3-磷酸甘油酸脱氢酶抗体对自身免疫性肝炎诊断意义评价

目的探讨3-磷酸甘油酸脱氢酶(D-3-phosphoglycerate dehydrogenase,PHGDH)抗体对自身免疫性肝炎诊断意义。方法选择在北京佑安医院诊治的自身免疫性肝炎(AIH)40例,原发性胆汁性肝硬化(PBC)患者34例,伴抗核抗体阳性(ANA≥1∶320)慢性病毒性肝炎(乙型+丙型)患者43例,免疫印迹法检测各组血清中PHGDH抗体,分析PHGDH抗体与其他自身抗体出现特点,并采用掊2检验分析AIH组患者与其他组间PHGDH抗体阳性率差别。结果共完成117例的标本检测,PHGDH抗体阳性18例,其中AIH 40例中PHGDH抗体阳性12例,阳性率30.7%;34例PBC中,PHGHD抗体阳性3例,阳性率8.8%;慢性病毒性肝炎43例中PHGDH抗体阳性3例,阳性率6.9%。两组间差异有统计学意义(P=0.026),AIH组阳性率明显高于PBC组,AIH组与病毒性肝炎组比较差异有统计学意义(P=0.007)。AIH组阳性率明显高于病毒性肝炎组;12例PHGDH抗体阳性AIH患者伴随自身抗体中ANA滴度≥1∶1000 6例,1∶320 5例,1∶100 1例,伴平滑肌抗体(SMA)阳性5例,12例阳性患者均不伴SLA/LP抗体及肝肾微粒体(LKM-1)抗体。结论 3-磷酸甘油酸脱氢酶抗体在自身免疫性肝炎患者中检出率显著高于在PBC组和病毒性肝炎组,可能有助于AIH诊断。

3-磷酸甘油酸脱氢酶在肿瘤中的研究进展

3-磷酸甘油酸脱氢酶(3-PGDH或PHGDH)是丝氨酸合成途径的关键酶。其编码基因PHGDH位于人类染色体1p12,在一些正常组织中存在高表达,特别对神经系统功能发育有着重要作用。近年研究发现在一些肿瘤细胞中糖酵解途径的部分中间产物进入丝氨酸合成途径,PHGDH酶活性增强、基因出现扩增且蛋白存在高表达,参与调控肿瘤细胞的增殖、凋亡及侵袭等过程。肿瘤细胞代谢方式的改变利于肿瘤的发生发展,研究发现沉默PHGDH可抑制肿瘤细胞增殖并增加细胞凋亡,沉默PHGDH后还可抑制肿瘤细胞侵袭,PHGDH有望成为肿瘤治疗的新靶点。主要从PHGDH基因概述、功能及其在肿瘤发生发展中的作用等方面进行研究进展综述。

3-磷酸甘油醛脱氢酶通过调控磷酸甘油酸脱氢酶促进肝癌的形成

【据《Hepatology）2017年4月报道】题：3-磷酸甘油醛脱氢酶通过调控磷酸甘油酸脱氢酶促进肝癌的形成（作者Liuss等）

3-磷酸甘油酸脱氢酶促进丝氨酸合成在肿瘤进展中的机制

丝氨酸生物合成途径活性的上调是许多癌症明显的共同特征。该途径的第一种限速酶3-磷酸甘油酸脱氢酶(PHGDH)在黑色素瘤、乳腺癌和肾癌等癌组织中高表达,对肿瘤细胞增殖、转移、侵袭有着重要作用。糖酵解中间产物3-磷酸甘油酸在PHGDH作用下,氧化为磷酸羟基丙酮酸并最终合成丝氨酸。丝氨酸转化为甘氨酸,然后在核苷酸、s-腺苷甲硫氨酸(SAM)和还原型谷胱甘肽(GSH)的合成中起着重要的作用。PHGDH有望成为肿瘤治疗的新靶点。

3-磷酸甘油酸脱氢酶在宫颈鳞状细胞癌中高表达

目的:检测宫颈鳞状细胞癌组织和细胞中3-磷酸甘油酸脱氢酶(3-phosphoglycerate dehydrogenase,PHGDH)的表达水平,探讨其在肿瘤发生发展中的作用。方法:使用实时荧光定量PCR法和免疫组织化学法检测宫颈鳞状细胞癌和正常宫颈组织中PHGDH mRNA转录水平和蛋白翻译水平;利用实时荧光定量PCR法和Western blot法检测HeLa、Siha和Hacat细胞系中PHGDH mRNA转录水平和蛋白翻译水平。结果:与正常宫颈组织比较,宫颈鳞状细胞癌组织中PHGDH mRNA转录水平升高,PHGDH蛋白表达水平升高,其差异具有统计学意义(P<0.05);HeLa和Siha细胞系中PHGDH mRNA转录水平较Hacat细胞系高,PHGDH蛋白表达水平也较Hacat细胞系高,其差异具有统计学意义(P<0.05)。结论:宫颈鳞状细胞癌组织和细胞系中PHGDH高表达,提示PHGDH可能与促进宫颈鳞状细胞癌病变进展有关。

敲低3-磷酸甘油酸脱氢酶靶向能量代谢逆转骨肉瘤恶性生物学的行为

目的探讨敲低3-磷酸甘油酸脱氢酶(PHGDH)靶向能量代谢对人骨肉瘤143B细胞恶性生物学行为及成骨分化的影响。方法Real-time PCR及Western blotting检测PHGDH在成骨细胞hFOB1.19和不同恶性程度骨肉瘤细胞TE85、MG63、143B中的表达。采用脂质体转染法将短发夹RNA(shRNA)-PHGDH重组质粒转染至143B细胞中,Real-time PCR和Western blotting检测PHGDH的表达变化;结晶紫染色法、细胞计数法、CCK-8实验检测细胞增殖;划痕实验检测细胞平行迁移能力,Transwell实验检测细胞垂直迁移及侵袭能力;Annexin V-FITC/PI双染法、DAPI染色法检测细胞凋亡;碱性磷酸酶(ALP)染色和茜素红S染色检测成骨分化作用,Western blotting检测成骨分化指标Runt相关转录因子2(Runx2)、骨钙素(OC)的表达情况;Real-time PCR检测能量代谢相关基因葡萄糖转运蛋白1(GLUT1)、6-磷酸果糖激酶1(PFK1)、M2型丙酮酸激酶(PKM2)、乳酸脱氢酶A(LDHA)的表达,乳酸检测试剂盒测定乳酸分泌量,三磷酸腺苷(ATP)检测试剂盒检测ATP产生量。结果PHGDH在143B细胞中的表达明显高于在hFOB1.19、MG63和TE85细胞中(P<0.01);转染shRNA-PHGDH重组质粒使143B细胞中的PHGDH表达量降低(P<0.01)、增殖能力降低(P<0.01)、细胞迁移及侵袭能力减低(P<0.01)、凋亡率增高(P<0.01)、ALP染色阳性率增加(P<0.01)、茜素红染色阳性率增加(P<0.05)、Runx2(P<0.05)和OC的表达增高(P<0.01)、能量代谢相关基因(GLUT1、PFK1、PKM2、LDHA)的表达下调(P<0.01)、乳酸减少(P<0.01)、ATP增多(P<0.05)。结论敲低PHGDH可通过能量代谢抑制人骨肉瘤143B细胞增殖、迁移、侵袭,促进其凋亡,并促进其成骨分化。

3-磷酸甘油酸脱氢酶与肿瘤关系的研究进展

肿瘤细胞代谢与正常细胞不同,为了获得其快速增殖能力所需的物质和能量,肿瘤细胞能量代谢从有氧氧化转化为有氧酵解。3-磷酸甘油酸脱氢酶(PHGDH)作为一种参与丝氨酸从头合成的关键酶,在肿瘤细胞增殖、转移过程中发挥重要作用,沉默PHGDH基因可导致肿瘤细胞增殖减少,凋亡增加,耐药性减弱。PHGDH参与乳腺癌、肺癌、黑色素瘤等肿瘤的发生发展过程,其高表达与患者生存率下降、远端转移以及肿瘤耐药等相关。未来,PHGDH有望成为肿瘤治疗的新靶点。

3-磷酸甘油酸脱氢酶缺乏相关发育性癫痫性脑病1例

3-磷酸甘油酸脱氢酶(3-phosphoglycerate dehydrogenase deficiency,3-PHGDH)缺乏症是一种罕见的常染色体隐性遗传病,由Jaeken等于1996年首次报道,由PHGDH基因变异所致,为常染色体隐性遗传性疾病^([1])。

3-磷酸甘油酸脱氢酶及其抗体对自身免疫性肝炎的诊断意义

目的克隆D-3-磷酸甘油酸脱氢酶（Phgdh）的cDNA，构建重组表达质粒，纯化重组蛋白，初步探讨Phgdh抗体在自身免疫性肝炎诊断中的意义。方法血清蛋白质组学方法鉴定差异蛋白，构建重组表达载体，在大肠杆菌中表达，融合蛋白经NiNTA树脂柱亲和层析纯化，通过十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳及Western blot法进行免疫鉴定；应用表达蛋白建立间接酶联免疫吸附法，检测60名健康体检者、65例自身免疫性肝炎（AIH）、122例原发性胆汁性肝硬化、56例慢性乙型肝炎、117例慢性丙型肝炎患者血清中抗Phgdh抗体。组间率的比较用χ^2检验。结果经重组质粒测序和酶切鉴定结果证实，Phgdh目的基因已正确插入原核表达载体中，基因序列正确，符合表达框架。十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳检测表达产物在相对分子质量约6．0×10^4附近有一明显的蛋白表达带，Westernblot分析结果显示重组蛋白具有Phgdh抗原反应性。酶联免疫吸附法检测血清标本结果显示，AIH、原发性胆汁性肝硬化、慢性乙型肝炎、慢性丙型肝炎及正常人抗Phgdh抗体阳性检出率分别为66．15％、21．42％、12．50％、6．83％和3．30％。AIH组Phgdh自身抗体阳性率与疾病对照组及正常对照组比较，差异均具有统计学意义（P〈0．01）。结论本研究成功克隆了Phgdh的cDNA，并将其在大肠杆菌中成功表达。该抗体主要在AIH患者中检出，此抗体的检测有助于提高AIH的临床诊断水平。

结直肠癌组织PHGDH、APOL3表达及临床预后价值

目的研究结直肠癌(CRC)中3-磷酸甘油酸脱氢酶(PHGDH)、载脂蛋白L3(APOL3)表达,分析两者对CRC患者的预后评估价值。方法回顾性收集2018年3月—2021年2月首都医科大学大兴教学医院消化内科收治的CRC患者112例临床资料。采用实时荧光定量PCR(qPCR)和免疫组织化学法检测癌组织及癌旁组织中PHGDH、APOL3 mRNA和蛋白表达;Kaplan-Meier法分析PHGDH、APOL3 mRNA表达对CRC患者生存预后的影响;Cox回归分析CRC预后的影响因素;受试者工作特征(ROC)曲线评价PHGDH、APOL3 mRNA表达水平对CRC患者预后的评估价值。结果CRC患者癌组织中PHGDH mRNA相对表达量高于癌旁组织,APOL3 mRNA相对表达量低于癌旁组织(t/P=52.982/<0.001,35.679/<0.001);CRC患者癌组织中PHGDH、APOL3蛋白阳性率分别为78.10%(90/112)、8.57%(10/112),与癌旁组织的7.62%(8/112)、76.19%(88/112)比较,差异有统计学意义(χ^(2)/P=123.722/<0.001,110.367/<0.001);TNM分期Ⅲ期、有淋巴结转移的CRC癌组织中PHGDH mRNA表达水平高于TNM分期Ⅰ~Ⅱ期、无淋巴结转移,而APOL3 mRNA表达水平低于TNM分期Ⅰ~Ⅱ期、无淋巴结转移(PHGDH:t/P=52.268/<0.001,51.315/<0.001;APOL3:t/P=15.873/<0.001,14.769/<0.001)。PHGDH mRNA高表达组3年总生存率为50.00%(26/52),低于低表达组的73.33%(44/60)(Log rankχ^(2)=4.169,P=0.041);APOL3 mRNA低表达组3年总生存率为46.30%(25/54),低于高表达组的77.59%(45/58)(Log rankχ^(2)=10.650,P=0.001)。TNM分期Ⅲ期、淋巴结转移、PHGDH mRNA高为影响CRC患者预后的独立危险因素[OR(95%CI)=1.465(1.172~1.832),1.501(1.159~1.944),1.384(1.088~1.761)],APOL3 mRNA高为独立保护因素[OR(95%CI)=0.775(0.617~0.924)];PHGDH、APOL3 mRNA表达水平及二者联合评估CRC患者预后的曲线下面积(AUC)分别为0.830、0.816、0.922,二者联合的AUC大于PHGDH、APOL3 mRNA表达水平单独评估(Z=4.482、4.130,P均<0.001)。结论CRC中PHGDH表达上调,APOL3表达下调,在CRC中均发挥重要的促癌作用,联合检测PHGDH、APOL3的表达有助于评估CRC的预后。

甘油醛-3-磷酸脱氢酶——神经变性疾病发病机制及药物治疗的新热点

甘油醛-3-磷酸脱氢酶（glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase，GAPDH）是糖酵解途径中的一个关键酶，催化3-磷酸甘油醛生成1，3-二磷酸甘油酸。体内各种组织或细胞的能量代谢均需GAPDH参与。长久以来，人们一直将其视为保守和稳定表达的管家基因，并用作定量评估其他基因及基因编码产物表达水平的内参照。然而，GAPDH并非在所有情况下都是稳定表达的，在某些特定病理状态下，它在不同器官或组织的表达水平会发生不同程度的改变。近些年的研究揭示GAPDH很可能通过诱导神经元凋亡参与了神经变性疾病的发生，许多治疗神经变性疾病的药物其作用也与GAPDH有关。

MiR-149通过PHGDH对慢性髓系白血病细胞葡萄糖代谢的影响

目的探讨miR-149-5p,3-磷酸甘油酸脱氢酶(3-Phosphoglycerate dehydrogenase,PHGDH)与慢性髓细胞白血病(chronic myeloid leukemia,CML)伊马替尼(Imatinib,IM)耐药和糖酵解活性的相关性。方法检测CML细胞K562、伊马替尼耐药的CML细胞株K562G中miR-149-5p、PHGDH的表达情况及葡萄糖摄取量。运用慢病毒转染技术在K562G细胞中获得过表达miR-149-5p的149G和对照组149N细胞。检测149G、149N细胞中miR-149-5p、PHGDH的表达情况及葡萄糖摄取量。基于液相-串联质谱联用(LC-MS/MS)技术进行靶向代谢组学分析。结果IM耐药的CML细胞株K562G中miR-149的表达水平明显低于IM敏感的CML细胞株K562(*P<0.05),而PHGDH的表达在K562G细胞中明显升高(*P<0.05)。与149N细胞相比,149G细胞中miR-149的表达水平明显升高(*P<0.05),而PHGDH的表达显著降低(*P<0.05)。同时,K562G细胞中葡萄糖摄取量较K562细胞明显升高(*P<0.05)。与149N细胞相比,149G细胞中葡萄糖摄取量明显降低(*P<0.05)。代谢组学分析,K562与K562G相比有9种代谢物水平有明显差异(*P<0.05)。结论miR-149-5p表达与CML细胞糖代谢重编程相关,过表达miR-149-5p可抑制下游靶基因PHGDH的表达。miR-149-5p靶向PHGDH通路可以抑制CML细胞的糖酵解活性。

高硒干扰肝细胞内糖与一碳单位代谢的体外研究

目的 探究高硒环境对人正常肝细胞内硒蛋白以及糖代谢和一碳单位代谢相关酶表达的影响。方法 用10个剂量浓度(0、0.001、0.005、0.01、0.05、0.1、0.5、1、5和10μmol/L)的硒代蛋氨酸(SeMet)对人正常肝细胞干预48 h后,采用免疫印迹法检测细胞内硒蛋白P1(SELENOP1)、谷胱甘肽过氧化物酶1(glutathione peroxidase 1,GPX1)、糖酵解旁路关键酶3-磷酸甘油酸脱氢酶(phosphoglycerate dehydrogenase, PHGDH)以及一碳代谢通路关键酶丝氨酸羟甲基转移酶1(serine hydroxymethyltransferase 1,SHMT1)、亚甲基四氢叶酸还原酶(methylenetetrahydrofolate reductase, MTHFR)和蛋氨酸合成酶(methionine synthase, MS)的表达。结果 SeMet在0~10μmol/L范围内,硒蛋白(GPX1和SELENOP1)的表达先升高后降低,GPX1和SELENOP1的拐点分别在0.5和0.1μmol/L;丝氨酸从头合成通路关键酶(PHGDH)和叶酸循环代谢酶(SHMT1、MTHFR和MS)表达与硒蛋白类似,同样先升高后降低,但拐点有差异,分别为0.1μmol/L(PHGDH和SHMT1)和0.01μmol/L(MTHFR和MS)。结论 高硒环境下,细胞内因硒蛋白过表达而导致丝氨酸供应不足,被迫启用糖酵解旁路——丝氨酸从头合成通路合成内源性的丝氨酸,从而引起糖代谢异常。

罗汉果GAPDH基因的克隆及其在基因表达分析中的应用

目的克隆罗汉果甘油酸-3-磷酸脱氢酶(glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase,GAPDH,EC 1.2.1.12)基因,分析其在基因表达定量研究中其作为内部参照基因的可行性。方法采用同源克隆和cDNA末端快速克隆技术,以罗汉果cDNA为模板扩增GAPDH基因的保守区片段。结果获得了罗汉果GAPDH保守区序列cDNA,命名为SgGAPDH(GenBank注册号:KC410810),序列长度为627 bp,编码209个氨基酸的多肽。系统发育分析表明,SgGAPDH属于植物甘油酸-3-磷酸脱氢酶家族。半定量PCR分析表明罗汉果GAPDH基因在不同组织中表达很稳定。以其作为内部参照基因,采用实时荧光定量PCR(Real-time PCR)研究了异戊烯基焦磷酸异构酶(Isopentenyl-diphosphate delta isomerase)的组织表达规律。结果显示SgGAPDH具有良好的扩增效果和重现性。结论首次克隆了罗汉果GAPDH基因,明确了该序列在基因表达分析中的内参照作用,为罗汉果甜苷生物合成基因的研究提供了条件。