大鼠脑缺血再灌注损伤后NF-κB蛋白、Caspase3 mRNA表达及细胞凋亡的研究

目的 研究大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤后核蛋白因子 κB(NF κB)蛋白、天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶 3(Caspase3)mRNA表达及细胞凋亡的变化。方法 采用大脑中动脉线栓法复制局灶性脑缺血再灌注模型 ,应用免疫组化、原位杂交法检测NF κB蛋白、Caspase3mRNA的表达 ,利用原位缺口末端标记法 (TUNEL)研究凋亡细胞的变化。结果 与假手术大鼠相比 ,脑缺血再灌注后NF κB蛋白、Caspase3mRNA表达明显增强 ;凋亡细胞显著增多 (P <0 .0 1)。结论 大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤引发的神经细胞凋亡可能是与上调NF κB蛋白、Caspase3mR NA表达有关。

川芎嗪对平滑肌细胞NF-κB激活、骨形成蛋白-2表达的影响

目的 观察川芎嗪对血管平滑肌细胞核转录因子 kappaB (NuclearFactor kappaB ,NF κB)的激活与骨形成蛋白 - 2 (bonemorphogenicprotein 2 ,BMP 2 )表达的影响。方法 贴块法培养血管平滑肌细胞 ,分为正常对照组 ,血管紧张素Ⅱ (AngiotensinⅡ ,AgⅡ )刺激组和川芎干预组。各取 15、 30、 6 0min测NF κB激活情况 ,6、 12、 2 4h测BMP 2表达变化。采用免疫组化及原位杂交法测蛋白表达和mRNA转录水平。结果 (1)AgⅡ刺激 15min即有NF κBp6 5核转移 ,30min达高峰 (P <0 0 1) ,1h后减退。川芎干预组NF κB激活与正常组无差异。 (2 )AgⅡ刺激 6hBMP 2表达增强 (P <0 0 5 ) ,12h减弱 (P <0 0 1) ,2 4h更弱。川芎干预组 6hBMP 2表达亦增强 ,12h与 2 4h保持正常水平。结论 川芎嗪抑制AgⅡ诱导的NF κB激活与BMP 2表达降低 ,表明它在抗动脉粥样硬化方面意义重大。

胃肠粘膜相关淋巴瘤NF-κB蛋白的表达与细胞凋亡

目的 :探讨胃肠粘膜相关 (MALT)淋巴瘤中细胞凋亡特点及其与NF κB表达的关系。方法 :收集 10例胃肠道粘膜相关淋巴组织 (MALT)和 4 0例胃肠MALT淋巴瘤 ,以免疫组化方法检测NF κB表达 ,以TUNEL法进行细胞凋亡检测。结果 :MALT组、低度恶性MALT淋巴瘤组和低高混合恶性MALT淋巴瘤组凋亡指数 (AI)分别为 (2 36 0±0 4 0 3) %、(1 6 32± 0 82 0 ) %、(1 12 2± 0 6 78) %。MALT组AI显著高于MALT淋巴瘤组 (P <0 0 1) ;NF κB阳性率分别为 30 0 %、6 1 3%和 88 9% ,三组表达间差异有显著性 (P <0 0 1)。AI与NF κB表达呈负相关 (r =- 0 716 ,P <0 0 1)。结论 :NF κB激活引起凋亡抑制在MALT淋巴瘤发生发展中可能起重要作用。

兔NF-κB p50蛋白质的原核表达及鉴定

为获得可溶性表达的兔NF-κB p50蛋白,本研究对兔p50基因进行大肠杆菌密码子优化及合成,并连接于原核表达载体pGEX-4T-1中,转化大肠杆菌Origami B(DE3)菌株,经异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达,获得GST-p50融合蛋白。聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)结果显示,GST-p50蛋白主要以可溶形式高效表达。经谷胱甘肽S转移酶(GST)磁珠纯化及蛋白免疫印迹(western blot)鉴定,所表达的GST-p50蛋白具有良好的反应原性。研究结果为进一步开展兔NF-κB互作蛋白及信号通路的研究奠定了基础。

NF-κB和P27蛋白在原发性胆囊癌的表达及意义

目的 :探讨NF -κB和P2 7蛋白在原发性胆囊癌中的表达及意义。方法 :采用SP免疫组化法对 4 7例原发性胆囊癌和 2 0例慢性胆囊炎石蜡包埋组织切片进行NF -κB和P2 7染色 ,检测NF -κB和P2 7蛋白表达。结果 :原发性胆囊癌与慢性胆囊炎组织中NF -κB和P2 7蛋白表达的阳性率有显著差异 (P <0 .0 1)。NF -κB在胆囊癌组织中明显高表达 (P <0 .0 5 ) ,P2 7蛋白明显低表达 (P <0 .0 5 ) ;NF -κB ,P2 7蛋白在细胞分化程度、组织学分级间存在显著差异 (P <0 .0 5 )。NF -κB随细胞分化程度的降低、组织学分级的增高明显增高 (P <0 .0 5 ) ,P2 7蛋白则明显降低 (P <0 .0 5 )。结论 :NF -κB的高表达与P2 7蛋白的低表达在原发性胆囊癌的发展过程中起重要作用 ,二者可部分反映原发性胆囊癌的恶性程度及预后。

凋亡抑制因子NF-кB(p50)在非小细胞型肺癌中的表达及其与Bcl-xl、Bak蛋白表达的关系

为探讨细胞核因子к B的表达在肺癌发生发展中的作用及其与 Bcl-xl、 Bak蛋白表达的相互关系 ,对 8例正常支气管粘膜上皮、9例不典型增生、43例肺癌及 10例淋巴结转移癌石蜡切片组织应用免疫组织化学链霉素抗生素蛋白 -过氧化酶法 (SP法 )检测 NF-к B(p5 0 )、Bcl-xl和 Bak蛋白的表达。结果显示 ,肺癌、淋巴结转移癌中 NF-к B(p5 0 )阳性率分别为 67.44 %和 60 .0 0 % ,显著高于正常支气管粘膜上皮及不典型增生中的阳性率 12 .5 0 %及 11.11% (P均 <0 .0 5 ) ;低分化、中分化肺癌中阳性率分别为 81.2 5 %、77.78% ,较高分化的 2 8.5 7%明显升高 (P均 <0 .0 1)。TNM分期 期病例中 NF-к B(p5 0 )表达阳性率 93 .75 %高于 + 期病例的 5 1.85 % (P<0 .0 1) ,NF-к B(p5 0 )表达与 Bcl-xl蛋白表达呈正相关 (P<0 .0 1)。

细胞核因子κB与细胞周期蛋白D1在宫颈癌中的表达及相关性研究

目的:探讨细胞核因子κB(NFκB)p65与细胞周期蛋白D1(cyclinD1)在宫颈癌中的表达及其与肿瘤增殖的关系。方法:免疫组织化学方法检测NFκBp65,cyclinD1在32例宫颈组织及30例正常宫颈组织中的表达。结果:宫颈肿瘤中NFκBp65蛋白阳性表达率为68.75%(22/32),cyclinD178.5%;正常宫颈组织中NFκB无表达,cyclinD1表达率20.5%。结论:NFκBp65可能通过上调cyclinD1表达参与宫颈癌的发生与发展。

核转录因子κBp65蛋白及其抑制蛋白IκBα表达与食管鳞癌浸润转移的关系

目的:探讨核转录因子κB(NF-κB)p65蛋白及其抑制蛋白IκBα表达与食管鳞癌浸润转移的关系。方法:用免疫组化SP法检测了61例食管鳞癌中NF-κBp65、IκBα蛋白的表达。结果:p65、IκBα蛋白的胞浆表达与食管鳞癌的组织学分级、浸润深度和淋巴结转移无关,但p65蛋白的胞核表达与食管鳞癌的组织学分级、浸润深度和淋巴结转移均呈正相关(P值均<0.01),IκBα蛋白的胞核表达与食管鳞癌的淋巴结转移有关(P<0.05)。在食管鳞癌中IκBα蛋白的胞浆和胞核阳性率均高于p65蛋白,但差异均无统计学意义,也无相关关系。结论:NF-κBp65蛋白的胞核表达与食管鳞癌的分级、浸润和淋巴结转移有关,IκBα蛋白的胞核表达与食管鳞癌的淋巴结转移有关。

NF-κB/P65,p-IκBα,IκKα在皮肤SCC和BCC中的表达和意义

目的:探讨NF-κB信号转导通路中真核细胞转录因子κ(BNF-κB/P65)、磷酸化NF-κB抑制蛋白(p-IκBα)以及真核细胞转录因子抑制蛋白激酶(IκKα)在皮肤SCC和BCC中的表达和三者之间关系,为临床治疗提供新思路。方法:采用免疫组化SP法检测53例皮肤癌组织(其中SCC27例,BCC26例)和20例正常皮肤组织中NF-κB/P65,p-IκBα和IκKα蛋白的表达。结果:与正常皮肤组织相比,NF-κB/P65,p-IκBα和IκKα三者在SCC,BCC中均高表达(P<0.05);三者在SCC和BCC中的表达具有统计学意义(P<0.05);IκK蛋白的表达与SCC的分化程度无明显相关性(P>0.05)。在BCC和SCC中,IκKα的表达与p-IκBα的表达呈正相关关系(r=0.536,P<0.05),NF-κB/P65和p-IκBα的表达呈正相关关系(r=0.435,P<0.05)。结论:NF-κB信号传导通路可能在BCC和SCC的发生中起重要作用。

大鼠硅肺纤维化中NF-κB和MMP-9的表达

目的 研究核转录因子 κB(NF κB)和基质金属蛋白酶 9(MMP 9)的表达在硅肺纤维化发生发展中的作用。方法 应用免疫组化S P法观察NF κB和MMP 9在大鼠硅肺组织中的表达。结果 对照组支气管上皮细胞、肺巨噬细胞和肺间质细胞均可表达NF κB和MMP 9,肺泡上皮细胞和血管内皮细胞未见表达。实验组的支气管上皮细胞、肺巨噬细胞、间质细胞和肺泡上皮细胞NF κB、MMP 9表达均明显增加。在实验的每一个时间点 ,肺巨噬细胞、肺间质细胞中NF κB和MMP 9的半定量表达基本同步 ,呈明显正相关。支气管上皮细胞NF κB在 1～ 2 8d均呈持续高水平表达 ,但MMP 9在 14d后开始减少 ;肺泡上皮细胞NF κB在 114d呈较高水平表达 ,以后下降 ,而MMP 9仅于第 3～ 7天时有阳性表达。结论 矽尘作用下肺内多种细胞NF κB和MMP 9表达增加 ,并可能通过NF κB介导调控MMP 9表达而影响硅肺的发生发展。

国产红葡萄酒对食饵性AS血管壁NF-κB活化及MCP-1表达的影响

目的探讨国产红葡萄酒(RW)在细胞、分子、基因调控水平的抗动脉粥样硬化(AS)作用 ,从而为RW防治AS提供实验佐证。方法采用病理技术、电泳迁移率改变分析法(EMSA)和原位杂交术检测食饵性AS血管壁的病理变化、NF -κB活化及MCP -1mRNA表达情况及RW对其干预的影响。结果与食饵性AS组各相应的时相点相比国产红葡萄酒可显著抑制不同阶段AS血管组织的增生、组织细胞NF -κB活化、显著下调其MCP -1mRNA的表达 ,并具有时间依赖性 ,RW干预12周时作用最强。结论提示国产RW可能是通过抑制NF-κB活性 ,减少MCP -1mRNA表达 ,从而阻抑了AS组织的损伤 ,延缓病变的发展。

小鼠HSV-2阴道炎粘膜上皮细胞凋亡和NF-κB异常表达的关系

目的探讨HSV 2在体内诱导细胞凋亡的效果、形态学特点、NF κB蛋白的表达和TNF的促进凋亡作用。方法用HSV 2 333株感染小鼠阴道 ,光镜下进行原位观察 ,TUNEL末端标记染色显示凋亡的细胞 ,免疫组化技术检查NF κB蛋白的表达。结果感染后的第 1天粘膜上皮内即出现大量的凋亡细胞 ,第 3- 6天凋亡细胞的数量及上皮内的分布范围达最高水平。凋亡细胞被TUNEL标记染成棕褐色 ,经免疫组化技术证实凋亡细胞有NF -κB蛋白的表达。结论HSV 2 333株阴道感染可同时诱导细胞坏死及凋亡 ,NF κB蛋白的表达参与了细胞凋亡的发生 ,TNF可以促进HSV 2在体内诱导的细胞凋亡。细胞凋亡可能在限制病毒产生子代及限制感染区域扩展中起重要作用。

小胶质细胞NF-κB与AQP4协同表达的研究

目的观察原代培养的小胶质细胞划痕损伤后NF-κB与水通道蛋白质4(AQP4)表达的相关性。方法原代培养小胶质细胞,用免疫细胞化学鉴定其特异性表面标记物巨噬细胞分化抗原-1(Mac-1)抗体。采用划痕致伤构建细胞损伤模型。于伤后12 h及1、3、57、d用RT-PCR检测NF-κB mRNA的表达,Western blot检测AQP4蛋白的表达。结果伤后12 h,NF-κB、AQP4表达不显著,1 d时表达达高峰,后逐渐降低,5、7 d时几乎无表达。结论致伤后,NF-κB与AQP4的表达具有协同性,炎症反应在创伤后脑水肿的发生、发展中发挥了重要作用。

糖尿病肾病小鼠肾组织基质金属蛋白酶9的表达及其细胞内信号传导机制的探讨

目的 观察Kkay小鼠糖尿病肾病(DN)时肾脏基质金属蛋白酶9(MMP-9) 的表达,并探讨其细胞内信号传导机制。 方法 Kkay糖尿病小鼠(KA)组和非糖尿病小鼠(KB)组各8 只,以PAS染色、免疫组化和逆转录聚合酶链反应(RT PCR)观察肾脏病变、MMP-9 表达水平。经糖基化终末产物(AGEs)作用于脐静脉内皮细胞(HUVECs)后,分别以RT PCR 和流式细胞技术检测MMP-9表达;以凝胶阻滞电泳(EMSA)检测核转录因子κB(NF-κB)激活情况。 结果 KA组出现明显DN病变,其肾小球硬化指数(GI)明显高于KB组(P<0.05);KA组肾小球MMP 9阳性着色面积(11 14%)高于KB组(5 68%)(P<0.01),MMP-9 mRNA表达水平有类似变化。AGEs使HU-VECs MMP-9表达增强,并伴有NF-κB激活。抑制NF-κB活性可降低MMP-9表达。 结论 Kkay小鼠DN伴有MMP-9表达增高,推测MMP-9在DN发生发展中起一定作用;AGEs可能是通过激活NF κB使内皮MMP-9表达增强的。

GLP-1对NAFLD大鼠肝功能及TLR4/NF-κB信号通路的影响

目的研究胰高血糖素样肽-1(GLP-1)对非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)大鼠肝功能及TLR4/NF-κB信号通路的影响。方法将45只大鼠随机分成两组,正常饲料喂养15只,高脂饮食喂养30只使其形成NAFLD模型。在第10周,把高脂饲料喂养的28只老鼠随机分成两组,模型对照组(14只)和GLP-1干预组(14只);正常饲料喂养的15只为正常对照组。之后对模型对照组和正常对照组大鼠进行注射生理盐水处理,GLP-1干预组大鼠注射利拉鲁肽处理;期间查看大鼠的活动、体质量、食欲、大小便等情况的变化。结果与正常对照组相比,模型对照组的大鼠其肝指数、肝质量、ALT、AST、TG、TC均明显升高(P<0.05),与模型对照组对比,GLP-1干预组大鼠的肝指数、肝质量、ALT、AST、TG、TC均明显下降(P<0.05);与正常对照组比较,模型对照组的TLR4和NF-κB蛋白表达上升(P<0.05),GLP-1干预组和模型对照组比较,TLR4和NF-κB蛋白的表达降低(P<0.05)。结论 GLP-1可明显扭转NAFLD大鼠的糖脂代谢絮乱和肝功能受损的情况,GLP-1可明显降低大鼠肝组织中TLR4和NF-κB的蛋白表达。

急性脑损伤大鼠脑组织核转录因子-κB活性及肿瘤坏死因子-α表达的变化

本研究旨在观察大鼠急性脑损伤后脑组织核转录因子-κB(NF-κB)活性及肿瘤坏死因子-α(TNF-α)蛋白表达的变化,探讨NF-κB活化在脑损伤后继发性脑水肿中的作用;并给应用NF-κB特异性抑制剂吡咯烷二硫基甲酸酯(PDTC)治疗提供佐证.

大鼠心肌缺血缺氧损伤核转录因子-κB与细胞间粘附分子-1的表达

目的 研究异丙肾上腺素致大鼠心肌损伤对心肌核转录因子 κB(NF κB)以及细胞间粘附分子 1(ICAM 1)表达的影响。方法 大鼠皮下注射异丙肾上腺素造成心肌坏死模型,测定血清乳酸脱氢酶(LDH)、肌酸磷酸激酶(CK)活力和丙二醛(MDA)含量,观察心肌坏死程度,免疫组化检测心肌NF κBp65蛋白的表达,Western蛋白质印迹杂交检测IκBα的蛋白质表达,半定量RT PCR检测ICAM 1mRNA含量。观察腹腔注射地塞米松后上述指标的变化。结果 大鼠给予异丙肾上腺素后,血清LDH、CK和MDA含量升高,心肌坏死,NF κBp65蛋白大量表达,IκBα蛋白质表达减弱,ICAM 1mRNA表达上升。地塞米松使升高的LDH、CK和MDA明显下降,减轻心肌坏死程度,显著抑制NF κBp65蛋白和ICAM 1mRNA表达,IκBα蛋白质表达增强。结论 儿茶酚胺大量释放引起的心肌缺血缺氧损伤中,NF κB和ICAM 1mRNA表达增加,表明抑制NF κB激活,减少ICAM 1mRNA的表达及炎性细胞因子产生是减少心肌缺血缺氧损伤的关键点之一。

核因子-κB及其在子宫内膜表达的研究进展

核因子 kappa B(nuclearfactorkappaB ,NF κB)是一类普遍存在的转录因子 ,可与核内基因上启动子区域的固定核苷酸序列结合 ,由此调节多种编码细胞因子、生长因子、细胞粘附分子的基因。本文简要介绍其分子结构及特征 ,并综述人子宫内膜NF κB的表达、NF κB与细胞因子的相互调节和性激素对NF κB的影响等的研究进展。