自身抗原SSB/La抗原优势表位分析

目的 :探讨自身抗原La的抗原优势表位 ,为疾病机制的研究提供依据。方法 :根据计算机软件进行的蛋白质序列结构分析 ,采用PCR法克隆自身抗原La多肽片段的cDNA ,定向插入表达载体PGEX 2T ,并且导入大肠杆菌中表达重组融合蛋白 ,用GST亲合层析柱进行纯化 ,经免疫印迹法与患者阳性血清进行反应。结果 :SSB/La的抗原优势表位主要存在于1～ 2 8,80～ 10 7,10 8～ 188,2 83～ 338位。不同病人在不同病程的La优势表位有所不同。结论 :抗原驱动机制在自身免疫疾病的发病中起重要作用 。

SSB/La蛋白在HEK293F细胞中的高效表达、纯化及初步应用

目的天然SSB/La抗原存在难获取、成本高等问题,故使用HEK293F细胞尝试表达重组SSB/La蛋白。方法调取人SSB/La序列并进行基因密码子优化和合成,亚克隆至哺乳动物重组表达质粒后转染HEK293F细胞,完成培养后组合使用DEAE离子交换层析和Ni亲和层析纯化目的蛋白。结果重组SSB/La蛋白在HEK293F细胞中成功表达,随后纯化获得了高纯度的重组SSB/La蛋白,且进一步通过抗SSB抗体检测试剂盒初步证实了重组SSB/La蛋白具有优良的性能。结论成功实现了SSB/La蛋白制备,为其工业化生产及商业化应用奠定坚实的理论基础。

免疫亲和层析在纯化可提取性核抗原SSB/La中的应用

生化提纯高纯度有生物活性的蛋白质一直是一项艰巨的工作.主要综述了免疫亲和层析的纯化特点,以及用此方法在分离纯化具有临床诊断价值的可提取性核抗原SSB La中的有效应用.

新生儿红斑狼疮与抗Ro/SSA和抗La/SSB抗体阳性2例

报告了 2例新生儿红斑狼疮。 1例出生后发现有心脏房室传导阻滞和室间隔缺损 ,脐血检测有抗Ro/SSA和抗U1RNP抗体 ,母亲为SLE患者。 1例出生后 1个月于面部、颈部及躯干上部出现环形红斑样皮疹 ,脐血检测有抗Ro/SSA和抗La/SSB抗体 ,母亲为SCLE患者。 2例患儿皮疹和心脏传导阻滞于生后 3个月内消退 ,自身抗体于生后 6个月内消退 ,随访 7年和 1 5年后均健康。

自身抗原SS-B/La序列结构分析及抗原性预测

目的 :通过计算机分析SS B/La的氨基酸序列及可能的抗原性位点。方法 :将自身抗原SS B/La的氨基酸序列输入“蛋白质结构预测”软件包 ,分析蛋白质分子亲水性、表面可及性、柔性 ,模拟其二级结构 ,预测其主要抗原位点。结果 :SS B/La的氨基酸 80～ 10 0位、2 2 0～ 2 40位和 30 0～ 340位可能具有较强的抗原性。结论 :通过计算机分析SS B/La的抗原性位点 ,为进一步确定SS B/La的抗原优势表位 。

利用重组抗原检测抗SSB自身抗体及其临床意义

目的：利用重组抗原检测自身免疫疾病患者血清中抗ＳＳＢ自身抗体并探讨其临床意义。方法：应用ＤＮＡ重组技术构建ＳＳＢ基因工程菌，并表达 ＳＳＢ融合蛋白、经 ＧＳＴ柱层析法纯化后，分别经蛋白质印迹（ＷＢＴ）法和酶联免疫吸附（ＥＬＩＳＡ）法检测２０份干燥综合征患者、６０份系统性红斑狼疮患者和３０份正常人血清。结果：经常规试剂盒检测为ＳＳＢ（＋）的２４份患者血清，利用重组抗原检测均阳性；经常规试剂盒检测为ＳＳＢ（－）的５６份患者血清，利用重组抗原检测有１１份阳性（ＷＢＴ法４份，ＥＬＩＳＡ法７份）。结论：利用重组抗原检测抗ＳＳＢ自身抗体敏感性较高。利用重组抗原对自身抗体进行定性、定量分析有助于对自身免疫疾病的诊断。

利用酵母重组SSB抗原建立间接ELISA法检测抗SSB抗体的初步研究

目的:利用纯化的酵母重组SSB抗原建立间接ELISA法,用于检测抗SSB抗体。方法:将毕赤酵母菌重组表达的SSB抗原包被于聚苯乙烯微量反应板,与待检血清中抗SSB抗体反应后,经洗涤,再加入辣根过氧化物酶标记羊抗人IgG与之结合,然后用TMB作用显色。结果:本法的敏感性和特异性分别为93.33%和100%,与欧蒙斑点酶免疫法检测结果之间的符合率为94.87%。结论:本法敏感性和特异性均较高,具有很好的临床诊断应用前景。

人La自身抗原蛋白与肝炎病毒的关系

0 引言 乙型和丙型肝炎呈全球分布,目前全世界有1.7亿人感染丙型肝炎病毒(HCV),3.5亿人感染乙型肝炎病毒(HBV),其中相当一部分感染者发展为慢性肝炎,少数还发展成肝硬化甚至肝癌,对人类健康造成极大危害,至今缺乏有效的控制.

抗La/SSB抗体在系统性红斑狼疮患者中的临床意义探讨

目的了解抗La/SSB抗体在系统性红斑狼疮(SLE)患者中的临床意义及与抗La/SSB抗体相关的影响因素。方法纳入德阳市人民医院195例系统性红斑狼疮患者,收集受试者临床资料和检测指标,分析抗La/SSB抗体阳性患者(SLE-SSB组)与抗La/SSB抗体阴性患者(SLE组)上述资料分布差异及影响抗La/SSB抗体的独立相关因素。结果两组性别、抗核抗体(ANA)滴度、抗双链DNA抗体滴度、抗干燥综合征A抗体百分率比较,差异有统计学意义(P<0.05)。两组中度及以上贫血百分率比较差异有统计学意义(P<0.05)。SLE-SSB组胱抑素C和免疫球蛋白G水平高于SLE组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论抗La/SSB抗体阳性的SLE患者器官/系统受累比较少见,临床损害主要以中度及以上贫血为主要表现,实验室检查方面表现为高滴度的ANA和免疫球蛋白G,值得临床医师的关注。

羊种布氏杆菌NN1202和LA1105株UgpB蛋白B细胞抗原表位分析

为了预测羊种布氏杆菌NN1202和LA1105株Ugp B蛋白B细胞抗原表位情况,试验应用PCR方法对羊种布氏杆菌NN1202和LA1105株的Ugp B基因进行扩增、克隆和测序,并应用Garnier-Robson方法和Chou-Fasman方法分析Ugp B蛋白的α-螺旋、β-折叠、转角区域和无规卷曲及应用Kyte-Doolittle方法、Karplus-Schulz方法、Emini方法和Jameson-Wolf方法分析蛋白的氨基酸亲水性、蛋白柔性区域、溶剂表面可能性和抗原指数。结果表明：NN1202和LA1105株的Ugp B蛋白在布氏杆菌种间高度保守,Ugp B蛋白的36∽41、48∽57、64∽72、78∽85、115∽19、131∽138、159∽174、180∽191、209∽221、248∽258、273∽280、293∽307、354∽372、378∽386、409∽419位氨基酸序列区域可能是优势B细胞抗原表位。说明Ugp B蛋白序列存在合成肽疫苗的靶位点。

HCV协同感染因子La自身抗原、33kDa人类囊相关膜蛋白和真核细胞翻译起始因子第三亚单位特异性siRNAs的筛选

目的筛选Huh7细胞内La自身抗原、33kDa人类囊相关膜蛋白(hVAP-33)和真核细胞翻译起始因子第三亚单位(eIF2Bgamma)的特异性siRNAs。方法根据Genebank中的序列设计3种基因的特异性引物,在Huh7细胞中通过荧光定量PCR方法检测上述3种分子;根据siRNA设计原则针对每种基因设计合成3条siRNAs;分别将不同序列siRNA转染Huh7细胞,利用荧光定量PCR方法并计算ΔΔCT值筛选出针对每种基因抑制效率最高的一条siRNA。结果荧光定量PCR方法检测到了上述3种分子的存在;每种基因的3条不同siRNA对相应基因具有不同程度的沉默作用,通过ΔΔCT值的计算找出其中效率最高的一条。结论 Huh7细胞内可以检测到La自身抗原、hVAP-33和eIF2Bgamma基因,其特异性siRNAs可以沉默相应基因表达。

人脾与猪脾SSA和SSB抗原的比较及其临床应用

目的:探讨以猪脾取代人脾为抗原检测SSA和SSB抗体的可能性。 方法:以超声粉碎破核及硫酸铵沉淀法经透析和冷冻制取猪及人脾抗原,ID、CIE和SDSPACE呈41—43kd,无SSA抗原成份。CIE测患者血清猪和人脾符合率为77％。 结论:猪脾可取代人脾测SSB抗体而不能测SSA抗体。

抗SSA60、SSA52、SSB/La抗体及抗着丝点B抗体在老年性干燥综合征干眼症诊断中的意义

目的探讨抗SSA60、SSA52、SSB/La抗体及抗着丝点B抗体在老年性干燥综合征干眼症诊断中的意义。方法选取2015年7月至2019年11月在我院风湿免疫科和眼科就诊的老年性干燥综合症患者157例,在确诊为干眼的患者中采用免疫印迹法和双扩散法检测抗SSA60、SSA52、SSB/La抗体及抗着丝点B抗体的表达情况。比较泪液分泌时间、泪膜破裂时间、角膜荧光素染色评分和干眼评分四个指标,分析其意义。结果老年性干燥综合症患者中,有79例为干眼症,阳性率为50.3%。其中抗SSA60抗体、抗SSA52抗体、抗SSB/La抗体,抗着丝点B抗体阳性比例分别为52.2%,占52.2%,占33.1%,占11.4%。抗SSA60抗体、抗SSA52抗体、抗SSB/La抗体阳性和阴性患者在老年性干燥综合征患者干眼症中比较都有统计学意义(P<0.01),抗着丝点B抗体阳性和阴性患者在老年性干燥综合征患者的干眼症中比较有统计学意义(P<0.05)。抗SSA60抗体阳性、抗SSA52抗体阳性的患者相对于阴性患者来说,出现泪液分泌时间和泪膜破裂时间短、角膜荧光素染色评分和干眼评分高,两组患者差异均有统计学意义(P<0.001)。抗SSB/La抗体阳性的患者相对于阴性患者来说,出现泪液分泌时间和泪膜破裂时间短、角膜荧光素染色评分和干眼评分高,两组患者差异均有统计学意义(P<0.01)。抗着丝点B抗体阳性的患者相对于阴性患者来说,出现泪液分泌时间短,两组患者差异有统计学意义(P<0.05)。两组患者泪膜破裂时间、角膜荧光素染色评分、干眼评分差异无统计学意义(P>0.05)。结论抗SSA60、SSA52、SSB/La抗体及抗着丝点B在老年性干燥综合征中干眼症患者中被检测比例高,4种抗体的联合检测能提示干眼症的发生,其中抗SSA60抗体、抗SSA52抗体、抗SSB/La抗体可能意义更大。

弹性成像结合抗Ro/SSA抗体、抗La/SSB抗体诊断原发性干燥综合征的Logistic回归分析

目的应用Logistic回归方程评价弹性成像结合抗Ro/SSA抗体、抗La/SSB抗体在原发性干燥综合征(PSS)诊断中的价值。方法对83例患者双侧腮腺及颌下腺行常规超声检查及弹性成像检查,同时检测患者抗Ro/SSA抗体、抗La/SSB抗体,并纳入唇腺活检病理结果。建立以超声检查特征、抗体及病理结果为变量的Logistic回归模型。结果运用前进法二分类Logistic回归分析,筛选出在PSS诊断中有统计学意义的特征变量。包括抗Ro/SSA抗体、抗La/SSB抗体及弹性应变率(SR比值)。所建立的回归模型对PSS预报的正确率为93.2%。结论弹性成像结合抗Ro/SSA抗体、抗La/SSB抗体在PSS的诊断中有较高价值,所建立的Logistic回归模型具有较高的诊断准确度。

抗生素和保存条件对新城疫La Sota抗原液效价的影响

利用同一批次的新城疫La Sota抗原液分别加入2种抗生素和两种用量,作用一定时间后每隔1周测定其效价(HA和EID50);同时,将这一批次抗原液分别放置在风冷冷库中和普通冷冻冰柜中保存;另外,将这一批抗原液不加任何抗生素条件下放置在风冷冷库中每隔1周测定其效价(HA和EID50)。结果表明:无论是抗生素的种类、用量还是冷冻保存的条件都会对其效价产生一定程度的影响。

低毒力新城疫抗原抗体复合物疫苗研究

用低毒力新城疫病毒La Sota株作为复合物疫苗抗原,与新城疫特异性中和抗体混匀配制了不同比例的8种复合物疫苗,用1日龄SPF雏鸡进行免疫效果试验。试验1组～8组分别免疫复合物疫苗1～8,试验9组免疫常规新城疫活疫苗,试验10组为空白对照组。免疫后3周采血测定HI抗体效价,同时用新城疫强毒北京株F48E9攻击。试验1组～10组HI抗体效价分别为23.6、23.1、22.3、24.13、24.85、25.0、25.0、24.5、25.1、22.14。攻毒后1组～10组鸡的死亡率分别为30%、50%、90%、10%、0%、0%、0%、0%、0%、100%。结果表明,低毒力新城疫病毒LaSota株与特异性抗体制备的复合物疫苗,可以减轻疫苗的毒副作用,提高疫苗的安全性,其免疫效果比常规活苗好。

人La多肽融合蛋白在E.coli中的表达

目的 构建在E .coli中表达人La多肽的质粒。方法以人脾cDNA为模板 ,通过PCR获得La多肽 (全长 )的DNA片段。将此片段利用双酶切定向克隆到MBP(麦芽糖结合蛋白 )融合系统的载体pMALTM c中 ,表达可溶性融合蛋白 ,并通过亲和层析予以纯化。结果免疫印迹实验 (IBT)证明 ,表达的融合蛋白具有La抗原多肽的特异性 ,而敏感性超过生化制备的ENA制品。

新城疫病毒La Sota株F蛋白结构与部分功能区的预测

以新城疫病毒(Newcastlediseace virus,NDV)La sota F蛋白的氨基酸序列为基础,采用Chou-Fasman法、Garnier-Robson法、Karplus-Schulz法与Kyte-Doolittle法、Emini法和Jameson-Wolf法分别预测蛋白质的二级结构和B细胞抗原表位。预测结果表明,NDV La Sota F蛋白结构较为复杂,含有较多的α-螺旋、β-折叠区,转角和无规则卷曲等有柔韧性区域。此外,应用Tmap法预测了NDV La sota F蛋白的跨膜区域,通过同源建模的方法预测了该蛋白的三维空间结构,并比较了强弱毒株裂解位点处空间结构的不同。为进一步通过试验方法确定其蛋白的B细胞表位和从结构出发了解其生物学功能,提供了理论依据。