应用单宁酸增加致密核心小泡电子密度的研究

对如何应用单宁酸提高致密核心小泡电子密度进行了研究,结果发现实验组动物应用单宁酸后,其延髓背角胶状质的超微结构出现了如下特征性变化:(1)膜结构清晰度增加,反差鲜明;(2)大、小致密核心小泡均被媒染,其电子密度显著提高,大致密核心小泡于非突触部位胞吐入细胞间隙内的介质被即时媒染、固定.实验还表明,灌流液单宁酸的浓度低于0.25%时,效果不显著;高于0.5%则出现正常结构析解,故先用含0.25%单宁酸的生理盐水溶液经主动脉缓慢滴入后,再快速输入含0.5%单宁酸的醛固定液效果最好.

牦牛和柴达木黄牛的颈动脉体Ⅰ型细胞线粒体和电子致密核心囊泡的体视学比较

作者旨在比较牦牛和柴达木黄牛颈动脉体(CB)Ⅰ型细胞线粒体和电子致密核心囊泡(EDCV)的体视学特征。选择海拔3 200m地区健康成年牦牛和柴达木黄牛各5头,采用透射电镜技术观察CB的超微结构,并运用立体定量方法比较牦牛和柴达木黄牛颈动脉体Ⅰ型细胞线粒体和EDCV的体密度(Vν)、面密度(Sν)、面数密度(NA)、比表面(δ)。结果表明,牦牛和柴达木黄牛的颈动脉体实质细胞主要由Ⅰ型细胞和Ⅱ型细胞组成,颈动脉体Ⅰ型细胞细胞质中含有大量的线粒体和特征性的电子致密核心囊泡。牦牛Ⅰ型细胞线粒体的Vν值大于柴达木黄牛,但差异不显著(P>0.05);牦牛S_v、N_A、δ值均小于柴达木黄牛,其中Sν、δ值在两组间差异均不显著(P>0.05),NA在两组间差异显著(P<0.05);牦牛Ⅰ型细胞质内EDCV的Vν值小于柴达木黄牛(P>0.05);牦牛Sν、NA和δ值均大于柴达木黄牛(P>0.05)。结果提示这种结构特征可能使牦牛对环境低氧的感知比生活在相同海拔高度的柴达木黄牛迟钝。

β-G spectrin的显性基因突变破坏致密核心囊泡的分泌(英文)

β-spectrin是细胞膜骨架的重要组成蛋白,其主要分布于质膜的基底部位.在线虫中只有一个编码β-spectrin亚基(β-G)的基因即unc-70.除了稳定质膜,使细胞产生极性等功能外,有报道称它还参与细胞分泌的调节过程.研究发现,在线虫中β-G spectrin的显性基因突变体unc-70(n493)会导致DCVs的分泌缺陷.在活体下,unc-70(n493)突变虫系的神经多肽分泌显著下降.此外,在主要分泌致密核心囊泡的ALA神经元内,钙光解释放促发的快相分泌也比野生型减少.运用TIRFM成像技术,观察在unc-70缺失的情况下ALA神经元内DCVs的锚定过程,结果显示质膜附近囊泡的密度没有显著变化,但囊泡在细胞膜附近停留的时程变短,表明囊泡锚定受到阻碍.为了验证unc-70是否还同时参与调控突触囊泡的分泌过程,运用电生理记录活体线虫神经肌肉接头的方法,发现自发的突触后电流mEPSCs没有明显变化.上述试验结果表明,β-G spectrin的显性基因突变虫系能够影响致密核心囊泡的分泌过程,其机制可能是影响了囊泡的锚定过程.

针刺麻醉中有衣大致密核心小泡非突触部位的胞吐

目的 :进一步证实在针刺镇痛中有衣的大致密核心小泡 (CL DV)通过非突触部位胞吐递质参与疼痛的调节 ,为疼痛生理研究提供形态学基础。方法 :取大鼠的“人中”、“四白”穴进行针刺镇痛 ,并将针刺显效时间分别延长至 0 .5、1、2、3、4小时 ,各组动物时间一致 ,立即杀死取材 ,制作电镜样品 ,电镜下观察、记录各针刺时间段内动物延髓三叉神经脊束核胶状质亚核中间部分神经元的 CL DV于非突触部位的胞吐影像。结果 :在三叉神经脊束核胶状质亚核内发现了各阶段 CL DV的胞吐影像 ,实验和对照组之间有显著性的差别 (P<0 .0 1)。结论 :在针刺镇痛中 CL

Muted蛋白介导CD63在嗜铬细胞大致密核心颗粒的定位

大致密核心颗粒(Large dense-core vesicles,LDCVs)是一种溶酶体相关细胞器(Lysosome-related organelles,LROs),在细胞受到刺激时快速释放其内含物,从而调节机体生长发育、物质代谢和能量代谢等,维持机体的稳态。Muted蛋白是溶酶体相关细胞器生物发生复合体-1(Biogenesis of lysosomal organelles complex-1,BLOC-1)的一个亚基,参与调控溶酶体和多种细胞特异性LROs的生物学发生。四联体跨膜蛋白CD63最初被定位在内体-溶酶体系统,后来发现它也参与部分LROs膜的组成。CD63是否存在于LDCVs尚不清楚,其靶向运输过程是否依赖Muted蛋白也不明确。本研究以肾上腺嗜铬细胞为细胞模型,采用荧光共定位、活细胞追踪和密度梯度离心等实验鉴定CD63蛋白为LDCVs的膜组分,并探讨了其生物学功能。活细胞实验显示CD63-YFP特异性定位在NPY-ds Red标记的LDCVs上,并动态参与LDCVs膜的组成;密度梯度离心实验表明高密度区的CD63与LDCVs的标记蛋白VMAT1共同出峰;Muted蛋白缺乏的小鼠(Bloc1s5基因突变)是一种理想的Hermansky-Pudlak综合征(HPS)小鼠模型,免疫印迹实验显示该突变体小鼠肾上腺组织中CD63蛋白含量明显减少,暗示Muted蛋白可能参与CD63的分选。以上结果表明CD63是LDCVs的膜成分,CD63在胞内的稳态水平依赖于Muted蛋白,为HPS的病理发生机制提供一定的理论依据。

UNC-10在致密核心囊泡分泌过程中的作用(英文)

Rim是囊泡分泌活性区中的重要组成蛋白,它与细胞分泌和突触可塑性相关.在秀丽隐感线虫中只存在一种编码Rim的基因即unc-10.我们的研究发现,在线虫中Rim的基因突变unc-10(md1117)会导致致密核心囊泡的分泌缺陷.在活体中,unc-10突变虫系的神经多肽分泌显著下降.此外,在主要分泌致密核心囊泡的ALA神经元内,钙光解释放促发的快相分泌也比野生型减少.运用全内反射荧光显微成像技术,我们观察在unc-10缺失的情况下ALA神经元中致密核心囊泡的锚定过程,结果显示在细胞膜附近停留的囊泡数目减少,表明囊泡锚定受到阻碍.上述试验结果表明,UNC-10能够影响致密核心囊泡的分泌过程,其机制可能是影响了囊泡的锚定过程.

大致密核心小泡非突触部位胞吐的研究进展

大致密核心小泡非突触部位胞吐的研究进展解剖学教研室孔祥玉关键词非突触部位胞吐，大致密核心小泡，大鼠，三叉神经尾侧脊束核在中枢和周围神经系统中，神经元间的信息传递无疑主要是借助突触完成的。但是，近年来越来越多的证据表明［１～１１］，某些神经元间的信息传...

线虫中RAB-27与其效应物RBF-1调控致密核心囊泡的栓系和锚定过程

致密核心囊泡的转运、栓系、锚定和成熟过程的分子机制尚不清楚.本文以秀丽隐杆线虫(简称线虫)为模式生物来研究致密核心囊泡分泌过程中Rab蛋白及其效应物的功能.实验认为,RAB-27/AEX-6,而非RAB-3,是神经肽释放所必需的.通过全内反射荧光显微镜技术分析了质膜附近致密核心囊泡的运动情况,阐述了RAB-27/AEX-6和囊泡的栓系相关,而RAB-27的效应物Rabphilin/RBF-1则是早期囊泡和膜栓系及稳定锚定所必需的.

ESYT-2在致密核心囊泡分泌中起到的作用

目的:研究秀丽隐杆线虫(简称线虫)中一种扩展的Synaptotagmin同源物ESYT-2在致密核心囊泡分泌过程中起到的作用。方法:以线虫为研究对象,运用线虫腔胞吸收ANF-GFP的基本原理来确定ESYT-2与分泌相关,之后又进一步使用全内反射荧光显微镜技术(TIRFM)来研究ESYT-2对致密核心囊泡的具体调控。结果:①ESYT-2功能缺失影响线虫神经细胞致密核心囊泡分泌。②ESYT-2影响致密核心囊泡分泌的栓系过程。结论:ESYT-2调控了致密核心囊泡的分泌过程。

PC12细胞中Synaptotagmin Ⅶ的沉默抑制了致密核心大囊泡的分泌

Syt Ⅶ,因其具有比Syt Ⅰ和Syt Ⅸ更高的钙离子亲和力,以及在与脂质结合后表现出更慢的解离动力学过程,被认为在致密核心大囊泡分泌的慢速动力学过程中起着钙离子感受器的作用,而并不参与突触囊泡的快速分泌过程.然而迄今为止,Syt Ⅶ的亚细胞定位和其在胞内具体的生理学功能尚未完全清楚.在本研究中,我们首先应用全内反射荧光显微镜技术表明,在PC12细胞中Syt Ⅶ定位于致密核心囊泡.通过综合运用高时间分辨率的细胞膜电容测量和碳纤维微电极安培检测,确定了单独沉默内源性的Syt Ⅶ就可以明显减少PC12细胞中钙触发的致密核心囊泡和质膜的融合和抑制了融合孔的开放,特别是减少了致密核心大囊泡胞吐触发相的幅值,而对于其持续成分的速率则几乎没有影响.这些发现提示我们Syt Ⅶ在PC12细胞致密核心囊泡融合机制中作为钙感受器,对可释放致密核心大囊泡库的形成和维持起着非常重要的作用.

大鼠皮质大颗粒泡的超微结构

用电镜在4只猫听区皮质和3只大白鼠额叶皮质中观察了大颗粒泡的超微结构。在2031个突触面上,共见到大颗粒泡282个。1.大颗粒泡的位置:在104个突触前囊中含有大颗粒泡135个,它们多位于突触前囊的后部(64/135),位于前囊的中部或接近突触前膜者较少。有的大颗粒泡不在突触前囊内,而位于轴突、树突或个别例在树突侧棘中。2.大颗粒泡数目:大脑皮质中的大颗粒泡数目较少。在各种成分中(包括突触前囊、轴突、树突以及其他成分)计见282个大颗粒泡,在一个成分中含1个大颗粒泡的占多数(78.80%)。个别例有含有6个者。多数突触前囊无大颗粒泡。3.大颗粒泡的形态:多为圆形或卵圆形,亚铃形或不整形者也有之。致密核心多数致密,有的并不致密而显得灰淡,有的致密核心呈网状,或在一个包膜内有两个核心。有的膜下环并不明显。4.大颗粒泡的大小不一。本文对大颗粒泡和某些递质的可能关系进行了讨论。

CAPS在钙离子触发的囊泡释放中的作用

钙离子依赖的分泌激活蛋白(Ca^(2+)-dependent activator protein for secretion,CAPS)是一类在进化中高度保守的促分泌蛋白,它存在两种异构体CAPS1和CAPS2,两者在不同发育阶段的表达水平及组织中的分布上均有所差异。以往的研究认为CAPS1作为磷脂酰肌醇二磷酸(phosphati-dylinositol diphosphate,PIP2)连接蛋白参与钙离子调节的大的致密核心囊泡(largedense-corevesci-cle,LDCV)与膜融合过程。最近的研究表明,CAPS1还作用于LDCV与膜融合的上游阶段,在分泌性囊泡的形成以及维持其稳定性方面发挥作用。

GST pull-down结合质谱技术鉴定Muted蛋白相互作用蛋白

目的鉴定Muted蛋白相互作用蛋白。方法表达并纯化GST-Muted蛋白融合蛋白,与小鼠脑组织蛋白共孵育,银染获得与Muted互作的蛋白条带,利用质谱技术获得这些条带的氨基酸序列,鉴定Muted的相互作用蛋白。结果初步鉴定出31个与Muted特异结合的互作蛋白,包括外泌体蛋白、细胞骨架蛋白及马达蛋白等,进一步应用免疫共沉淀技术验证了Muted与Stxbp1的相互作用。结论从小鼠脑组织初步鉴定了Muted蛋白的结合蛋白,为进一步研究Muted蛋白在LDCVs形成和分泌过程中的功能及机制提供了新的线索。

高原人的颈动脉体形态学研究

对26例不同海拔高度意外死亡和无明显慢性心肺疾病尸者的颈动脉体(简称CB)进行了巨检、光镜及电镜观察,并探讨与高原低氧的关系。男23例、女3例。分组:①高原组6例,②中度高原组17例,③平原组3例。高原人CB平均体积、重量、小叶数量、小叶直径以及细胞直径均高于平原人,高原人CB细胞增生明显,核增大,双核。电镜下高原人CB的超微结构致密核心囊泡较平原人多,并多近胞膜分布,少数嗜锇核较小、空晕较宽、线粒体增大等。

不同海拔牦牛颈动脉体Ⅰ型细胞线粒体和EDCV的体视学

颈动脉体(carotid body,CB)是第一个被发现的缺氧感知器官,当血液PaO2降低时,迅速引起呼吸加深、加快等反应。为探讨牦牛不同低氧程度下CB的适应特征,应用透射电子显微镜技术和体视学方法测量了海拔4 600,3 800和2 800m牦牛颈动脉体Ⅰ型细胞线粒体、电子致密核心囊泡体(electron dense-cored vesicles,EDCV)的体密度(Vv,单位体积Ⅰ型细胞浆中线粒体、EDCV的体积百分比)、面密度(Sv,单位体积Ⅰ型细胞浆中线粒体、EDCV外膜的表面积)、面数密度(NA,单位面积中线粒体、EDCV数目)、比表面(δ,线粒体、EDCV表面积与其自身体积之比)。结果表明,牦牛颈动脉体Ⅰ型细胞浆内线粒体的Vv值随着海拔的升高呈增加趋势,但3组间差异不显著(P>0.05);Sv、NA、δ值随着海拔从2 800m升到3 800m先减小,从3 800m到4 600m而增加,3组间差异均不显著(P>0.05)。牦牛颈动脉体Ⅰ型细胞浆内EDCV的Vv、Sv值随海拔升高呈上升趋势,但3组间差异均不显著(P>0.05);δ值随海拔升高呈下降趋势,3组间差异也不显著(P>0.05)。

大白鼠颈上神经节的超微结构观察

颈上神经节(SCG)的光学显微镜研究仅有关于神经节细胞和卫星细胞的形态描述。六十年代初(Falck等1962)应用荧光组织化学方法证明SCG内除上述细胞成份外,还有一种稀疏分布的小强荧光细胞。

色味连锁夸克物质中的涡旋

夸克物质在不同的温度和重子数密度下表现出丰富的相结构。高密低温情况下,夸克物质的基态是色味连锁相。介绍了金兹堡-朗道理论以及色味连锁夸克物质中的各种涡旋态(特别是准超流涡旋),并讨论了磁场和自转对准超流涡旋的的影响。由于致密星核心内部有可能形成准超流涡旋,这一结果对致密星体的研究具有现实意义。如果将温度、夸克质量等因素考虑在内,研究夸克物质中涡旋结构的性质将为诸如致密星物理实验等相关的领域提供新的视角。