鸡卵泡颗粒层组蛋白H3K4me3和H3K27me3的表达研究

卵母细胞成熟过程受组蛋白H3K4me3(trimethylation of lysine 4 on histone 3)和H3K27me3(trimethylation of lysine 27 on histone 3)及其相关的甲基化和去甲基化酶的调控,因此考虑对鸡的卵泡发育也存在一定的影响。选取“苏禽3号”配套系第一母本为研究对象,采用Western blot法探究组蛋白H3K4me3和H3K27me3在鸡卵泡不同发育阶段颗粒层中蛋白的表达模式。结果表明:在苏禽3号卵泡颗粒层中,组蛋白H3K4me3在卵泡发育不同阶段表达模式呈降低→升高→降低→升高的波浪形趋势,波浪变化较为平缓,在F5、F2和F13个表达高点的表达量与SWF(small white follicle)、LWF(large white follicle)、SYF(small yellow follicle)和F34个表达低点的表达差异显著(P<0.05)。组蛋白H3K27me3在不同发育阶段表达模式亦呈波浪形表达趋势,波浪变化起伏较明显,在SWF、SYF和F33个表达高点的表达量与F5、F4、F1和F24个表达低点的表达差异显著(P<0.05)。相关性分析显示,组蛋白H3K4me3与H3K27me3在不同发育阶段卵泡颗粒细胞中的表达呈较强的负线性相关(R=-0.808,P=0.000)。结果提示:组蛋白H3K4me3和H3K27me3在不同发育阶段卵泡颗粒层中的表达具有组织差异性,呈负相关的动态修饰性,可能共同协调卵泡生长过程中各基因的表达与功能,研究结果为鸡繁殖性状调控机理提供了理论依据。

清胰颗粒对重症急性胰腺炎大鼠肾脏AQP4蛋白表达及肾功能的影响

目的 探讨清胰颗粒(QYG)对重症急性胰腺炎(SAP)大鼠肾脏中水通道蛋白4(AQP4)的表达及肾功能的影响。方法 64只SD大鼠随机分为假手术组(SO组)、SAP组、QYG组和地塞米松(DXMS)组;用5%STC逆行胰胆管注射诱导大鼠SAP肾损伤模型;观察肾脏病理变化,比较各组大鼠肾干湿质量比、肾脏系数、血清淀粉酶(AMS)、BUN、Scr、IL-6、TNF-α水平和肾脏中AQP4蛋白表达量。结果 SAP组大鼠肾脏病理评分、血清AMS、BUN、Scr、IL-6、TNF-α水平均较SO组明显升高(P均<0.05),QYG和DXMS治疗能降低SAP大鼠血清BUN、Scr、IL-6和TNF-α表达,肾脏病理损伤减轻,72 h疗效显著,呈时效依赖性。SAP大鼠肾脏中AQP4蛋白表达均较SO组明显上调,差异有统计学意义(P<0.05);QYG和DXMS治疗下调AQP4蛋白表达,治疗72 h后与SAP组比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论 AQP4参与SAP并发肾损伤过程,QYG抑制炎症反应下调AQP4表达对肾脏具有保护作用。

弓形虫致密颗粒蛋白4的原核细胞表达与纯化

目的构建弓形虫致密颗粒蛋白4(GRA4)的pET原核细胞表达系统,并对其表达产物进行纯化及其免疫学活性测定。方法利用PCR扩增弓形虫GRA4基因片段,定向亚克隆入原核细胞表达载体pET-23a(+),转化大肠埃希菌(E.coliBL21 DE3),以组氨酸结合柱亲和层析法纯化表达产物,并对其进行抗原活性分析。将纯化的重组蛋白免疫小鼠,用ELISA检测其特异性抗体滴度。结果成功构建了弓形虫pET-GRA4原核细胞表达系统,其表达产物相对分子质量(Mr)约为40 000,主要以包涵体形式存在,纯化后的重组蛋白能被人工感染弓形虫RH株速殖子的兔血清识别。免疫小鼠后可诱导产生高滴度的特异性IgG抗体。结论利用pET原核细胞表达系统成功表达和纯化了弓形虫GRA4重组蛋白,该蛋白具有一定的免疫学活性。

血清PGRN、IL-21、4-HNE水平与重症肺炎患儿病情程度、预后的相关性及对患儿预后不良的预测价值

目的探讨血清颗粒蛋白前体(PGRN)、白细胞介素(IL)-21、4-羟基壬烯醛(4-HNE)水平与重症肺炎(SP)患儿病情程度、预后的相关性及对患儿预后不良的预测价值。方法选取2022年1月至2023年1月该院收治的110例SP患儿作为SP组,另随机选取该院同期收治的55例轻症肺炎患儿作为轻症组、55例健康儿童作为对照组。比较3组血清PGRN、IL-21、4-HNE、常规炎症因子[C-反应蛋白(CRP)、IL-6、降钙素原(PCT)]水平。比较SP组不同病情程度[采用小儿危重症评分(PCIS)评估]患儿血清PGRN、IL-21、4-HNE水平。比较SP组治疗后3个月不同预后患儿治疗前后血清PGRN、IL-21、4-HNE、CRP、IL-6、PCT水平及变化值(以△表示对应指标治疗前后变化值的绝对值)。采用Pearson相关分析血清PGRN、IL-21、4-HNE水平与CRP、IL-6、PCT水平、PCIS的相关性。绘制受试者工作特征(ROC)曲线分析△PGRN、△IL-21、△4-HNE、△CRP、△IL-6、△PCT对SP患儿预后不良的预测价值。采用净重新分类指数(NRI)、综合判别改善指数(IDI)评价新预测方案(△PGRN、△IL-21、△4-HNE、△CRP、△IL-6、△PCT联合预测)与常规预测方案(△CRP、△IL-6、△PCT联合预测)对SP患儿预后不良的预测价值。结果SP组血清PGRN、IL-21、4-HNE、CRP、IL-6、PCT水平均高于轻症组与对照组,且轻症组血清PGRN、IL-21、4-HNE、CRP、IL-6、PCT水平均高于对照组,差异均有统计学意义(P<0.05)。SP组中,极危重患儿3例,危重26例,非危重81例。危重或极危重患儿血清PGRN、IL-21、4-HNE水平均高于非危重患儿,差异均有统计学意义(P<0.05)。Pearson相关分析结果显示,SP组血清PGRN、IL-21、4-HNE水平与血清CRP、IL-6、PCT水平均呈正相关(P<0.05),与PCIS均呈负相关(P<0.05)。SP组中,预后不良25例,预后良好85例;两组治疗后血清PGRN、IL-21、4-HNE、CRP、IL-6、PCT水平均低于同组治疗前,差异均有统计学意义(P<0.05)。预后不良患儿治疗前后血清PGRN、IL-21、4-HNE、CRP、IL-6、PCT水平均高于预后良好患儿,△PGRN、△IL-21、△4-HNE、△CRP、△IL-6、△PCT均小于预后良好患儿,差异均有统计学意义(P<0.05)。ROC曲线分析结果显示,△PGRN、△IL-21、△4-HNE、△CRP、△IL-6、△PCT预测SP患儿预后不良的曲线下面积(AUC)分别为0.786、0.754、0.764、0.794、0.777、0.754,各指标单独预测SP患儿预后不良的AUC比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。新预测方案预测预后不良的AUC为0.956(95%CI:0.899~0.986),预测灵敏度、特异度分别为92.00%、90.59%;常规预测方案预测预后不良的AUC为0.849(95%CI:0.768~0.910),预测灵敏度、特异度分别为88.00%、78.82%;与常规预测方案比较,新预测方案的AUC明显增大(Z=2.302,P<0.05),且新预测方案与常规预测方案比较,NRI为0.029(95%CI:0.021~0.039,P<0.05)、IDI为0.047(95%CI:0.035~0.064,P<0.05)。结论SP患儿血清PGRN、IL-21、4-HNE水平与CRP、IL-6、PCT、病情程度均呈正相关,且治疗期间监测血清PGRN、IL-21、4-HNE水平变化对预测SP患儿预后不良具有良好应用价值。

弓形虫致密颗粒蛋白GRA2真核表达质粒的构建与体外表达

目的构建弓形虫致密颗粒蛋白GRA2的真核表达重组质粒。方法设计合成GRA2引物,运用PCR方法扩增其基因片段,经克隆至pMD18-T载体后,亚克隆至真核表达质粒pcDNA3.1(-)而构建重组表达质粒pcDNA3.1-GRA2。脂质体法将构建的重组质粒转染HFF细胞,RT-PCR法检测转染细胞中GRA2的表达情况。结果PCR扩增GRA2基因序列正确,构建的重组表达质粒pcDNA3.1-GRA2经PCR、EcoRⅠ/HindⅢ双酶切和测序鉴定正确;转染GRA2基因的细胞,RT-PCR可见目的条带。结论成功获得真核表达重组质粒pcDNA3.1-GRA2,为进一步研究弓形虫疫苗的免疫保护性奠定基础。

化浊颗粒对2型糖尿病大鼠磷脂酰肌醇3激酶和葡萄糖转运蛋白4基因表达的影响

目的观察化浊颗粒对2型糖尿病(T2DM)大鼠磷脂酰肌醇3激酶(PI-3K)、葡萄糖转运蛋白4(GLUT4)在骨骼肌组织中表达的影响,探讨其对PI-3K及GLUT4信号通路激活的作用。方法采用高脂饲料喂养联合小剂量链脲佐菌素腹腔注射建立T2DM大鼠模型,随机分为化浊颗粒组、罗格列酮组、模型组。各给药组给予相应药物灌胃,模型组与空白组予生理盐水灌胃,观察大鼠一般状态、体质量及摄食量。干预10周后,予10%水合氯醛麻醉大鼠,检测大鼠空腹血糖(FBG)、葡萄糖耐量试验餐后2 h血糖(2 h PG)、空腹胰岛素(FINS)水平;RT-PCR检测各组大鼠骨骼肌组织PI-3K和GLUT4 m RNA表达的水平。结果与模型组比较,化浊颗粒组与罗格列酮组大鼠FBG、2 h PG及FINS水平降低(P<0.05),PI-3K及GLUT4 m RNA表达水平升高(P<0.05)。结论化浊颗粒具有提高胰岛素敏感性的作用,与激活骨骼肌组织胰岛素信号传导通路中PI-3K和GLUT4 m RNA的表达有关。

弓形虫致密颗粒蛋白GRA8截短型片段在原核中的表达

目的构建弓形虫GRA8原核重组表达质粒,分析其表达状况。方法采用PCR技术扩增GRA8及其截短型片段的基因序列,经克隆后,亚克隆至原核表达载体中,构建GRA8及其截短型片段的重组表达质粒,分析GRA8的表达;将各重组菌进行诱导,将裂解上清用谷胱甘肽-琼脂糖亲合层析法和SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)纯化目的蛋白,免疫印迹法(Westernblotting)分析纯化蛋白的活性。结果GRA8基因被正确插入原核表达质粒中,原核重组表达质粒在大肠埃希菌JM109中表达GRA8的水平低,几乎无完整GRA8的表达,截短型GRA8经谷胱甘肽-琼脂糖亲合层析法和SDS-PAGE获得纯化。纯化的截短型GRA8能被弓形虫感染兔血清识别。结论GRA8的原核重组表达质粒表达GRA8的水平低,纯化的截短型GRA8具一定的抗原反应性。

磁性Fe_3O_4纳米颗粒对大鼠脏器组织中Caveolin-1和Clathrin Heavy Chain蛋白表达的影响

目的:探讨磁性Fe_3O_4纳米颗粒对大鼠主要脏器组织中Caveolin-1及Clathrin Heavy Chain蛋白表达的影响,阐明其作用机制。方法:将24只Wistar大鼠按体质量随机分成对照组和低、中、高剂量磁性Fe_3O_4纳米颗粒组,尾静脉注射不同剂量磁性Fe_3O_4纳米颗粒24h后取脏器组织,Western blotting法检测大鼠主要脏器组织中Caveolin-1及Clathrin Heavy Chain蛋白的表达水平,荧光实时定量PCR法检测大鼠主要脏器组织中Caveolin-1及Clathrin Heavy Chain mRNA的表达水平。结果:与对照组比较,中和高剂量组大鼠肝脏和脾脏组织中Clathrin Heavy Chain蛋白和mRNA表达水平明显升高(P<0.05)。高剂量组大鼠肾脏组织中Clathrin Heavy Chain mRNA的表达水平与其他3组比较明显升高(P<0.05)。Caveolin-1蛋白表达水平在各剂量组之间比较差异无统计学意义(P>0.05);与对照组比较,低、中和高剂量组大鼠肝脏、肺脏和脾脏组织中Caveolin-1mRNA表达水平明显升高(P<0.05);各组肾脏组织中Caveolin-1 mRNA表达水平差异无统计学意义(P>0.05)。结论:磁性Fe_3O_4纳米颗粒能够诱导大鼠肝脏、肺脏、脾脏中Clathrin Heavy Chain蛋白表达增强,通过Clathrin Heavy Chain蛋白的内吞作用是磁性Fe_3O_4纳米颗粒进入大鼠肝脏、肺脏和脾脏细胞的途径之一。

大气细颗粒物对G蛋白偶联受体激酶4的异常调节在尿钠排泄中的作用

目的探讨大气细颗粒物(fine particle,fine particulate matter,PM2.5)对G蛋白偶联受体激酶4(G proteincoupled receptor kinase 4,GRK4)的异常调节及其影响尿钠排泄在高血压病发生、发展中的作用。方法以Wistar-Kyoto(WKY)大鼠来源肾脏近曲小管上皮细胞(renal proximal tubule,RPT)株为研究对象,观察在PM2.5刺激对细胞活力、Na+-K+-ATP酶活性以及GRK4、D1R表达的变化;以小干扰RNA(siRNA)技术沉默GRK4,观察PM2.5对Na+-K+-ATP酶活性的影响。结果不同浓度PM2.5(10、50、100μg/mL)处理WKY大鼠RPT细胞株24 h后,细胞活力无明显差异(P>0.05)。PM2.5干预组(100μg/mL)Na+-K+-ATP酶活性明显高于对照组(P<0.05),且对10-6mol/L非诺多泮(fenoldopam)的作用较对照组减低(P<0.05)。不同浓度PM2.5(10、100μg/mL)干预后RPT细胞的GRK4表达明显高于对照组(P<0.05),多巴胺D1受体的蛋白表达明显低于对照组(P<0.05)。以siRNA技术沉默GRK4后,PM2.5对Na+-K+-ATP酶活性的作用较对照组无明显差异(P>0.05)。结论 PM2.5通过调节GRK4表达,进而调控D1受体的表达和Na+-K+-ATP酶活性,参与了对尿钠排泄的调节。

田黄颗粒对脑出血大鼠脑水肿及水通道蛋白-4 mRNA的影响

目的观察田黄颗粒对脑出血模型大鼠脑含水量、水通道蛋白-4 mRNA、大鼠行为学评分的影响。方法选用雄性SD大鼠,采用自体动脉血制备大鼠脑出血(ICH)模型,随机分为模型组、中药组(田黄颗粒)、西药组(甘露醇)、中西药组(田黄颗粒+甘露醇)。测定各组大鼠术后第1天、第3天、第7天后脑含水量、水通道蛋白-4 mRNA、大鼠行为学评分等。结果在第3天和第7天时,各治疗组脑水肿减轻、水通道蛋白-4mRNA下降、行为学评分降低,均优于模型组(P<0.05或P<0.01),并且中西药组优于中药组和西药组(P<0.05或P<0.01)。结论田黄颗粒能降低脑出血大鼠脑水肿,改善神经功能缺损,可能与降低水通道蛋白-4 mRNA表达有关。

肾元颗粒对慢性肾脏病3~5期非透析患者血清成纤维细胞生长因子23、成纤维细胞生长因子受体4、Klotho蛋白的影响

目的观察肾元颗粒对慢性肾脏病(CKD)3~5期非透析患者的血清成纤维细胞生长因子23(FGF23)、成纤维细胞生长因子受体4(FGFR4)和Klotho蛋白含量的影响,以探讨肾元颗粒对CKD患者血管钙化的可能作用机制。方法选取湖北省中医院2018年6月—2019年6月收治的CKD患者60例,按随机数字表法将其分为对照组(28例)和治疗组(32例)。对照组采用尿毒清颗粒治疗,治疗组采用肾元颗粒治疗。连续治疗3个月,观察两组治疗前后生化指标[血清钙、磷、甲状旁腺激素(PTH)及估算的肾小球滤过率(eGFR)]水平及血清FGF23、FGFR4和Klotho蛋白含量。结果治疗前,两组钙、磷、PTH、eGFR比较,差异无统计学意义(P>0.05);治疗后,治疗组血清中磷、PTH含量低于对照组,钙、eGFR高于对照组,差异均有统计学意义(均P<0.05)。治疗前,两组FGF23、FGFR4、Klotho蛋白含量比较,差异无统计学意义(P>0.05);治疗后治疗组血清FGF23、Klotho蛋白含量高于对照组,FGFR4含量低与对照组,差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论肾元颗粒能够抑制FGF23、FGFR4水平,提高Klotho蛋白含量,这可能是肾元颗粒治疗CKD患者血管钙化作用机制之一。

哮喘宁颗粒对哮喘大鼠白三烯B4、白三烯C4、C-反应蛋白表达的调节作用

目的观察哮喘宁颗粒对哮喘模型大鼠白三烯B4(LTB4)、白三烯C4(LTC4)、C-反应蛋白(CRP表达的调节作用,探讨哮喘宁颗粒对哮喘大鼠气道相关炎症介质的影响,为哮喘宁颗粒防治哮喘提供实验依据。方法雄性Sprague-Dawley大鼠60只,随机分成5组,分别是空白对照组、模型组、哮喘宁颗粒组、布地奈德组、地塞米松组,每组12只。采用卵白蛋白联合氢氧化铝腹腔注射致敏和卵白蛋白滴鼻激发方法建立哮喘模型大鼠,采用双抗夹心酶联免疫吸附试验法检测各组大鼠肺组织匀浆中LTB4、LTC4的含量变化,速率散射比浊法检测CRP的表达变化。结果模型组大鼠肺组织中LTB4、LTC4、CRP含量均升高,与空白对照组相比差异有统计学意义(P <0. 05)。治疗后,哮喘宁颗粒组、布地奈德组、地塞米松组大鼠肺组织中LTB4、LTC4、CRP含量均降低,与模型组相比差异有统计学意义(P <0. 05)。地塞米松组降低LTB4含量的效果优于哮喘宁颗粒组,差异有统计学意义(P <0. 05)。布地奈德组降低LTB4含量的效果优于哮喘宁颗粒组,差异有统计学意义(P <0. 05)。哮喘宁颗粒组、布地奈德组、地塞米松组大鼠血清CRP的表达降低程度相当,差异无统计学意义(P> 0. 05)。结论哮喘宁颗粒能下调哮喘大鼠LTB4、LTC4、CRP的表达,其治疗哮喘的机制可能是通过抑制气道相关炎症介质来实现的。

smad4和cyclinA蛋白在大鼠卵巢颗粒细胞中的表达及当归黄芪超滤膜提取物对其的增殖作用

目的:观察smad4和cyclin A蛋白在体外培养大鼠卵巢颗粒细胞中的表达以及当归黄芪超滤膜提取物对其的增殖作用。方法:以不同剂量的当归黄芪超滤膜提取物作用于体外培养的大鼠卵巢颗粒细胞,用MTS法检测各组大鼠卵巢颗粒细胞24、48和72小时的增殖情况,并用westren bolt法监测smad4和cyclin A蛋白的表达。结果:smad4和cyclin A蛋白在颗粒细胞高表达,随着细胞增殖作用的增加,其表达也逐渐增加;当归黄芪超滤膜提取物可促进颗粒细胞的增殖,并且呈一定的量效和时效关系,最佳作用浓度为0.375g/L;各组比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论:当归黄芪超滤膜提取物有促进卵巢颗粒细胞增殖的作用,能促进卵泡发育,与上调smad4和cyclin A蛋白表达有关。

基于HSP27-TLR4/NF-κB通路的芪参颗粒对大鼠心肌梗死后炎症反应的影响

目的基于HSP27-TLR4/NF-κB通路探讨芪参颗粒对大鼠心肌梗死后炎症反应的影响及潜在机制。方法48只雄性SD大鼠分别进行左冠状动脉前降支结扎术造模或假手术,将假手术大鼠分为对照组、芪参颗粒对照组,造模大鼠分为模型组和芪参颗粒组。术后24 h予芪参颗粒(2.352 g/kg)或蒸馏水灌胃,每日1次,连续1周。超声检测大鼠心功能,免疫荧光、HE和Masson染色评估心肌结构、炎症及纤维化改变,ELISA检测血浆热休克蛋白27(HSP27)含量,Western blot检测心肌组织Toll样受体(TLR)4和核因子-κB(NF-κB)蛋白表达。结果与对照组比较,模型组大鼠左室舒张末期前壁厚度、左室收缩末期前壁厚度(LVAWs)、左室舒张末期后壁厚度(LVPWd)、左心室收缩末期后壁厚度、射血分数(EF)和短轴缩短率(FS)显著降低(P<0.01),左室舒张末期内径、左室收缩末期内径(LVIDs)、左室舒张末期容积、左室收缩末期容积(LVESV)显著升高(P<0.05,P<0.01);心肌细胞大量坏死,梗死边缘区心肌细胞代偿性肥大且排列紊乱,血管旁和心肌间质内大量炎性细胞浸润和胶原纤维沉积;血浆HSP27含量显著增加(P<0.01),心肌组织TLR4、NF-κB p65蛋白表达显著升高(P<0.05)。与模型组比较,芪参颗粒组大鼠LVAWs、LVPWd、EF和FS显著升高,LVIDs、LVESV显著降低(P<0.05,P<0.01);心肌组织炎性细胞浸润、心肌细胞存活情况和间质纤维化情况显著改善;血浆HSP27含量显著减少(P<0.01),心肌组织TLR4、NF-κB p65蛋白表达显著降低(P<0.05)。结论芪参颗粒可能通过降低血浆HSP27含量抑制TLR4/NF-κB通路,从而减轻炎症反应,改善心肌梗死后心室重构和心功能下降。

颗粒蛋白前体通过CTLA4调控调节性T细胞的发育和功能

目的探讨颗粒蛋白前体(PGRN)对调节性T细胞发育和功能的影响及分子机制。方法在野生型和PGRN敲除小鼠模型中,采用流式细胞术检测小鼠中枢及外周各淋巴器官中T细胞各亚群的比例及调节性T细胞比例及其功能相关分子的表达;采用RT-PCR检测调节性T细胞中CTLA4的表达;最后采用调节性T细胞体外抑制试验验证其功能变化。结果与野生型小鼠相比,PGRN敲除小鼠脾脏、胸腺和淋巴结中调节性T细胞的比例均升高,特别发现在脾脏调节性T细胞中CTLA4在基因和蛋白表达水平均显著升高。体外功能试验发现PGRN敲除小鼠的脾脏调节性T细胞的抑制功能也较野生型增强。结论 PGRN在调节性T细胞的发育和功能中扮演重要角色,其机制可能涉及CTLA4。

颗粒蛋白前体(PGRN)促进小鼠乳腺癌4T1细胞上皮间质转化与侵袭和迁移

目的探讨颗粒蛋白前体(PGRN)对小鼠乳腺癌4T1细胞侵袭和迁移的影响及其机制。方法采用1μg/mL PGRN处理乳腺癌4T1细胞24 h,通过Transwell^(TM)侵袭实验检测4T1细胞的侵袭能力、划痕实验检测细胞的迁移能力,实时荧光定量PCR检测4T1细胞上皮钙黏蛋白(E-cadherin)、波形蛋白(vimentin)的mRNA水平,Western blot法检测4T1细胞E-cadherin、vimentin、细胞外信号调节激酶1/2(ERK1/2)、磷酸化的ERK1/2(p-ERK1/2)蛋白水平。采用1μg/mL PGRN与ERK1/2信号通路抑制剂U0126(10μmol/L)同时处理4T1细胞后,前述方法检测4T1细胞侵袭及迁移能力及E-cadherin、vimentin与p-ERK蛋白表达的变化。结果乳腺癌4T1细胞经PGRN处理后,其侵袭及迁移能力明显增强;E-cadherin表达下降,vimentin表达升高,p-ERK1/2的表达增强;抑制ERK1/2信号通路后,PGRN促进乳腺癌4T1细胞侵袭、迁移及上皮间质转化(EMT)的能力被明显抑制。结论PGRN可通过促进EMT及激活ERK1/2通路促进乳腺癌4T1细胞的侵袭及迁移。

复方甘芍贴剂对多囊卵巢综合征模型大鼠卵巢颗粒细胞转录因子GATA结合蛋白4表达的影响及意义

目的 探讨复方甘芍贴剂干预治疗对多囊卵巢综合征模型大鼠卵巢颗粒细胞转录因子GATA结合蛋白4（GATA-4）的影响及意义. 方法 6周龄的SD雌性大鼠48只,随机分为正常对照组（12只）和实验组（36只）.实验组用来曲唑法建立多囊卵巢综合征（PCOS）大鼠模型,然后随机分为PCOS模型组、达英-35治疗组和外用复方甘芍贴剂组,分别给予相应的处理方案.于12周龄时取双侧卵巢组织,分别用免疫组织化学法和Westernblot方法检测GATA4的蛋白表达. 结果 （1）正常对照组、复方甘芍贴剂组和达英-35治疗组大鼠卵巢组织颗粒细胞免疫组化检测后GATA4灰度值[（129.4±9.9）、（115.1±7.0）、（112.4±7.9）]低于PCOS模型组（162.9±9.4）,差异有统计学意义.（2）采用Western blot方法检测正常对照组、复方甘芍贴剂组和达英-35治疗组大鼠卵巢颗粒细胞GATA4蛋白表达水平[（0.9±0.1）、（1.0±0.1）、（1.1±0.3）]为均低于PCOS模型组（1.6±0.1）,差异有统计学意义. 结论 复方甘芍贴剂可能通过抑制GATA-4的表达恢复颗粒细胞的功能而改善卵泡发育并恢复排卵。

颗粒蛋白前体衍生物Atsttrin对骨关节炎的保护作用及对CD^(+)_(4)T细胞的调节作用

目的揭示颗粒蛋白前体衍生物Atsttrin对骨关节炎的保护作用及对CD^(+)_(4)T细胞的调节作用。方法本研究起止时间为2018年10月至2019年12月,60只5周龄SD雄性大鼠购自西安交通大学医学部实验动物中心。采用膝关节前交叉韧带横断法建立骨关节炎大鼠模型,通过关节内注射15μL Atsttrin(1μg/μL)对模型大鼠进行治疗,每周注射1次,连续注射4周。通过番红O固绿染色检测软骨损伤程度,采用OARSI评分系统评价软骨退化情况。ELISA法检测大鼠血清干扰素-γ(IFN-γ)、白细胞介素-4(IL-4)、白细胞介素-17(IL-17)和转化生长因子-β(TGF-β)水平。流式细胞仪分析血清Th1、Th2、Th17和Treg细胞比例。应用终浓度为10μg/L的肿瘤坏死因子-α(TNF-α)诱导滑膜细胞和软骨细胞48 h,并分别用终浓度为10μg/L、20μg/L、50μg/L的Atsttrin处理滑膜细胞和软骨细胞48 h。通过5-溴-2-脱氧尿苷(BrdU)细胞增殖测定试剂盒检测滑膜或软骨细胞的增殖。通过RT-PCR和Westernblotting检测软骨细胞中解聚蛋白样金属蛋白酶-4(ADAMTS-4)、基质金属蛋白酶-13(MMP-13)、IFN-γ、IL-4、IL-17和TGF-β的信使核糖核酸(mRNA)和蛋白表达。结果与模型组相比,Atsttrin组大鼠的膝关节软骨破坏情况明显减轻(P<0.05)。与模型组相比,Atsttrin组大鼠国际骨关节炎研究学会(OARSI)评分显著降低[(2.56±0.21)比(1.08±0.11),P=0.001]。Atsttrin组大鼠的血清IFN-γ和IL-17水平显著低于模型组,而IL-4和TGF-β水平显著高于模型组(P<0.05)。Atsttrin组大鼠的血清Th1和Th17细胞比例显著低于模型组,而Th2和Treg细胞比例显著高于模型组(P<0.05)。Atsttrin处理显著降低了TNF-α诱导的滑膜细胞的增殖能力,并提高了TNF-α诱导的软骨细胞的增殖能力(P<0.05)。Atsttrin显著下调了TNF-α诱导的软骨细胞中ADAMTS-4、MMP-13、IFN-γ和IL-17的mRNA和蛋白表达水平,并上调了IL-4和TGF-β的表达水平(P<0.05)。结论Atsttrin可有效抑制骨关节炎大鼠模型的软骨病变并提高关节功能。Atsttrin可通过抑制滑膜细胞增殖、促进软骨细胞增殖、抑制软骨机制降解来维持关节内微环境的稳定。此外,Atsttrin的关节软骨保护作用与纠正Th1/Th2细胞以及Th17/Treg细胞的失衡有关。

藤芪通络颗粒治疗2型糖尿病下肢血管病变气虚血瘀证患者的疗效及对血清丝氨酸蛋白酶抑制剂、视黄醇结合蛋白4水平的影响

目的探讨藤芪通络颗粒治疗2型糖尿病下肢血管病变气虚血瘀证患者的疗效及对血清丝氨酸蛋白酶抑制剂、视黄醇结合蛋白4水平的影响。方法选取2018年3月—2020年3月期间青岛市立医院本部内分泌科诊治的2型糖尿病下肢血管病变患者82例,采用随机数字表法分为治疗组和对照组,每组各41例。对照组患者给予基础干预措施,治疗组患者在对照组基础上给予藤芪通络颗粒治疗。两组患者均持续治疗12周后,观察比较两组患者临床疗效,治疗前后血糖、血清腹内脂肪型丝氨酸蛋白酶抑制剂(Visceral adipose-specific serine protease inhibitor,Vaspin)、血清视黄醇结合蛋白4(Retinol binding protein 4,RBP4)、中医证候积分、踝肱指数及足背动脉血流量。结果两组患者治疗后空腹血糖、餐后2 h血糖水平均较治疗前降低,差异有统计学意义(P<0.05);且治疗组空腹血糖、餐后2 h血糖水平均较对照组明显降低,差异有统计学意义(P<0.05)。治疗后治疗组临床总有效率为87.80%(36/41)明显高于对照组68.29%(28/41),差异有统计学意义(P<0.05)。两组患者治疗后血清Vaspin水平均较治疗前升高,RBP4水平均较治疗前降低,差异有统计学意义(P<0.05);且治疗组血清Vaspin水平较对照组明显升高,RBP4水平较对照组明显降低,差异有统计学意义(P<0.05)。两组患者治疗后中医证候面色晦暗、肌肤甲错、自汗、气短懒言、倦怠乏力、肢体疼痛、肢体麻木积分均较治疗前降低,差异有统计学意义(P<0.05);且治疗组均较对照组明显降低,差异有统计学意义(P<0.05)。两组患者治疗后踝肱指数、足背动脉血流量均较治疗前升高,差异有统计学意义(P<0.05);且治疗组较对照组明显升高,差异有统计学意义(P<0.05)。结论2型糖尿病下肢血管病变气虚血瘀患者,采用藤芪通络颗粒进行治疗,可提升治疗效果,降低血糖以及血清RBP4水平,提高血清Vaspin水平,改善患者临床症状,提升踝肱指数以及足背动脉血流量。

左归丸含药血清对大鼠卵巢颗粒细胞Smad4及周期蛋白Cyclin A表达的影响

目的:探讨Smad4蛋白对大鼠卵巢颗粒细胞细胞周期蛋白cyclin A的影响以及左归丸的干预作用。方法:以不同剂量的左归丸含药血清作用于体外培养的大鼠卵巢颗粒细胞,用MTS法检测各组颗粒细胞24、48、72 h增殖情况以及用Western bolt法检测卵巢颗粒细胞Smad4和cyclin A蛋白表达。结果:左归丸含药血清对大鼠卵巢颗粒细胞的增殖有促进作用,在作用48 h,2.5%左归丸含药血清组作用最为显著(P<0.05);同时Smad4和cyclin A蛋白也达到最大表达(P<0.05)。结论:左归丸含药血清对卵巢颗粒细胞增殖的促进作用与增加Smad4信号通路细胞周期蛋白cyclin A表达,抑制细胞分裂有关。