两步酶解法制备低致敏性乳清蛋白及其致敏性评价

目的探究两步复合酶解工艺处理对牛乳清蛋白(whey protein isolate,WPI)结构和致敏性的影响。方法实验采用邻苯二甲醛法、体积排阻色谱法分析WPI水解物在不同酶解时间下的水解程度,同时采用酶联免疫吸附法(enzyme-linked immunoassay,ELISA)、细胞模型和小鼠模型对水解物进行体外和体内的致敏性评估,并利用超高效液相色谱-串联质谱法(ultra performance liquid chromatography-tandem mass spectrometry,UPLC-MS/MS)分析水解物中的残留过敏原表位。结果WPI经碱性蛋白酶和木瓜蛋白酶顺序酶解3.0 h后水解度达到14.19%,在水解2.0~3.0 h期间,WPI水解物主要由小肽(<5.0 kDa)组成。水解3.0 h后,水解产物与特异性抗体的结合能力降低了97.83%,细胞模型和小鼠模型结果证实,酶解产物的体外、体内致敏性显著降低,与空白对照组无显著性差异。UPLC-MS/MS结果表明WPI水解3.0 h产物中70.59%的肽段不含过敏原表位。结论复合酶解工艺有效降低了WPI致敏性,本研究构建的致敏性综合评价体系可为低敏乳制品水解工艺的开发提供指导。

加工方式对花生致敏性的影响及其致敏性评价研究进展

花生蛋白是一种理想的食品加工原料,同时也是一种致死率较高的食物过敏原,严重危害人类健康。本文主要综述食品加工方式对花生过敏蛋白致敏性的影响,以及体内、体外致敏性评价方法,为低致敏或无致敏花生制品的开发提供参考和指导。

模拟消化方法在食物过敏原潜在致敏性评价中的应用进展

食物过敏已成为全球范围内日益严重的食品安全问题。对食物过敏原的潜在致敏性进行评价有助于更好地了解食物过敏原自身特性及其对过敏人群免疫系统的影响。模拟消化实验是食物过敏原潜在致敏性评价的有力手段。食物过敏原蛋白的消化稳定性为其潜在致敏性评价结果提供了重要参考依据,但并非所有食物过敏原均具有较强的消化稳定性。食物过敏原的潜在致敏性一方面取决于过敏原蛋白在通过消化道时的消化稳定性,另一方面取决于消化产物中具有免疫刺激能力的过敏原表位的丰度。不同模拟消化方法的应用对食物过敏原的消化结果及潜在致敏性评价结果的真实性和可比性具有重要影响。本文系统地介绍了体内及体外模拟消化方法的优缺点及在食物过敏原潜在致敏性评价中的应用研究进展,并综述了食物过敏原消化稳定性与其潜在致敏性评价结果的关系。以期对食物过敏原致敏性评价体系的进一步完善和发展有所帮助。

两种金小蜂类icarapin蛋白潜在致敏性的初步评价

西方蜜蜂icarapin蛋白是一种常见的人畜过敏原,在寄生蜂类群中也有其同源物存在。为探究寄生蜂中类icarapin蛋白的潜在致敏性,本文克隆并表达了蝶蛹金小蜂和丽蝇蛹集金小蜂中类icarapin蛋白编码基因。序列分析表明,两种金小蜂类icarapin蛋白编码基因开放阅读框分别为645 bp和714 bp,生物信息学预测其均具有潜在的致敏性。经Ni离子亲和层析柱纯化得到了高纯度的重组类icarapin蛋白,在此基础上建立了小鼠致敏模型,初步探究了其潜在致敏性。结果表明,注射2种寄生蜂和西方蜜蜂重组icarapin蛋白的小鼠血清中组胺和免疫球蛋白IgE浓度均高于注射PBS的阴性对照组,表明这2种金小蜂类icarapin蛋白有潜在的致敏风险。本研究为寄生蜂源活性蛋白在应用前的安全性评估提供了一定的参考。

BN大鼠与豚鼠用于药物致敏性评价的比较

目的:比较豚鼠和BN大鼠过敏试验,以寻找用于致敏原检测的更为敏感的动物模型。方法:将白色豚鼠和BN大鼠(Brown Norwayrat)分别随机分为2组:1正常对照组,2牛血清白蛋白组。牛血清白蛋白组于试验的1,3,5d分别腹腔注射0.6%牛血清白蛋白以致敏,1mL/次,共3次。对照组腹腔注射给予相同体积的生理盐水注射液。于末次致敏后第7,14天,牛血清白蛋白组分别静脉注射2.4%牛血清白蛋白1mL/次以激发过敏;而对照组静脉注射相同体积生理盐水。分别于第1次及第2次静脉注射后,观察每只动物过敏反应情况,根据过敏反应症状评分,评价过敏反应强弱;并从眼眶静脉丛取血,分离血清,采用ELISA竞争试验法检测IgE含量;此外,采用激发后动物的血清,用SD大鼠进行被动皮肤过敏试验,计算蓝斑面积,测定并计算伊文思蓝染料的渗出量。结果:豚鼠第1次及第2次激发后,牛血清白蛋白组的过敏症状评分与对照组比较无明显差异;BN大鼠第1次及第2次激发后,牛血清白蛋白组出现明显的过敏反应,经非参数秩和检测与对照组比较均有显著性差异;被动皮肤过敏试验显示,BN大鼠牛血清白蛋白组血清在SD大鼠上可造成明显的蓝斑和伊文思蓝渗出量明显增加。而豚鼠牛血清白蛋白组的蓝斑不明显,伊文思蓝渗出量与对照组比较无明显差异。同种动物比较,牛血清白蛋白组和对照组血清IgE含量无明显差异。结论:BN在主动全身过敏反应和被动皮肤过敏反应中均显示牛血清白蛋白呈现阳性反应,而豚鼠反应不明显,因此BN大鼠用于致敏原检测比豚鼠更为敏感。同时,BN大鼠在技术操作上比豚鼠更方便和容易。

C57BL/6J小鼠胭窝淋巴结试验评价注射用双黄连的致敏性研究

目的比较注射用双黄连和致敏物引起的腘窝淋巴结(popliteal lymph node,PLN)反应,探讨注射用双黄连的致敏潜能。方法雌性C57BL/6J小鼠随机分为空白对照(Veh)组、苯巴比妥(PB)组(1 mg/只)、HgCl_2组(50μg/只)和D-青霉胺(D-pen)组(2 mg/只)、注射用双黄连低剂量组(L组,1 mg/只)和高剂量组(H组,5 mg/只),每组10只。小鼠一侧足趾部皮下给予受试物,第8天处死动物,摘取两侧PLN,称重,计算质量指数(mass index,MI);每组将4只小鼠的PLN以4%中性多聚甲醛固定用于病理学检查,其余6只制备单细胞悬液,计算细胞指数(cells index,CI),比较PLN的变化。结果H组MI、CI较Veh组升高(P<0.05),MI≥2和CI≥5。病理检查,PLN体积变大,生发中心明显,副皮质区内高内皮静脉(HEV)横断面增多。结论注射用双黄连可诱导C57BL/6J小鼠产生明显的PLN反应,提示它具有一定的致敏潜能。

腘窝淋巴结免疫细胞多种表面分子在PLNA评价致敏性中的综合分析

目的利用腘窝淋巴结实验(popliteal lymph node as-say,PLNA)分析腘窝淋巴结免疫细胞多个表面分子在PLNA评价致敏性中的综合变化,旨在提高PLNA的可靠性和灵敏性。方法选用♀BALB/c小鼠,选取具有致敏潜能物质氯化汞(HgCl2)、链脲佐菌素(STZ)、2,4,6-三硝基苯磺酸(TN-BS)和D-青霉胺(D-pen)为供试品,后肢足趾部注射免疫动物1次,5 d后处死动物,取注射侧腘窝淋巴结制备细胞悬液,流式细胞术检测腘窝淋巴结淋巴细胞、效应T细胞、抗原提呈细胞及其MHCⅡ、协同刺激和早期活化等十余种表面分子的变化,探讨这些表面分子在供试品致敏后的综合改变。结果 HgCl2和TNBS引起腘窝免疫细胞多种表面分子明显变化,D-pen和STZ所致的相应变化不明显。结论腘窝淋巴结免疫细胞表面分子变化的综合分析可以判断供试品的致敏潜能;不同供试品引起表面分子变化的种类和强弱有所不同,在致敏性评价中应综合考察各细胞表面分子的变化。

转基因食品致敏性评价啮齿类动物模型研究进展

随着转基因作物的快速发展,转基因食品的安全性成为广大民众关心的问题,转基因食品引起食物过敏的可能性是人们关注的焦点之一。目前,使用动物模型评价转基因作物的致敏性,是国际上研究和开发的热点领域,本文就转基因食品致敏性评价啮齿类动物模型的研究进展进行了综述。

转基因食品致敏性评价细胞模型研究进展

随着转基因作物的快速发展,转基因食品的安全性,尤其是引起食物过敏的可能性成为广大民众关心的主要问题之一。目前,国际上转基因作物致敏性评价的研究和开发的热点之一是使用细胞模型进行致敏性评价,本文简单介绍了转基因食品致敏性评价的现状,重点对细胞模型方面的研究进展进行了综述。

食物致敏性评价表达人IgE高亲和力受体αβγ的大鼠嗜碱性白血病粒细胞2H3细胞株的建立及鉴定

目的建立稳定表达人IgE高亲和力受体alpha、beta和gamma链(human high affinity receptor containing alpha, beta and gamma chain,hFcεRIαβγ)的大鼠嗜碱性白血病粒细胞(rat basophil leukemia,RBL)-2H3细胞株。方法将包装好的载有hFcεRIαβγ慢病毒感染目的细胞RBL-2H3细胞,实时PCR检测细胞hFcεRIαβγ的表达水平,流式细胞仪分选hFcεRIα表达阳性细胞,并检测分选后细胞hFcεRIα的表达水平。结果成功构建重组慢病毒表达载体GV348-hFcεRIαβγ和慢病毒颗粒;慢病毒能够有效感染RBL-2H3细胞,hFcεRIαβγ在RBL-2H3细胞中成功表达,hFcεRIα在RBL-2H3细胞蛋白水平成功表达。结论初步构建了hFcεRIαβγ/RBL-2H3细胞,相较于RBL-2H3细胞,该细胞表达hFcεRIα,可与人血清IgE特异性结合,能够更好地应用于食品致敏性评价体系中。

浅析食源性低聚肽的致敏风险

食源性低聚肽是以食用蛋白为原料水解的产物,分子质量小于1000 u,一般由2~10个氨基酸构成,可不需消化或稍加消化即可吸收,吸收利用率较高。食源性低聚肽具有一些生理活性功能,如抗氧化、抗菌,抑制血管紧张素转换酶活性等。近年来,食源性低聚肽被广泛应用于食品、保健品及化妆品等行业。从理论上来说,一般形成抗原表位至少需要5个氨基酸,由2~10个氨基酸组成的食源性低聚肽能够形成抗原表位而存在IgE介导过敏的潜在风险。据此,本文对可能引起食源性低聚肽致敏风险的因素,如存在抗原表位和可能发生交叉过敏反应进行分析,并对可能用于评价食源性低聚肽致敏性的方法进行介绍,对如何降低食源性低聚肽致敏风险的加工方法进行探讨,为食源性低聚肽的更广泛应用提供理论基础。

食物过敏动物模型的研究进展

食物过敏是食品安全的重要问题之一,日益受到人们的关注。食物过敏动物模型不仅为食物过敏机制的研究提供重要的依据,而且还可有效地对食物过敏原进行准确的评价和检测。本文对小鼠、大鼠、豚鼠等啮齿类动物及幼猪和狗等非啮齿类常见食物过敏动物模型、动物模型致敏途径以及动物过敏模型检测、评价指标等研究进行了综述。

转基因植物食用安全评价

2014年全球转基因植物种植面积达到1.815亿hm2,转基因植物商业化发展给全球农业和环境带来巨大收益,但是其安全性问题仍然受到广泛争议。目前,对转基因植物的安全评价在全球范围内已经建立起较为完善的体系,但是各国政府对评价程序的具体要求还存在差异。为了在法律法规层面规范转基因植物安全评价程序,中国农业部颁布了《转基因植物安全评价指南》,涵盖了详细的转基因植物及其产品的安全性评价内容。本文结合案例分析,对该指南中的食用安全评价部分详细解析和论述了包括营养学、毒理学、致敏性以及非期望效应等安全评价程序,旨在为我国转基因植物的食用安全评价提供有益的指导与借鉴。

花粉过敏动物模型的研究进展

花粉等植物性过敏原导致的各类变态反应性疾病逐年高发,成为全球性公共卫生问题和各国政府日益关注的环境与健康风险。花粉过敏动物模型是研究植物源过敏性疾病的发生及其过敏机制等的关键环节,可为花粉过敏机制及相关研究提供重要依据,也可对花粉过敏原进行有效准确的评价和检测,推动防治策略研究。文章围绕花粉过敏动物模型的品系种类、模型构建方法、繁育策略、检测与评价等方面的研究资料进行综述,通过总结近年来花粉过敏动物模型研究的优缺点及其应用情况,为建立适宜的花粉过敏研究实验动物模型及其相关的基础和应用研究提供参考。

利用血清筛选和模拟胃肠液消化稳定性试验评价植物源重组人血清白蛋白潜在致敏性

目的利用血清筛选试验和模拟胃肠液消化稳定性试验,探讨植物源重组人血清白蛋白(OsrHSA)是否具有潜在致敏性。方法选择对虾、小麦、屋尘螨、鸡蛋、牛奶过敏,特异性IgE抗体浓度大于3.5 kUA/L的患者血清75份和健康人血清4份,利用酶联免疫吸附试验探讨OsrHSA能否与过敏血清中的过敏原特异性IgE抗体结合;按照国家标准《转基因生物及其产品食用安全检测模拟胃肠液外源蛋白质消化稳定性试验方法》进行OsrHSA的模拟胃肠液消化稳定性试验,评估OsrHSA的消化稳定性。结果有3份对牛奶过敏的血清与OsrHSA发生免疫交叉反应,该蛋白与牛奶过敏原可能存在抗原交叉性;OsrHSA在模拟胃肠液中15 s内即被消化完全,表明该蛋白极易被消化。结论OsrHSA的潜在致敏性较低,对牛奶过敏的人群需要慎重使用。

2，4-二硝基氯代苯对小鼠骨髓源树突状细胞膜表面分子的影响

[目的]筛选小鼠骨髓来源树突状细胞(DC)在化学物致敏性评价中的合适指标。[方法]将皮肤致敏物2,4-二硝基氯代苯(DNCB)和皮肤刺激物十二烷基磺酸纳(SDS)分别作用于小鼠骨髓来源DC,设立对照组,在不同的时段,用流式细胞仪检测DC膜表面分子CD80、CD86和MHCⅡ类分子。[结果] CD80在SDS染毒后,48h和60h时表达增幅最大,约335%,而DNCB组和对照组则平稳增加,最大增幅分别为50%和60%;CD86表达在DNCB染毒48h时达到最大值,增加约262%,而SDS组和对照组最大增幅分别为72%和66%,12h后趋于降低;MHCⅡ类分子表达则在3组中均出现大幅波动。[结论] CD86分子表达在化学物致敏性评价中有一定的应用前景。

Ⅰ型过敏试验动物模型比较研究

目的:通过观察速发型过敏反应发生时的敏感指标的含量变化,比较常用于中药注射剂速发型过敏反应的几种动物模型的优劣。方法:①以卵蛋白为致敏原,直接对SD大鼠、BN大鼠、豚鼠进行致敏和激发,通过观察过敏反应的症状,ELISA法测量血清中的IgE、组胺、类胰蛋白酶以及β-氨基己糖苷酶的含量变化。②SD大鼠皮下注射致敏后的动物血清进行被动皮肤过敏试验,观察大鼠皮下是否出现蓝斑以及蓝斑面积。结果:①在致敏和激发途径、注射卵蛋白的剂量、次数、间隔时间相同的情况下,SD大鼠、BN大鼠、豚鼠血清中IgE、组胺、类胰蛋白酶以及β-氨基己糖苷酶的含量与相应的生理盐水组比均具有显著性的差异。其中豚鼠血清中IgE、类胰蛋白酶以及β-氨基己糖苷酶的变化率均高于SD大鼠和BN大鼠。BN大鼠血清中的组胺变化率高于豚鼠和SD大鼠。②被动过敏试验显示:BN大鼠卵蛋白组在SD大鼠上可造成明显的蓝斑。结论:仅采用豚鼠作为评价中药注射剂过敏反应的动物模型尚不能完全反映注射剂是否能引起过敏反应,增加不同品种试验动物以及相关检测指标,能更加全面的评价中药注射剂的致敏性。