冀东南地区鸡致病性大肠杆菌的分离、O血清群鉴定及药敏试验

对2015年3月至2024年2月自河北省唐山市、沧州市、衡水市、石家庄市、邢台市和邯郸市等发病鸡群疑似大肠杆菌病的病死鸡病变部位分离的163株致病性大肠杆菌(APEC)进行了生化特性测定、O抗原血清群鉴定及药敏试验。结果表明所分离的菌株均符合大肠杆菌生化特征。试验用5种(O1、O2、O57、O65、O78)大肠杆菌单因子阳性血清进行O血清群鉴定,确定了94株O血清群,占鉴定菌株数的57.67%(94/163),其中O1(3株)、O2(26株)、O57(6株)、O65(37株)和O78(22株),O65、O2和O78为优势菌株,而O57和O65血清群菌株为国内外首次报道,应引起鸡病研究者特别是养鸡生产者重视。8种药物(氨苄西林、新霉素、多西环素、磺胺间甲氧嘧啶钠、替米考星、环丙沙星、头孢噻呋和氟苯尼考)的药敏试验结果表明受试的8株APEC均对新霉素有所敏感外,对其他药物均有不同程度的耐受。

禽致病性大肠杆菌fdtACB基因缺失株的生物学特性研究

为研究O抗原侧链岩藻糖合成酶基因fdtACB对禽致病性大肠杆菌(APEC)生物学特性的影响,本研究以O_(2)血清型APEC DE17为亲本株,通过Red同源重组构建fdtACB基因缺失株与回补株,经PCR及测序鉴定确认缺失株ΔfdtACB和回补株CΔfdtACB均正确构建。采用硝酸银染色法鉴定细菌脂多糖(LPS)图谱,采用western blot鉴定缺失株与O_(2)血清型O因子血清的反应性。硝酸银染色法结果显示,ΔfdtACB缺失株未产生与野生株一样完整的LPS图谱,表现为部分O抗原梯状条带缺失和移位;western blot结果显示,ΔfdtACB与大肠杆菌O_(2)血清型O因子血清无反应条带。各菌株培养16 h后每隔1 h测定OD600nm值,绘制生长曲线;于半固体培养基培养各菌株,通过测量细菌运动圈直径分析各菌株的运动能力,通过结晶紫染色法检测各菌株生物被膜(BF)形成能力,结果显示,ΔfdtACB缺失株、野生株和回补株间生长速率无明显差异(P>0.05);与野生株相比,ΔfdtACB缺失株的运动能力显著降低(P<0.01),BF形成能力显著升高(P<0.01)。以上结果表明fdtACB影响细菌O抗原完整性、运动及BF的形成。将各菌株分别感染DF-1细胞后通过细菌计数分析APEC对细胞的黏附及侵袭力,结果显示,ΔfdtACB对DF-1细胞的黏附及侵袭力均较野生株极显著降低(P<0.01)。以不同浓度各菌株腹腔注射感染大蜡螟后,根据5 d内各组大蜡螟死亡数量计算各菌株LD50,结果显示,除高剂量各菌株外,其它剂量各菌株注射后,ΔfdtACB组大蜡螟死亡数较其它组少,经计算野生株LD50为1.85×10^(2) cfu/mL,缺失株LD50为9.16×10^(2) cfu/mL,回补株LD50为8.0×10^(1) cfu/mL,缺失株致病力比野生株降低约5倍,表明fdtACB影响细菌感染性和致病力。综上所述,本研究首次证实大肠杆菌岩藻糖合成酶FdtACB参与O_(2)型APEC O的抗原合成,在细菌运动、BF形成和感染过程中发挥作用,该结果对掌握APEC O抗原侧链的生物学功能具有重要意义。

禽致病性大肠杆菌的分离、O血清群鉴定及药物敏感试验

对2005年5月-2016年3月自河北、山东、河南、江苏、陕西、辽宁等省发病鸡场疑似大肠杆菌病的病死鸡病变部位分离的194株禽致病性大肠杆菌进行了生化特性测定、O 抗原血清群鉴定及药敏试验。试验用5种大肠杆菌单因子（O1、O2、O57、O65、O78）阳性血清进行 O 血清群鉴定,确定了124株 O 血清群,占鉴定菌株数的63.9%（124/194）,其中 O13株、O226株、O5715株、O6547株和 O7833株,O65和 O78为优势菌株,而 O2和 O57血清群菌株次之,O1血清群菌株最少。8种药物（氨苄西林、新霉素、多西环素、磺胺间甲氧嘧啶、替米考星、环丙沙星、头孢噻呋和氟苯尼考）的药敏试验结果表明,受试的5株大肠杆菌分离株均对环丙沙星和新霉素敏感,而对其他药物均有不同程度的耐受。本研究结果表明 O65、O78、O2和 O57血清群高度流行,为进一步研发多价菌苗奠定了基础。

林麝肺源致病性大肠杆菌O因子血清型鉴定及部分耐药基因的PCR检测

为调查林麝肺源致病性大肠杆菌O因子血清型以及相关耐药基因的流行状况,本试验采用玻板凝集反应法进行O因子血清型鉴定;同时用PCR方法检测耐药基因。结果显示:O血清型定型的有16株菌,分别属于9个不同的血清型,其中O78为优势血清型,占定型菌株的43.75%(7/16)。同时,29株菌皆携带多种耐药基因,其中磺胺类耐药基因sul1、sul2、sul3,喹诺酮类耐药基因aac(6')-Ib、qnrB,β-内酰胺酶类耐药基因blaTEM、blaCTX-M,氨基糖苷类耐药基因aac(3)-IIa、ant(3″)-Ia和四环素类耐药基因tet(B)检出率较高,检出率分别为100%、96.55%、96.55%、100%、86.21%、100%、65.52%、100%、96.55%和58.62%。本试验结果对林麝临床科学合理用药有重要指导意义。

致病性大肠杆菌O157:H7的基本特性与基因组研究进展

大肠杆菌 (Escherichiacoli)是条件致病菌 ,在正常情况下一般不致病 .致病性菌株EscherichiacoliO1 5 7:H7能够引起出血性肠炎 ,给人类带来严重危害 .本文简要介绍致病性大肠杆菌O1 5 7:H7的基本特性 ,着重从基因水平上对致病性大肠杆菌EscherichiacoliO1 5 7:H7和非致病性大肠杆菌EscherichiacoliK -1 2的核酸序列比较后得到的有关大肠杆菌O1 5 7:H7致病性和毒力功能方面的结果作了简要的综述 .

肠致病性大肠杆菌O45ERIC/ler基因的克隆与序列分析

目的 测定肠致病性大肠杆菌O4 5株的ler基因及其上游ERIC序列 ,了解该菌株与其它种类的AEEC的ler基因及其上游ERIC序列有何差异 ,分析其亲缘关系 ,为研制AEEC的疫苗奠定基础。方法 用PCR方法扩增了PEPECO4 5的ler基因及其上游ERIC序列进行了测序 ,将其序列与另外四种AEEC的ler基因及上游序列进行序列分析比较 ,结果与结论 PEPECO4 5的ler基因及其上游序列与兔致病性大肠杆菌RDEC - 1和REPECO10 3的同源性最高 ,达到 97 9% ,而与EPECE2 348/ 6 9和EHECO15 7∶H7EDL933的同源性只有 78 9%。

肠致病性大肠杆菌O128∶K67(B12)的脉冲场凝胶电泳分型方法研究

目的:应用脉冲场凝胶电泳技术(pulsed field gel electrophoresis,PFGE)对由原料乳和牛粪中分离的肠致病性大肠杆菌EPEC O128∶K67(B12)进行基因分型,了解来自天津市9个奶牛场和保定市9个奶牛场的原料乳样品和牛粪样品分离株的遗传相关性。方法:对7株肠致病性大肠杆菌EPEC O128∶K67(B12)按照脉冲场凝胶电泳方法进行基因分型。结果:用XbaI限制性内切酶对分离株的基因组DNA进行酶切,经PFGE可形成17～20条清晰条带的分离株DNA指纹图谱,由聚类分析树状图可将7株分离株分为3个基因群。结论:7株肠致病性大肠杆菌EPEC O128∶K67(B12)分离株存在3个图谱类型,各型之间不紧密相关,未发现单个基因型菌株流行的迹象。研究发现,脉冲场凝胶电泳分型技术分辨率高、可靠、应用性强、技术先进,对原料乳的致病菌溯源有较大的应用前景。

致病性大肠杆菌O_(157):H_7研究概述

概述了致病性大肠杆菌Ｏ１５７ ：Ｈ７ 的生物学特性、流行病学、诊断、治疗和预防等，并加以分析。揭示了大肠杆菌Ｏ１５７ ：Ｈ７ 感染对人类的危害，以及加强对该病进行研究和防治的重要性。

致病性大肠杆菌O_(157)H_7外膜蛋白(OMPs)抗原的快速提取

本试验采用了超声波破碎、N—十二烷基肌氨酸处理和超速离心技术提取致病性大肠杆菌O157H7的外膜蛋白 (OMPs)。提取物用SDS—PAGE进行电泳检测。

致病性大肠杆菌O157:H7生物被膜形成的影响因素研究

为了解不同因素对大肠杆菌(E.coli)O157∶H7生物被膜形成的影响,本研究采用生物被膜体外定量粘附性检测方法对E.coli O157∶H7在不同环境(培养时间,培养基类型,营养条件)下产生生物被膜的差异进行研究。实验结果显示,在载体为96孔聚乙烯微孔板中,E.coli O157∶H7体外生物被膜的形成最适的形成时间是培养48 h,最适合的培养基为5%的TSB,而且效果显著优于LB和M63培养基。另外,在M63培养基中当葡萄糖浓度为3%时可以促进生物被膜的形成。本研究结果表明,不同培养基和不同的葡萄糖浓度均可以影响生物被膜的形成。本研究为E.coli相关菌膜疾病防治提供了实验数据。

鸽源产肠毒素大肠杆菌O55分离株的鉴定及其致病性研究

本研究旨在了解鸽源致病性大肠杆菌O55分离株的分类及其致病性。首先,采用PCR方法对前期研究得到的6株分离菌毒力基因携带率进行检测;然后,选取毒力基因携带种类较多且与人类腹泻相关的O55分离株,经凝集试验、兔回肠结扎试验、乳鼠灌胃试验测定O55分离株黏附素、肠毒素基因是否表达;最后,以昆明鼠为试验动物,通过口服途径感染O55分离株进行致病性观察。结果显示:分离菌携带毒力基因fimH与papA均为100%(6/6),fyuA为66.7%(4/6),eaeA与iss均为50%(3/6),irp-2、fimC与tsh均为33.3%(2/6);O55分离株黏附素及肠毒素基因均表达;O55分离株对试验鼠多个脏器造成持续性损伤,以肝脏、肺脏、肾脏、空肠、回肠较为严重,抗原主要位于感染部位细胞质或细胞间质。该研究结果有助于了解鸽源产肠毒素大肠杆菌的致病特点,具有值得关注的公共卫生学价值。

同一个体不同组织来源大肠杆菌分离株O86致病性研究

2014年江苏某肉鸡场暴发禽大肠杆菌病,从同一病死鸡个体不同部位分离到禽致病性大肠杆菌(APEC)。为了解同一个体腺胃和心血分离株的致病性,经形态特性、生化试验和血清型鉴定,两分离株均符合O86的典型特征;人工感染显示,两分离株分别以108cfu/m L左胸气囊接种SPF鸡可导致不同程度致病性;病死鸡多个脏器组织可分离到细菌,且腺胃中腺胃分离株的载菌量高于心血分离株,其病理组织学变化涉及肝、脾、肺、肾和腺胃。说明APEC的致病性与其分离部位有一定的相关性,结果为相关禽大肠杆菌病的有效防控提供了新思路。

三株肠致病性大肠杆菌O128∶K67(B_(12))生物学关系实验研究

目的 :了解从不同时间、不同地点食物中毒标本中分离到的 3株肠致病性大肠杆菌 (EPEC) O12 8∶ K6 7(B1 2 )是否存在着种间生物学差异。方法 :用同批试剂 ,对上述 3株细菌进行生化反应、噬菌体裂解及药敏等各种生物学试验。结果 :3株 EPECO12 8∶ K6 7(B1 2 )存在着四项生化反应差异 ;噬菌体裂解模式也不同 ;药敏试验结果亦存在着差异。结论 :同一血清型 EPEC O12 8∶ K6 7(B1 2 )存在着种间生物学差异。

规模化猪场致病性大肠杆菌血清型鉴定

从四川省 1 6个规模化猪场临诊发生典型仔猪黄、白痢猪只的肛试粪样及死亡猪只的心血和肝中分离出致病性大肠杆菌 2 45株 ,用 35种大肠杆菌单价O抗原进行血清型鉴定。 2 45株分离菌有 1 72株能定型 ,分属 30种血清型 ,其中以O6 0、O89、O1 1 9、O1 41、O9、O2 0、O1 37和O1 0 1等 8种血清型为优势血清型 ,占定型菌株的 6 6 86 %。尚有 73株未能定型 ,占分离菌株的 2 9 80 % (73/2 45 )。

鸡致病性大肠杆菌菌毛分型的初步研究

以鸡致病性大肠杆菌F1菌毛特异性单抗 1F4 _1、2C3 、3H3 和F11菌毛特异性单抗FA1、FB11作为检测试剂 ,将 111株已知O抗原的鸡致病性大肠杆菌经MD液体培养基连续传代培养后 ,通过直接玻板凝集法对各菌毛进行初步分型。结果发现F1、F11菌毛与O78、O1及O2 三种优势O抗原型菌株之间存在较为明显的相关性 ,即致病性大肠杆菌主要集中在上。F1、F11菌毛在这三种O抗原型上的总检出率分别为 95 .6 %、75 .4%及 73.3%。另外 ,在所检测的 111株鸡致病性大肠杆菌中 ,只表达F1菌毛的大肠杆菌占菌杆总数的 33.3%。只表达F11菌毛的大肠杆菌占菌株总数的 8.1% ,两者都表达的占菌株总数的36 % ,F1、F11菌毛的总检出率为 78.3%。

中国部分地区禽源性大肠杆菌分离株的致病性试验

1995—2011年对中国18个省(市、区)临诊上有典型大肠杆菌病病变的病、死鸡中分离到的243株大肠杆菌分离株进行了致病性试验。结果表明:受试的243个禽源性大肠杆菌分离株均有致病性,其中,80%以上的分离株属高致病株,其他为中度致病株或低致病株。

1株感染多种致病性大肠杆菌噬菌体的生物学特性研究

旨在测定此前从断奶前仔猪粪样中分离得到的1株大肠杆菌噬菌体C6在致病性大肠杆菌上的生物学特性,并比较该噬菌体在不同致病菌上的感染特性。利用电镜形态观察和基因组测序确定其分类,用点滴法和双层平板法测定其在致病性大肠杆菌上的宿主谱,通过噬菌斑形态、最佳感染复数(MOI)、成斑率(EOP)、吸附率、一步生长曲线以及抑菌曲线等来评价噬菌体在多株致病菌上的感染特性。结果显示:噬菌体C6可感染1株非致病性大肠杆菌和4株致病性大肠杆菌,包括大肠杆菌O157(E.coli W1)、2株产志贺毒素大肠杆菌(STEC W3、STEC W5)和1株肠致病性大肠杆菌(EPEC 143)。通过比较噬菌体C6在4株致病菌上的各项感染特性指标发现:噬菌斑大小和成斑率E.coli W1>EPEC 143>STEC W3>STEC W5;吸附率E.coli W1>EPEC 143、STEC W3、STEC W5;最佳MOI EPEC 143、STEC W3、STEC W5>E.coli W1;液体LB中生长能力和抑菌能力E.coli W1>STEC W3>EPEC 143、STEC W5。噬菌体C6为T4样噬菌体,可感染多株致病性大肠杆菌,在不同致病菌上的感染特性存在差异,但均能显著抑制致病菌的生长。

羔羊致病性大肠杆菌病的分离培养及防治

通过分离培养,得到90株致病性大肠杆菌,认为大肠杆菌仍然是造成被调查地区羔羊腹泻的主要病原。对其中75株鉴定出了O血清型,从所分离得到的菌株来看O8、O26、O55、O78、O86、O101、O111和O126为优势血清型。消维康、畜痢灵等制剂对大肠杆菌引起的羔羊腹泻具有较好的防控作用,这与本次的药敏试验结果相吻合。