加热对人舌癌Tca8113细胞尿激酶型纤溶酶原激活物表达的影响

目的 研究加热对人舌癌Tca8113细胞尿激酶型纤溶酶原激活物 (UPA)表达的影响。方法 采用免疫组织化学染色和流式细胞术检测Tca8113细胞在不同加热温度下 (37℃、4 0℃、4 3℃、4 5℃ )UPA表达情况。结果 与 37℃组相比 ,4 0℃、4 3℃组加热后Tca8113细胞UPA表达明显下降 (P <0 0 5 ) ,而 4 5℃组UPA表达下降 ,但无统计学意义 (P >0 0 5 )。结论 口腔鳞癌局部热疗不会促进侵袭、转移 ,还会对肿瘤的侵袭、转移有抑制作用。

端粒酶RNA反义寡核苷酸对舌癌细胞系Tca8113细胞增殖和端粒酶活性的影响

目的探讨端粒酶RNA反义寡核苷酸对舌癌细胞系Tca8113细胞增殖和端粒酶活性的影响。方法反义寡核苷酸(AS-ONS)作用于Tca8113细胞;采用MTT法测定AS-ONS对Tca8113细胞的毒性;倒置相差显微镜观察细胞生长状况及形态学改变;透射电镜观察细胞超微结构;测定Tca8113细胞端粒酶活性。结果AS-ONS可明显地抑制Tca8113细胞的生长,其生长抑制随剂量的增加而增强,具有浓度依赖性;AS-ONS对于Tca8113细胞端粒酶活性抑制作用具有时间依赖性。不同浓度AS-ONS作用于Tca8113细胞,其细胞毒性作用较弱;在倒置显微镜下可见AS-ONS组随药物浓度增高,细胞生长出现抑制。透射电镜观察到AS-ONS组作用的细胞细胞膜破损,细胞核内染色质凝聚,边集,并穿过核膜溢入胞质中,胞质部分溶解,线粒体空胞变性;AS-ONS对端粒酶活性抑制效果非常明显。结论反义寡核苷酸AS-ONS可明显地抑制Tca8113细胞的生长,并具有剂量依赖性和时间依赖性;靶向于端粒酶RNA的反义寡核苷酸可明显地抑制Tca8113细胞端粒酶活性,细胞增殖受到明显抑制。

人舌癌Tca8113肿瘤抗原对树突状细胞诱导CTL杀伤活性的影响

目的探讨人舌癌Tca8113细胞肿瘤抗原体外诱导外周血来源的树突状细胞(dendritic cell,DC)对CTL杀伤活性的影响。方法选取健康成年人,抽取外周血,分离单核细胞,经贴壁获得树突状细胞前体,在体外先后加入GM-CSF、rhIL-4和(或)肿瘤抗原、LPS诱导培养10 d,获得成熟DC;而未贴壁细胞经rhIL-2诱导培养,获得T淋巴细胞。实验中设置舌癌Tca8113组和对照EC9706组,每组再根据效应细胞不同分为A组:Tca8113细胞冻融抗原致敏的DC与T淋巴细胞共培养组;B组:未经致敏DC与T细胞共培养组;C组:单纯T细胞组。结果A、B、C组效应细胞对Tca8113细胞株的杀伤活性分别为(76.48±1.47)%、(50.17±3.34)%、(27.66±4.12)%。A与B组、A与C组比较差异有统计学意义(P<0.05),A组效应细胞对EC9706杀伤活性为(51.18±5.31)%,与对Tca8113的杀伤活性相比差异有统计学意义(P<0.05)。结论人舌癌Tca8113细胞冻融抗原能增强DC-CTL效应细胞对舌鳞癌Tca8113细胞株特异性杀伤活性。

rhBMP-2对舌癌细胞Tca8113增殖能力影响的研究

目的 :探讨人重组骨形成蛋白 2 (recombinanthumanbonemorphogeneticprotein 2 ,rhBMP 2 )对舌癌细胞Tca8113增殖能力的影响 ,以深入了解口腔舌癌的恶变机制。方法 :用含 10 0ml/L胎牛血清的RMPI 164 0培养基 ,加入 5 0 μg/L的rhBMP 2培养舌癌细胞Tca8113 ,通过细胞生长曲线、MTT检测、流式细胞仪分析观察细胞的生长状态 ,免疫组化检测细胞周期蛋白依赖性激酶 4(cyclin dependent kinases 4,CDK 4)的表达来观察细胞的周期变化。 结果 :5 0 μg/L的rhBMP 2能显著增进Tca8113细胞的增殖 ,免疫组化结果显示周期蛋白CDK 4的表达增强。结论 :5 0 μg/L的rhBMP 2能显著促进Tca8113细胞的增殖 ,并上调细胞周期蛋白的表达 ,说明BMP 2可能在舌癌的发生发展过程中起着重要作用。

迷迭香酸抑制人舌癌Tca8113细胞转移作用及初步机制研究

目的探讨迷迭香酸对舌癌Tca8113细胞转移的抑制作用及初步机制。方法用磺酰罗丹明B(SRB)比色法检测迷迭香酸对Tca8113细胞增殖活性的影响;Transwell小室迁移试验测定舌癌Tca8113细胞的迁移活性;明胶酶谱法检测Tca8113细胞中基质金属蛋白酶-2(MMP-2)和基质金属蛋白酶-9(MMP-9)的表达活性;蛋白质印迹法检测蛋白IKK、p-IKK、Akt和p-Akt在Tca8113细胞中表达的变化。结果迷迭香酸能明显抑制Tca8113细胞的增殖活性,且具有时间和浓度依赖关系;能浓度依赖性降低Tca8113细胞的迁移活性以及细胞中MMP-2和MMP-9的表达(P<0.05)。胞浆中蛋白IKK的总量和p-IKK的量均随着迷迭香酸浓度的增加而降低;Akt的总量并不随迷迭香酸的浓度而变化,但是p-Akt的量明显呈浓度依赖性降低(P<0.05)。结论迷迭香酸对舌癌Tca8113细胞的转移具有一定的抑制作用,其机制可能与PI3K/Akt信号通路和核因子-κB信号通路有关。

VEGF单克隆抗体对人舌癌细胞Tca-8113增殖抑制作用观察

目的观察VEGF单克隆抗体对体外舌癌细胞Tca-8113增殖的抑制作用,并探讨其机制。方法对数生长期的Tca-8113细胞制成2.5×107/ml的单细胞悬液,接种于96孔板。设A、B两组。培养6 h待细胞贴壁后,A组加入VEGF单克隆抗体,B组不添加任何药物。分别于培养后24、48、72、96 h检测细胞生长存活率,于培养后48 h采用流式细胞仪检测细胞周期,Real-time PCR法检测两组细胞中的VEGF mRNA。结果培养24、48、72、96 h后,A组细胞生长存活率分别为65.9%、46.1%、69.7%、30.3%(P均<0.05)。A组G2/M期细胞数量较对照组明显增多(分别为7.393%±0.323%和2.733%±0.055%,P<0.01),A组VEGF mRNA表达水平显著低于B组(分别为0.180±0.061和1.000±0.000,P<0.01)。结论 VEGF单克隆抗体可抑制Tca-8113细胞增殖,可能是通过诱导Tca-8113细胞凋亡和细胞周期重分布及下调细胞中VEGF mRNA的表达而发挥作用。

CKS1siRNA联合化疗药物对舌癌Tca8113细胞中CKS1蛋白表达影响的研究

舌癌是口腔颌面部常见的恶性肿瘤,治疗效果不理想。目前,舌癌的治疗主要是以手术和放、化疗为主,其中化疗是目前有效综合治疗舌癌的一个重要的方法,但化疗药物的应用存在耐药和毒副作用等,限制了其用量和时间。近年来的研究表明,肿瘤的发生、发展是细胞周期调控因子异常导致的细胞周期紊乱,因此,寻找有关的调控因子,并将其作为目的基因与放化疗相结合,对肿瘤治疗具有重要意义。

姜黄素对人舌癌Tca8113细胞增殖周期及凋亡的影响

舌癌是口腔颌面部最常见的恶性肿瘤,治疗比较棘手[1],因此有必要进一步研究舌癌的发病抑制以及发现及探求有价值的治疗药物,为舌癌的治疗提供依据。姜黄素(curcumin)是从草本植物姜黄根茎中提取出的一种酚性色素,具有抗肿瘤,抗氧化,抗突变等多种生物学作用,且毒副作用小,获取方便,对多种肿瘤细胞增殖有明显抑制作用[2]。因此,本研究依Tca8113细胞为靶点探讨姜黄素的生物学机制,为舌癌治疗开辟一新治疗途径。

转染BMP-II型突变受体基因对Tca8113舌癌细胞增殖的影响

目的 :明确转染BMP II型突变受体对Tca8113舌癌细胞的作用 ,以进一步探讨BMPs对口腔上皮恶变的作用机制。方法 :用FuGENE6(TransfectionReagentKit)真核转染试剂盒将携带BMP II型突变受体cDNA的真核表达载体转染Tca8113细胞 (命名为Tca8113ZR细胞 ) ;然后对Tca8113ZR和Tca8113细胞分别进行生长曲线、MTT检测 ,FCM分析 ,BrdU标记检测细胞的增殖活性及DNA合成 ;以观察转染前后舌癌细胞生物学性状的变化。结果 :Tca8113ZR细胞和Tca8113细胞相比 ,形态未见明显变化 ,但是细胞的增殖活力明显下降。结论

TMPyP4-PDT对人舌癌Tca8113细胞杀伤作用的实验研究

目的:探讨TMPyP4(〔四-(N-甲基-4-吡啶基)〕卟啉)对人舌癌Tca8113细胞的光动力学杀伤作用。方法:人舌癌Tca8113细胞用浓度分别为0μM、3.3μM、6.5μM、17μM、26μM的TMPyP4孵育4h后,用580nm半导体激光照射,能量密度分别为0 J/cm2、2J/cm2、4 J/cm2、8J/cm2、16J/cm2、32J/cm2,24h后用甲基噻唑四唑法(MTT))检测TMPyP4-PDT对人舌癌Tca8113细胞的抑制作用,流式细胞仪检测细胞凋亡率,并在光镜及电镜下观察细胞的形态变化。结果:在一定浓度范围内,TMPyP4-PDT对人舌癌Tca8113细胞生长增殖的抑制作用和诱导凋亡作用随着浓度和光照能量的增加而增加。光镜、电镜下可观察到细胞坏死和凋亡样改变。结论:TMPyP4-PDT对人舌癌Tca8113细胞有明显的杀伤作用,并在一定范围内呈光剂量和浓度剂量依赖型。

天浆壳生物碱的提取分离纯化及对舌癌Tca8113细胞的增殖抑制作用

目的:从天浆壳中提取分离纯化得到生物碱,并研究其对人舌癌Tca8113细胞的增殖抑制作用。方法:采用醇提法提取天浆壳中总生物碱,硅胶柱色谱分离纯化得到单一生物碱化合物,通过核磁共振光谱和质谱对其化学结构进行分析。采用四甲基偶氮唑盐(MTT)比色法测定生物碱对Tca8113细胞增殖的抑制率,Hoechst 33342染色法观察细胞形态变化。结果:从天浆壳中分离出secu’amamine D、securinine、securitinine三种生物碱;MTT结果表明,三种生物碱均能明显抑制Tca8113细胞的增殖;Hoechst 33342染色结果显示,三种生物碱均能使Tca8113细胞发生凋亡形态学改变,且与浓度正相关。结论:首次从天浆壳中分离出secu’amamine D、securinine、securitinine三种生物碱,三种生物碱均能抑制Tca8113细胞增殖并促使其凋亡。

橙皮苷对人舌癌Tca8113细胞增殖和凋亡的影响及机制研究

目的:探讨橙皮苷(HP)对人舌癌Tca8113细胞增殖和凋亡的影响及机制。方法:将人舌癌Tca8113细胞分为对照组、低剂量HP组和高剂量HP组。对照组细胞常规培养。低剂量HP组细胞在对照组基础上给予30μmol/L HP,高剂量HP组细胞则给予60μmol/L HP。24 h后,采用CCK-8实验检测细胞增殖活力;采用Hoechst 33342染色和Annexin V-FITC/PI染色检测细胞凋亡情况;采用Western blot检测凋亡相关蛋白磷酸化磷脂酰肌醇3-激酶(p-PI3K)、磷酸化蛋白激酶B(p-AKT)、B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2)和Bcl-2相关X蛋白(Bax)的表达情况。结果:经30、60μmol/L HP处理24 h后,舌癌Tca8113细胞的增殖活力受到不同程度的抑制(均P<0.01)。对照组细胞形态规则,染色质均匀,胞核呈现出弱蓝色荧光;HP实验组细胞染色质浓缩,细胞核固缩,部分胞核碎裂呈现出亮蓝色荧光,凋亡数量明显增加。HP实验组细胞凋亡率高于对照组(均P<0.01)。低剂量HP组和高剂量HP组细胞p-PI3K、p-AKT和Bcl-2蛋白相对表达量明显低于对照组,而Bax蛋白相对表达量显著高于对照组(均P<0.01)。结论:HP可通过调控PI3K/AKT信号通路抑制人舌癌Tca8113细胞增殖活力,促进凋亡。

siRNA干扰沉默HIF-1α基因在舌癌Tca8113细胞侵袭和迁移中的作用机制

目的探讨利用siRNA技术特异性阻断缺氧诱导因子(HIF)-1α基因表达对舌癌Tca8113细胞侵袭和迁移的影响。方法取指数生长期细胞消化计数后按2×105个/孔接种于6孔细胞培养板中,待细胞融合至40%~50%时,将针对HIF-1α的siRNA序列应用LipofectamineTM2000转染入Tca8113细胞(siRNA HIF-1α组,干扰组)。半定量RT-PCR及Western印迹法检测HIF-1α的m RNA及蛋白,四甲基偶氮唑蓝比色法(MTT)检测细胞增殖,流式细胞仪检测细胞凋亡率,细胞侵袭实验和划痕实验检测细胞的侵袭和迁移能力。结果 siRNA可以有效沉默Tca8113细胞HIF-1α基因;干扰组细胞增殖较对照组明显受到抑制,且与细胞凋亡有关,凋亡率显著高于对照组(P<0.05);,siRNA HIF-1α基因转染后的Tca8113细胞黏附能力降低,与对照组比较差异有统计学意义(P<0.05);侵袭能力也下降。结论 siRNA能够有效沉默HIF-1α基因,抑制舌癌Tca8113细胞侵袭和迁移,在某种程度上可以改善舌癌细胞的恶性表型,为舌癌的治疗提供思路。

羟基喜树碱、平阳霉素、顺铂单独及联合应用对人舌癌细胞活性的影响

目的 :观察体外应用羟基喜树碱 (HCPT)、平阳霉素 (PYM )、顺铂 (DDP)三种药物单用和两两联合应用对人舌癌Tca8113细胞的生长抑制作用。方法 :采用MTT法、细胞计数法、软琼脂克隆形成法及HE染色法 ,研究用药前后细胞增殖活性及形态的变化。结果 :⑴三种药单用及两药合用对细胞均有很好的抑制作用 ,且以HCPT和PYM合用最强。⑵HCPT和PYM单用和合用可使细胞的群体倍增时间显著延长 ,克隆形成率显著降低 ,形态发生明显的变化。结论

Tca8113细胞exosomes的制备、鉴定及体外抗瘤作用观察

目的:探讨舌癌Tca8113细胞能否分泌exosomes,为口腔肿瘤的免疫治疗寻找新方法。方法:采用超速离心及差异密度梯度离心等方法,从Tca8113细胞中分离并纯化exosomes,透射电镜观察其超微结构,Westernblot分析其表面蛋白成分,最后通过与树突状细胞(dendritic cells,DC)及细胞毒性T淋巴细胞(cytotoxic T lymphocyte,CTL)等介导的细胞毒性实验来观察exosomes体外抗肿瘤效应。结果:从Tca8113细胞中成功分离并纯化出exosomes,其结构及携带蛋白与其他细胞来源的相似,并发现其分泌的exosomes还携带有肿瘤抗原MAGE蛋白。体外抗瘤实验表明:负载exosomes的DC诱导的CTL对Tca8113细胞的杀伤率明显高于未负载exosomes的DC诱导的CTL及加IL-2培养的T细胞,有显著性差异(P<0.01)。结论:舌癌Tca8113细胞能分泌exosomes,exosomes携带各种与肿瘤免疫相关的蛋白,负载DC后,可以诱导T细胞成为抗原特异性CTL,具有特异杀伤肿瘤细胞的功能,为口腔肿瘤的免疫治疗开拓了新的途径。

热休克诱导人舌鳞癌Tca8113细胞HSP_(70)表达的研究

目的：研究热休克恢复期人舌癌Tea8113细胞热休克蛋白（HSP70）的表达和热动力学变化，为人舌鳞癌的免疫治疗提供理论基础。方法：通过人舌鳞癌细胞Tea8113在43℃加热30min，运用免疫组化和流式细胞技术检测在各时间点细胞HSP70的表达，各时间点再次以相同条件加热后用MTT法测各组细胞活性，以期了解Tea8113细胞HSP70表达的动态变化。结果：热休克后恢复2h即出现HSP70的表达，8～12h达到高峰，之后逐渐减少，48h后基本恢复至加热2h后的水平，热休克后恢复12h细胞活性最强。结论：HSP70的迅速表达与缓慢降解对维持Tea8113细胞的生理功能有重要作用。为进一步研究HSP70在人舌癌热疗联合免疫治疗初步提供了理论依据。

阿霉素诱导Tca8113细胞凋亡及其分子机制的研究

【目的】观察阿霉素诱导Tca8113细胞凋亡及其过程中某些凋亡相关分子表达的变化,探讨其诱导凋亡作用的分子机制。【方法】采用MTT法检测阿霉素对Tca8113细胞的增殖作用;以光镜、荧光纤维镜、流式细胞仪和Annexin V-FITC标记法检测细胞凋亡;以蛋白印迹法分析阿霉素对Bcl-2、Bax和Survivin蛋白表达的影响。【结果】阿霉素以剂量依赖方式抑制Tca8113细胞增殖;光镜及荧光显微镜下可见明显凋亡细胞;流式细胞仪检测显示细胞停滞于G1或S期,有明显凋亡峰出现;Annexin V-FITC标记法定量检测证实阿霉素可诱导细胞凋亡发生;蛋白印迹检测表明阿霉素可使Bax表达升高,Bcl-2和Survivin表达下降。【结论】阿霉素可显著抑制Tca8113细胞增殖,可通过调节Bcl-2、Bax和Survivin蛋白表达来实现致凋亡作用。

羟基喜树碱、平阳霉素对人舌癌细胞的抑制作用及端粒酶活性的影响

目的 :观察体外羟基喜树碱、平阳霉素单独和联合应用对人舌癌Tca 8113细胞的生长抑制及端粒酶活性的影响。方法 :采用MTT法、软琼脂克隆形成法、透射电镜观察法、流式细胞术 ,TRAP PCR ELISA法研究。结果 :羟基喜树碱、平阳霉素单用及合用对Tca 8113细胞均有很好的抑制作用 ,且以合用效果最强 ,羟基喜树碱、平阳霉素使Tca 8113细胞的克隆形成率降低 ,超微结构、细胞周期发生明显变化 ,抑制端粒酶活性且有一定的时间依赖性。结论 :羟基喜树碱、平阳霉素对人舌癌Tca 8113细胞在体外有很好的抑制作用且联合应用效果更佳。

加温对乏氧培养中的舌癌细胞株增殖活性影响的实验研究

目的 :探讨加温对乏氧培养中的人舌癌Tca8113细胞株增殖活性的影响 ,为临床上加温治疗口腔癌提供理论基础。方法 :根据是否给予加温处理分为A组 (未加温组 )和B组 (加温组 ) ;根据乏氧时间A、B组又分别分为 0h、3h、6h、12h、2 4h 5个小组。依此分组 ,采用MTT法检测加温对乏氧人舌癌Tca8113细胞增殖活性的抑制率。结果 :加温可降低乏氧人舌癌Tca8113细胞的增殖活性 ;且随着乏氧时间的延长 ,此作用越明显。结论 :乏氧可提高肿瘤细胞对加温的敏感性 ,为加温联合放。