α亚族趋化因子受体3在人舌鳞癌细胞株的表达及其配体干扰素诱导蛋白-10对CAL-27细胞增殖和凋亡的影响

目的探讨α亚族趋化因子受体3(CXC-chemokine receptor 3,CXCR3)在不同人舌鳞癌细胞株的表达以及其配体干扰素诱导蛋白-10(interferon induced protein 10,IP-10)对人舌鳞癌细胞株CAL-27增殖和凋亡的影响。方法采用蛋白印迹法和免疫荧光染色对3种人舌鳞癌细胞株(CAL-27、UM-1、Tca-8113)IP-10的相应受体CXCR3的表达进行检测。CAL-27细胞被分为3个实验组和1个对照组,3个实验组根据IP-10的刺激浓度,分为10 ng/mL组、20 ng/mL组、40 ng/mL组,对照组不予刺激。12 h、24 h、48 h时检测4组细胞的增殖;24 h时用流式细胞仪检测细胞的凋亡。结果 CXCR3在3种人舌鳞癌细胞株均有表达,并且CXCR3在3株细胞的胞膜及胞质内均有染色。和对照组相比,12 h、24 h时,3种浓度的IP-10均能够促进CAL-27细胞增殖(P<0.05);在48 h时,只有40 ng/mL的IP-10能够促进CAL-27细胞增殖(P<0.05),10 ng/mL、20 ng/mL的IP-10对CAL-27细胞的增殖无促进作用(P>0.05)。在24 h时,对照组、10 ng/mL组、20 ng/mL组和40 ng/mL组的细胞凋亡率分别为(0.053 3±0.472 6)%、(3.236 7±0.940 0)%、(4.516 7±1.115 4)%和(3.363 3±0.571 2)%,3种浓度IP-10均能够促进CAL-27细胞的凋亡(P<0.05),但3个实验组之间差异无统计学意义(P>0.05)。结论CXCR3在3种人舌鳞癌细胞株的胞膜及胞质内均有表达;IP-10既能促进CAL-27细胞的增殖,又能促进其凋亡。随着时间的延长,IP-10的促增殖作用减弱,而这种减弱可能是由IP-10的促凋亡作用的逐步发挥所引起的。

沙培林对人舌鳞癌细胞株的抑制作用

沙培林(Sapylin)在临床上治疗口腔鳞癌具有一定效果。本文研究了 Sapylin 对舌鳞癌细胞株(Tca8113)细胞的抑制作用机理。实验证实:Sapylin 能抑制 Tca8113细胞的 DNA 合成;Sapylin 含量为0.015KE/ml～0.00375KE/ml,其抑制率为53.8%～61.3%。含量为1.0KE/ml时,培养8天后的Tca8113细胞集落形成率为0。提示 Sapylin 有抑制舌鳞癌细胞 Tca8113的作用。

应用蛋白质芯片技术筛选人舌鳞癌细胞株差异性炎症因子的初步研究

目的研究应用蛋白质芯片(抗体芯片)技术筛选、分析人舌鳞状细胞癌细胞株中差异性炎症因子的效果,为进一步探讨口腔癌与炎症的关系奠定基础。方法体外培养人舌鳞癌细胞株UM-1、CAL-27、Tca-8113和人正常口腔黏膜上皮细胞,消化后分别提取胞内、胞外蛋白,上芯片孵育,封闭,清洗。采用激光扫描仪扫描芯片,Axon GenePix Pro6.0软件提取芯片数据,对获得的80种炎症因子表达数据采用AAH-CYT-G5软件分析,上调因子信号值以大于200、比值大于2.0为纳入标准;下调因子信号值以大于200、比值小于0.66为纳入标准,分别对3种人舌鳞癌细胞株(UM-1、CAL-27、Tca-8113)与人正常口腔黏膜上皮细胞,以及高侵袭性细胞株(UM-1、CAL-27)与低侵袭性细胞株(Tca-8113)进行两两比较,筛选出差异性炎症因子。挑选3种显著差异性炎症因子,用酶联免疫吸附法再次检测其蛋白表达,所得结果用单因素方差分析进行统计学分析,进一步验证芯片法所获得的结果。结果根据纳入标准,从检测的80种因子中筛选出有表达的炎症因子9个,包括干扰素诱导蛋白10(inter-feron inducible protein10,IP-10)、巨噬细胞炎症蛋白-1β(macrophage inflammatory protein1β,MIP-1β)、巨噬细胞炎症蛋白-3α(macrophage inflammatory protein-3α,MIP-3α)、骨保护素蛋白(osteoprotegerin,OPG)、调节活化蛋白(regulated upon activation normal T-cell expressed and secreted,RANTES)、白细胞介素1β(interleukin1β,IL-1β)6种舌鳞癌细胞株中高表达的细胞因子,及单核细胞趋化因子4(monocyte chemoattractant protein4,MCP-4)、胰岛素样生长因子结合蛋白4(insulin-like growth factor binding protein-4,IGFBP-4)、转化生长因子-β3(transforminggrowth factor-β3,TGF-β3)3种舌鳞癌细胞株中低表达的细胞因子。鳞状细胞癌细胞和正常口腔鳞状上皮细胞之间比较,胞内IL-1β呈高表达,MCP-4呈低表达,胞外OPG呈高表达;高、低侵袭性细胞株之间比较,胞内RANTES呈高表达,IGFBP-4、TGF-β3呈低表达,胞外IP-10、MIP-1β、MIP-3α呈高表达。酶联免疫吸附法检测发现UM-1和CAL-27胞外IP-10、MIP-1β、MIP-3α的表达量和Tca-8113相比呈高表达,差异有统计学意义(P<0.05)。其结果与芯片筛选结果一致。结论蛋白质芯片技术能够较为准确地筛选出不同舌鳞癌细胞株之间差异性炎症因子,这些差异性炎症因子可能与肿瘤细胞的生物学行为有一定的联系。

紫杉醇对舌鳞癌细胞株Tca8113的抑制作用

目的:探讨紫杉醇对舌鳞癌细胞株Tca8113的抗癌作用。方法:将不同浓度的紫杉醇作用于Tca8113细胞,用四亚基偶氮唑蓝(MTT)快速比色法检测其作用的时间效应及剂量效应。结果:紫杉醇对体外培养的Tca8113细胞有明显的抑制作用,在一定时间和剂量范围内,其抑制作用呈时间、剂量依赖性。结论:紫杉醇对舌鳞癌Tca8113细胞有明显的抑制作用。

VEGF-C在人舌鳞癌细胞株TCa8113的表达及过表达细胞株的建立

目的 研究VEGF -C在人舌癌发生发展中的作用 ,检测VEGF -CmRNA和蛋白在人舌鳞癌细胞株TCa8113中的表达 ,建立高表达VEGF -C的细胞株TCa8113 /VEGF -C。方法 运用RT -PCR和免疫组化法分别检测VEGF -CmRNA和蛋白在人舌癌细胞株中的表达 ,通过脂质体转基因的方法筛选建立过表达VEGF-C的细胞株。结果 TCa8113中检测到VEGF -C的表达 ,筛选建立的细胞株高表达VEGF -C。结论 TCa8113能转录VEGF -CmRNA ,并在胞浆中翻译表达VEGF -C蛋白 ,但是表达较弱 ;

FAK基因沉默对人舌鳞癌细胞CAL-27增殖与迁移能力的影响

目的探讨运用RNA干扰技术沉默FAK基因表达对人舌鳞癌细胞株CAL-27增殖与迁移能力的影响。方法使用si RNA干扰技术瞬时转染构建FAK si RNA。将实验细胞分为空白对照组、阴性对照组和实验组。运用q PCR和Western blotting法检测FAK m RNA和蛋白的表达情况,MTT法检测细胞的增殖情况,Transwell小室法研究细胞的迁移能力。结果 q PCR和Western blotting实验结果显示,实验组细胞FAK m RNA和蛋白表达量明显低于空白对照组和阴性对照组(Pm RNA<0.01,P蛋白<0.05);MTT实验结果显示在48和72 h时,空白对照组和阴性对照组的吸光度值均明显高于实验组(P<0.01);Transwell实验结果显示实验组穿膜迁移细胞数明显低于空白对照组和阴性对照组(P<0.05)。结论沉默FAK基因表达可有效抑制人舌鳞癌CAL-27细胞的增殖和迁移能力。

1400W对缺氧培养人舌鳞癌CAL-27细胞株iNOS和MMP-9表达变化的影响及意义

目的探讨缺氧条件下培养诱导型一氧化氮合酶(iNOS)抑制剂1400W对人舌鳞癌CAL-27细胞株iNOS和基质金属蛋白酶-9(MMP-9)mRNA表达的影响。方法常规培养人舌鳞癌CAL-27细胞株,实验组分别加入50、100、200、400μmol/L的1400W培养液培养;对照组不加1400W培养液,缺氧条件下培养24、48、72、96 h后,采用RT-PCR方法检测iNOS、MMP-9 mRNA表达的变化。结果 1400W作用于人舌鳞癌CAL-27细胞后,可呈时间、剂量性依赖抑制人舌鳞癌iNOS、MMP-9基因表达(P<0.05)。结论 1400W可显著抑制缺氧条件下培养的人舌鳞癌CAL-27细胞株iNOS和MMP-9表达,表明1400W对舌鳞癌新生血管的形成具有预防和潜在的治疗价值。

1400W对缺氧培养人舌鳞癌CAL-27细胞株iNOS的影响

目的探讨缺氧条件培养下诱导型一氧化氮合酶(inducible nitric oxide synthase,iNOS)抑制剂1400 W对人舌鳞癌CAL-27细胞株iNOS的影响。方法常规培养人舌鳞癌细胞系CAL-27后,实验组分别加入iNOS抑制剂1400W 50(50μmol.L-1组)、100(100μmol.L-1组)、200(200μmol.L-1组)、400(400μmol.L-1组)μmol.L-1的培养液缺氧条件下培养;对照组不加iNOS抑制剂1400 W培养液缺氧条件下培养。在缺氧条件下培养24、48、72、96 h后,采用硝酸还原酶法检测细胞培养上清液NO含量。结果 1400 W作用于人舌鳞癌CAL-27细胞后,实验各组细胞培养上清液NO含量与对照组比较明显下降(P<0.05),并且随作用时间和剂量的增加而相应递减。结论选择性iNOS抑制剂1400 W可显著抑制缺氧条件下培养的人舌鳞癌CAL-27细胞株iNOS的表达。

干扰素诱导蛋白10对舌鳞癌细胞增殖、凋亡的影响

目的 :探讨干扰素诱导蛋白10(IP-10)对舌鳞癌细胞CAL-27增殖、凋亡的影响以及与CXCR3A、CXCR3B基因表达的关系。方法:将CAL-27细胞分为3个实验组和1个对照组,3个实验组分别采用10、20、40 ng/mL的IP-10刺激,对照组不予刺激。刺激12、24、48、72 h时,利用CCK-8法检测4组细胞的增殖活性;24 h时,利用流式细胞仪检测细胞凋亡。采用Q-PCR检测10 ng/mL IP-10作用下,CAL-27细胞在12、24、48、72 h时CXCR3A、CXCR3B mRNA的表达情况。采用SPSS16.0软件包对数据进行单因素方差分析。结果:12 h和24 h时,3种浓度的IP-10均能促进CAL-27细胞增殖(P<0.05);在48 h时,只有40 ng/mL的IP-10能够促进CAL-27细胞增殖(P<0.01);而在72 h时,3种浓度的IP-10对CAL-27细胞的增殖均无促进作用(P>0.05)。24 h后,3个实验组与对照组相比,CAL-27细胞的增殖率降低。24 h时,3种实验组细胞凋亡率分别为(3.377±0.575)%、(6.867±2.848)%和(5.317±2.794)%,与对照组相比具有显著差异(P<0.05),但各实验组间无显著差异(P>0.05)。12、24、48、72 h时,CXCR3A mRNA的表达量分别为0.0130±0.0007、0.0274±0.0005、0.0204±0.0011和0.0174±0.0006,组间差异显著(P<0.05);CXCR3B mRNA的表达量分别为0.0124±0.0015、0.0209±0.0016、0.0297±0.0013和0.0386±0.0010,组间差异显著(P<0.05)。结论:IP-10既能促进舌鳞癌细胞CAL-27增殖又能够诱导其凋亡,随着作用时间的推移,细胞增殖率降低;CXCR3A mRNA的表达先升高后降低,而CXCR3B mRNA的表达逐渐升高。CXCR3A、CXCR3B可能参与调控IP-10诱导下的舌鳞癌细胞的增殖和凋亡。

TCDD对人鳞癌细胞的乙氧基异吩恶唑-O-去乙基酶(EROD)诱导作用的观察

2,3,7,8-四氯二苯二氧芑(TCDD)为多氯代芳香烃类的一种高毒性化合物,对混合功能氧化酶系有特异的诱导作用。本文应用两株人舌鳞癌细胞株(SCC-15G,SCC-25)观察了TCDD对其乙氧基异吩噁唑-O-去乙基酶(EROD)的诱导作用。结果表明TCDD对SCC-15G与SCC-25细胞的EROD活性诱导作用明显,但以SCC-15G更为敏感。用10n MTCDD处理两株细胞后于不同时间观察酶活性的反应曲线。

尼妥珠单抗联合顺铂对人舌鳞状细胞癌细胞株CAL-27的抑制作用

目的研究尼妥珠单抗(h-R3)联合顺铂(DDP)对人舌鳞状细胞癌(以下简称舌鳞癌)细胞株CAL-27的生长抑制作用。方法常规培养CAL-27细胞,以5×104/ml的细胞密度种植细胞,实验分为对照组、h-R3组、DDP组及h-R3联合DDP用药组共4组。CCK-8法检测h-R3及h-R3联合DDP组在不同时间对CAL-27细胞的生长抑制情况;分别于24、48及72h对各组进行摄片并收集细胞培养上清,酶联免疫吸附法(ELISA)检测h-R3组及h-R3联合DDP组在不同时间对CAL-27细胞分泌表皮生长因子(EGF)及血管内皮细胞生长因子(VEGF)含量的影响,同时采用细胞凋亡-Hoechst染色试剂盒检测CAL-27加入不同药物后的凋亡情况。结果 h-R3和DDP单药对CAL-27细胞生长均有抑制作用且呈时间和剂量依赖性,两药单独作用72h后,对CAL-27细胞的最大抑制率分别为(26.91±7.08)%和(89.18±4.73)%。两药联用对CAL-27细胞增殖的最大抑制率为(93.26±1.03)%,联合用药可提高细胞增殖抑制率,呈相加作用;h-R3及h-R3联合DDP组不同时间凋亡率与对照组比较差异有统计学意义(P<0.01),随着作用时间增加细胞凋亡率亦呈升高趋势;h-R3及h-R3联合DDP组不同时间CAL-27细胞分泌EGF与VEGF含量与对照组比较均显著降低(P<0.01),而且联合用药与单药比较,EGF和VEGF含量也显著降低(P<0.05)。结论 h-R3在体外与DDP联用可以提高对CAL-27细胞增殖抑制及凋亡作用,同时对CAL-27细胞分泌EGF与VEGF具有抑制作用。

RNAi沉默FAK基因表达对人舌鳞癌细胞CAL-27凋亡和侵袭的影响

目的应用RNA干扰技术将FAK基因表达沉默后,观察人舌鳞癌细胞株CAL-27凋亡和侵袭能力的变化。方法使用RNAi技术构建3对FAK siRNA后,瞬时转染细胞。运用实时定量聚合酶链反应(qPCR)法检测FAK mRNA的表达情况,筛选出沉默效率最佳的siRNA用于后续实验。运用蛋白免疫印迹法(Western blot)法检测细胞FAK蛋白的表达情况,流式细胞仪观察细胞的凋亡情况,Transwell侵袭实验观察细胞体外侵袭能力的变化。结果 qPCR实验结果显示转染siRNA-1组、siRNA-2组、siRNA-3组FAK mRNA表达水平明显低于阴性对照组和空白对照组(P<0.01),其中以siRNA-3沉默效率最高;Western blot结果显示转染组细胞FAK蛋白表达水平明显低于阴性对照组和空白对照组(P<0.05);流式细胞仪检测结果显示转染组细胞凋亡率明显高于阴性对照组和空白对照组(P<0.01);Transwell法实验结果显示转染组细胞穿膜的数量明显低于阴性对照组和空白对照组(P<0.05)。结论沉默FAK基因表达可诱导舌鳞癌细胞CAL-27的凋亡,有效抑制其侵袭能力。