牙龈卟啉单胞菌致病岛基因及其致病性的研究进展

牙周组织炎症的发生和发展是定植于牙周袋中的致病菌与宿主免疫和炎症反应相互作用的结果。牙龈卟啉单胞菌是革兰阴性的专性厌氧菌,该菌具有一系列逃避宿主防御机制及破坏宿主组织的毒性因子,如菌毛、多糖夹膜、脂多糖、外膜膜泡和多种蛋白酶[1],是目前公认的慢性牙周炎重要的病原菌,与牙周炎症的发生、发展和复发密切相关[2~4]。

正畸牙龈炎患者中牙龈卟啉单胞菌致病岛Rag基因的检测及其致病性分析

目的:分析不同rag基因型牙龈卟啉单胞菌(Pg)在正畸牙龈炎患者中的分布状况。方法:41例患者为戴用矫治器后发生牙龈炎者(正畸治疗组),36例为未戴矫治器牙周健康者(对照组),25例为中、重度牙周炎患者(牙周炎组)。利用多重PCR技术检测受试者龈沟液标本中牙龈卟啉单胞菌及致病岛rag基因,分析其与临床指标之间的相互关系。结果:牙龈卟啉单胞菌阳性率(%)在正畸治疗组、对照组和牙周炎组分别为70.7、36.1和92.0(P<0.01)。在Pg阳性患者(正畸治疗组和牙周炎组)rag基因型检出率依次为rag-3、rag-4、rag-1和rag-2。结论:不同rag基因型P.gingivalis在不同病变组织中的分布不同;rag-3型和rag-4型Pg与牙龈炎的发生发展有密切关系。

慢性牙周炎患者中牙龈卟啉单胞菌的检测及致病岛Rag基因的初步研究

目的探讨牙龈卟啉单胞菌及致病岛Rag基因与慢性牙周炎的关系。方法收集慢性牙周炎患者的134个龈沟液样本,另选牙龈健康者的28个龈沟液样本作为对照组,采用PCR技术检测牙龈卟啉单胞菌及致病岛Rag基因,分析牙龈卟啉单胞菌及致病岛Rag基因在不同病变位点的分布。结果经16S rDNA聚合酶链式反应(PCR)法检测,病变位点牙龈卟啉单胞菌检出率为73.13%,对照组阳性率为46.43%,牙周炎组明显高于对照组,两者之间比较差异有显著性(P<0.01)。经多重PCR检测,111个P.gingivalis阳性的龈沟液样本中,共扩增出Rag基因的有88例,阳性率为79.27%。结论牙龈卟啉单胞菌及致病岛Rag基因与慢性牙周炎的发生、发展密切相关。

幽门螺杆菌细胞毒素相关基因致病岛及Ⅳ型分泌系统的研究进展

致病岛是指细菌染色体上一段具有典型结构特征的基因簇,主要编码与细菌毒力及代谢等功能相关的产物。Ⅳ型分泌系统指革兰阴性菌中由多种蛋白分子构成的、通过菌毛样结构向宿主细胞注入毒力因子的分泌系统。幽门螺杆菌细胞毒素相关基因致病岛及其编码的Ⅳ型分泌系统是幽门螺杆菌关键性致病因子,有可能成为药物作用的新靶标,是近年相关研究的热点。

正畸牙龈炎患者龈沟液中牙龈卟啉单胞菌及致病岛rag基因的研究

目的探讨正畸过程中牙龈卟啉单胞菌及致病岛rag基因与牙龈炎症程度的相关关系,分析其在正畸牙龈炎发生发展中的作用。方法收集102例来自济南市口腔医院正畸科和口腔内科患者组成正畸牙龈炎组(57例)、对照组(20例)、牙周炎组(25例),并记录其各临床指标,分别采集牙周袋最深处或龈沟液标本,采用16S rDNA PCR和多重PCR对牙龈卟啉单胞菌及致病岛rag基因进行检测,分析其与临床指标的关系。结果 102例患者临床标本,共扩增出牙龈卟啉单胞菌65株,其中正畸牙龈炎组35株;对照组7株;牙周炎组23株,经Spearman等级相关分析,牙龈卟啉单胞菌检出率与牙龈指数之间存在明显的正相关关系(P<0.01)。正畸牙龈炎组检出率明显高于对照组,牙周炎组高于正畸牙龈炎组和对照组,三者之间有显著性差异(χ2=15.918,P<0.001),65例牙龈卟啉单胞菌阳性患者临床标本,扩增出rag基因的有52例,其中正畸牙龈炎组29例;对照组1例;牙周炎组22例,正畸牙龈炎组明显高于对照组,牙周炎组高于正畸牙龈炎组和对照组,三者之间有显著性差异(χ2=22.593,P<0.001)。结论牙龈卟啉单胞菌致病岛rag基因与正畸治疗中牙龈炎性反应密切相关。

黑龙江省部分地区马铃薯疮痂病菌种类及致病性鉴定

为明确黑龙江省马铃薯疮痂病病原菌的种类及其特征,2012-2013年从黑龙江省克山县、绥化市、哈尔滨市、杜尔伯特蒙古族自治县采集具有疮痂病病斑的马铃薯块茎,从中分离纯化病原菌,根据16SrRNA基因的差异采用分子手段对所分离的菌株进行种类和致病性鉴定,并对txtAB阳性菌株采用萝卜幼苗法或马铃薯致病性试验测定其致病性。共分离出74株菌株,鉴定出致病性菌株26株,其中Streptomyces scabies或S.europaeiscabiei 21株,S.turgidiscabies 3株和S.acidiscabies 2株。所有的致病性菌株中共有4种致病岛基因型,即nec1+/tomA+、nec1-/tomA+、nec1+/tomA-和nec1-/tomA。

慢性胃炎、消化性溃疡患者携带株幽门螺杆菌基因分型

目的探讨慢性胃炎、消化性溃疡患者携带株幽门螺杆菌(Hp)的基因分型方法。方法对Hp标准株和慢性胃炎、消化性溃疡、非胃炎非溃疡患者携带株基因组DNA进行随机扩增多态性分析(RAPD),PCR扩增空泡毒素基因(vacA)和致病岛基因(cag-PAI)的cagA、cagE、cagT片段,并测定全部菌株的VacA活性。采用聚类分析进行基因分型。结果单纯RAPD分型结果显示不同基因型别Hp与不同疾病结局无关(P=0.0685)。依据vacA+cag-PAI分型结果显示不同基因型别Hp与不同疾病结局无关(P=0.2685)。将RAPD分析结果与vacA+cag-PAI检测结果进行综合聚类,全部菌株可分为3个型别,慢性胃炎、消化性溃疡和非胃炎非溃疡分别有自己的优势基因型,且各型间的总体分布差异有统计学意义(P=0.0067)。VacA的活性表达情况在各基因型之间的分布差异无统计学意义(P=0.2655)。结论Hp基因型与疾病类型有关,空泡毒素基因和致病岛基因可作为Hp基因分型的靶基因,RAPD是有效的基因分型手段。

幽门螺杆菌基因型与慢性胃炎和消化性溃疡的相关性

目的探讨Hp基因型与慢性胃炎、消化性溃疡的关系。方法对标准株和临床分离株幽门螺杆菌空泡毒素基因vacA和致病岛基因的cagA、cagE、cagT片段进行PCR扩增,对基因组DNA进行随机扩增多态性分析(RAPD),并以Hela细胞测定全部菌株的VacA毒素活性。SPSS13.0软件聚类分析进行基因分型。结果全部菌株被分为3个型别,慢性胃炎、消化性溃疡和非胃炎非溃疡分别有自己的优势基因型,且各型之间的总体分布差异具有统计学意义。结论Hp基因型与疾病类型有关,空泡毒素基因和致病岛基因可作为Hp基因分型的靶基因,RAPD是有效的基因分型手段。

幽门螺杆菌cag1基因缺陷株的构建与鉴定

目的:构建幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,H.pylori)细胞毒素相关基因致病岛(cytotoxin associated gene pathogenicity island,cag PAI)中的第1个编码基因hp0520/cag1基因缺陷株,为进一步研究cag1基因在cag PAI中的功能奠定基础。方法:使用同源重组技术,通过PCR扩增出cag1基因两侧同源臂序列,酶切纯化后分别连接于带卡那霉素抗性标志的载体两端,构建成cag1基因自杀质粒。将该质粒通过电穿孔导入受体野生株中,通过抗性筛选与PCR验证得到cag1基因缺陷株,与人胃上皮GES-1细胞共培养后,与野生株比较,观察细胞形态变化。结果:成功敲除H.pylori cag1基因,获得cag1基因缺陷株;与野生株相比,cag1基因缺陷株破坏细胞的能力降低。结论:成功获得幽门螺杆菌cag1基因缺陷株;cag1基因缺失后H.pylori对GES-1细胞的毒力减弱。

细胞毒素相关基因A及细胞毒素相关蛋白A研究进展

细胞毒素相关基因A及细胞毒素相关蛋白A是幽门螺杆菌重要的毒力因子,具有遗传基因多态性和地区分布的差异,与消化道溃疡、胃炎、胃癌及一些非胃肠道疾病的发生发展密切相关,并影响胃损害的严重程度及最终临床结局。其致病机制主要与影响多条细胞信息传递通路有关。

多重PCR技术用于检测牙龈卟啉单胞菌致病岛rag基因的研究

目的探讨多重PCR技术用于检测牙龈卟啉单胞菌(Porphyromonasgingivalis,P.gingivalis)致病岛rag基因的可行性,并研究致病岛rag基因在毒力株和非毒力株中的分布情况。方法本研究于2011年1—6月在山东省口腔生物医学重点实验室进行,对P.gingivalis毒力株和非毒力株进行厌氧培养,采用普通PCR和多重PCR分别对他们的致病岛rag基因进行检测,对比检测结果,并对临床标本进行预实验研究。结果普通PCR和多重PCR均能对P.gingivalis致病岛rag基因进行检测,并且结果一致。多重PCR可用于临床标本的检测。致病岛rag基因不同基因型在毒力株和非毒力株中的分布不同,rag-1型存在于高毒力株P.gingivalisW83中,而rag-4型存在于低毒力株P.gingivalisATCC33277中。结论致病岛rag基因与细菌致病性密切相关;多重PCR技术省时省力、简单快速,为后续临床标本中rag基因的快速检测提供实验依据。

幽门螺杆菌cag致病岛ORF10基因下调胃上皮白细胞介素-8转录

目的 幽门螺杆菌 (Hp)cag致病岛 (cagPAI)含 30多个基因 ,HpcagⅠ与cagⅡ中许多基因能增加胃上皮白细胞介素 8(IL 8)基因转录与IL 8蛋白分泌。本研究观察HpcagⅡ中ORF10基因对胃上皮细胞IL 8基因转录的影响 ,以验证HpcagPAI中某些基因下调IL 8基因转录及表达的可能性。方法 构建cagⅡORF10基因缺失 ( ORF10 )Hp突变株及带有IL 8报告基因的人胃癌细胞系L5F11,用液体闪烁计数仪测定荧光素酶 (IL 8转录 )活性 ,用ELISA法测定IL 8蛋白浓度。结果 3株 ORF10Hp菌株 (2 8 1,2 8 2 ,2 8 3)诱导荧光素酶活性较亲代菌株 2 6 6 95显著增加 [分别为 2 8 1:(1.4 9± 0 .2 7)× 10 6cpm ,2 8 2 :(1.33± 0 .2 8)× 10 6cpm ,2 8 3:(1.33± 0 .2 9)× 10 6cpm ;亲代菌株2 6 6 95 :(0 .6 7± 0 .0 8)× 10 6cpm ;P分别 <0 .0 1,0 .0 5和 0 .0 5 ];2株 ORF10Hp菌株诱导IL 8蛋白水平较亲代菌株 2 6 6 95均显著升高 [分别为 2 8 2 :(1.2± 0 .0 8)ng/ml;2 8 3为 (1.2 4± 0 .0 7)ng/ml;亲代菌株 2 6 6 95为 (0 .33± 0 .19)ng/ml,P <0 .0 5 ,<0 .0 1]。结论 与HpcagⅠ与cagⅡ中大多数基因上调IL 8转录不同 ,cagⅡ中ORF10基因对胃上皮细胞IL

牙龈卟啉单胞菌致病岛rag基因在青少年正畸早期的变化研究

目的分析牙龈卟啉单胞菌致病岛rag基因在青少年正畸早期的的变化,探讨其与牙龈炎性反应的关系。方法随机收集前来正畸的牙龈正常患者45例,分别取矫治器戴入前,矫治器戴入后1、2、3、6、12个月龈沟液标本,应用16S r DNA PCR技术及多重PCR技术检测各样本中的牙龈卟啉单胞菌及其致病岛rag基因。结果矫治器戴入后1个月,牙龈卟啉单胞菌检出率较戴入前明显增加,差异有显著性(P<0.05),到2个月时最高(P<0.01);2个月后开始下降,戴入后6个月与12个月趋于稳定。致病岛rag基因在戴入矫治器后1个月明显增加,有显著性差异(P<0.05),到2个月和3个月时最高(P<0.01);3个月后开始下降,戴入后6个月与12个月趋于稳定,但仍高于矫治前。结论牙龈卟啉单胞菌及致病岛rag基因与正畸牙龈炎性反应关系密切。

幽门螺杆菌细胞毒导致胃癌发生的作用机制

幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,Hp)感染导致胃癌的重要原因之一是它的细胞毒作用。细胞毒素相关基因致病岛(cytotoxin-associated gene pathogenicity island,cagPAI)和空泡毒素A(vacuolatingcytotoxin A,vacA)是Hp最典型的细胞毒代表。cagPAI可诱发促炎因子的释放及增强促上皮细胞增殖信号的兴奋程度;vacA则导致上皮空泡化和病原体黏附。明确cagPAI和vacA在胃癌发生发展过程中的作用,将有利于全面理解Hp感染对机体造成的危害以及根治Hp感染的重要意义。

不同种族幽门螺杆菌菌株CagA蛋白羧基端结构和生物学功能的差异

目的比较不同种族H.pylori菌株CagA蛋白羧基端结构以及诱导AGS细胞延伸、分泌IL-8能力的差异。方法 PCR扩增CagA3′端可变区DNA序列并进行测序,获得CagA3′端可变区氨基酸序列。以不同H.pylori菌株与AGS细胞孵育,观察AGS延伸细胞的百分数,测定细胞培养上清IL-8含量。结果美籍亚裔和美籍非裔菌株的CagA羧基端氨基酸第3个EPIYA前后的氨基酸序列存在明显差异。不同种族cag PAI+H.pylori导致AGS细胞延伸、分泌IL-8能力无明显差异。cag PAI+H.pylori诱导细胞延伸AGS细胞、分泌IL-8的能力明显大于cag PAI-H.pylori。结论不同种族H.pylori菌株CagA蛋白羧基端结构存在差异。H.py-lori菌株诱导AGS细胞延伸、分泌IL-8的能力与cag PAI有关。