云南省金沙江中下游流域致病性耶尔森菌调查研究

目的了解云南省金沙江中下游流域鼠疫耶尔森菌、假结核耶尔森菌及小肠结肠炎耶尔森菌3种致病性耶尔森菌的分布及流行现状。方法选择云南省金沙江中下游流域5个县,采集鼠盲肠及犬肛门拭子标本,通过冷增菌后提取增菌液DNA并对foxA、ail、inv、caf1等特异基因进行PCR检测,基因阳性可疑标本进行菌株分离纯化后进行菌落PCR鉴定,对实验结果进行统计分析。结果采集标本1631份,其中鼠盲肠段标本985份、犬肛门拭子标本646份。自鼠肠道中共分离到小肠结肠炎耶尔森菌24株,分离率为2.44%(24/985),自犬肛门拭子中共分离到14株,分离率为2.17%(14/646),小肠结肠炎耶尔森菌总分离率为2.33%(38/1631),且38株小肠结肠炎耶尔森菌毒力基因检测均为阴性;自昭通永善县犬肛门拭子中分离到唯一1株假结核耶尔森菌,分离率为0.15%(1/646);未分离到鼠疫耶尔森菌。结论云南省金沙江中下游流域鼠和家犬中携带非致病性小肠结肠炎耶尔森菌,云南省首次自鼠疫指示动物犬中分离到假结核耶尔森菌,未发现鼠疫耶尔森菌的相关线索。

甘肃黄鼠疫源地鼠疫宿主动物致病性耶尔森菌调查分析

目的了解甘肃阿拉善黄鼠疫源地内鼠疫宿主动物致病性耶尔森菌感染状况,为探索该疫源地鼠疫流行状态提供依据。方法 2016-2018年现场采集阿拉善黄鼠鼠疫疫源地会宁县、平川区鼠疫宿主动物阿拉善黄鼠及花鼠、大仓鼠、沙土鼠、子午沙鼠、中华鼢鼠、小灰鼠、达乌尔鼠兔、小家鼠、灰仓鼠的回盲部及内容物、舌根部、血清标本,分别进行耶尔森菌分离及鼠疫F1抗体的检测。结果会宁县共采集阿拉善黄鼠及花鼠、大仓鼠、沙土鼠、子午沙鼠、中华鼢鼠舌根部标本274份,未检出耶尔森菌,回盲部及内容物标本275份,检出1株非致病性小肠结肠炎耶尔森菌,其毒力型别为(ail-ystA-ystB+yadA-virF-rfbc-),检菌率为0.18%;平川区共采集阿拉善黄鼠及沙土鼠、子午沙鼠、中华鼢鼠、小灰鼠、达乌尔鼠兔、小家鼠、灰仓鼠舌根部标本213份,回盲部及内容物标本219份均未检出耶尔森菌。阿拉善黄鼠血清312份,鼠疫F1抗体结果均为阴性。结论甘肃黄鼠疫源地鼠类肠道内可能存在耶尔森菌群,检出的小肠结肠炎耶尔森菌的地点与阿拉善黄鼠鼠疫菌的地点一致。

致病性耶尔森菌感染与细胞因子相关性的研究进展

目的病原体感染机体后会引起相关的细胞因子发生变化,细胞因子的变化是病原体与感染的机体相互作用的结果。本文主要综述了鼠疫耶尔森菌、小肠结肠炎耶尔森菌和假结核耶尔森菌这三种致病性耶尔森菌感染后机体细胞因子变化的研究进展,主要包括致炎性细胞因子和抑炎性细胞因子的变化。

致病性耶尔森菌强毒力岛的结构和功能研究进展

耶尔森菌属中鼠疫耶尔森菌、假结核耶尔森菌和小肠结肠炎耶尔森菌与人类致病关系密切。其鼠毒力是由染色体上存在的强毒力岛(HPI)决定。本文综述了由3种致病性耶尔森菌形成的2个HPI进化系Yen HPI和Yps HPI的结构和功能的研究进展。

云南省鼠疫静息期家鼠鼠疫疫源地鼠中致病性耶尔森菌的调查研究

目的了解处于静息状态的云南省家鼠鼠疫疫源地鼠中3种致病性耶尔森菌的分布情况并探讨其相互作用关系,探究鼠疫耶尔森菌微生态环境,为防治致病性耶尔森菌提供依据。方法2016-2017年,通过多重分层抽样法在云南省抽选10个家鼠鼠疫疫源县采集鼠盲肠标本,经4℃冷增菌后,采用PCR方法检测foxA基因、inv基因及caf1基因进行初筛并用耶尔森选择培养基分离致病性耶尔森菌;利用SPSS17.0软件进行统计分析,比较各地区携菌率差异。结果云南省10个疫源县共采集鼠类盲肠标本2865份,分离到74株小肠结肠炎耶尔森菌,分离率为2.58%(74/2865);未分离到鼠疫耶尔森菌和假结核耶尔森菌;结论云南省家鼠鼠疫疫源地中存在小肠结肠炎耶尔森菌的分布,经统计分析,各地的分离率不同,且越早进入静息期的鼠疫疫源地鼠中小肠结肠炎耶尔森菌分离率越低;未发现鼠疫耶尔森菌和假结核耶尔森菌。

我国西南3省交界处静息鼠疫疫源地致病性耶尔森菌研究

目的通过对我国西南3省交界处静息鼠疫疫源地连续3年的监测,了解当地鼠疫流行情况并验证鼠疫耶尔森菌(鼠疫菌)内在保存学说的正确性。方法于2013-2015年对曾发生过人间鼠疫疫情的贵州省兴义市、广西壮族自治区西林和隆林县、云南省罗平县开展啮齿动物及指示动物的鼠疫菌病原学及血清学检测,并对其他致病性耶尔森菌开展病原学检测;对与疫区县所属同一省份的非疫区开展动物间其他致病性耶尔森菌的对照检测;对非疫区≤5岁的腹泻儿童开展其他致病性耶尔森菌的病原学调查。结果静息鼠疫疫源地仍存在F1抗体阳性的啮齿动物和指示动物;疫区与非疫区动物均检出小肠结肠炎耶尔森菌(疫区啮齿动物、犬、家猪的分离率分别为0.80%、1.55%和3.59%,非疫区犬和家猪的分离率分别为3.86%和12.71%),在非疫区致病性菌株的分离率更高(疫区犬和家猪的分离率为0.39%和3.19%,非疫区犬和家猪的分离率为1.19%和7.43%);假结核耶尔森菌仅分离自非疫区。此外,在非疫区≤5岁腹泻儿童中致病性小肠结肠炎耶尔森菌的感染率达0.64%。结论静息期内在宿主动物中仍存在鼠疫菌的循环,证实了鼠疫菌内在保存学说的正确性。在静息期疫源地内,宿主动物携带致病性小肠结肠炎耶尔森菌的能力弱于同省非疫源地的宿主动物,佐证了致病性耶尔森菌的交叉免疫学说。

云南省梁河县家鼠鼠疫疫源地中致病性耶尔森菌的调查

目的对梁河县家鼠鼠疫疫源地鼠疫、假结核及小肠结肠炎3种致病性耶尔森菌分布情况调查分析并研究其病原学特征。方法选择梁河县5个鼠疫常规监测的乡镇,采集鼠盲肠标本,4℃冷增菌后采用耶尔森菌选择培养基进行致病性耶尔森菌的分离;对所分菌株进行生化鉴定、生物分型、血清分型和毒力基因(ail、yst A、yst B、yad A、vir F及rbfc)检测。结果共捕鼠533只,主要是黄胸鼠、臭鼩鼱、斯氏家鼠等;自鼠肠道中分离到2株小肠结肠炎耶尔森菌,分离率为0.4%(2/533),皆分离自黄胸鼠;2株小肠结肠炎耶尔森菌均为生物1A型,且毒力基因检测均为阴性;未检测到鼠疫耶尔森菌和假结核耶尔森菌。结论梁河县家鼠中少量携带非致病性小肠结肠炎耶尔森菌,未发现鼠疫耶尔森菌与假结核耶尔森菌的相关线索。

中国致病性小肠结肠炎耶尔森菌生物分型研究

目的初步了解我国致病性小肠结肠炎耶尔森菌O∶3、O∶9血清型菌株的生物型分布,掌握我国致病性小肠结肠炎耶尔森菌的生物学特征。方法用文献报道方法对1986-2008年从我国不同地区的腹泻病人、家禽家畜、鼠类、食品、环境等各类宿主中分离到的427株致病性小肠结肠炎耶尔森菌进行生物分型。结果 427株致病性小肠结肠炎耶尔森中213株属于生物2型(49.9%),全部为O∶9血清型;208株属于生物3型(48.7%),其中191株为O∶3血清型,17株为O∶9血清型;6株属于生物4型(1.4%),全部为O∶3血清型。没有发现生物1A型、1B型与5型的致病性菌株。结论我国O∶3血清型致病性小肠结肠炎耶尔森菌以生物3型为主、O∶9血清型致病性菌株以生物2型为主,没有生物1B型菌株,与国外致病性菌株的生物血清型分布有一定差异。

3种致病性耶尔森菌对宿主鼠的交叉免疫反应研究

目的研究3种致病性耶尔森菌对宿主鼠的交叉免疫反应及流行病学意义。方法分别用2株假结核耶尔森菌(假结核菌)、3株小肠结肠炎耶尔森菌(小肠结肠炎菌)以活菌方式对广东省鼠疫宿主动物黄毛鼠、黄胸鼠和褐家鼠各免疫4次,每次菌量分别为20、30、60和70亿,同时设立对照组。然后用鼠疫耶尔森菌(鼠疫菌)EV76株适量菌液混合0.30%枸橼酸铁铵溶液0.3 ml进行攻毒实验,观察是否有交叉免疫保护作用。率的比较采用χ2检验或Fisher精确概率法进行统计学处理。结果黄毛鼠:鼠疫菌EV76株28℃培养25亿攻毒,假结核菌免疫组(2/22,9.09%)、小肠结肠炎菌免疫组(10/32,31.25%)和对照组(22/32,68.75%)死亡率相比,差异均有统计学意义(χ2=18.793,P<0.001;χ2=9.000,P=0.003)。假结核菌免疫组和小肠结肠炎菌免疫组死亡率差异无统计学意义(χ2=2.533,P=0.112)。黄胸鼠:鼠疫菌EV76株37℃培养38亿菌量攻毒,假结核菌免疫组(4/22,18.18%)与对照组(21/23,91.30%)死亡率相比,差异有统计学意义(χ2=24.350,P<0.001),小肠结肠炎菌免疫组(90.91%,30/33)与对照组死亡率差异无统计学意义(χ2=0.000,P=1.000),假结核菌免疫组与小肠结肠炎菌免疫组死亡率比较差异有统计学意义(χ2=29.580,P<0.001)。另一组黄胸鼠EV76株37℃培养30亿攻毒,小肠结肠炎菌免疫组(1/29,3.45%)与对照组(5/11,45.45%)死亡率相比,差异有统计学意义(P=0.004)。褐家鼠:EV76株37℃培养35亿攻毒,小肠结肠炎菌免疫组(1/27,3.70%)与对照组(11/18,61.11%)死亡率比较,差异有统计学意义(χ2=15.384,P<0.001)。结论在有效免疫下,假结核菌对鼠类抵抗鼠疫菌侵袭有较强的交叉免疫保护作用,小肠结肠炎菌亦有一定的交叉免疫保护作用。

致病性小肠结肠炎耶尔森氏菌实时荧光RPA检测方法的建立

本研究建立了致病性小肠结肠炎耶尔森氏菌的实时荧光重组酶聚合酶扩增(real-timeRecombinasePolymerase Amplification,real-time RPA)检测方法。根据致病性小肠结肠炎耶尔森氏菌黏附侵袭位点ail致病基因序列设计特异性引物和exo探针,在37℃恒温下20 min内即可完成检测,方法特异性高,对目的DNA的检测限为0.1 ng/μL。在稳定性实验中,对10 ng/μL、0.1ng/μL、0.01 ng/μL、0.001 ng/μL的目的DNA各进行8个平行的测试,0.1 ng/μL及以上浓度的DNA均可稳定检出;当DNA为0.1 ng/μL时,8个平行的阈值时间和最大荧光值的相对标准偏差(relative standard deviation,RSD)最低且≤7.06%。致病性小肠结肠炎耶尔森氏菌在奶粉和牛肉的人工污染样品中初始污染量为3 CFU/25 g时,培养20 h后,可用本方法检出。对20份各种类实际样品进行检测,本方法与国标方法结果一致。本方法对致病性小肠结肠炎耶尔森氏菌的常温现场快速定性检测具有重要意义。

甘肃省肃南裕固族自治县喜马拉雅旱獭鼠疫流行及耶尔森菌感染调查分析

目的了解甘肃省肃南裕固族自治县(肃南县)喜马拉雅旱獭鼠疫流行态势及耶尔森菌感染状况,为防控鼠疫提供新思路。方法2014-2018年,在肃南县现场采集喜马拉雅旱獭肝脾、盲肠、咽拭子及血液样本,分离鉴定耶尔森菌菌株类型,并进行鼠疫F1抗原、抗体检测。结果共采集喜马拉雅旱獭肝脾组织634份、盲肠样本427份、咽拭子样本426份,分别检出鼠疫耶尔森菌23株、马赛耶尔森菌2株、弗氏耶尔森菌1株,检出率依次为为3.63%(23/634)、0.47%(2/427)、0.23%(1/426);不同年份鼠疫耶尔森菌检出率比较,差异有统计学意义(χ^(2)=13.19,P=0.010)。共检测喜马拉雅旱獭血清1822份,检出F1抗体阳性样本5份,阳性率为0.27%,不同年份间比较差异有统计学意义(χ^(2)=25.22,P<0.001);检测喜马拉雅旱獭肝脾组织匀浆282份,检出F1抗原阳性样本22份,阳性率为7.80%,不同年份间比较差异无统计学意义(χ^(2)=7.85,P=0.097)。检出的23株鼠疫耶尔森菌分布在马蹄藏族乡(12株)、大河乡(6株)、祁丰藏族乡(5株);1株弗氏耶尔森菌和2株马赛耶尔森菌均在大河乡。结论2014-2018年肃南县有动物间鼠疫流行,检出鼠疫耶尔森菌和非致病性耶尔森菌的地区有重叠。

甘肃夏河、碌曲县鼠疫主要宿主动物耶尔森菌感染状况调查

目的:了解甘肃喜马拉雅旱獭鼠疫疫源地夏河、碌曲县鼠疫主要宿主动物耶尔森菌感染状况,为探索该疫源地鼠疫流行状态提供依据。方法:2014-2018年,现场采集20世纪50-60年代鼠疫活跃疫源地甘肃夏河、碌曲县鼠疫主要宿主动物肠回盲部及内容物、咽拭子(或舌根部)、血液样本,分别进行耶尔森菌分离、毒力测定及鼠疫耶尔森菌F1抗体检测。结果:958份回盲部及内容物样本检出24株耶尔森菌,检菌率为2.51%,分别为13株小肠结肠炎耶尔森菌(Yersinia enterocolitia,Y.e)、1株克氏耶尔森菌(Yersinia kristensenii,Y.k)、2株弗氏/中间耶尔森菌(Yersinia frederiksenii/intermedia,Y.f/i)、6株中间耶尔森菌(Yersinia intermedia,Y.i)、1株奥氏耶尔森菌(Yersinia aldouae,Y.a)、1株Yersinia massiliensis(Y.m)。958份咽拭子(或舌根部)样本检出19株耶尔森菌,检菌率为1.98%,分别为8株Y.e、1株假结核耶尔森菌(Yersinia pseudotuberculosis,Y.p)、4株Y.k、1株Y.f/i、4株Y.i、1株Yersinia ruckeri(Y.r)。检出的21株Y.e均没有致病性,毒力型别有ail-ystA-ystB+yadA-virF-rfbc-、ail-ystA-ystB-yadA-virF-rfbc-两种,分别占9.52%(2/21)、90.48%(19/21)。1079份血清样本F1抗体检测结果均为阴性。结论:夏河、碌曲县鼠疫主要宿主动物咽部及肠道内广泛存在耶尔森菌群,检出的Y.e均为非致病性菌株。本次调查结果为进一步研究该疫源地鼠疫耶尔森菌在宿主动物和其生存环境中如何保存提供了线索。