生鲜乳中16种致病微生物多重荧光定量PCR集成检测技术的建立与初步应用

为满足生鲜乳中微生物快速通量检测的需求,建立多重荧光定量PCR集成方法,从而快速检测生鲜乳中潜在的16种致病微生物,通过设计致病性大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、链球菌等目标菌株的特异性引物和探针,优化反应体系,验证方法的特异性、敏感性等,建立了稳定的4组多重集成荧光定量PCR反应体系,并利用人工污染的生鲜乳样品对所建立的方法和传统培养法进行了验证比较。结果显示:各对引物探针对目标菌株均能有效识别并扩增,每组体系中引物探针未发现交叉反应,对其余3组体系的12株非目标菌均未有特异性反应;组内和组间变异系数均低于3%;该方法对布鲁氏菌的最低检出限为10^(2) CFU/mL,对阪崎肠杆菌、志贺菌、沙门菌等7种致病微生物的最低检出限为10^(3) CFU/mL,对蜡样芽胞杆菌、弯曲杆菌、结核分枝杆菌等8种致病微生物的最低检出限为10^(4) CFU/mL;所建方法和传统培养法对人工污染不同致病菌的各25份样品检测结果基本一致。结果表明,本研究建立的多重集成荧光定量PCR方法灵敏度高,特异性及重复性好,可实现对生鲜乳样品中多种致病微生物的快速高效检测,为生鲜乳微生物性风险监测提供了技术支撑。

急性胆管炎患者的致病微生物和相关临床特征分析

目的分析急性胆管炎患者的致病微生物和相关临床特征。方法收集并分析2019—2022年海宁市人民医院229例急性胆管炎患者的胆汁培养结果和相关临床资料。结果229例患者中160例胆汁培养结果阳性(69.87%),其中58例为多种细菌混合感染。160例阳性胆汁标本共分离出病原菌227株,其中革兰阴性菌136株(59.91%),革兰阳性菌79株(34.80%),真菌12株(5.29%);混合感染以大肠埃希菌与屎肠球菌混合最为常见(10/58,17.24%)。革兰阴性菌对阿米卡星、替加环素的敏感度最高,而革兰阳性菌对利奈唑胺、万古霉素和替加环素高度敏感。既往胆道手术史和肝硬化均是发生胆道感染的独立危险因素(P<0.05);肝硬化是发生混合感染的独立危险因素(P<0.05)。结论急性胆管炎致病微生物分布复杂,且对常用抗菌药物有一定的耐药性。对既往有胆道手术史、肝硬化、慢性肾功能不全的急性胆管炎患者,临床医生应予以高度关注,合理选择初始抗菌药物。

普外科患者术后切口感染致病微生物分布特征及血清 LDH、IL-6对感染的预测价值

目的探讨普外科患者术后切口感染(SSI)的致病微生物分布特征及血清乳酸脱氢酶(LDH)、白细胞介素(IL)-6对感染的预测价值。方法选取2021年1月至2023年6月在该院普外科进行手术的患者100例为研究对象。根据术后感染发生情况分为感染组(28例)和非感染组(72例)。收集患者的基本资料,包括年龄、性别、手术类型、手术时间、切口类型、切口愈合情况等。在无菌条件下,对患者切口分泌物进行细菌培养和病原菌鉴定。检测患者术后第1天和第3天的血清LDH、IL-6水平,并比较感染组和非感染组LDH、IL-6水平差异。采用Pearson相关分析血清LDH水平与IL-6的相关性,采用多因素Logistic回归分析SSI的影响因素,绘制受试者工作特征(ROC)曲线分析血清LDH、IL-6水平对SSI的诊断效能。结果100例患者中,有28例发生了SSI,感染率为28%。感染组与非感染组年龄、手术时间、切口类型比较,差异有统计学意义(P<0.05)。细菌培养结果显示,感染组患者共分离出35株细菌,其中革兰阳性菌占54.29%,革兰阴性菌占45.71%,以金黄色葡萄球菌(14株)、铜绿假单胞菌(7株)、大肠埃希菌(5株)为主。感染组术后第1、3天血清LDH、IL-6水平均高于非感染组(P<0.05),感染组血清LDH水平与IL-6呈正相关(r=0.512,P<0.001)。多因素Logistic回归分析显示,年龄、手术时间、切口类型及术后第3天血清LDH、IL-6水平是影响SSI的独立危险因素(P<0.05)。ROC曲线分析显示,血清LDH、IL-6水平对SSI的诊断效能较高,其曲线下面积分别为0.89、0.88,最佳临界值分别为210 U/L、15 pg/mL,灵敏度分别为82.14%、85.71%,特异度分别为78.57%、80.36%。结论普外科患者SSI的致病微生物以金黄色葡萄球菌和铜绿假单胞菌为主,血清LDH、IL-6水平可作为SSI的预测指标,对感染的早期诊断和治疗具有重要意义。

国外即食食品致病微生物限量对比研究

即食食品是指在售卖后就可以立即食用,无须经过额外的处理或烹饪的食品。即食食品相关标准在国际食品法典委员会的相关文件,欧盟、英国、澳新等国家和地区,并不区分是预包装还是散装食品,主要根据加工工艺、食品类型和用途来规定微生物的限量要求。本文主要针对各国(地区)即食食品致病微生物限量标准展开深入研究分析。

食品中4种致病微生物的多联PCR快速检测技术

食品安全问题一直以来都是人们关注的焦点,食品中微生物污染是导致食品安全问题的重要原因之一。常见的致病微生物包括沙门氏菌、大肠杆菌、金黄色葡萄球菌和志贺氏菌等。传统的微生物检测方法通常需要较长时间,而且灵敏度有限。因此,研究人员对快速、准确、高效的食品微生物检测技术的研究越来越重视。传统的微生物检测方法存在时间长、操作复杂和灵敏度低等问题,不能满足对快速检测的需求。PCR技术作为一种高效、准确的分子生物学方法,可以在短时间内扩增目标DNA序列。多联PCR技术即同时进行多个PCR反应,可以实现对多个目标序列的快速扩增。

多重PCR-膜芯片技术快速检测饲料中6种致病微生物

本实验基于多重PCR与膜芯片核酸杂交技术,旨在构建同时检测饲料及原料中6种致病微生物的检测方法,并对方法的特异性、检出限及适用性进行了验证。结果表明:该方法具有良好重复性、再现性和特异性,综合检出限为培养前1~5 CFU/mL(核酸样本为0.01 ng/μL),可实现对沙门氏菌、大肠埃希氏菌O157:H7、金黄色葡萄球菌、志贺氏菌、单核细胞增生李斯特氏菌、副溶血性弧菌等6种致病微生物的高通量检测,检测结果与标准方法一致。多重PCR-膜芯片技术可成为饲料及原料中微生物污染快速、高通量筛查新的技术手段。

水源性致病微生物检测中水样前处理方法研究进展

水中的微生物水平(细菌、病毒、原虫等)是衡量水质安全的重要指标,水源性致病微生物通过饮水和直接接触等途径感染人体,存在传播各类疾病的风险,关乎人群生命健康。由于致病微生物在环境水体中通常以较低浓度存在,在检测过程中均需先对水样进行前处理将其浓缩成较小的体积。文中介绍了可用于水体中致病微生物富集浓缩的富集培养、离心、过滤和磁性分离等前处理方法的研究进展,讨论了不同前处理方法的优缺点和适用范围,以实现水体中致病微生物的准确检测,真实反映致病微生物在水体中的赋存状况,为水体中致病微生物分析检测和风险控制提供技术支撑。如离心和过滤适用范围广泛,适用于水源性致病微生物的非特异性富集,富集培养和磁性分离特异性较强,更适用于水源性致病微生物的特异性富集。

生鲜乳中致病微生物污染来源、危害与消减措施

生鲜乳中致病微生物污染严重影响乳及其制品的质量安全。本文分析了致病微生物的污染来源,并对生鲜乳中可能携带的对消费者健康有影响的37种病原微生物综合其致病性和耐药基因传播进行危害分析,明确了需优先管控的致病微生物风险排序,为我国生鲜乳全产业链中致病微生物认知、防控、风险评估提供技术参考。同时结合我国生鲜乳不同生产模式,提出影响消费者健康的致病微生物消减措施:养殖环节要加强饲料、牛舍和牛体的微生物控制;挤奶环节加强挤奶工具、挤奶员工、和药浴时的微生物控制;贮运环节要加强储存和运输过程中的微生物控制。这些针对性防控策略建议,将促进相关方及时跟进生鲜乳质量安全控制,降低乳制品消费风险。

医院呼吸道致病微生物的传播与防控

医院环境空间密闭且人流量大,呼吸道致病微生物传播防控难度较大。本文介绍了医院呼吸道致病微生物的传播特征及其影响因素,从隔离、环境净化和个体防护3个方面分析医院呼吸道传染病防控策略。

高致病性传染病疫苗专利申请中生物材料保藏问题

目的为高致病性传染病疫苗专利确权问题提供解决方案。方法通过对比研究《专利法》《专利法实施细则》《专利审查指南》及中华人民共和国农业农村部和国务院卫生健康委员会等部门的相关法规中对高致病性病原微生物保藏程序的相关规定,并对国外相关案例进行研究,分析得出我国高致病性传染病疫苗专利申请中生物材料保藏问题的成因,尝试提出解决高致病性传染病疫苗专利确权问题的可实施路径。结果《专利审查指南》中规定的不需要保藏生物材料的情形和国外处理相关问题的经验不适用于解决我国高致病性传染病疫苗专利的确权问题。结论建议修改《专利法》、《专利审查指南》中的相关条款,助力上述问题的解决。

湖南烟草青枯病菌的致病性及生物型研究

从湖南省１２个县、市采集分离烟草青枯病菌菌株５６个．根据其致病性测定结果分为强、中、弱３个类群，分别占４６．４％，１６．１％和３７．５％．大多数调查地点强、弱致病类群并存．对其中５１个菌株进行生理生化测定，根据其对乳糖、麦芽糖、纤维二糖和甘露醇、山梨醇、卫茅醇的利用能力以及对硝酸盐的还原作用，判定其生物型分别属于生物型Ⅲ，Ⅲ－１，Ⅲ－２，Ⅲ－３，Ⅲ－４．

慢性阻塞性肺疾病患者痰标本致病微生物分布及药敏情况调查研究

目的调查分析慢性阻塞性肺疾病(chronic obstructive pulmonary disease,COPD)患者痰标本中致病微生物的分布和药敏结果。方法选择2022年1月至12月扬州东方医院收治的100例COPD患者进行研究,收集所有患者的痰标本开展致病菌检测和药敏试验,统计痰标本内致病微生物的分布和药敏试验结果。结果100例COPD患者痰液标本内检出菌株161株,其中革兰氏阴性菌102株,占比63.35%;革兰氏阳性菌55株,占比34.16%;真菌4株,占比2.48%。在革兰氏阴性菌中,肺炎克雷伯氏杆菌占比最高,是18.63%;其次是鲍曼不动杆菌,占比11.18%;铜绿假单胞菌,占比9.32%。在革兰氏阳性菌中,金黄色葡萄球菌占比最高,是11.80%;其次是肠球菌,占比11.18%。主要致病菌的耐药率总体处在较高水平,其中金葡菌及肠球菌对于多类抗菌药存在耐药现象,但对于亚胺培南以及万古霉素不存在耐药现象。在革兰氏阴性菌中,肺炎克雷伯杆菌对于万古霉素和亚胺培南较为敏感,不存在耐药现象;鲍曼不动杆菌对于氨苄西林/舒巴坦比较敏感,不存在耐药现象;铜绿假单胞菌对于环丙沙星及美罗培南较为敏感,不存在耐药现象。结论COPD患者痰标本内的致病菌多为革兰氏阴性菌,同时抗生素的耐药率较高,需要临床结合药敏结果合理选择有关抗生素进行治疗。

日本松干蚧生物防治研究进展

生物防治是防控林业害虫危害的重要手段之一,作为一种绿色防控技术在对日本松干蚧的防治中更符合当前社会对环保的要求。本文从天敌昆虫资源、致病微生物、昆虫性信息素及选育抗性树种等4方面综述了日本松干蚧生物防治的研究进展,以期为日本松干蚧开展绿色防控提供参考。

膜芯片法快速筛查即食果蔬中常见致病微生物方法的建立及应用

建立膜芯片法检测即食果蔬中的常见致病微生物,实现快速、简便、同步筛检6种细菌和病毒。利用反向斑点杂交技术将待测靶标基因中的特异性序列作为探针固定在尼龙膜上,利用多对带生物素标记的引物对待测靶标基因进行扩增,并通过酶-底物显色,产生肉眼可辨的信号。单次反应即可得出多种指标结果,同时结合多重PCR技术以双重反应体系来确保检测结果的准确性。结果表明,该方法具备特异性强及灵敏度高的优势,且检测结果准确,为食品中致病微生物的快速检测提供了新思路。

感染性心内膜炎239例致病微生物分布及其优势菌药物敏感差异性

目的了解感染性心内膜炎患者致病微生物分布、确定优势菌株及其药物敏感差异性,为优选抗菌药物提供依据。方法选择2018年1月至2021年12月在山东第一医科大学第二附属医院和山东省济南市第五人民医院住院的239例确诊感染性心内膜炎患者为研究对象,分别进行静脉血培养,分离菌株,确定优势菌分布;对主要革兰阳性优势菌和革兰阴性优势菌进行药物敏感差异性分析。结果分离出239株致病微生物,革兰阳性菌在所有致病微生物中占比高达63.60%,构成优势菌株。草绿色链球菌、金黄色葡萄球菌在革兰阳性菌占比分别达51.97%、28.29%,在革兰阳性菌中构成优势菌株;大肠埃希菌、鲍氏不动杆菌在革兰阴性菌占比较高42.65%、19.12%,在革兰阴性菌中构成相对优势菌株。草绿色链球菌、金黄色葡萄球菌对青霉素不敏感(耐药率91.14%、88.37%),两者对利福平、莫西沙星、万古霉素、利奈唑胺均敏感(敏感率为96.20%、98.34%、100.00%、100.00%和95.35%、97.67%、97.67%、100.00%),仅有32.56%金黄色葡萄球菌对氨苄西林敏感。大肠埃希菌、鲍氏不动杆菌对头孢唑啉、头孢哌酮、头孢曲松、哌拉西林敏感性差(耐药率为93.10%、75.86%、72.41%、58.62%和100.00%、84.62%、92.31%、69.23%),两者对环丙沙星、美罗培南、亚胺培南均敏感(敏感率为96.55%、100.00%、100.00%和92.31%、92.31%、100.00%),大肠埃希菌对庆大霉素敏感,鲍氏不动杆菌对庆大霉素敏感性相对较低。结论感染性心内膜炎病原菌感染谱分布仍以革兰阳性菌特别是草绿色链球菌、金黄色葡萄球菌为优势菌株;草绿色链球菌、金黄色葡萄球菌对青霉素不敏感、对利福平、莫西沙星、万古霉素、利奈唑胺均敏感。应掌握最新的耐药动态变迁,选择敏感抗菌药物。

即食果蔬中致病微生物检测技术及研究进展

即食果蔬中的致病微生物污染给其食用造成了极大的安全隐患。致病微生物的传统检验方法耗时、耗力,目前急需一种高效率、高准确度、低成本且单次实验可满足多指标筛检要求的快速检测技术来对即食果蔬中的多种致病微生物进行同时检测。本文阐述了即食果蔬中食源性致病微生物的种类及其主要危害,介绍了目前比较常见的微生物检测技术,并重点介绍了针对即食果蔬最新开发出的一种快速、简便、高通量的微生物检测方法,为研究者开辟其他食源性致病微生物快速检测方法提供重要参考。

肉鸡屠宰加工过程中的致病性微生物控制技术

肉鸡屠宰加工是畜牧业中至关重要的环节,但其过程中可能存在着致病性微生物的危险,这对食品安全和公共健康构成威胁。本文将深入探讨肉鸡屠宰加工过程中的控制措施,包括但不限于卫生操作规程、消毒措施、生物安全措施和监测系统。通过综合应用这些技术,可以最大程度地减少致病性微生物的存在和传播,提高肉鸡产品的卫生质量,从而确保食品供应链的可持续性和公共健康。

水产品中常见致病微生物快速检测体系的建立

采用聚合酶链式反应(PCR)检测方法,针对副溶血弧菌耐热溶血毒素tlh基因及其毒力基因tdh和trh基因、单增李斯特菌溶血素hly基因、沙门氏菌invA基因和大肠杆菌O157 rfbe、stx 1和stx 2基因为靶基因设计引物,建立快速简便水产品中常见致病性微生物检测体系。通过确定统一的PCR反应条件和缩短循环时间,达到快速检测的目的。研究结果表明,建立的PCR体系,多靶点同步检测特异性为100%,致病性微生物基因组DNA的检测限约为8.28×10^(1) CFU/mL,对人工污染的水产品样品直接进行检测,检测限分别为4×10^(3) CFU/mL,2.14×10^(3) CFU/mL,8×10^(4) CFU/mL和1.07×10^(3) CFU/mL,并能在3 h内完成检测。表明已成功建立水产品常见致病微生物的PCR快速检测技术。

PCR-反向斑点杂交技术在即食果蔬常见致病微生物快速筛查中的应用

本研究旨在提升即食果蔬的食品安全市场监管技术水平,为保障我国居民身体健康和国家利益提供科技支撑,开发一种高效、快速的即食果蔬常见致病微生物检测方法,用于即食生鲜果蔬中沙门氏菌、大肠埃希氏菌O157:H7、金黄色葡萄球菌、单核细胞增生李斯特氏菌、轮状病毒、诺如病毒GI及GII型等7种常见致病微生物的快速筛查鉴定。将多重PCR与反向斑点杂交技术联用,一次检测即可完成7种致病微生物的筛查。结果表明,该技术具有准确度高、特异性强、无交叉反应和检测灵敏度高的特点,在提高检测通量的同时大大提高了检测效率。

高致病性病原微生物实验室环境风险探讨

目前,高致病性病原微生物实验室环境风险评价只针对实验室操作过程产生的三废展开,但病原微生物进入自然环境远远不止这一种途径。分析病原微生物进入自然环境的3种途径:通过实验室产生的三废进入自然环境,被感染的人或动物进入自然环境,在运输、储存、安保等环节,病原微生物样本直接进入自然环境。同时概述了由环境介质进入人体的3种途径。总结出病原微生物从实验室多途径散逸出来到侵入人体的全过程轨迹。最后指出了高致病性病原微生物实验室环境风险评价应该覆盖实验室运行活动可能产生的所有环境生物污染风险环节。