水稻蜡质合成相关基因OsCER4自身启动子驱动的反义RNA转化植株获得

水稻OsCER4基因编码脂肪醛脱羧酶,与拟南芥CER1基因高度同源,是否参与植物表面蜡质合成尚不清楚,为了探讨其功能,扩增了OsCER4基因起始密码子ATG上游约2 kb的序列作为该基因的启动子,以常规技术将启动子和OsCER4基因反义片段克隆到pCAMBIA双元载体1380中,采用农杆菌介导法转化粳稻品种中花11,并进行了转化苗OsCER4蛋白的表达量变化分析.结果表明,成功构建了由OsCER4自身启动子驱动的反义RNA载体,并通过农杆菌介导法成功转入水稻中花11中,多数OsCER4基因反义转化植株为阳性转化植株,后代分离比符合3∶1,反义RNA转化植株在蛋白水平上的表达量下降.

肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体对乙型肝炎病毒启动子的调控作用

目的肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)能够诱导乙型肝炎病毒(HBV)感染细胞发生凋亡,但抑制病毒复制的具体机制不清楚,研究通过非凋亡浓度TRAIL对4种HBV启动子调控作用的研究,探讨HBV复制的可能调控机制。方法采用噻唑蓝法和末端脱氧核苷酸转移酶介导的dUTP缺口末端标记荧光法,检测不同浓度TRAIL作用后人肝癌细胞株HepG2的存活率。使用HBV的4种启动子重组质粒,4种启动子分别控制乙肝表面抗原、X抗原、核心抗原、PS1抗原基因的转录与表达。将受HBV上述4种启动子调控的荧光素酶报道基因表达质粒(SpLUC、XpLUC、CpLUC、PS1pLUC)转染HepG2细胞,6 h后按300、30、3 ng/mL浓度梯度加入可溶性TRAIL,采用双荧光报道基因分析系统检测细胞化学发光值,计算相对荧光素酶活性。结果 300 ng/mL是可溶性TRAIL诱导HepG2细胞凋亡的浓度阈值。采用远低于凋亡阈值浓度(30 ng/mL)的TRAIL可明显上调对HBV的Sp启动子活性(P<0.001),另3种质粒的相对荧光素酶活性在加入TRAIL后改变不大。结论 TRAIL仅对HBV的Sp启动子活性具有上调作用,其生物学意义值得进一步研究。