苦参碱对人舌癌Tca-8113细胞增殖抑制及机制研究

目的探讨分化诱导剂苦参碱(Matrine Mat)对人舌癌Tca-8113细胞系增殖抑制作用及其发生的机制。方法体外培养舌癌TCA-8113细胞,用不同浓度的苦参碱对体外培养的舌癌TCA-8113细胞进行干预。分别采用MTT;细胞周期检测;免疫细胞化学染色、间接免疫荧光联合流式细胞仪定量检测等方法,观察其对舌癌TCA-8113细胞的增殖抑制作用并探讨该作用发生的机制。统计学分析采用12.00统计软件包,计量资料用均数±标准差(x±s)表示,t检验做显著性比较,P<0.05为显著性检验水准。结果经Mat处理后的舌癌TCA-8113细胞生长速度减慢,细胞周期明显阻滞;其PCNA表达明显下降。结论 Mat对舌癌TCA-8113细胞的增殖有显著的抑制作用;其增殖抑制作用发生可能是通过对细胞周期阻滞及调控增殖相关基因表达发生。

苦参碱对人舌癌Tca-8113细胞转移抑制作用的体外研究

研究苦参碱对舌癌Tca－8113细胞粘附侵袭能力1的影响并初步探讨其机制

载阿霉素介孔二氧化硅纳米粒对人舌癌Tca-8113细胞增殖及凋亡的影响

目的:探讨载阿霉素介孔二氧化硅纳米粒(MSNs@DOX)对体外培养的人舌癌Tca-8113细胞增殖及凋亡的作用。方法:透射电镜(TEM)和氮吸附法对介孔二氧化硅纳米粒(MSNs)进行表征;紫外分光光度计检测阿霉素(DOX)释放行为;MTT法检测细胞增殖抑制作用;Hochest33342染色、流式细胞术检测细胞凋亡和周期分布;Western blot检测P53、Bcl-2、Bax和Caspase-3蛋白表达。结果:MSNs形态规则,分布均一,平均粒径、介孔孔径、比表面积和孔容分别为约30nm,19.59682nm、193.4296m2/g、0.947625cm3/g;MSNs细胞相容性良好;与单独DOX相比,载药组的细胞增殖抑制率及凋亡率更显著,且呈一定MSNs浓度依赖性(P<0.05);细胞明显阻滞于G0/G1期;P53、Bax、Caspase-3表达显著升高,Bcl-2表达显著降低。结论:该载药纳米传输系统有望用于舌癌治疗。

积雪草酸对人舌癌TCA-8113细胞增殖、凋亡的影响

目的 探究积雪草酸(asiatic acid,AA)体外对人舌癌TCA-8113细胞增殖、凋亡、细胞周期阻滞的作用及其可能的作用机制。方法 MTT法检测不同浓度的AA(0、20、30、40、50 μmol·L -1 )作用于TCA-8113细胞24 h的增殖抑制作用;集落形成实验检测AA对TCA-8113细胞集落形成率的影响;Hoechst 33342染色法、Annexin V-FITC/PI法检测AA对TCA-8113细胞凋亡的影响;流式细胞术分析细胞周期变化;Western blot检测AA对TCA-8113细胞中Bcl-2、Bax、cleaved caspase-3及p53、p21蛋白表达的影响。结果 AA对TCA-8113细胞抑制率呈浓度依赖性( P <0.05),其IC 50 值为42.13 μmol·L -1 ,细胞集落形成能力降低;随AA浓度的增大,细胞凋亡率增加( P <0.05);当AA浓度达到30 μmol·L -1 时,细胞周期逐渐阻滞在G 2/M期;Western blot显示,p53、p21及Bax表达升高,Bcl-2表达降低( P <0.05),呈浓度依赖性。结论 AA明显抑制TCA-8113细胞的增殖,诱导其凋亡,其机制可能与调控p53通路相关蛋白p53、p21、Bax,以及抑制Bcl-2的表达有关,同时AA能使TCA-8113细胞周期阻滞在G 2/M期。

虫草素对舌癌TCA-8113细胞周期和凋亡的影响

目的:研究虫草素在体外对舌癌TCA-8113细胞周期和凋亡的影响;方法:以噻唑蓝法(MTT)测定虫草素对TCA-8113细胞增殖活性的影响;用流式细胞术测定虫草素对TCA-8113细胞周期的影响情况以及是否诱导TCA-8113发生凋亡作用;采用蛋白免疫印迹检测细胞周期相关蛋白和细胞凋亡相关蛋白的表达情况;结果:虫草素对TCA-8113细胞增殖活性的抑制作用具有浓度依赖性,能够引起TCA-8113细胞发生G2期细胞周期阻滞,并诱导TCA-8113细胞发生凋亡作用;Cyclin B1和Bcl-2表达减少,Cdc2和Bax表达量没用明显变化。结论:虫草素有效的引起TCA-8113发生细胞周期阻滞,诱导TCA-8113细胞凋亡,从而抑制TCA-8113细胞的增殖活性,为进一步应用于临床治疗舌癌等肿瘤疾病提供了依据。

VEGF单克隆抗体对人舌癌细胞Tca-8113增殖抑制作用观察

目的观察VEGF单克隆抗体对体外舌癌细胞Tca-8113增殖的抑制作用,并探讨其机制。方法对数生长期的Tca-8113细胞制成2.5×107/ml的单细胞悬液,接种于96孔板。设A、B两组。培养6 h待细胞贴壁后,A组加入VEGF单克隆抗体,B组不添加任何药物。分别于培养后24、48、72、96 h检测细胞生长存活率,于培养后48 h采用流式细胞仪检测细胞周期,Real-time PCR法检测两组细胞中的VEGF mRNA。结果培养24、48、72、96 h后,A组细胞生长存活率分别为65.9%、46.1%、69.7%、30.3%(P均<0.05)。A组G2/M期细胞数量较对照组明显增多(分别为7.393%±0.323%和2.733%±0.055%,P<0.01),A组VEGF mRNA表达水平显著低于B组(分别为0.180±0.061和1.000±0.000,P<0.01)。结论 VEGF单克隆抗体可抑制Tca-8113细胞增殖,可能是通过诱导Tca-8113细胞凋亡和细胞周期重分布及下调细胞中VEGF mRNA的表达而发挥作用。

蒲公英根水提物通过磷脂酰肌醇-3-激酶-蛋白激酶B途径调控人舌癌细胞Tca-8113凋亡 迁移

目的制备蒲公英根水提物,研究其对人舌癌细胞Tca-8113凋亡、迁移的影响。方法水溶法制备蒲公英根水提物,并按一定浓度加至正常培养的人舌癌细胞Tca-8113中。流式细胞术用于分析蒲公英根水提物对Tca-8113细胞凋亡的作用,Transwell实验检测其对癌细胞迁移的影响,蛋白质印迹法检测各组癌细胞中磷脂酰肌醇-3-激酶-蛋白激酶B(PI3K/Akt)途径中关键分子p-Akt、Bcl-2等蛋白的表达差异。结果 10 g/L,20 g/L的蒲公英根水提物明显抑制癌细胞的增殖,进一步证实蒲公英根水提物可诱导Tca-8113细胞凋亡;蒲公英根水提物降低p-Akt、Bcl-2的蛋白表达并呈浓度依赖性。结论蒲公英根水提物通过降低p-Akt、Bcl-2表达促进人舌癌细胞Tca-8113细胞凋亡,并降低其迁移能力。

β-榄香烯乳对体外培养Tca-8113细胞放射增敏、细胞周期、凋亡及Bcl-2、Bax蛋白表达的影响

目的:观察β-榄香烯乳对人舌鳞状细胞癌Tca-8113细胞体外放射敏感性的影响,并探讨其相关机制。方法:集落形成法观察β-榄香烯乳对Tca-8113细胞的放射增敏作用:对照组(0mg/L)、实验A、B组(40、60mg/L)细胞经β-榄香烯乳作用24h后,分别进行0、2、4、6、8Gy的剂量照射1min,14d后进行集落计数。对照组、实验组β-榄香烯乳作用Tca-8113细胞24h后,流式细胞术分析作用前后细胞周期及凋亡变化,免疫细胞化学染色观察Bcl-2、Bax蛋白表达变化。结果:2～8Gy照射后实验组(40、60mg/L)集落计数(个)分别为:(60.67±3.56)、(52.67±3.44);(50.00±2.45)、(49.39±6.15);(39.00±3.74)、(25.00±2.53);(31.00±2.37)、(13.00±2.00)。对照组(0mg/L)集落计数(个)为:(74.17±3.60)、(55.17±4.59)、(48.00±2.90)、(38.50±3.62)。3组比较差异均有统计学意义(P均<0.05)。实验组(40、60mg/L)凋亡率分别为(10.00±4.95)%、(18.50±6.57)%,对照组为(0.42±0.33)%,3组比较差异均有统计学意义(P均<0.05)。实验组(40、60mg/L)G2/M期细胞百分比分别为(18.30±6.45)%、(30.90±7.94)%,对照组为(4.40±2.61)%,3组比较差异均有统计学意义(P均<0.05)。β-榄香烯乳作用Tca-8113细胞后,凋亡抑制蛋白Bcl-2的表达减弱,凋亡促进蛋白Bax的表达增强,3组比较差异均有统计学意义(P均<0.05)。结论:β-榄香烯乳在低细胞毒性浓度下对Tca-8113细胞有放射增敏作用;其机制可能是诱导凋亡和促使细胞G2/M期阻滞。

白花丹醌对人舌鳞癌Tca-8113细胞增殖及端粒酶的影响

目的探讨白花丹醌(plumbagin)对人舌鳞癌Tca-8113细胞增殖及端粒酶活性的影响。方法 Annexin V/PI双染色后采用流式细胞术检测细胞凋亡率;以Tca-8113细胞株作为靶细胞,采用原位TRAP法检测端粒酶活性的变化。结果8μmol/L白花丹醌作用人舌鳞癌Tca-8113细胞24 h和48 h后,凋亡细胞显著增加,具有明显的时间依赖性;白花丹醌对人舌鳞癌细胞Tca-8113作用72 h后,端粒酶活性明显降低,且随药物浓度增大,抑制端粒酶活性的作用增强,呈剂量依赖性。结论进一步证实了白花丹醌对人舌鳞癌Tca-8113细胞的增殖具有明显抑制作用,它通过抑制端粒酶活性,诱导细胞凋亡,可能是其发挥抗癌作用的机制之一。

Semaphorin 3A及其受体Neuropilin-1在舌癌组织及Tca8113中的表达

目的:观察Semaphorin 3A(SEMA3A)及其受体Neuropilin-1(Nrp-1)在舌癌组织及舌癌细胞系Tca8113中的表达,探讨其对舌癌中血管生成的意义。方法:应用免疫组织化学方法检测舌癌组织和癌旁组织中SEMA3A及Nrp-1的表达,应用免疫细胞化学检测SEMA3A及Nrp-1在Tca8113中的表达,并用Western印迹检测舌癌组织、癌旁组织及舌癌细胞系Tca8113中SEMA3A及其受体Nrp-1的表达情况。采用SPSS11.0软件包对数据进行χ2检验。结果:免疫组织化学显示,17/20例舌癌组织SEMA3A呈阴性表达,18例Nrp-1呈阳性表达。19/20例癌旁组织中SEMA3A阳性表达,而Nrp-1均呈阴性表达。免疫细胞化学显示,SEMA3A在舌癌细胞中检测不到,而Nrp-1均呈阳性表达。Western印迹检测与此结果完全相符。SEMA3A及Nrp-1在舌癌及癌旁组织中的表达有显著差异(P<0.001)。结论:SEMA3A及其受体Nrp-1在舌癌组织及细胞系中表达异常,提示其可能与肿瘤血管生成相关。

JSI-124靶向性阻断STAT3通路对舌鳞癌Tca-8113细胞增殖抑制的研究

目的:观察选择性JAK/STAT3抑制剂JSI-124对舌鳞状细胞癌Tca-8113细胞增殖抑制以及胞质转录因子STAT3蛋白表达的影响。方法:用MTT、流式细胞仪分别检测Tca-8113细胞在不同浓度JSI-124及不同时间作用下,细胞增殖及凋亡的情况;Western Blot法检测作用后细胞中STAT3蛋白及其磷酸化蛋白表达的变化,并对所得结果进行统计分析。结果:JSI-124可以抑制舌鳞癌Tca-8113细胞的增殖,其抑制作用随着时间的延长和药物浓度的增加而增强;STAT3蛋白的表达无明显变化,而磷酸化激活状态的STAT3蛋白表达显著降低(P<0.01)。结论:选择性JAK/STAT3抑制剂JSI-124可明显抑制舌鳞癌Tca-8113细胞的增殖并诱导其细胞凋亡。

加热对人舌癌Tca8113细胞尿激酶型纤溶酶原激活物表达的影响

目的 研究加热对人舌癌Tca8113细胞尿激酶型纤溶酶原激活物 (UPA)表达的影响。方法 采用免疫组织化学染色和流式细胞术检测Tca8113细胞在不同加热温度下 (37℃、4 0℃、4 3℃、4 5℃ )UPA表达情况。结果 与 37℃组相比 ,4 0℃、4 3℃组加热后Tca8113细胞UPA表达明显下降 (P <0 0 5 ) ,而 4 5℃组UPA表达下降 ,但无统计学意义 (P >0 0 5 )。结论 口腔鳞癌局部热疗不会促进侵袭、转移 ,还会对肿瘤的侵袭、转移有抑制作用。

七氟烷通过MAPK/STAT3信号通路诱导人口腔舌鳞状细胞癌Tca-8113细胞凋亡

目的:探究七氟烷对人舌鳞状细胞癌Tca-8113细胞的凋亡机制。方法:用2~10μmol/L七氟烷作用体外培养人舌鳞状细胞癌Tca-8113细胞。MTT实验检测细胞活力;Hochest/PI双染法以及流式细胞术检测细胞凋亡;Western blot法检测MAPK/STAT3信号通路中相关蛋白表达含量的变化以及通过加入MAPK抑制剂检测MAPK与STAT3信号通路的关系。结果:七氟烷对Tca-8113细胞具明显的杀伤效应,IC_(50)=8μmol/L。七氟烷能够诱导Tca-8113细胞凋亡,促进Bax、cle-cas-3、cle-PARP、p-p38及p-JNK蛋白的表达,抑制Bcl-2、p-STAT3蛋白的表达;加入MAPK抑制剂后,细胞中p-p38、p-JNK、cle-cas-3及cle-PARP表达量降低,p-STAT3、p-ERK表达量增多。结论:七氟烷可能通过调控MAPK/STAT3信号通路从而导致Tca-8113细胞发生凋亡。

VEGF-siRNA对人舌癌TCA8113细胞体内及体外生长影响的初步研究

目的探讨针对血管内皮生长因子(VEGF)的小分子RNA干扰(siRNA)对舌癌TCA8113细胞体内和体外生长的影响。方法将两对特异性针对VEGF的siRNA真核表达载体,以空载体组做实验对照组,经脂质体转染人舌癌TCA8113细胞,经G418筛选后获得稳定表达,以未转染舌癌细胞作空白对照组,MTT检测转染后各组细胞增殖情况;将稳定转染的各组细胞接种裸鼠,接种后7 d开始,每4 d测量瘤体积,绘制肿瘤生长曲线,比较各时间段肿瘤生长,接种后47 d处死,比较瘤体积和瘤重。结果与实验对照组和空白对照组相比较,两个实验组细胞生长速度降低,细胞抑制率均显著增高,差异有统计学意义(P<0.05),裸鼠接种肿瘤生长缓慢,处死后测量到瘤体体积小、重量轻(P<0.05),而实验对照组和空白对照组细胞抑制率、瘤体体积、瘤重等差异无统计学意义(P>0.05)。结论VEGF-siRNA在体内和体外能有效的抑制人舌癌细胞的生长。

rhBMP-2对舌癌细胞Tca8113增殖能力影响的研究

目的 :探讨人重组骨形成蛋白 2 (recombinanthumanbonemorphogeneticprotein 2 ,rhBMP 2 )对舌癌细胞Tca8113增殖能力的影响 ,以深入了解口腔舌癌的恶变机制。方法 :用含 10 0ml/L胎牛血清的RMPI 164 0培养基 ,加入 5 0 μg/L的rhBMP 2培养舌癌细胞Tca8113 ,通过细胞生长曲线、MTT检测、流式细胞仪分析观察细胞的生长状态 ,免疫组化检测细胞周期蛋白依赖性激酶 4(cyclin dependent kinases 4,CDK 4)的表达来观察细胞的周期变化。 结果 :5 0 μg/L的rhBMP 2能显著增进Tca8113细胞的增殖 ,免疫组化结果显示周期蛋白CDK 4的表达增强。结论 :5 0 μg/L的rhBMP 2能显著促进Tca8113细胞的增殖 ,并上调细胞周期蛋白的表达 ,说明BMP 2可能在舌癌的发生发展过程中起着重要作用。

迷迭香酸抑制人舌癌Tca8113细胞转移作用及初步机制研究

目的探讨迷迭香酸对舌癌Tca8113细胞转移的抑制作用及初步机制。方法用磺酰罗丹明B(SRB)比色法检测迷迭香酸对Tca8113细胞增殖活性的影响;Transwell小室迁移试验测定舌癌Tca8113细胞的迁移活性;明胶酶谱法检测Tca8113细胞中基质金属蛋白酶-2(MMP-2)和基质金属蛋白酶-9(MMP-9)的表达活性;蛋白质印迹法检测蛋白IKK、p-IKK、Akt和p-Akt在Tca8113细胞中表达的变化。结果迷迭香酸能明显抑制Tca8113细胞的增殖活性,且具有时间和浓度依赖关系;能浓度依赖性降低Tca8113细胞的迁移活性以及细胞中MMP-2和MMP-9的表达(P<0.05)。胞浆中蛋白IKK的总量和p-IKK的量均随着迷迭香酸浓度的增加而降低;Akt的总量并不随迷迭香酸的浓度而变化,但是p-Akt的量明显呈浓度依赖性降低(P<0.05)。结论迷迭香酸对舌癌Tca8113细胞的转移具有一定的抑制作用,其机制可能与PI3K/Akt信号通路和核因子-κB信号通路有关。

CKS1siRNA联合化疗药物对舌癌Tca8113细胞中CKS1蛋白表达影响的研究

舌癌是口腔颌面部常见的恶性肿瘤,治疗效果不理想。目前,舌癌的治疗主要是以手术和放、化疗为主,其中化疗是目前有效综合治疗舌癌的一个重要的方法,但化疗药物的应用存在耐药和毒副作用等,限制了其用量和时间。近年来的研究表明,肿瘤的发生、发展是细胞周期调控因子异常导致的细胞周期紊乱,因此,寻找有关的调控因子,并将其作为目的基因与放化疗相结合,对肿瘤治疗具有重要意义。

姜黄素对人舌癌Tca8113细胞增殖周期及凋亡的影响

舌癌是口腔颌面部最常见的恶性肿瘤,治疗比较棘手[1],因此有必要进一步研究舌癌的发病抑制以及发现及探求有价值的治疗药物,为舌癌的治疗提供依据。姜黄素(curcumin)是从草本植物姜黄根茎中提取出的一种酚性色素,具有抗肿瘤,抗氧化,抗突变等多种生物学作用,且毒副作用小,获取方便,对多种肿瘤细胞增殖有明显抑制作用[2]。因此,本研究依Tca8113细胞为靶点探讨姜黄素的生物学机制,为舌癌治疗开辟一新治疗途径。

表皮生长因子(EGF)对舌鳞癌细胞(Tca-8113)胞内钙离子的影响

目的:以舌鳞癌细胞(Tca-8113)为研究对象,以期为阐明EGF与肿瘤病人舌苔变化之间的关系提供重要的理论依据。方法:通过激光共聚焦显微镜观察不同浓度的EGF对Tca-8113胞内钙离子动态变化的影响。结果:不同浓度的EGF均可引起Tca-8113胞内钙离子的升高,其中1ng/mL EGF可迅速使胞内钙离子浓度升高,5ng/mL与10ng/mL EGF亦可造成胞内钙离子浓度升高,但升高幅度并不随EGF的浓度增大而升高,且升高缓慢,估计EGF-R的表达具有一定的饱合度造成的。结论:表皮生长因子可能作用于EGF-R,通过钙离子的信号传导,从而调控舌苔形成的动态平衡。

ADAM15在舌癌耐药细胞系Tca8113/ADM表达的实验研究

目的研究舌癌阿霉素(adriamycin,ADM)耐药细胞系Tca8113/ADM及其亲本细胞系Tca8113肿瘤转移相关蛋白去整合素-金属蛋白酶15(adamalysin15,ADAM15)的表达水平,从肿瘤耐药的角度对舌癌的耐药与ADAM15的关系进行初步探讨。方法用蛋白免疫印迹技术检测Tca8113/ADM及Tca8113亲本细胞系的ADAM15蛋白表达水平。结果 ADAM15在Tca8113亲本细胞系和Tca8113/ADM细胞系的表达分别为0.244±0.231和1.217±0.494,两者差异具有统计学意义(P=0.001)。结论肿瘤转移相关蛋白ADAM15在Tca8113/ADM细胞系的表达高于其在亲本细胞的表达,提示舌癌的阿霉素耐药细胞系的转移性可能比其亲本细胞更强。