致病性鸡大肠杆菌血清型鉴定及多价灭活苗的研制

从新乡市不同鸡场采集大肠杆菌的病料88株,经过分离鉴定,确定出56株为致病性鸡大肠杆菌,血清型分别是O1,O2,O5,O35,O78,O111,其中O1,O2,O78,O111为主要的血清型。将所分离的6种血清型大肠杆菌制成多价灭活苗,接种雏鸡,使实验鸡获得了免疫保护。

致病性鸡大肠杆菌pilA基因和外膜蛋白C基因的克隆、表达及其免疫原性

根据GenBank公布的致病性鸡大肠杆菌的Ⅰ型菌毛pilA基因和外膜蛋白C基因序列,分别设计了两对引物,并以分离的致病性鸡大肠杆菌基因组为模板,经PCR特异性扩增出pilA基因和ompC基因,基因产物大小为别为549bp和1104bp,与GenBank报道的参考菌株的两个基因序列的同源性为高达98.18%和97.28%。将扩增得到的两个基因分别定向克隆到原核表达载体pET-28a中,得到两个重组质粒pETpilA和pETompC,转化大肠杆菌BL21(DE3)中,得到重组菌株BL21(pETpilA)和BL21(pETompC),经IPTG诱导后,SDS-PAGE分析分别可见表达的20kD和40.9kD的特异条带;Westernblotting结果表明,两种蛋白可与抗体发生特异性结合,说明其具有良好的免疫原性。将表达的菌毛蛋白和外膜蛋白的菌株分别制成基因工程疫苗,免疫小鼠后,具有很好的保护能力,表明这两株基因工程菌株有望作为鸡致病性大肠杆菌基因工程疫苗的候选生产菌株。

3株致病性鸡大肠杆菌P型菌毛结构基因的克隆、序列测定及同源性分析

用鸡致病性大肠杆菌分离株O1、O2和O78的基因组DNA做为模板,PCR分别扩增出了0.55kb的P型菌毛结构基因(papA)。将扩增得到的3个papA基因片段分别克隆进pGEM-T○R载体中,转化至受体菌JM109中,用Amp/IPTG/X-gal琼脂平板蓝白菌落筛选法,得到含阳性重组子的菌株,提取质粒后用BamH和Sal双酶切进行鉴定。所得阳性重组子进行DNA序列测定,测序结果经DNAStar核酸分析软件包分析比较,结果表明,所构建的克隆质粒中均含有相应完整papA基因,其开放式阅读框架大小为549bp,编码182个氨基酸。此3株菌的P型菌毛结构基因的同源性为98.9%～100%,其中O1株和O78株的P型菌毛基因的ORF序列100%相同,O2株有2个碱基与前两者不同。

冀东南地区鸡致病性大肠杆菌的分离、O血清群鉴定及药敏试验

对2015年3月至2024年2月自河北省唐山市、沧州市、衡水市、石家庄市、邢台市和邯郸市等发病鸡群疑似大肠杆菌病的病死鸡病变部位分离的163株致病性大肠杆菌(APEC)进行了生化特性测定、O抗原血清群鉴定及药敏试验。结果表明所分离的菌株均符合大肠杆菌生化特征。试验用5种(O1、O2、O57、O65、O78)大肠杆菌单因子阳性血清进行O血清群鉴定,确定了94株O血清群,占鉴定菌株数的57.67%(94/163),其中O1(3株)、O2(26株)、O57(6株)、O65(37株)和O78(22株),O65、O2和O78为优势菌株,而O57和O65血清群菌株为国内外首次报道,应引起鸡病研究者特别是养鸡生产者重视。8种药物(氨苄西林、新霉素、多西环素、磺胺间甲氧嘧啶钠、替米考星、环丙沙星、头孢噻呋和氟苯尼考)的药敏试验结果表明受试的8株APEC均对新霉素有所敏感外,对其他药物均有不同程度的耐受。

鸡致病性大肠杆菌菌毛fimC基因的表达及重组fimC蛋白卵黄抗体的免疫保护效力

在表达鸡致病性大肠杆菌菌毛fimC基因的基础上,对fimC蛋白卵黄抗体的免疫保护效力进行测定。对鸡致病性大肠杆菌O2血清型菌株fimC基因序列进行扩增,扩增产物克隆至pMD18-T载体并测序。测序结果显示,fimC基因全长657 bp,编码218个氨基酸,与人源大肠杆菌fimC基因进行同源性比较,核苷酸序列同源性达97.9%,氨基酸序同源性为96%。从重组质粒pMD18-T-fimC上将fimC基因亚克隆到表达载体质粒pET-30c上,转化大肠杆菌BL21(DE3),表达出预期的25 ku融合蛋白,采用Western Blot对表达产物进行反应原性分析,结果显示fimC融合蛋白具有较好的抗原反应特异性。用表达的fimC蛋白免疫产蛋母鸡,制备fimC高免卵黄抗体。用制备的fimC高免卵黄抗体免疫1日龄健康雏鸡,1 d后注射鸡致病性大肠杆菌进行攻毒,结果显示,fimC卵黄抗体免疫组死亡率为40%,对照组分别为60%、70%,证明所制备的fimC蛋白卵黄抗体能在一定程度上抵抗鸡致病性大肠杆菌的攻击。

致病性鸡大肠杆菌Ⅰ型菌毛fimA基因的克隆和同源性分析

根据Genbank已发表的致病性鸡大肠杆菌(Avian pathogenic Escherichia coli,APEC)Ⅰ型菌毛fim A基因序列,设计并合成了位于fim A基因保守区的1对引物.应用PCR技术以鸡大肠杆菌标准株和分离株DNA为模板,扩增到片段长为549 bp的阳性产物;经酶切、连接、转化和筛选,得到fim A基因,并克隆、测序;运用DNAStar软件对核酸序列分析,确定所扩增和克隆的DNA片段为fim A基因.

豫北地区致病性鸡源大肠杆菌血清型鉴定及多价灭活苗的研制

从河南新乡市不同鸡场采集大肠杆菌病料88株,经鉴定56株为致病性鸡源大肠杆菌,血清型分别是O1O2,O5,O35,O78,O111,其中O1,O2,O78,O111为主要的血清型.将所分离的6种血清型大肠杆菌制成多价灭活苗,接种雏鸡,攻毒保护率达100%,免疫效果良好.

河南省鸡致病性大肠杆菌血清型、耐药性的研究

对河南省3个不同地区的38株鸡致病性大肠杆菌进行了O血清型的鉴定、15种抗生素药物的耐药性试验。结果表明：河南省鸡致病性大肠杆菌的血清型种类众多,以O78,O1,O2为优势血清型,分别占定型菌株的35.29%,23.53%,17.65%;耐药图谱复杂,可以分为21种耐药类型,菌株耐药种类4-14种;不同来源的菌株其血清型、耐药性一般不同;相同来源的菌株,其耐药图谱相同或相似,但血清型有多种。

鸡致病性大肠杆菌1型菌毛fimI基因克隆与序列测定

对鸡O2血清型致病性大肠杆菌1型菌毛fimI基因进行了扩增并与国外同源菌株基因序列进行了比较。结果表明:两者核苷酸同源性达98.42%,预测氨基酸顺序同源性达98.92%。fimI基因的预测氨基酸序列中仅第46位氨基酸由ALA变为THR,第76位氨基酸由SER变为ALA,其余核苷酸的变化未影响氨基酸的翻译。推测,这种改变是由分离株的差异所引起的。

豫南地区鸡致病性大肠杆菌的分离鉴定及药敏试验

鸡大肠杆菌病是由致病性血清型的大肠杆菌引起的多种疾病的总称。在临床上可表现为脐炎、败血症、肉芽肿、全眼球炎、气囊炎、腹膜炎、输卵管炎等;还常常与病毒和其他细菌性疾病并发,造成鸡群的高死亡率,给养禽业造成严重经济损失。

河南省鸡致病性大肠杆菌耐药性质粒的研究

对河南省32个县市的93株鸡致病性大肠杆菌进行耐药性质粒的分析,并对其中12株100%耐庆大霉素(GM)的菌株进行耐药质粒的转化试验,成功获取了2个转化子。质粒检测结果表明:93株鸡致病性大肠杆菌可以分为49种质粒图谱类型,质粒电泳条带最多6条,最少1条,其中质粒图谱为1条条带的菌株占测试菌株的45.16%;同一地区、同一鸡场菌株的质粒图谱相同或相似,不同地区菌株的质粒图谱不同,但它们之间会有相同或相近的少量流行质粒存在。质粒转化结果表明:同一质粒可编码1个至数个抗药性基因,不同质粒可以携带相同或不同的抗性基因,证明了质粒可以传递多种耐药性,细菌的抗药性与抗药性质粒的转移有很大关系。

胶东地区肉鸡致病性大肠杆菌的分离及血清型鉴定

鸡大肠杆菌病是一种大肠杆菌的某些血清型引起的禽类的急性、慢性细菌传染病。笔者对采自胶东地区的禽病门诊、肉鸡养殖场及各地畜牧兽医站的疑似大肠杆菌病病例进行了细菌的分离、血清型鉴定，现报道如下．

鸡致病性大肠杆菌生物学特性的相关性研究

对来源于河南省新郑地区的14株鸡致病性大肠杆菌进行了致病性试验、血清型鉴定、耐药性试验和质粒图谱检测,并对其相互关系进行了分析研究,结果表明:菌株的血清型与其致病性、耐药性、质粒图谱均无一定的相关性;菌株的致病性与其耐药性、质粒图谱有一定的关系,耐药种类越多的菌株其致病性越强,质粒图谱中含有相对分子量较大的质粒条带的菌株其致病性较强;并且耐药图谱的复杂性与其质粒图谱中的条带数无一定的相关性。

新疆阿拉尔垦区鸡致病性大肠杆菌的分离与鉴定

从新疆阿拉尔垦区的不同鸡场和屠宰点收集典型病变的病料100份,从中分离出大肠杆菌26株,并进行血清型鉴定,其主要血清型主要有O_(127)、O_(111)、O_(55)、O_(26)、O_(126)、O_(128)、O_(125)、O_(4),动物回归试验显示所分离的6种血清型的菌株对3～5日龄内雏鸡具有很强的致病作用,多数菌株可使接种雏鸡94.4%死亡。通过药敏试验结果表明,所分离26株大肠杆菌对头孢唑林钠最敏感,为该垦区鸡的大肠杆菌病诊断和预防提供技术支持。

河南省鸡源致病性大肠杆菌耐药性的监测分析

对来源于河南省32个县市的93株鸡源致病性大肠杆菌进行了16种抗生素药物的药敏试验和菌株耐药性与质粒图谱间关系的分析研究。结果表明:93株鸡源致病性大肠杆菌均为多重耐药菌株,耐药种类3～14种,耐药图谱复杂,可以分为58种耐药类型,相同来源的大肠杆菌耐药图谱、质粒图谱相似,但菌株耐药种类与质粒图谱条带的多少无一定的相关性。