不同浓度苦丁茶对TCA8113人舌鳞癌细胞的体外抗癌效果

对一种市售苦丁茶进行TCA8113人舌鳞癌细胞体外抗癌效果评价。通过MTT(3-(4,5-二甲基噻唑-2)-2,5-二苯基四氮唑溴盐)比色法实验、DAPI(4’,6-二脒基-2-苯基吲哚)荧光染色分析、RT-PCR(逆转录聚合酶链式反应)和Westernblot分析,研究其抗癌效果。通过MTT法测定苦丁茶对癌细胞体外生长抑制效果时发现,200μg/mL浓度的苦丁茶(75%癌细胞生长抑制率)对TCA8113人舌鳞癌细胞生长有相对最强的抑制效果。DAPI染色分析显示,与100、50μg/mL苦丁茶相比,使用200μg/mL浓度的苦丁茶,对TCA8113细胞有较强的诱其凋亡的能力。在RT-PCR和Westernblot分析结果中,凋亡因子Bax(B细胞淋巴瘤/白血病基因伴随蛋白x)、caspase-3(半胱天冬氨酸酶-3)、caspase-9(半胱天冬氨酸酶-9)的mRNA和蛋白质表达得到增强,Bcl-2(B细胞淋巴瘤/白血病基因-2)表达减弱。综合分析得出,一定浓度的苦丁茶具有良好的防癌抗癌效果。

X线对舌鳞癌细胞系Tca8113端粒长度影响的动态观察

【目的】探讨放射线对人舌鳞癌细胞系Tca8113端粒长度变化的影响。【方法】采用流式原位杂交法(FLOW-FISH)检测Tca8113细胞的端粒相对长度(RTL)。【结果】与未照射细胞相比,经X线处理后,Tca8113细胞RTL值明显下降(P<0.05);在照射后1h至3h间,不同照射剂量的细胞RTL值均有一定程度上升;5h时,除2Gy组外,其它各照射剂量组的RTL值均下降。【结论】经X线照射后,Tca8113细胞端粒明显缩短。端粒缩短可能是放射损伤的机制之一。

c-myc转染对舌鳞癌细胞系Tca8113fas表达和凋亡的影响

背景与目的:恶性肿瘤的发生不仅与细胞的异常增殖有关,还与细胞的凋亡异常有关。本实验目的在于研究原癌基因c-myc(cellularavianmyelocytomavirus)介导舌鳞癌细胞凋亡的可能性和分子机制。方法:脂质体法将含c-myc的重组质粒转染到舌鳞癌细胞Tca8113,G418筛选阳性克隆,RT-PCR检测转染前后fas(fattyacidsynthase)表达水平,TUNEL法检测细胞凋亡水平。结果:转染后fasmRNA表达上调。正常培养条件下,转染前后细胞凋亡指数无明显改变,低浓度血清条件下细胞凋亡指数增加。结论:低营养状态下c-myc可以介导舌鳞癌细胞凋亡,凋亡机制可能与上调fasmRNA表达有关。

舌鳞癌细胞系Tca8113 Fas表达水平与凋亡的关系

目的研究舌鳞癌Tca8113细胞Fas表达水平与细胞凋亡的关系,了解细胞凋亡的相关机制。方法采用脂质体法将含Fas基因片段的真核表达重组质粒pBK-Fas导入舌鳞癌Tca8113细胞,检测转染前后FasmRNA表达水平、Fas蛋白阳性表达率和阳性表达强度。以及细胞凋亡指数,分析细胞凋亡的相关因素。结果Fas转染不提高舌鳞癌Tca8113细胞Fas蛋白阳性表达率(P>0.05),但能提高FasmRNA表达水平、Fas蛋白表达强度,以及细胞凋亡指数。各项指标分别由转染前的0.201±0.015,31.02±4.63,0.88%±0.16%上升到0.399±0.073,54.32±6.38和10.21%±1.46%,统计分析均有显著性差异(P<0.01)。结论Fas介导Tca8113凋亡与Fas蛋白阳性率可能无关,而与Fas蛋白阳性强度有关。Fas蛋白激活细胞凋亡可能存在阈值。只有Fas表达达到一定强度,细胞凋亡才被激活。

紫杉醇对舌鳞癌细胞株Tca8113的抑制作用

目的:探讨紫杉醇对舌鳞癌细胞株Tca8113的抗癌作用。方法:将不同浓度的紫杉醇作用于Tca8113细胞,用四亚基偶氮唑蓝(MTT)快速比色法检测其作用的时间效应及剂量效应。结果:紫杉醇对体外培养的Tca8113细胞有明显的抑制作用,在一定时间和剂量范围内,其抑制作用呈时间、剂量依赖性。结论:紫杉醇对舌鳞癌Tca8113细胞有明显的抑制作用。

白花丹醌对人舌鳞癌Tca-8113细胞增殖及端粒酶的影响

目的探讨白花丹醌(plumbagin)对人舌鳞癌Tca-8113细胞增殖及端粒酶活性的影响。方法 Annexin V/PI双染色后采用流式细胞术检测细胞凋亡率;以Tca-8113细胞株作为靶细胞,采用原位TRAP法检测端粒酶活性的变化。结果8μmol/L白花丹醌作用人舌鳞癌Tca-8113细胞24 h和48 h后,凋亡细胞显著增加,具有明显的时间依赖性;白花丹醌对人舌鳞癌细胞Tca-8113作用72 h后,端粒酶活性明显降低,且随药物浓度增大,抑制端粒酶活性的作用增强,呈剂量依赖性。结论进一步证实了白花丹醌对人舌鳞癌Tca-8113细胞的增殖具有明显抑制作用,它通过抑制端粒酶活性,诱导细胞凋亡,可能是其发挥抗癌作用的机制之一。

大蒜素对人舌鳞状细胞癌Tca8113细胞凋亡及细胞周期的影响

[目的]研究大蒜素对人舌鳞状细胞癌Tca8113细胞凋亡以及细胞周期的影响并初探其机制。[方法]取对数生长期Tca8113细胞设空白对照组、大蒜素(50、25、12.5μg/m L)组和顺铂(40μg/m L)组,给药48 h后流式细胞术分析细胞周期的改变并检测细胞凋亡状况,逆转录聚合酶链式反应法(RT-PCR)检测B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)m RNA、Bcl-2相关X蛋白(Bax)m RNA表达,蛋白免疫印迹法检测细胞周期相关调控蛋白周期蛋白(cyclin B1、cyclin D1)和周期蛋白依赖性激酶(CDK1、CDK2)表达。[结果]与空白对照组比较,大蒜素(50、25μg/m L)组细胞周期G2/M期比例显著提高(P<0.05),细胞凋亡率显著升高(P<0.01),Bcl-2 m RNA表达显著下调且Bax m RNA表达显著上调(P<0.05或P<0.01),Bax/Bcl-2值显著提高(P<0.01),cyclin B1蛋白和CDK1蛋白显著上调、cyclin D1蛋白和CDK2蛋白显著下调(P<0.05或P<0.01)。[结论]大蒜素具有促进人舌鳞状细胞癌Tca8113细胞凋亡、阻滞细胞有丝分裂的作用,其机制可能与大蒜素影响凋亡相关调控基因及细胞周期相关调控蛋白表达有关。

雷公藤内酯醇对人口腔鳞状细胞癌细胞株Tca8113作用的实验研究

目的观察雷公藤内酯醇对人口腔鳞状细胞癌细胞株Tca8113的抑制作用,并与传统化疗药物顺铂的作用相比较,评价其作为抗头颈部恶性肿瘤药物的价值。方法噻唑蓝比色法检测雷公藤内酯醇和顺铂对Tca8113增殖的抑制作用,形态学观察经药物作用后细胞的生长情况。结果雷公藤内酯醇对Tca8113的增殖有明显抑制作用,呈量-效、时-效关系;较小浓度的雷公藤内酯醇即可产生较好的抑制效果,作用小于7 d时与顺铂相当,7 d时0.001 mg.L-1抑制率达60%,0.01 mg.L-1抑制率达90%,显著优于顺铂(P<0.05);1、3、5 d作用点时,在大于0.1 mg.L-1时顺铂效果优于雷公藤内酯(P<0.05),7 d时两者差异无统计学意义;各个作用点雷公藤内酯醇的50%抑制浓度均小于顺铂。结论雷公藤内酯醇对人口腔鳞状细胞癌细胞株Tca8113有明显的抑制作用,呈量-效、时-效关系,且在较低浓度和较长时间作用下其抑制率明显高于顺铂。

Zyflamend对人舌鳞癌细胞系Tca83增殖和凋亡的影响

目的观察Zyflamend对人舌鳞癌细胞系Tca83的增殖和凋亡的影响。方法采用MTT方法和AnnexinV-FITC/PI染色法观察Zyflamend对Tca83的增殖和凋亡的影响。结果0.1、0.5、1μl/mlZyflamend对Tca83细胞增殖有明显的抑制作用,随着Zyflamend浓度增大,抑制作用逐渐增强,呈一定浓度依赖关系。24h和48h时,0.1μl/mlZyflamend诱导Tca83细胞凋亡率未见明显增加(P>0.05);0.25μl/mlZyflamend诱导Tca83细胞凋亡率显著增加(P<0.01)。结论Zyflamend对人舌鳞癌细胞系Tca83有抑制增殖的作用,0.1μl/mlZyflamend能够诱导Tca83细胞凋亡。

大蒜素对人舌鳞状细胞癌Tca8113细胞顺铂化疗增敏作用及机制研究

目的研究大蒜素对人舌鳞状细胞癌Tca8113细胞顺铂化疗敏感性的影响并初探其机制。方法体外培养并取对数生长期人舌鳞状细胞癌Tca8113细胞进行实验。研究设4组,空白对照组正常培养,大蒜素组和顺铂组分别加入25μg/m L大蒜素和40μg/m L顺铂进行培养,联合组加入25μg/m L大蒜素和20μg/m L顺铂进行培养,培养48 h后,MTT比色法测定各组细胞增殖抑制率,流式细胞术检测细胞周期和细胞凋亡情况,Western blotting法测定Bax、Bcl-2、激活型Caspase-3蛋白表达水平。结果顺铂组、大蒜素组和联合组人舌鳞状细胞癌Tca8113细胞增殖抑制率、G2/M期细胞比例、细胞凋亡率、激活型Caspase-3蛋白表达水平、Bax蛋白表达水平和Bax/Bcl-2值均显著高于空白对照组(P均<0. 05),且联合组均显著高于顺铂组和大蒜素组(P均<0. 05);顺铂组、大蒜素组和联合组Bcl-2蛋白表达水平均显著低于空白对照组(P均<0. 05),且联合组显著低于顺铂组和大蒜素组(P均<0. 05)。结论大蒜素具有提高人舌鳞状细胞癌Tca8113细胞对顺铂化疗敏感性的作用,可能与大蒜素阻滞细胞有丝分裂以及调节凋亡相关蛋白表达有关。

大蒜素对人舌鳞状细胞癌Tca8113细胞生长的影响

目的:研究大蒜素对人舌鳞状细胞癌Tca8113细胞生长的抑制作用及其机制。方法:取对数生长期Tca8113细胞设空白对照组,顺铂组,大蒜素低、中、高剂量组,给药干预48小时后,观察各组细胞生长状态,MTT法检测细胞生长抑制率,流式细胞术检测细胞周期时相变化和细胞凋亡状况,Western blotting法检测Bax、B细胞淋巴瘤-2基因(Bcl-2)、激活型Caspase-3蛋白表达。结果:与空白对照组比较,大蒜素各组和顺铂组Tca8113细胞呈现胞体破裂,核固缩、深染等病理性改变,以大蒜素50μg/m L组最为显著;大蒜素各组和顺铂组Tca8113细胞增殖抑制率和凋亡率显著提高(P<0.05);大蒜素(25、50μg/m L)组和顺铂组G_2/M期比例显著提高(P<0.05),Bax、激活型Caspase-3蛋白表达显著上调且Bcl-2蛋白显著下调(P<0.05),Bax/Bcl-2值显著提高(P<0.05)。结论:大蒜素对人舌鳞状细胞癌Tca8113细胞生长具有一定的抑制作用,可能与大蒜素阻滞细胞有丝分裂以及调控凋亡相关蛋白表达而促进细胞凋亡有关。

三氧化二砷诱导舌鳞状细胞癌Tca8113细胞凋亡的实验研究

目的观察三氧化二砷对舌癌细胞系Tca8113的诱导凋亡作用。方法以人舌鳞癌细胞系Tca8113为研究对象,使用荧光染色光镜、透射电镜观察三氧化二砷不同浓度、不同时间作用后的肿瘤细胞的形态学变化,流式细胞仪检测细胞凋亡率。结果一定浓度的三氧化二砷作用Tca8113细胞24h、48h后,细胞形态学观察可见有明显的细胞凋亡发生;流式细胞仪检测Tca8113细胞的基础凋亡率为0.5%～1.2%,三氧化二砷作用后肿瘤细胞的凋亡率可提高到15%～20%。结论三氧化二砷可诱导人舌鳞癌细胞系细胞凋亡。

百安对人舌鳞状细胞癌Tca8113细胞系作用的初步研究

目的:研究中药提取物百安(活血化瘀抗肿瘤药)对人舌鳞状细胞癌Tca8113细胞的抑制作用。方法：采用细胞形态观察法、MTT法及活细胞计数法观察百安对Tca8113细胞的作用，同时以常用化疗药物顺铂为对照。结果：1：50稀释的百安对Tca8113细胞的抑制率1d为50％，且随时间增加而增加，百安联合顺铂对Tca8113细胞的协同作用不明显。结论：中药提取物百安对人舌鳞状细胞癌Tca8113有直接杀伤作用，且有时间依赖性，在人舌鳞状细胞癌的治疗方面有一定意义。

HMME-PDT对人舌鳞癌Tca8113细胞的作用及影响因素初步研究

目的:初步探讨血卟啉单甲醚(HMME)介导的光动力疗法(HMME-PDT)对人舌鳞癌Tca8113细胞的作用及可能的影响因素。方法:以HMME作为光敏剂、发光二极管(LED)为光源的光动力疗法作用于Tca8113细胞。采用MTT法分别检测光敏剂孵育时间、光敏剂浓度、光剂量及光功率密度对Tca8113细胞抑制率的影响。HE染色观察细胞形态学改变,Hoechst 33342荧光染色观察细胞核凋亡情况。结果:细胞抑制率随光敏剂孵育时间延长而增大,呈时间依赖效应;并且随光敏剂浓度和光剂量增加而增大,呈浓度-光剂量依赖效应;在相同光剂量下,抑制率随光功率密度增加而增大,在高剂量时更明显。HE染色显示,与对照组相比,PDT处理组细胞密度明显降低,死细胞明显增多;Hoechst 33342荧光染色可见核染色质浓集、核固缩、核碎裂,出现凋亡小体,呈典型凋亡形态改变。结论:HMME-PDT能有效杀伤Tca8113细胞,光敏剂孵育时间、光敏剂浓度、光剂量及光功率密度以均是影响PDT疗效的重要因素,HMME-PDT主要通过凋亡方式诱导细胞死亡。

雷公藤红素联合平阳霉素对舌鳞状细胞癌Tca8113细胞增殖及凋亡的影响

目的:观察雷公藤红素联合平阳霉素对舌鳞状细胞癌Tca8113细胞增殖和凋亡的影响。方法:对Tca8113细胞进行常规培养,应用MTT法测定不同浓度雷公藤红素、平阳霉素、雷公藤红素联合平阳霉素(联合组)对Tca8113细胞的增殖抑制作用,采用流式细胞学对Tca8113凋亡细胞进行定量分析。结果:联合组对Tca8113细胞的增殖抑制率明显高于两药物单用组,各时间点差异具有统计学意义(P<0.05);与空白组比较,各用药组Tca8113细胞的凋亡率明显升高,联合组细胞的凋亡率明显高于两药物单用组,24、48 h比较,差异均具有统计学意义(P<0.05)。结论:雷公藤红素与平阳霉素联合用药可提高Tca8113细胞增殖率和凋亡率,雷公藤红素具有化疗增敏作用。

Neuropilin-1对人舌鳞状细胞癌TCa8113增殖、迁移能力、细胞凋亡及对化疗药物敏感性的影响

目的探究神经菌毛素-1(Neuropilin-1,NRP-1)对舌癌TCa8113细胞增殖、迁移能力、细胞凋亡及对化疗药物敏感性的影响。方法以舌癌TCa8113细胞为研究对象,分别使用shRNA方法构建NRP-1敲低TCa8113细胞株和使用NRP-1单克隆抗体两种方法抑制NRP-1功能,通过对比抑制NRP-1功能后TCa8113细胞株与正常TCa8113细胞株,确定NRP-1对TCa8113细胞的增殖、迁移能力、细胞凋亡及对化疗药物敏感性的影响。结果成功构建NRP-1敲低TCa8113细胞株(NRP-1-knockdown)。NRP-1低表达细胞株和NRP-1单克隆处理抑制NRP-1功能后,细胞的增殖、迁移能力与正常TCa8113细胞株相比均显著降低(P<0.05),而细胞凋亡及对化疗药物的敏感性增加(P<0.05)。结论NRP-1可促进舌癌TCa8113细胞增殖和细胞迁移能力,抑制细胞的凋亡,降低细胞的化疗敏感性。

雷公藤红素联合顺铂对舌鳞状细胞癌Tca8113细胞作用机制的研究

目的探讨雷公藤红素联合顺铂对舌鳞状细胞癌Tca8113细胞作用机制。方法将Tca8113细胞分为对照组(0μmol/L顺铂和0μg/m L雷公藤红素)、顺铂组(15μmol/L顺铂)、雷公藤红素组(50μg/m L雷公藤红素)以及联合组(15μmol/L顺铂和50μg/m L雷公藤红素),MTT法检测细胞活力,酶联免疫吸附法测定血管内皮生长因子(VEGF)、血管内皮生长因子-C(VEGF-C)、抗凋亡蛋白(Bcl-2)、凋亡蛋白(Bax)水平。结果顺铂组、雷公藤红素组以及联合组Tca8113细胞存活率分别为:(0.61±0.12)%、(0.59±0.12)%、(0.27±0.11)%,顺铂组、雷公藤红素组Tca8113细胞存活率低于对照组的(1.00±0.00)%,差异有统计学意义(P<0.05),联合组Tca8113细胞存活率低于对照组、顺铂组与雷公藤红素组,差异有统计学意义(P均<0.05),雷公藤红素组Tca8113细胞存活率低于顺铂组,但差异无统计学意义(P>0.05);顺铂组、雷公藤红素组Tca8113细胞VEGF、VEGF-C、Bcl-2水平低于对照组[VEGF:(39.14±1.78)μmol/L、(41.11±1.45)μmol/L比(61.45±2.73)μmol/L,P<0.05;VEGF-C:(43.11±1.37)μmol/L、(43.13±1.65)μmol/L比(61.33±2.16)μmol/L,P<0.05;Bcl-2:(52.47±0.98)μmol/L、(53.47±1.03)μmol/L比(78.47±1.33)μmol/L,P<0.05],Bax水平高于对照组[(45.14±0.89)μmol/L、(44.14±1.12)μmol/L比(43.14±1.36)μmol/L,P<0.05)];联合组VEGF、VEGFC、Bcl-2水平显著低于对照组、顺铂组与雷公藤红素组[VEGF:(23.1±2.13)μmol/L分别与(61.45±2.73)μmol/L、(39.14±1.78)μmol/L和(41.11±1.45)μmol/L比较,P<0.05;VEGF-C:(21.45±1.47)μmol/L分别与(61.33±2.16)μmol/L、(43.11±1.37)μmol/L和(43.13±1.65)μmol/L比较,P<0.05;Bcl-2:(36.47±1.25)μmol/L分别与(78.47±1.33)μmol/L、(52.47±0.98)μmol/L和(53.47±1.03)μmol/L比较,P<0.05];Bax水平高于对照组、顺铂组与雷公藤红素组(79.14±1.45)μmol/L分别与(43.14±1.36)μmol/L、(45.14±0.89)μmol/L和(44.14±1.12)μmol/L比较,P<0.05];雷公藤红素组VEGF、VEGF-C、Bcl-2、Bax水平与顺铂组相近,差异无统计学意义(P>0.05)。结论雷公藤红素联合顺铂对舌鳞状细胞癌Tca8113细胞作用优于顺铂和雷公藤红素单独作用,作用机制可能与其抑制VEGF、VEGFC、Bcl-2表达,促进Bax表达相关。

TRPM1在舌癌组织及Tca8113细胞中表达的研究

目的观察瞬间受体势M亚基1(Transient Receptor Potential Melastatin-1,TRPM1)在舌癌组织及舌癌Tca8113细胞系中的表达情况。方法选取25例舌癌组织作为实验组,15例正常舌组织作为对照组,应用免疫组化及Western-blot的方法检测TRPM1蛋白在舌癌组织及Tca8113细胞与正常舌组织中的表达;应用RT-PCR方法检测TRPM1 mRNA在舌癌细胞与正常舌组织中的表达。结果免疫组化实验结果显示,23/25例舌癌组织中TRPM1呈强阳性表达,2/25例呈阴性表达;12/15例正常舌体组织中TRPM1呈阴性表达,3/15例呈弱阳性表达。TRPM1在舌癌与正常舌组织中的表达有显著性差异(P<0.05);Western-blot实验显示舌癌组织及舌癌细胞系Tca8113细胞中TRPM1蛋白的表达水平高于其在正常舌组织的表达;RT-PCR实验结果也证实TRPM1 mRNA在Tca8113细胞中的表达高于正常舌组织。结论 TRPM1与舌癌的发生可能存在相关性。

PAMAM-D介导EGFP基因转染人舌鳞癌细胞的实验研究

目的:优化聚酰胺-胺型树枝状高聚物(PAMAM-D)纳米载体介导增强型绿色荧光蛋白(EGFP)基因转染人舌鳞癌Tca8113细胞的条件,以获得最佳的转染效率和细胞内表达。方法:采用不同的质粒DNA浓度、PAMAM-D代数、PAMAM-D∶DNA质量比以及转染时间等参数,在激光共聚焦显微镜下,观察PAMAM-D介导pEGFP-N1体外转染Tca8113细胞,检测转染效率,并应用单因素方差分析等统计学方法进行比较分析;结合细胞生长和荧光蛋白的表达情况,进一步评估和优化转染条件。结果:1.0μg质粒DNA与2.0μlG5PAMAM-D形成复合物,转染细胞2h后,可获得最佳的转染效率(42.1%);G5PAMAM-D转染效率显著高于G2PAMAM-D(42.1%比19.4%,P<0.05);PAMAM-D基因转移系统对细胞的生长增殖无显著影响(P>0.05)。结论:PAMAM-D纳米载体在优化的转染条件下,可安全高效地介导目的基因转染Tca8113细胞,是一种较理想的基因转移系统。

吉西他滨对舌鳞癌细胞增殖和端粒酶活性的影响

目的:了解吉西他滨对舌鳞癌Tca8113细胞增殖及端粒酶活性的影响。方法:采用噻唑蓝(MTT)和碘化丙锭(PI)染色法,检测细胞增殖抑制率和细胞周期变化;采用TRAPPCRELISA法检测细胞端粒酶活性,PAGE-银染法显示端粒酶电泳图像。数据采用SPSS10.0中独立样本t检验法或单因素方差分析法进行统计学检验。结果:吉西他滨能够显著抑制Tca8113细胞增殖,并具有时间和浓度依赖性,5.0μg/ml组72h增殖抑制率均值为72.2%,高于0μg/ml组(F=161.854,P<0.05)。细胞周期检测显示:吉西他滨作用72h后,S期细胞比例下降,5.0μg/ml组均值为18.1%,低于0μg/ml组38.5%(t=5.801,P<0.05)。TRAPPCRELISA法检测细胞端粒酶活性(A值)随吉西他滨作用浓度增加和时间延长而下降:72h,0和5.0μg/ml组A值分别为1.32±0.12、0.28±0.02(F=811.208,P<0.05)。结论:吉西他滨能够有效抑制Tca8113细胞增殖,可以降低细胞端粒酶活性。