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致细胞病变型新疆BVDV基因2型毒株的分离鉴定及其致病性
被引量:
5
1
作者
李祯
郭妍婷
+10 位作者
陈俊贞
胡新艳
赵新艳
董文丽
贺渊秀
王万顺
李泽宇
姚刚
冉多良
付强
史慧君
《中国兽医学报》
CAS
CSCD
北大核心
2021年第4期646-654,共9页
为了解新疆博乐地区某牛场牛病毒性腹泻病毒(bovine viral diarrhea virus,BVDV)的流行情况及致病性,采用反转录PCR(reverse transcription PCR,RT-PCR)检测粪便样品,将阳性病料接种至胎牛肾细胞(madin-darby bovine kidney,MDBK),盲传1...
为了解新疆博乐地区某牛场牛病毒性腹泻病毒(bovine viral diarrhea virus,BVDV)的流行情况及致病性,采用反转录PCR(reverse transcription PCR,RT-PCR)检测粪便样品,将阳性病料接种至胎牛肾细胞(madin-darby bovine kidney,MDBK),盲传15代后通过5轮蚀斑纯化试验得到1株致细胞病变型(cytopathic type,CP)BVDV毒株;通过理化性质检测、间接免疫荧光试验、电镜观察、基因序列分析及小鼠致病性试验对该毒株进行鉴定。结果显示:成功分离纯化得到1株CP BVDV毒株,将其命名为BVDV-BL314株;盲传15代BVDV毒株接种至MDBK细胞培养引起明显的细胞皱缩、变圆、碎裂、脱落、产生合胞体等致细胞病变效应(cytopathogenic effect,CPE);测定该毒株的滴度为2×10^(8) TCID50/0.1mL;理化性质检测发现该病毒对乙醚、氯仿等有机溶剂敏感,对酸碱敏感;56℃处理30min可显著性降低病毒活性;间接免疫荧光试验检测胞浆中可见特异性荧光;电镜观察该病毒呈球形,直径为40~60nm;遗传进化分析显示该分离株与BVDV-125c株有较近的亲缘关系,属于BVDV-2a基因亚型;免疫BALB/c小鼠后,剖检表现为多器官肿大、出血、质地变脆,边缘钝圆,无光泽等症状;镜检可见炎性细胞浸润、出血等变化。结果表明,分离纯化得到1株致细胞病变型新疆地方性BVDV基因2型毒株,且具有较强的致病性,将为新疆BVDV流行病学调查及致病机制研究提供依据。
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关键词
牛
病
毒性腹泻
病
毒
致细胞病变型
5′UTR基因
基因2型
原文传递
牛病毒性腹泻病毒长春分离株P125基因的克隆与序列测定
被引量:
5
2
作者
骆延波
张绍学
+4 位作者
王新平
宣华
牛钟相
柴家前
王承宇
《中国兽医科技》
CSCD
北大核心
2001年第2期3-6,共4页
以MDBK细胞培养致细胞病变型牛病毒性腹泻病毒 (BVDV)NCD毒株 ,采用异硫氰酸胍一步法提取总RNA ,并根据BVDVNADL参考株序列设计合成的 1对引物 (W 1与W 2 ) ,进行反转录PCR (RT PCR) ,扩增出P12 5基因区约40 0bp的片段。经 pGEM T载体...
以MDBK细胞培养致细胞病变型牛病毒性腹泻病毒 (BVDV)NCD毒株 ,采用异硫氰酸胍一步法提取总RNA ,并根据BVDVNADL参考株序列设计合成的 1对引物 (W 1与W 2 ) ,进行反转录PCR (RT PCR) ,扩增出P12 5基因区约40 0bp的片段。经 pGEM T载体连接后克隆、测序 ,并与已发表的NADL、Osloss、SD 1、184、D、H、Yak等BVDV毒株序列进行比较。结果表明 :NCD株P12 5基因区无插入或缺失变异 ,但存在着核苷酸的替换 ;经聚类分析初步认为NCD株属于Ⅰa型。NCD株与长春 184、H株核苷酸序列差异较大 ,而亲缘关系较近 。
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关键词
牛
病
毒性腹泻
病
毒
基因克隆
序列测定
致细胞病变型
非
致细胞病变型
R25基因
下载PDF
职称材料
牛病毒性腹泻病毒XC株的分离与鉴定
3
作者
邓宇
何学谦
+1 位作者
陈红军
张政
《中国兽医杂志》
CAS
北大核心
2017年第10期38-41,共4页
将BVDV阳性血清样品接种MDBK细胞,结果分离出1株BVDV。采用MDBK细胞培养法、直接免疫荧光、RT-PCR与TCID_(50)等方法对分离毒株进行鉴定分析。结果表明,分离株在MDBK细胞上盲传至10代均未出现细胞病变;在直接免疫荧光试验中呈阳性;RT-PC...
将BVDV阳性血清样品接种MDBK细胞,结果分离出1株BVDV。采用MDBK细胞培养法、直接免疫荧光、RT-PCR与TCID_(50)等方法对分离毒株进行鉴定分析。结果表明,分离株在MDBK细胞上盲传至10代均未出现细胞病变;在直接免疫荧光试验中呈阳性;RT-PCR扩增均获得5'-UTR、Npro预期大小DNA片段;分离株滴度为10^(-5.9)TCID_(50)/0.2 mL。进化分析显示,该分离株属于BVDV-1m。以上结果推断,成功分离鉴定1株BVDV,该分离株为非致细胞病变型BVDV-1m,命名为BVDV-1 XC株,为研究致病机理奠定基础。
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关键词
牛
病
毒性腹泻
病
毒
分离鉴定
直接免疫荧光试验
非
致细胞病变型
下载PDF
职称材料
题名
致细胞病变型新疆BVDV基因2型毒株的分离鉴定及其致病性
被引量:
5
1
作者
李祯
郭妍婷
陈俊贞
胡新艳
赵新艳
董文丽
贺渊秀
王万顺
李泽宇
姚刚
冉多良
付强
史慧君
机构
新疆农业大学动物医学学院
出处
《中国兽医学报》
CAS
CSCD
北大核心
2021年第4期646-654,共9页
基金
新疆维吾尔自治区自然科学基金面上资助项目(2017D01A35)。
文摘
为了解新疆博乐地区某牛场牛病毒性腹泻病毒(bovine viral diarrhea virus,BVDV)的流行情况及致病性,采用反转录PCR(reverse transcription PCR,RT-PCR)检测粪便样品,将阳性病料接种至胎牛肾细胞(madin-darby bovine kidney,MDBK),盲传15代后通过5轮蚀斑纯化试验得到1株致细胞病变型(cytopathic type,CP)BVDV毒株;通过理化性质检测、间接免疫荧光试验、电镜观察、基因序列分析及小鼠致病性试验对该毒株进行鉴定。结果显示:成功分离纯化得到1株CP BVDV毒株,将其命名为BVDV-BL314株;盲传15代BVDV毒株接种至MDBK细胞培养引起明显的细胞皱缩、变圆、碎裂、脱落、产生合胞体等致细胞病变效应(cytopathogenic effect,CPE);测定该毒株的滴度为2×10^(8) TCID50/0.1mL;理化性质检测发现该病毒对乙醚、氯仿等有机溶剂敏感,对酸碱敏感;56℃处理30min可显著性降低病毒活性;间接免疫荧光试验检测胞浆中可见特异性荧光;电镜观察该病毒呈球形,直径为40~60nm;遗传进化分析显示该分离株与BVDV-125c株有较近的亲缘关系,属于BVDV-2a基因亚型;免疫BALB/c小鼠后,剖检表现为多器官肿大、出血、质地变脆,边缘钝圆,无光泽等症状;镜检可见炎性细胞浸润、出血等变化。结果表明,分离纯化得到1株致细胞病变型新疆地方性BVDV基因2型毒株,且具有较强的致病性,将为新疆BVDV流行病学调查及致病机制研究提供依据。
关键词
牛
病
毒性腹泻
病
毒
致细胞病变型
5′UTR基因
基因2型
Keywords
bovine viral diarrhea virus
cytopathic type
5′UTR gene
genotype 2
分类号
S852.65 [农业科学—基础兽医学]
原文传递
题名
牛病毒性腹泻病毒长春分离株P125基因的克隆与序列测定
被引量:
5
2
作者
骆延波
张绍学
王新平
宣华
牛钟相
柴家前
王承宇
机构
山东农业大学动物科技学院
解放军军需大学动物医学系
出处
《中国兽医科技》
CSCD
北大核心
2001年第2期3-6,共4页
文摘
以MDBK细胞培养致细胞病变型牛病毒性腹泻病毒 (BVDV)NCD毒株 ,采用异硫氰酸胍一步法提取总RNA ,并根据BVDVNADL参考株序列设计合成的 1对引物 (W 1与W 2 ) ,进行反转录PCR (RT PCR) ,扩增出P12 5基因区约40 0bp的片段。经 pGEM T载体连接后克隆、测序 ,并与已发表的NADL、Osloss、SD 1、184、D、H、Yak等BVDV毒株序列进行比较。结果表明 :NCD株P12 5基因区无插入或缺失变异 ,但存在着核苷酸的替换 ;经聚类分析初步认为NCD株属于Ⅰa型。NCD株与长春 184、H株核苷酸序列差异较大 ,而亲缘关系较近 。
关键词
牛
病
毒性腹泻
病
毒
基因克隆
序列测定
致细胞病变型
非
致细胞病变型
R25基因
Keywords
BVDV
P12 5
GeneCloning
Sequencing
分类号
S852.659.6 [农业科学—基础兽医学]
S858.235.3 [农业科学—临床兽医学]
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职称材料
题名
牛病毒性腹泻病毒XC株的分离与鉴定
3
作者
邓宇
何学谦
陈红军
张政
机构
西昌学院动物科学学院
出处
《中国兽医杂志》
CAS
北大核心
2017年第10期38-41,共4页
基金
四川省教育厅自然科学重点项目(18ZA0523)
四川省科技厅科技支撑项目(2014NZ0113)
攀西动物疫病检测与防控四川省高校重点实验室基本科研业务经费项目(341B)
文摘
将BVDV阳性血清样品接种MDBK细胞,结果分离出1株BVDV。采用MDBK细胞培养法、直接免疫荧光、RT-PCR与TCID_(50)等方法对分离毒株进行鉴定分析。结果表明,分离株在MDBK细胞上盲传至10代均未出现细胞病变;在直接免疫荧光试验中呈阳性;RT-PCR扩增均获得5'-UTR、Npro预期大小DNA片段;分离株滴度为10^(-5.9)TCID_(50)/0.2 mL。进化分析显示,该分离株属于BVDV-1m。以上结果推断,成功分离鉴定1株BVDV,该分离株为非致细胞病变型BVDV-1m,命名为BVDV-1 XC株,为研究致病机理奠定基础。
关键词
牛
病
毒性腹泻
病
毒
分离鉴定
直接免疫荧光试验
非
致细胞病变型
Keywords
Bovine viral diarrhea virus
isolation and identification
direct immune- fluorescence assay
noncytopathic
分类号
S852.653 [农业科学—基础兽医学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
致细胞病变型新疆BVDV基因2型毒株的分离鉴定及其致病性
李祯
郭妍婷
陈俊贞
胡新艳
赵新艳
董文丽
贺渊秀
王万顺
李泽宇
姚刚
冉多良
付强
史慧君
《中国兽医学报》
CAS
CSCD
北大核心
2021
5
原文传递
2
牛病毒性腹泻病毒长春分离株P125基因的克隆与序列测定
骆延波
张绍学
王新平
宣华
牛钟相
柴家前
王承宇
《中国兽医科技》
CSCD
北大核心
2001
5
下载PDF
职称材料
3
牛病毒性腹泻病毒XC株的分离与鉴定
邓宇
何学谦
陈红军
张政
《中国兽医杂志》
CAS
北大核心
2017
0
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