核桃主要致敏蛋白Jugr1的分离纯化、鉴定与分析

采用十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳、双抗夹心酶联免疫吸附(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)等方法,以Jug r 1含量为指标,对云南7个不同产地的泡核桃(Juglans sigillata)进行筛选,进一步利用硫酸铵分级沉淀、凝胶过滤层析、液相色谱-串联质谱等手段制备Jug r 1并进行优化和鉴定,通过圆二色谱对Jug r 1的结构进行表征,最后采用双抗夹心ELISA法测定其含量。结果表明:保山隆阳产地核桃的总蛋白含量和Jug r 1含量均最高,用于后续实验;经优化得到Jug r 1的最佳硫酸铵分级沉淀分离区间为40%~80%,进一步对其进行凝胶过滤层析的最佳条件为上样质量浓度30 mg/mL、上样体积4 mL、洗脱流速1 mL/min;在此条件下纯化得到Jug r 1含量达19.90 mg/120 mg上样量,蛋白得率为16.58%;质谱分析表明该蛋白符合Jug r 1的典型特征;圆二色谱显示Jug r 1的二级结构以α-螺旋为主,多种构象共存;经“两步法”分离纯化后可获得蛋白纯度占总蛋白96%以上的Jug r 1。本结果可为深入研究Jug r 1提供科学基础,并为其他坚果致敏蛋白的分离纯化提供参考。

大豆主要致敏蛋白及其检测技术研究进展

大豆是常见的食物过敏原之一,能够引发严重的过敏反应。目前,由于缺乏对大豆过敏的明确治疗方法,大豆过敏人群只能避免摄入含有大豆的食物。但在实际的食品生产过程中会添加不同的食品配料,且加工过程复杂,难以准确检测部分食品中是否含有大豆过敏原。因此对于食品中大豆过敏原检测方法的研究变得尤为重要。本文主要阐述大豆中主要致敏蛋白及其结构特性,并详细总结目前用于大豆过敏原检测的主要技术,对于有效避免大豆过敏、保证过敏人群生命健康具有重要意义。

基于高分辨质谱的食品致敏蛋白检测研究进展

食品致敏原事关食品安全,其检测技术的进步对于食物过敏风险评估具有重要现实价值。与传统的酶联免疫吸附(ELISA)等免疫学检测方法相比,高分辨质谱技术(HRMS)凭借高通量等特点,近些年在食品致敏蛋白检测研究中的应用日渐广泛。该文主要综述了基于HRMS技术的致敏蛋白检测研究进展,重点介绍了致敏蛋白的提取纯化、酶解以及基于HRMS的分析策略和数据采集模式,同时分析了HRMS在致敏蛋白检测方面存在的挑战,以期为促进致敏蛋白检测的现代化发展提供参考。

花生致敏蛋白的研究进展

食物过敏已成为重要的食品安全问题。而花生蛋白是重要的食物过敏原,因此研究花生蛋白致敏的机制,探索脱敏方法,保证花生制品的安全性是亟待解决的课题。本文综述了花生过敏临床症状、花生致敏蛋白的识别及已建立的脱敏方法。并提出了探索合适的蛋白改性方法。

酶水解对大豆致敏蛋白P34免疫活性的影响及酶解产物理化性质研究

采用不同来源的7种蛋白酶对大豆蛋白进行酶解,利用SDS-PAGE和水解度研究酶解去除P34的效果,通过Western Blot法测定酶解后大豆致敏蛋白P34免疫活性的变化。结果表明,经不同来源的蛋白酶处理后,大豆蛋白中致敏蛋白P34的含量都有不同程度降低,风味蛋白酶和碱性蛋白酶对P34的作用效果最强,可将P34完全去除。在最优的酶解条件下,两种大豆蛋白酶解物溶解性、保水性、乳化性、乳化稳定性和起泡性明显提高,而粘性、吸油性和泡沫稳定性降低。

大豆致敏蛋白及其清除方法的研究进展

大豆含有丰富的蛋白质和平衡的氨基酸组分,是人和畜禽优质的植物蛋白源。然而,近年来,大豆中含有的抗原蛋白导致人和动物过敏反应的问题越来越受到关注,大豆致敏蛋白的相关研究成为大豆蛋白研究与应用的新热点。该文综述了大豆致敏蛋白的种类、特征,对有效加工、灭活大豆致敏蛋白的方法进行了归纳,着重介绍了传统育种方法结合基因工程手段在创制低致敏原大豆新种质方面的应用及研究进展,为进一步提高大豆及其制品的品质质量、保证其在人类食品和畜禽饲料中的安全与高效利用提供科学参考。

大豆主要致敏蛋白生化特性的研究进展

大豆是一种优质植物蛋白原料,其种子中蛋白质含量为36%～38%,但大豆中所含的多种致敏蛋白质是限制大豆在饲料和食品中利用的关键因素。本文对大豆主要致敏原的生物化学特性进行了综述。

鸡蛋致敏蛋白免疫分析方法的建立

采用硫酸铵沉淀法和离子交换法分离纯化鸡蛋清得致敏蛋白后免疫兔子制备抗多克隆抗体,并建立快速、灵敏、特异性强的鸡蛋致敏蛋白酶联免疫检测方法。在优化条件下,鸡蛋致敏蛋白在1×10-4～10μg/mL质量浓度范围内与抑制率线性关系良好,其线性回归方程为y=0.74145+0.21692 lgC(r=0.9971),半抑制浓度(IC50)和最低检测限(IC10)分别为为77.076、1.104ng/mL;样品加标回收率在98.29%～101.55%之间;且抗鸡蛋致敏蛋白多克隆抗体对火鸡蛋蛋白、鸭蛋蛋白、鹅蛋蛋白均具有交叉反应,与花生、小麦蛋白无交叉反应;批内和批间变异系数分别为4.63%和5.49%,且可在4℃可保存6个月以上,能够快速灵敏检测食品中鸡蛋致敏蛋白的存在。

处理方法对大豆致敏蛋白的影响

Gly m Bd30K、Gly m Bd28K和β-伴大豆球蛋白的α亚基(MW68K)是大豆中的主要致敏蛋白,本文对经过不同处理的大豆进行SDS-PAGE电泳,结果显示,结合盐析和pH值处理可以有效去除Gly m Bd30K和Glym Bd28K,但要同时去除三种致敏蛋白还需进一步研究。

辐照处理对花生致敏蛋白的影响

花生过敏会严重影响人体的健康。通过检测花生蛋白SDS-PAGE电泳图谱研究了不同辐照剂量对花生致敏蛋白的影响,并初步探讨了辐照和挤压组织化技术结合处理对花生蛋白致敏性的影响。结果表明,花生中的大部分蛋白对辐照处理的稳定性较强。1.0kGy以下的小剂量辐照处理对花生制品及溶液中致敏蛋白影响不大。当辐照剂量在1.0kGy以上,各蛋白溶液中,除分子量大于96.9kDa蛋白含量增加外,其余各蛋白含量普遍减少。

大豆致敏蛋白的识别

我国是大豆的种植大国,但对大豆致敏蛋白的识别却一直没有进行过,本文就是利用大豆过敏患者的血清识别不同品种大豆致敏蛋白的组成,除已被发现的7S(β-伴大豆球蛋白)外,还识别到一种分子量85.3kDa的强致敏蛋白,同时发现,品种间的差异蛋白都有可能成为新的致敏蛋白。

酶解处理对小鼠模型中虾主要致敏蛋白的致敏性影响分析

为探究酶解处理对动物模型中虾主要致敏蛋白的致敏性影响,68只雌性BALB/c小鼠随机分为生理盐水对照组、虾致敏蛋白组、酶解虾致敏蛋白组、酶对照组,腹腔注射各组溶液,测定小鼠的脾指数,血清中s Ig G、s Ig E、组胺含量,并观察灌胃处理后的小鼠小肠切片,探究酶解后蛋白的抗原性变化。结果表明,酶解处理使虾中主要致敏蛋白的α-螺旋和β-折叠比例分别下降3.5%和1.5%,β-转角跟无规则卷曲比例分别上升4.3%和1.7%,这些变化使小鼠体内s Ig E水平降低了40.44%。但虾致敏蛋白组的s Ig G和脾指数与酶解蛋白组相比差异不显著,且酶解蛋白组肠切片显示其炎症反应较致敏蛋白组更为明显。综上所述,酶解处理减弱了虾致敏蛋白的抗原性,在一定程度上降低了其致敏性,但是经过多次免疫,酶解后的致敏蛋白在小鼠体内依然能引起很强的过敏反应。本研究为探索致敏蛋白降敏机理提供了技术支撑。

大豆制品中致敏蛋白的识别

本实验采用酶联免疫印迹和竞争性抑制实验识别大豆制品中的致敏蛋白。研究结果显示,大豆中的致敏蛋白主要存在于非发酵性豆制品中,且脂肪氧化酶和32.5kD的致敏蛋白在大豆加工过程中很容易失去致敏性,18.9kD的致敏蛋白在组织化大豆蛋白中容易失去致敏性,而β-伴球蛋白的α-亚基虽然存在一定的非特异性吸附,但依然是致敏性较强的蛋白。

三裂叶豚草花粉致敏蛋白组分的分离、纯化及鉴定

目的分离、纯化及鉴定三裂叶豚草花粉致敏蛋白组分。方法提取三裂叶豚草花粉粗提液,用十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)分离粗提液蛋白组分并测定其分子量。收集存在变态反应患者血清,通过免疫印迹法(Western-blotting)对花粉致敏蛋白组分进行鉴定,用离子交换层析初步纯化其致敏蛋白组分,并通过Western-blotting鉴定。结果三裂叶豚草花粉有30余条蛋白条带,其中有14条主要条带,其特异性致敏蛋白组分的相对分子质量为63 000、56 000、40 000和36 500,主要为63 000、40 000和36 500。三裂叶豚草花粉通过离子交换层析纯化出相对分子质量分别为63 000、40 000和36 500的致敏蛋白组分主要集中在Ⅳ、Ⅲ、Ⅱ、Ⅰ峰。结论初步分离、纯化及鉴定了三裂叶豚草花粉致敏蛋白组分。

辐照对克氏原螯虾致敏蛋白质生化性质的影响

通过对克氏原螯虾(Procambarus clarkii)致敏蛋白质的提取,利用60Coγ射线对其进行辐照,探讨了7个不同辐照剂量10、20、30、40、50、60、70 k Gy对克氏原螯虾致敏蛋白质降解效果的影响,以及对致敏蛋白质浓度、浊度和疏水性等生化性质的影响。结果表明,随着辐照剂量的增加,致敏蛋白质条带逐渐减弱,部分条带消失,即使是最大辐照剂量70 k Gy也未能使所有致敏蛋白质条带完全降解;与未辐照的克氏原螯虾致敏蛋白质相比,辐照后的蛋白质浓度降低,浊度增高,疏水性逐渐增强,说明辐照对克氏原螯虾致敏蛋白质有一定的降解作用。

花生致敏蛋白Ara h1与咖啡酸互作对其抗原性的影响

为探寻适宜的花生脱敏方法,该文研究了花生致敏蛋白Ara h1与咖啡酸互作对其抗原性的影响,利用荧光光谱、紫外光谱和间接ELISA法对碱法、酶法、自由基法处理后的咖啡酸蛋白复合物抗原性变化进行了分析,并对碱法互作反应温度、反应时间、pH值、咖啡酸浓度进行优化。结果表明:在温度33.2℃、时间25 h、pH值8.67和咖啡酸浓度1.76 mg/mL时,咖啡酸与花生致敏蛋白Ara h1碱法互作后其抗原性降至69.31%,接枝量为119.16 nmol/mg。碱法处理后,咖啡酸与花生致敏蛋白Ara h1互作能降低致敏蛋白抗原性,研究结果可为花生脱敏处理提供参考。

荞麦过敏症临床特征及致敏蛋白

荞麦在我国分布极广,且用途广泛,其种子可食用,谷壳可作为枕芯的填充物。荞麦富含纤维素和微量元素,越来越普遍成为流行的健康食品,因此荞麦过敏患者日渐增多,引起了临床医师及广大患者的重视。本文总结荞麦过敏症的发病率、易患人群、发病机制、临床表现、接触途径和诊断标准,并对荞麦致敏蛋白的研究进行总结,了解荞麦过敏症的临床特征和荞麦致敏蛋白的研究现状,为进一步研究奠定基础。

食物致敏蛋白研究进展

食物过敏现已成为食品安全事件中尤为突出的问题。为了解决食物过敏病症给人类带来的困扰,综述了引起过敏的食品来源,识别食物致敏蛋白现状,食品变应原的致敏机理以及利用物理化学方法、酶法、生物技术方法脱除过敏蛋白的技术进展。从而根据上述理论对开发低过敏以及抗过敏食品作出指导,并且规范食品过敏原检测技术。

食物致敏蛋白及其检测方法

食物过敏是威胁人类健康的一大问题,并随着环境的恶化和新食物资源的出现而趋于严重,因此受到科研工作者,政府职能部门以及消费者的关注。本文就食物来源的致敏蛋白加以分类并对其结构特点进行了概述,同时也介绍了现阶段致敏蛋白的主要检测手段。以期对食品安全有进一步的了解和认识,从而减少因食物过敏造成的危害。

利用质谱技术鉴定马铃薯醇溶性致敏蛋白

【目的】为马铃薯品质育种提供理论依据.【方法】利用小麦麸质蛋白提取液提取马铃薯储藏蛋白,然后利用十二烷基苯磺酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳分离可能的致敏蛋白,切胶回收目的蛋白,真空干燥,酶切后质谱检测分离的蛋白,并与小麦中已知的致敏性多肽进行比对.[结果]共检测到199种马铃薯蛋白,比对后未发现其含有可导致乳糜泻的多肽.【结论】马铃薯不含有类似麸质蛋白的多肽.