臭壳虫含药血清诱导人肺腺癌A549细胞凋亡的研究

目的探索臭壳虫(CKC)含药血清对人肺鳞癌A549细胞凋亡的影响。方法选取40只雄性SD大鼠,按体重随机分为4组:生理盐水对照组(NS)、臭壳虫低剂量(CKCL)组、臭壳虫中剂量(CKCM)组、臭壳虫高剂量(CKCH)组,分别给予大鼠相应的CKCL、CKCM、CLCH浓缩水煎剂进行灌胃,NS组给予等量生理盐水灌胃,连续5d。采用血清药理学方法制备含药血清;体外培养人肺腺癌A549细胞。使用流式细胞(FCM)Annen V-FITC/PI标记法检测A549细胞的凋亡率。结果臭壳虫含药血清能够诱导A549细胞的凋亡,且凋亡率随着剂量升高而上升,并和时间呈正相关性。臭壳虫高剂量组的作用最强,作用72h后,细胞凋亡率可达21.9%。结论臭壳虫含药血清能够诱导人肺腺癌A549细胞发生凋亡。

回药臭壳虫含药血清对人肺腺癌A549细胞生长增殖的影响

目的:探讨回药臭壳虫(CKC)含药血清对人肺鳞癌A549细胞生长的抑制作用及对细胞形态的影响。方法:将40只雄性SD大鼠按体重随机分为生理盐水对照组(NS)、回药臭壳虫低剂量组(CKCL)、回药臭壳虫中剂量组(CKCM)、回药臭壳虫高剂量组(CKCH)各10只,分别给予相应的CKCL、CKCM、CLCH浓缩水煎剂灌胃,NS组给予等量生理盐水灌胃,连续5天。采用血清药理学方法,制备含药血清;体外培养人肺腺癌A549细胞,将细胞分为实验组与对照组,实验组分别给予10%、20%浓度的相应组大鼠含药血清,对照组给予相同浓度对照组大鼠血清,培养24h、48h、72h后观察细胞形态变化,采用MTT法检测不同浓度含药血清对A549细胞的生长抑制率。结果:光镜下观察发现,各浓度臭壳虫含药血清组细胞形态不规则,胞膜出现不同程度的回缩,胞核固缩,细胞间距增大,其中以20%浓度臭壳虫含药血清高剂量组作用72h最为明显。MTT法检测细胞生长抑制率发现,各实验组不同浓度抑制率均高于对照组(P<0.05);回药臭壳虫高剂量组72h抑制率高于低剂量组(P<0.05);回药臭壳虫各剂量组72h抑制率高于24h抑制率(P<0.05)。结论:回药臭壳虫含药血清可抑制A549细胞的生长增殖。

臭壳虫化学成分和药理作用研究概况及质量标志物的预测分析

臭壳虫为药食同用的传统虫类药,具有败火解毒、软坚散结、消肿止痛、息风定惊等功效,因其在抗肿瘤方面展现出良好的药理作用而备受关注。近年来,国内外学者对臭壳虫各方面的研究逐渐扩大和更新,结果显示臭壳虫还具有抗菌、抗炎、抗氧化、调节免疫、保肝、镇痛、抑制瘢痕增生、改善贫血等药理作用,具有广泛的应用前景。本研究通过对臭壳虫的化学成分和药理作用进行系统总结,以中药质量标志物(Q-Marker)为指导,从化学成分的特有性、有效性、可测性及临床药效研究等方面对臭壳虫的质量标志物进行预测分析,建议将原儿茶酸、羟基酪醇、Rynchopeterine A~I、Blapsins A和Blapsins B等特征性酚类成分以及十三烷、3-甲基丁酸等成分作为臭壳虫质量标志物的备选物质,为臭壳虫质量评价体系的建立提供依据,以期为臭壳虫药材的进一步深入研究及合理利用提供参考。

基于Wnt/β-catenin信号通路研究臭壳虫与环磷酰胺联合用药对肺癌细胞增殖和凋亡的影响及机制

研究臭壳虫与环磷酰胺单独以及联合用药对肺癌细胞增殖和凋亡的影响及作用机制。选择SD大鼠制备臭壳虫和环磷酰胺含药血清与空白血清,采用细胞增殖与活性检测细胞计数试剂(cell counting kit-8,CCK-8)法检测臭壳虫与环磷酰胺含药血清单独以及联合用药对肺癌细胞株A549和Lewis细胞增殖的影响,金式公式法评价药物联用效应,根据评价结果选择合适的药物浓度与肺癌细胞株用于后续实验。实验分组为对照组、臭壳虫组、环磷酰胺组、联合组、臭壳虫+Wnt/β-catenin通路激动剂氯化锂(LiCl)组,采用免疫细胞化学法检测不同组别药物干预后Lewis细胞中增殖相关蛋白的表达情况;流式细胞术检测细胞周期变化及凋亡情况;同时采用蛋白免疫印迹法检测细胞中PCNA、cyclinD1、Bcl-2、Bax和Wnt/β-catenin信号通路相关蛋白的表达水平。结果显示,臭壳虫与环磷酰胺单独及联合用药均能显著抑制A549和Lewis肺癌细胞增殖,与单独用药相比,联合用药能够进一步升高对细胞增殖的抑制率,且通过金氏公式评价得知臭壳虫与环磷酰胺联合用药具有协同效应。与对照组相比,臭壳虫组、环磷酰胺组及联合组Lewis细胞G_(0)/G_(1)期比例、凋亡率及Bax蛋白表达均显著升高,PCNA、cyclinD1、Bcl-2、Wnt1及β-catenin蛋白表达均显著降低;与环磷酰胺组相比,联合组细胞G_(0)/G_(1)期比例、凋亡率及Bax蛋白表达进一步增加,PCNA、cyclinD1、Bcl-2、Wnt1及β-catenin蛋白表达进一步降低;与臭壳虫组相比,臭壳虫+LiCl组细胞G_(0)/G_(1)期比例、凋亡率及Bax蛋白表达显著降低,PCNA、cyclinD1、Bcl-2、Wnt1及β-catenin蛋白表达显著升高。结果表明,臭壳虫可能通过抑制Wnt/β-catenin信号通路抑制肺癌细胞增殖,阻滞细胞周期,并诱导其凋亡,且与环磷酰胺联合用药具有协同效应。

基于网络药理学和体内外实验研究臭壳虫对非小细胞肺癌增殖、迁移和侵袭的影响

基于网络药理学、分子对接技术和体内外实验研究臭壳虫抗非小细胞肺癌的分子作用机制。文献检索收集臭壳虫成分,通过TCMSP数据库筛选臭壳虫的活性成分,利用PharmMapper数据库获取臭壳虫活性成分的靶点;检索DrugBank、Gene-Cards、OMIM、TTD、PharmGKB数据库中非小细胞肺癌相关的疾病靶点蛋白,再通过绘制韦恩图取臭壳虫活性成分靶点和非小细胞肺癌疾病靶点的交集;通过Cytoscape软件构建“药物成分-靶点”网络和蛋白-蛋白互作(PPI)图,并根据Centiscape插件进行关键靶点的筛选;利用DAVID数据库对上述关键靶点进行GO和KEGG富集分析;采用AutoDock软件对臭壳虫活性成分与其对应的关键靶点进行分子对接验证。结果共获取臭壳虫抗非小细胞肺癌的31种活性成分及72个潜在靶点,11个关键靶点。分子对接结果表明,臭壳虫活性成分与关键靶点之间具有较好的结合活性。制备臭壳虫含药血清,体外培养人肺腺癌A549细胞株,通过CCK-8法检测不同干预时间的空白对照组、不同浓度臭壳虫含药血清组、顺铂组和联合用药组(臭壳虫含药血清+顺铂)对人肺腺癌A549细胞生长的抑制率;通过细胞划痕实验和细胞迁移侵袭实验检测A549细胞迁移和侵袭能力;通过Western blot法检测A549细胞中Bax、Bcl-2、caspase-3、CDC42、SRC、VEGF蛋白表达水平。C57BL/6小鼠皮下接种Lewis肺腺癌细胞,按平均瘤体随机分为模型对照组、臭壳虫组、顺铂组、联合用药组(臭壳虫+顺铂)4组,每组12只;治疗期间隔天监测记录小鼠体质量和肿瘤的长径(a)与短径(b),计算肿瘤体积(0.52ab^(2)),连续用药14 d后处死小鼠,收集肿瘤组织、脾脏及胸腺称重并计算抑瘤率和免疫器官指数;采用HE染色观察各组肿瘤的组织形态,IHC法检测各组肿瘤组织中Bax、Bcl-2、caspase-3、CDC42、SRC、VEGF蛋白阳性表达情况。体内外实验结果表明,臭壳虫组及联合用药组能通过调节Bax、Bcl-2、caspase-3、CDC42、SRC、VEGF蛋白的表达水平,有效抑制人肺腺癌A549细胞和小鼠肺腺癌Lewis细胞的增殖、迁移和侵袭,从多方面起到抗非小细胞肺癌的作用。