6表达升高(P<0.05,P<0.05);在慢性期IL-23、IL-17表达下降(P<0.05,P<0.05),而IL-6表达升高(P<0.05)。结论:外源性的TGF-β1可能通过上调IL-23、IL-17的表达使EAE高峰期的症状加重并提前,而在慢性期相对地下调其表达,EAE症状趋于缓解。

实验性自身免疫性脑脊髓炎模型小鼠脾和中枢神经系统中CD4^+T细胞的动态变化

利用MOG35-55多肽的抗原乳剂和百日咳毒素诱导C57BL/6小鼠EAE模型,分别于发病初期S1(Day 17)、发病高峰期S2(Day 25)、平台初期S3(Day 40)、平台后期S4(Day 52)取材。采用流式细胞仪检测4个时间点EAE小鼠脾单个核细胞中CD4^+T细胞的比例,采用免疫组化法观察4个时间点中枢神经系统各部位CD4^+T细胞的浸润情况。结果显示,在EAE小鼠的发病过程中,脾中的CD4^+T细胞在S1、S2期的比例持续升高,在S2期达到最高值,但到S3期比例开始降低。免疫组化结果显示,随着疾病的发展,EAE小鼠中枢神经系统不同部位的CD4^+T细胞浸润均呈现先增加后降低的特点,而且在各个时期,脊髓中的CD4^+T细胞浸润最明显,其次是大脑,再次为脑干。CD4^+T细胞动态变化结果说明,外周和中枢的CD4^+T细胞均主要在EAE的发病初期和发病高峰期发挥致病效应。

实验性自身免疫性脑脊髓炎模型的建立和长期观察研究

目的建立实验性自身免疫性脑脊髓炎小鼠模型(EAE)并长期观察研究。方法C57BL/6小鼠30只,随机分为EAE模型组、PBS对照组和正常对照组。应用神经功能评分进行临床评估,通过HE和髓鞘染色观察组织病理变化。结果小鼠在诱导后的12±3d急性起病,16±2d内达到高峰,严重度评分为3.2±0.6分。半年观察期内复发1次,复发率为25%。光镜下可见EAE组以脊髓组织病变为主,表现为大量炎性细胞浸润和白质脱髓鞘。结论采用MOG35-55诱导C57BL/6小鼠建立的模型既往被认为是一种慢性迁延EAE模型,本研究通过长期观察发现其存在缓解复发现象。

不同磷脂肽段诱导的实验性自身免疫性脑脊髓炎模型病理特征多样性的研究

目的:探索是否不同磷脂肽段可以诱导Lewis大鼠产生不同的病理学表现。方法:采用髓鞘碱性蛋白82-99(MBP82-99)、MBP68-86、髓鞘少突胶质细胞糖蛋白35-55(MOG35-55)免疫Lewis大鼠,每天进行神经功能评分。免疫后取各组大鼠大脑、小脑、脑干和脊髓组织,观察炎性细胞浸润部位和浸润程度、有无脱髓鞘和轴索损害。结果:MBP68-86和MBP82-99两组大鼠的大脑、脑干、小脑和脊髓组织均有炎性细胞浸润,脊髓炎症程度重于其他部位;MBP68-86和MBP82-99诱导的脊髓炎症程度无统计学差异;MOG35-55组大鼠仅脊髓组织受累,且炎症程度明显低于MBP组,其余各组未见炎性细胞浸润。各组大鼠神经组织均未见脱髓鞘和轴索受累。结论:不同磷脂肽段诱导Lewis大鼠神经组织炎性细胞浸润的分布和程度不同。

Wistar大鼠实验性自身免疫性脑脊髓炎模型性别差异研究

目的:分别建立雌性和雄性Wistar大鼠的实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)模型,并研究两者的差别。方法:应用非灌注法制备的豚鼠全脊髓匀浆分别免疫雌性和雄性两组Wistar大鼠,诱导建立EAE模型,观察30天,取脊髓组织石蜡包埋,病理切片,HE染色,光镜观察。观察两组大鼠在发病时间、发病率、神经功能评分及病程等方面的区别。结果:雌性Wistar大鼠的平均发病时间(13.67±3.50)天,发病率为60%,病程有复发-缓解的特点,神经功能高峰期评分(2.20±1.96)分;雄性Wistar大鼠的平均发病时间(12.18±1.55)天,发病率为85%,呈一过性发病,神经功能高峰期评分(3.46±1.61)分。结论:雄性Wistar大鼠的EAE模型较雌性Wistar大鼠具有发病率高、单相急性病程等特点,为研究多发性硬化发病机制及其发病的性别差异奠定了一定的基础。

C57BL/6J小鼠实验性自身免疫性脑脊髓炎模型建立的关键性问题

实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)模型是国际公认的多发性硬化(MS)的经典动物模型,被广泛用于MS发病机制和评价免疫调节药物的实验研究。实验操作中仍有较多缺陷导致发病率不能达到100%和死亡率偏高,需要对造模的关键技术不断完善。加强该模型免疫前准备工作、免疫操作和免疫后护理3个方面的研究,分析EAE模型成功建立的关键性问题,并根据实验操作过程提出解决办法,完善EAE模型的规范化造模流程,可以使EAE模型具备发病率高、死亡率低、模型稳定的特点。

应激对大鼠自身免疫性脑脊髓炎模型的影响

目的:观察应激刺激对实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)SD大鼠细胞免疫的影响。方法:用豚鼠脊髓抗原免疫SD大鼠,制作SD大鼠EAE模型,并随机分为抗原免疫+应激处理组(A组)和单纯抗原免疫组(B组),观察两组大鼠EAE的发病率及病情严重程度。3周后处死SD大鼠,检测大鼠外周血CD4+、CD8+细胞比例和CD4+/CD8+比值。结果:接种豚鼠脊髓抗原的两组大鼠10d后开始发病,A组大鼠EAE发病率和病情严重评分均高于B组,差异有统计学意义(P<0.01)。A组外周血CD4+比例、CD4+/CD8+比值均低于B组,差异有统计学意义(P<0.05),CD8+细胞比例与B组相当,差异无统计学意义(P>0.05)。结论:应激刺激对EAE大鼠细胞免疫有抑制作用,促发并加重大鼠EAE病情。

塞来昔布对实验性自身免疫性脑脊髓炎模型小鼠Th1/Th17细胞分化的抑制作用

目的探讨塞来昔布对实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)模型小鼠脊髓中Th1/Th17细胞分化的抑制作用。方法将36只C57BL/6小鼠随机分为对照组(等体积生理盐水)、模型组(等体积生理盐水)、塞来昔布组(5 mg/kg),各12只。皮下注射髓磷脂少突胶质细胞糖蛋白35-55(MOG_(35-55))混合乳剂以复制EAE小鼠模型。建模成功后,各组小鼠灌胃给予相应药物或生理盐水,每天1次,连续35 d。对小鼠进行神经功能缺损评分;光学显微镜下观察小鼠脊髓髓鞘脱失程度;采用流式细胞仪测定小鼠脊髓中CD_(4)^(+)T细胞与CD_(8)^(+)T细胞占比,分析CD_(4)^(+)T细胞的分化程度;采用酶联免疫吸附法测定小鼠脊髓中白细胞介素1β(IL-1β)、白细胞介素6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)表达水平;采用Western blot法测定小鼠脊髓中环氧合酶2(COX-2)、核因子κB(NF-κB)、含NLR家族Pyrin域蛋白3(NLRP3)蛋白表达水平。结果与模型组比较,塞来昔布组小鼠同时间点神经功能缺损评分显著降低,小鼠脊髓中CD_(4)^(+)T细胞占比,CD_(4)^(+)T细胞中Th1与Th17细胞占比,TNF-α,IL-6,IL-1β水平,以及COX-2,p-NF-κB,NLRP3蛋白表达水平均显著降低(P<0.05)。模型组小鼠脊髓髓鞘脱失严重,塞来昔布组虽可见部分髓鞘破坏,但整体染色更深,且髓鞘空泡区域较少。结论塞来昔布可在一定程度上改善模型小鼠EAE症状,其机制可能与抑制COX-2活性,减少CD_(4)^(+)T细胞向Th1与Th17亚型分化,降低TNF-α,IL-6,IL-1β等炎性细胞因子水平有关。

Wistar大鼠实验性自身免疫性脑脊髓炎模型的建立

目的 研究用牛的髓鞘碱性蛋白 (MBP)诱导Wistar大鼠发生实验性自身免疫性脑脊髓炎 (EAE)。方法 一次性给Wistar大鼠双后腿足垫皮内注射牛MBP 福氏完全佐剂 (CFA)混合乳剂 ,同时辅以百日咳杆菌。结果 实验组大鼠全部发病 ,对照组无一发病。结论 用牛脊髓MBP的粗提品可成功地诱导Wistar大鼠发生EAE。

全脊髓匀浆建立豚鼠实验性自身免疫性脑脊髓炎模型

目的:用全脊髓匀浆(粗制髓鞘碱性蛋白)建立豚鼠实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)模型。方法:Wistar大鼠全脊髓匀浆+完全福氏完全佐剂(CFA)免疫豚鼠,观察豚鼠的临床症状和中枢神经系统(CNS)的病理改变。结果:实验豚鼠均表现典型的EAE症状;光镜观察见CNS血管周围炎性细胞浸润和白质脱髓鞘改变。结论:全脊髓匀浆加完全福氏完全佐剂成功的诱导了豚鼠的EAE模型,具有模型稳定、发病率高、动物廉价易得的优点,是研究多发性硬化理想的动物模型。

昆明小鼠实验性自身免疫性脑脊髓炎模型的建立

用豚鼠脊髓匀浆液和不完全弗氏佐剂制备免疫原,联合腹腔注射百日咳毒素,建立昆明小鼠实验性自身免疫性脑脊髓炎动物模型。发病小鼠临床神经系统症状逐渐加重,脑组织经HE染色后,可见血管周围有大量炎性细胞浸润,呈袖套状改变;大脑白质可见胶质细胞增生形成胶质细胞结节以及神经细胞坏死等病理改变。正常小鼠中枢神经系统功能及病理检查均未见异常。此模型为进一步阐明多发性硬化的发病机制打下基础。