采用十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳、双抗夹心酶联免疫吸附(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)等方法,以Jug r 1含量为指标,对云南7个不同产地的泡核桃(Juglans sigillata)进行筛选,进一步利用硫酸铵分级沉淀、凝胶过滤层...采用十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳、双抗夹心酶联免疫吸附(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)等方法,以Jug r 1含量为指标,对云南7个不同产地的泡核桃(Juglans sigillata)进行筛选,进一步利用硫酸铵分级沉淀、凝胶过滤层析、液相色谱-串联质谱等手段制备Jug r 1并进行优化和鉴定,通过圆二色谱对Jug r 1的结构进行表征,最后采用双抗夹心ELISA法测定其含量。结果表明:保山隆阳产地核桃的总蛋白含量和Jug r 1含量均最高,用于后续实验;经优化得到Jug r 1的最佳硫酸铵分级沉淀分离区间为40%~80%,进一步对其进行凝胶过滤层析的最佳条件为上样质量浓度30 mg/mL、上样体积4 mL、洗脱流速1 mL/min;在此条件下纯化得到Jug r 1含量达19.90 mg/120 mg上样量,蛋白得率为16.58%;质谱分析表明该蛋白符合Jug r 1的典型特征;圆二色谱显示Jug r 1的二级结构以α-螺旋为主,多种构象共存;经“两步法”分离纯化后可获得蛋白纯度占总蛋白96%以上的Jug r 1。本结果可为深入研究Jug r 1提供科学基础,并为其他坚果致敏蛋白的分离纯化提供参考。展开更多
Gly m Bd30K、Gly m Bd28K和β-伴大豆球蛋白的α亚基(MW68K)是大豆中的主要致敏蛋白,本文对经过不同处理的大豆进行SDS-PAGE电泳,结果显示,结合盐析和pH值处理可以有效去除Gly m Bd30K和Glym Bd28K,但要同时去除三种致敏蛋白还需进一...Gly m Bd30K、Gly m Bd28K和β-伴大豆球蛋白的α亚基(MW68K)是大豆中的主要致敏蛋白,本文对经过不同处理的大豆进行SDS-PAGE电泳,结果显示,结合盐析和pH值处理可以有效去除Gly m Bd30K和Glym Bd28K,但要同时去除三种致敏蛋白还需进一步研究。展开更多
通过对克氏原螯虾(Procambarus clarkii)致敏蛋白质的提取,利用60Coγ射线对其进行辐照,探讨了7个不同辐照剂量10、20、30、40、50、60、70 k Gy对克氏原螯虾致敏蛋白质降解效果的影响,以及对致敏蛋白质浓度、浊度和疏水性等生化性质的...通过对克氏原螯虾(Procambarus clarkii)致敏蛋白质的提取,利用60Coγ射线对其进行辐照,探讨了7个不同辐照剂量10、20、30、40、50、60、70 k Gy对克氏原螯虾致敏蛋白质降解效果的影响,以及对致敏蛋白质浓度、浊度和疏水性等生化性质的影响。结果表明,随着辐照剂量的增加,致敏蛋白质条带逐渐减弱,部分条带消失,即使是最大辐照剂量70 k Gy也未能使所有致敏蛋白质条带完全降解;与未辐照的克氏原螯虾致敏蛋白质相比,辐照后的蛋白质浓度降低,浊度增高,疏水性逐渐增强,说明辐照对克氏原螯虾致敏蛋白质有一定的降解作用。展开更多
文摘采用十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳、双抗夹心酶联免疫吸附(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)等方法,以Jug r 1含量为指标,对云南7个不同产地的泡核桃(Juglans sigillata)进行筛选,进一步利用硫酸铵分级沉淀、凝胶过滤层析、液相色谱-串联质谱等手段制备Jug r 1并进行优化和鉴定,通过圆二色谱对Jug r 1的结构进行表征,最后采用双抗夹心ELISA法测定其含量。结果表明:保山隆阳产地核桃的总蛋白含量和Jug r 1含量均最高,用于后续实验;经优化得到Jug r 1的最佳硫酸铵分级沉淀分离区间为40%~80%,进一步对其进行凝胶过滤层析的最佳条件为上样质量浓度30 mg/mL、上样体积4 mL、洗脱流速1 mL/min;在此条件下纯化得到Jug r 1含量达19.90 mg/120 mg上样量,蛋白得率为16.58%;质谱分析表明该蛋白符合Jug r 1的典型特征;圆二色谱显示Jug r 1的二级结构以α-螺旋为主,多种构象共存;经“两步法”分离纯化后可获得蛋白纯度占总蛋白96%以上的Jug r 1。本结果可为深入研究Jug r 1提供科学基础,并为其他坚果致敏蛋白的分离纯化提供参考。
文摘通过对克氏原螯虾(Procambarus clarkii)致敏蛋白质的提取,利用60Coγ射线对其进行辐照,探讨了7个不同辐照剂量10、20、30、40、50、60、70 k Gy对克氏原螯虾致敏蛋白质降解效果的影响,以及对致敏蛋白质浓度、浊度和疏水性等生化性质的影响。结果表明,随着辐照剂量的增加,致敏蛋白质条带逐渐减弱,部分条带消失,即使是最大辐照剂量70 k Gy也未能使所有致敏蛋白质条带完全降解;与未辐照的克氏原螯虾致敏蛋白质相比,辐照后的蛋白质浓度降低,浊度增高,疏水性逐渐增强,说明辐照对克氏原螯虾致敏蛋白质有一定的降解作用。