臭氧后处理对大鼠肾脏缺血/再灌注后Smad-7表达的影响

目的 探讨臭氧后处理对大鼠肾脏缺血/再灌注损伤（IRI）后Smad-7表达的影响。方法采用随机数字表法将24只SD大鼠分为3组,假手术组（n=8）、缺血/再灌注组（n=8）和臭氧后处理组（n=8）。假手术组的大鼠在切除右肾后即缝合腹壁;缺血/再灌注组的大鼠用无创伤血管夹夹闭左肾动、静脉45 min后开放血管夹进行再灌注;臭氧后处理组：再灌注后10 d内,每日对大鼠经直肠吹入氧气和臭氧的混合气体2.5-3.0 mL[臭氧浓度为50 mg/L,0.5 mg/（kg·d）],余同缺血/再灌注组。全自动生化分析仪检测大鼠血清肌酐和尿素氮,组织病理学检查观察大鼠肾组织的病理情况改变,蛋白免疫印迹法检测各组大鼠Smad-7的表达变化。结果 臭氧后处理的血清尿素氮、肌酐值显著低于缺血再灌注组[（19.36±7.24）mmol/L vs（31.63±13.14）mmol/L、（79.27±19.93）μmol/L vs（151.36±27.26）μmol/L,P〈0.05]且臭氧后处理组的肾组织病理学改变较缺血/再灌注组轻,仅部分刷状缘消失、部分管腔明显扩张、偶见管型。蛋白免疫印迹实验结果显示,与假手术组相比,IRI组Smad-7的表达量明显降低,而臭氧后处理可以明显上调Smad-7的表达,差异有统计学意义（P〈0.05）。结论 臭氧后处理可能通过上调Smad-7的表达而发挥肾脏保护作用。

臭氧后处理对大鼠肾脏HIF-1α的表达及细胞凋亡的影响

目的:探讨臭氧后处理对大鼠肾脏缺血再灌注损伤(IRI)中缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)及肾小管上皮细胞凋亡的影响。方法:随机将36只SD大鼠分为假手术组、缺血再灌注组和臭氧后处理组,每组12只,进行如下实验:①假手术组:切除大鼠右肾后缝合腹壁;②缺血再灌注组:切除大鼠右肾后,用无创伤血管夹夹闭左肾动、静脉45min进行缺血,然后开放血管夹进行再灌注;③臭氧后处理组:手术步骤与缺血再灌注组相同,但在术后10d内,每天对该组大鼠经直肠吹入氧气和臭氧的混合气体2.5-3.0ml[臭氧浓度为50mg/L,0.5mg/(kg·d)]。全自动生化分析仪检测大鼠血清肌酐和尿素氮,观察大鼠肾组织的病理改变和细胞凋亡情况,蛋白免疫印迹法(Western blot)检测各组大鼠HIF-1α的含量。结果:与假手术组相比,缺血再灌注组和臭氧后处理组血清尿素氮、肌酐水平均显著升高,而缺血再灌注组的尿素氮、肌酐表达量又明显高于臭氧后处理组。臭氧后处理组的肾组织病理学改变较缺血再灌注组轻。假手术组、缺血再灌注组、缺血后处理组大鼠肾组织的细胞凋亡指数分别为4.32±1.84、39.28±4.06和27.42±2.83,3组间比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。Western Blot结果显示,在假手术组、缺氧再灌注组和臭氧后处理组中HIF-1α表达量依次增加,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:臭氧后处理可能通过显著增加HIF-1α的表达而抑制肾小管上皮细胞的凋亡,从而发挥肾脏保护作用。

臭氧氧化后处理对肾脏缺血再灌注损伤的作用

目的研究臭氧O_3氧化后处理对大鼠肾脏缺血再灌注所致肾脏慢性纤维化的作用及相关机制。方法将72例SD大鼠随机分为4组:假手术组(S组)、单纯缺血再灌注组(I/R组)、O_3氧化后处理组(I/R+O_3组)、氧气O_2后处理组(I/R+O_2组),每组4只。每组在模型复制成功后2周检测血清肌酐(Scr)和血浆尿素氮(BUN),2和10周取肾脏标本,进行苏木精-伊红染色法染色、Masson染色,以及免疫组织化学法检测转化生长因子β1(TGF-β_1)、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的表达。结果术后2周各组的血清Scr、血浆BUN基本恢复到正常范围,两组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。术后10周Masson染色显示,肾纤维化程度,其他3组较S组重(P<0.05),I/R+O_3组较I/R组、I/R+O_2组轻(P<0.05),而I/R组与I/R+O_2组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。与S组比较,其他3组TGF-β1、α-SMA的表达增强(P<0.05);与I/R组比较,I/R+O_3组的表达减弱(P<0.05);I/R组与I/R+O_2组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论 O_3后处理可以减轻缺血再灌注损伤肾脏的慢性纤维化,其机制可能与O_3后处理抑制转化生长因子-β_1/Smad信号通路激活有关。

臭氧氧化后处理对大鼠肾缺血再灌注损伤慢性纤维化的作用

目的观察臭氧氧化后处理(简称"臭氧后处理")对大鼠肾缺血再灌注损伤远期改变的影响。方法通过随机数字表将36只SD雄性成年大鼠分为假手术(Sham)组、缺血再灌注(I/R)组和臭氧后处理(Postcond)组,每组12只。Sham组:腹部正中切开后充分游离并显露双侧肾脏,切除右肾结束手术。I/R组:切除右肾后,无创血管夹阻断肾蒂45 min,随后开放肾血管。Postcond组:同样操作夹闭左肾蒂45 min,在恢复肾动静脉血灌流后,连续10 d经直肠给予臭氧治疗。术后2周测定肾功能,包括血清肌酐(Scr)和尿素氮(BUN)水平浓度。分别于术后2周及8周观察肾组织病理变化,蛋白水平上检测平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、细胞转化生长因子(TGF-β1)和信号传导蛋白(Smad-2)在肾脏的表达。结果术后2周各组肾功能已经基本恢复正常(P>0.05)。Postcond组引起的肾小管间质损伤接近于Sham组,而I/R组HE显示仍有肾小管细胞萎缩变形,炎性细胞浸润甚至空泡形成。同时Masson染色显示小管间质胶原纤维增加(P<0.05)。Postcond组的α-SMA、TGF-β1和Smad-2蛋白的表达高于Sham组,但是都明显低于其在I/R组的表达(P<0.05)。结论臭氧可以减轻肾缺血再灌注损伤从而减少肾纤维化,其机制可能与抑制TGF-β1/Smad-2信号通路,降低α-SMA、TGF-β1和Smad-2蛋白在肾组织的表达有关。

臭氧联合缺血后处理对大鼠肾脏缺血再灌注损伤的影响

目的:探讨臭氧后处理联合缺血后处理对大鼠肾脏缺血再灌注损伤(IRI)的影响。方法:随机将50只SD大鼠分为假手术组、IRI组、缺血后处理组、臭氧后处理和缺血后处理+臭氧后处理组,每组10只。所有大鼠均在麻醉后打开腹壁,切除右肾,然后进行如下实验:(1)假手术组:切除右肾后缝合腹壁;(2)IRI组:用无创伤血管夹夹闭左肾动、静脉45min进行缺血后打开血管夹再灌注24h;缺血后处理组:手术步骤与缺血再灌注组相同,但在缺血后、再灌注之前,对肾动静脉进行开放10s、夹闭10s的6个循环后,再灌注24h。臭氧后处理组:手术步骤与缺血再灌注组相同,但在术后10d内,每天对该组大鼠经直肠吹入氧气和臭氧的混合气体2.5-3.0ml[臭氧浓度为50mg/L,0.5mg/(kg·d)]。缺血后处理+臭氧后处理组:手术步骤与缺血再灌注组相同,但在缺血后、再灌注之前,先进行缺血后处理,然后进行臭氧后处理。比较各组大鼠血清肌酐和尿素氮水平,观察大鼠肾组织的病理改变和细胞凋亡情况,免疫组化检测各组大鼠PARP-1表达,PCR检测各组大鼠炎性因子的水平。结果:与缺血再灌注组,缺血后处理组和臭氧后处理组血清尿素氮、肌酐水平均显著降低,而缺血后处理联合臭氧后处理可以明显改善缺血再灌注损伤后的肾功能水平。缺血再灌注损伤可以诱导细胞凋亡和炎性因子水平,而与缺血后处理、臭氧后处理组相比,其联合应用可以明显抑制炎性因子表达和细胞凋亡。结论:臭氧后处理和缺血后处理均可减轻肾脏缺血再灌注损伤后的炎性反应和细胞凋亡,其联合应用对肾脏缺血再灌注损伤的保护效果更佳。