人舌鳞癌Tca8113细胞株中c-erbB-2、bcl-2表达

目的探讨口腔癌肿瘤细胞中c-erbB-2、bcl-2基因的表达水平及其在肿瘤形成、发展过程中的作用.方法采用荧光定量RT-PCR实验技术检测人舌鳞癌Tca8113细胞株中c-erbB-2、bcl-2基因mRNA表达水平.结果分光光度计检测纯度A260/A280均在1.8～2.0,通过基因表达扩增曲线图与看家基因GAPDH校正,得出目的基因的相对含量高.结论 bcl-2与c-erbB-2基因的表达水平在人舌鳞癌Tca8113细胞株中显著升高,可能在肿瘤形成、发展过程中起到一定的作用.

基于舌鳞癌Tca8113细胞醛脱氢酶活性不同构建差异表达基因cDNA文库

目的构建舌鳞癌Tca8113细胞系中高、低醛脱氢酶活性(high/low aldehyde dehydrogenase activity,ALDHhigh/ALDHlow)细胞差异表达基因cDNA文库。方法用流式细胞仪检测ALDEFLUOR染色的Tca8113细胞中干细胞标志物ALDH的表达,并收集ALDHhigh和ALDHlow细胞;用Trizol分别提取两亚群细胞的总RNA;用抑制性消减杂交(SSH)对2组RNA进行差异基因筛选和扩增,扩增产物与pMD18-T载体连接并转化大肠杆菌DH5α。文库扩增后,每库随机挑取24克隆进行酶切、测序及同源性分析。结果分选得到ALDHhigh和ALDHlow两亚群细胞,其中ALDHhigh细胞的比例为2.5%;分光光度计测得ALDHhigh和ALDHlow的RNA D(260)/D(280)的比值分别为1.93和1.92;构建了ALDHhigh和ALDHlow细胞差异基因cDNA双向文库,每个库约500个克隆菌落,每库随机挑选24个菌落进行PCR分析,克隆片段均匀分布在200～700 bp,无假阳性克隆。测序结果经同源性比对分析和PubMed检索,其中与肿瘤有关的基因有SLC25A13、KLHL2、NPC1、WAPL、BARD1、Notch2、EEF2K。结论成功构建ALDHhigh和ALDHlow细胞差异基因cDNA文库。

无血清悬浮培养舌鳞癌Tca8113细胞系及肿瘤干细胞样亚群筛选

目的:比较有血清培养基(Serum-supplemented medium,SSM)培养的细胞中和无血清培养基(Serum-free medium,SFM)培养的肿瘤干细胞球体中肿瘤干细胞样亚群的比例,以期获得较好富集肿瘤干细胞的方法。方法:SFM培养细胞,观察形成肿瘤干细胞球过程中的细胞形态;更换培养基为SSM诱导其分化;流式细胞仪检测SSM组细胞和SFM培养的肿瘤干细胞球分化前、后醛脱氢酶(Aldehyde dehydrogenase,ALDH)的表达。结果:Tca8113细胞能在SFM中存活、增殖并形成肿瘤干细胞球;SFM和SSM培养的细胞中ALDHhigh细胞比例分别为0.297 0±0.009 0和0.010 7±0.002 5,差异有统计学意义(P<0.05);诱导分化后细胞与SSM组细胞形态上无明显差异。结论:用SFM培养舌鳞癌Tca8113细胞可形成肿瘤干细胞球,而且这种细胞球富集了肿瘤干细胞。

竹红菌乙素光动力对人舌鳞癌Tca8113细胞杀伤作用的初步研究

目的:本文是用实验的方法,初步探讨中药光敏剂竹红菌乙素(HB)在光动力(PDT)作用下,对体外人舌鳞癌Tca8113细胞的杀伤作用。方法:常规培养、选取对数生长期人舌鳞癌Tca8113细胞,用含有竹红菌乙素(HB)浓度分别为0μM、0.25μM、0.5μ/M、1μM、2μM的RPMI-1640培养液孵育细胞4h后,经470nmLED定制多光源半导体激光光照处理(PDT),能量密度设置分别为0J/CM2、1J/CM2、2J/CM2、3J/CM2、4J/CM2。PDT处理后细胞继续孵育24h后,分别在光学显微镜和荧光显微镜下观察细胞形态学变化,并用甲基噻唑四唑法(MTT法)检测竹红菌乙素(HB)对细胞的抑制作用。并分别在激光照射6h及24h后,用流式细胞仪测定细胞凋亡率。结果:经PDT处理后细胞在光学显微镜及荧光显微镜下均可观察到细胞坏死和凋亡样改变;在一定浓度范围和光照能量密度范围内,竹红菌乙素(HB)在PDT作用下对人舌鳞癌Tca8113细胞生长增殖的抑制和诱导凋亡作用与药物浓度和能量密度成正相关变化。结论:竹红菌乙素(HB)在光动力(PDT)作用下,对人舌鳞癌Tca8113细胞具有显著的杀伤作用,并在一定范围内呈浓度剂量和光剂量正相关依赖性。

以量子点为载体转染Survivin siRNA至人舌鳞癌Tca8113细胞中的实时观察

目的通过量子点(quantum dot,QD)为载体将靶向Survivin基因的siRNA转染至人舌鳞癌Tca8113细胞中,并通过激光共聚焦显微镜实时观察转染过程,以期在肿瘤治疗的同时对其进行实时影像学观察。方法表面带正电荷的水溶性量子点,通过正负电荷的吸引力与表面带负电荷的Survivin siRNA以1∶2比例结合成QDsiRNA复合物。QD-siRNA复合物通过内吞作用进入人舌鳞癌Tca8113细胞,用激光共聚焦显微镜对QD-siRNA复合物转染至细胞中的过程和分布情况进行实时动态观察。结果激光共聚焦显微镜观察显示QD成功将Survivin siRNA转染至人舌鳞癌Tca8113细胞中,QD-siRNA复合物加入培养皿15 min后开始吸附至细胞膜上,并慢慢穿透胞膜到达胞浆,直至6 h可见QD-siRNA复合物充分进入细胞,QD主要分布在细胞质中,而siRNA在细胞质和细胞核中均有分布。来自QD的红色荧光强度大于来自siRNAFAM的绿色荧光。结论激光共聚焦显微镜观察QD成功将Survivin siRNA转染至人舌鳞癌Tca8113细胞中,QD相对于羧基荧光素更适于进行细胞动态观察。

野黄芩苷对人舌鳞癌Tca8113细胞Fas和FasL表达的影响

目的:观察野黄芩苷对人舌鳞癌Tca8113细胞Fas和Fas L表达的影响。方法:体外培养人舌鳞癌Tca8113细胞分为对照组、不同浓度野黄芩苷药物组,野黄芩苷组分别用80μg/ml、120μg/ml、160μg/ml的野黄芩苷作用人舌鳞癌Tca8113细胞48h。采用免疫细胞化学法观察野黄芩苷对人舌鳞癌Tca8113细胞Fas和FasL表达的影响。结果:用药组Tca8113细胞Fas和FasL的表达水平明显高于对照组(P<0.05);并且随着野黄芩苷药物浓度的增加,Fas和FasL的表达水平逐渐升高(P<0.05)。结论:野黄芩苷可能通过促进人舌鳞癌Tca8113细胞Fas蛋白和FasL蛋白的表达促进肿瘤细胞凋亡。

姜黄素对人舌鳞癌Tca8113细胞株增殖抑制机制的研究

目的探讨姜黄素（curcumin）对人舌癌Tca8113细胞株体外增殖及凋亡的调控作用。方法选用人舌鳞癌Tca8113细胞系进行体外培养，以5—40μmol／L的姜黄素分别处理Tca8113细胞24～72h后，倒置显微镜观察细胞形态，MTT法检测细胞增殖，SABC免疫组化海检测细胞内核增殖抗原ki-67、癌基因蛋白P-21、细胞凋亡相关基因蛋白Bax表达水平。结果eurcumin对Tca8113细胞增殖有抑制作用，并随药物浓度升高和时间延长而增强，倒置显微镜观察可见细胞发生凋亡形态学改变的程度和浓度与时间呈正相关，免疫组织化学检测到核增殖抗原ki-67、P-21表达均下调，Bax表达增强。结论姜黄素对Tca8113细胞的增殖具有明显抑制作用，并与浓度、时间有量效关系。通过上调凋亡基因蛋白Bax，下调ki-67、P-21蛋白的表达，诱导细胞凋亡可能是其作用机制之一。

多西紫杉醇对人舌鳞癌Tca8113细胞的生长抑制作用

目的研究多西紫杉醇对人舌鳞癌Tca8113细胞增殖及凋亡的作用。方法将0.1μmol/L的多西紫杉醇分别作用于Tca8113细胞12、24、48h,分别用倒置显微镜观察细胞形态、流式细胞术检测细胞凋亡状况;将浓度为0.001、0.01、0.1、1、10μmol/L的多西紫杉醇分别作用于Tca8113细胞12、24、48h后,用MTT法检测细胞增殖状况。结果多西紫杉醇对Tca8113细胞的增殖有明显的抑制作用,且浓度在0.001、0.01、0.1、1、10μmol/L时呈时间和浓度依赖性;镜下可见典型的凋亡细胞形态学特征。流式细胞术检测:多西紫杉醇浓度为0.1μmol/L时,作用12、24、48h,凋亡率增加,细胞阻滞于G2/M期。结论多西紫杉醇对Tca8113细胞有增殖抑制和诱导凋亡作用,这可能与抗癌机制有关。

量子点为载体转染survivin siRNA至人舌鳞癌Tca8113细胞的研究

目的靶向survivin基因的siRNA通过量子点为载体转染至人舌鳞癌Tca8113细胞中,研究其对survivin基因表达的影响,为量子点在肿瘤的基因治疗方面提供实验依据。方法 Survivin siRNA通过量子点转染至人舌鳞癌Tca8113细胞中,同时设立LIPOFECTTAMINE2000脂质体为转染载体的对照组以及未转染的空白组,采用实时定量RT-PCR检测各组Tca8113细胞中survivin mRNA表达的改变情况。结果实验组用50pmolQD转染100pmol survivin siRNA入Tca8113细胞48h后,检测到survivin siRNA mRNA表达量相对于空白组下降64%,QD与siRNA的使用比例为1∶2;对照组中用100pmol lipofectamine2000脂质体转染100pmol survivin siRNA入Tca8113细胞48h后,检测到survivin siRNA mRNA表达量相对于空白组下降90%,QD与siRNA的使用比例为1∶1。结论量子点为载体转染survivin siRNA能够有效的抑制Tca8113细胞survivin mRNA的表达,量子点有望作为RNA干扰技术的新型载体。

细胞外基质对舌鳞癌Tca8113细胞黏附性及迁移性的影响

目的 :观察细胞外基质成分在体外对舌鳞癌Tca8113细胞黏附和迁移的影响。方法 :运用细胞黏附实验和细胞迁移实验进行观察。结果 :显示随着纤连蛋白、层连蛋白、IV型胶原浓度升高 ,Tca8113细胞在相应的基质上黏附及迁移能力有所升高 ,低浓度时增强幅度更大 ,I、III型胶原在低浓度 ( <5mg/L)时表现为轻微促进黏附作用 ,高浓度时 ( >5mg/L)抑制黏附和迁移且随着浓度加大抑制作用更明显。结论 :纤连蛋白、层连蛋白、IV型胶原可通过诱导肿瘤细胞黏附和迁移 ,从而促进肿瘤细胞浸润和转移 ;而I、III型胶原则相反 ,可抑制肿瘤细胞的浸润和转移。

野黄芩苷对人舌鳞癌Tca8113细胞凋亡及caspase-8表达的影响

目的探讨野黄芩苷诱导人舌鳞癌Tca8113细胞凋亡的可能机制。方法将体外培养的人舌鳞癌Tca8113细胞分成对照组和不同浓度野黄芩苷组(浓度分别为80、120、160 mg/L),每组设3个复孔。采用Tunel检测细胞凋亡情况;采用免疫细胞化学法和Western blot法检测caspase-8蛋白表达情况。结果 (1)80、120、160mg/L野黄芩苷组Tca8113细胞凋亡率高于对照组[(17.63±0.25)%、(36.23±0.36)%、(51.84±0.58)%vs(4.45±0.27)%,P<0.05]。(2)与对照组相比,80、120、160 mg/L野黄芩苷组caspase-8蛋白的表达增加(0.283±0.040 vs0.474±0.031、0.592±0.077、0.781±0.020,P<0.05)。结论野黄芩苷能明显诱导舌鳞癌细胞Tca8113的凋亡,可能与上调caspase-8蛋白表达有关。

NOD2基因对舌鳞癌Tca8113细胞增殖和凋亡的影响

目的:观察NOD2基因对舌鳞癌Tca8113细胞增殖、凋亡的影响。方法:构建NOD2表达载体(NOD2-pEZ-M29)和NOD2-shRNA表达载体,分别转染舌鳞癌Tca8113细胞48 h后,RT-PCR和Western blot法检测NOD2和HBD-2分子及蛋白表达,MTT法检测细胞增殖,流式细胞仪检测细胞凋亡比例。结果:转染NOD2表达载体的Tca8113细胞NOD2和HBD-2表达较对照组显著增高,细胞增殖速度较对照组慢,凋亡较对照组高;转染NOD2-shRNA载体的Tca8113细胞NOD2和HBD-2表达较对照组显著降低,细胞增殖速度较对照组快,凋亡较对照组低。结论:NOD2可促进舌鳞癌细胞凋亡,抑制其增殖。在舌鳞癌细胞中,NOD2与HBD-2的表达呈正相关。

脂质体介导hES基因转染人舌鳞癌Tca8113细胞及其蛋白表达

目的 建立转人内皮抑素 (hES)基因舌鳞癌Tca8113细胞 ,检测体外培养的转基因细胞基因蛋白表达。方法 为了建立携带hES基因的舌鳞癌Tca8113细胞克隆 ,选用阳离子脂质体Lipofectamin为载体 ,将含hES基因的质粒———pBLAST_hES转染Tca8113细胞 ,以BlasticidinS抗生素筛选阳性克隆。免疫组织化学S_P方法检测体外培养的转基因Tca8113细胞克隆中ES的表达。结果 经BlasticidinS抗生素筛选 ,转染hES基因的Tca8113细胞由于具有bsr抗性基因 ,可以在含有 5 0 μg mlBlasticidinS的培养基中生长和传代 ,从而得到携带hES基因的Tca8113细胞克隆。该细胞在体外培养传代 96h后 ,经免疫组织化学检测 ,hES表达的强阳性 (+++)率为 10 0 %。结论 以脂质体介导hES基因转染Tca8113细胞效率高 ,转基因细胞具有高效表达活性目的基因产物的能力。

Bcl-2与HER-2反义寡核苷酸联合转染对人舌鳞癌Tca8113细胞的干预作用

目的探讨Bcl-2与HER-2基因反义寡核苷酸(ASODN)联合转染对人舌鳞癌Tca8113细胞增殖的干预作用及其分子机制。方法实验分成正常对照组、Bcl-2正义干预组、HER-2正义干预组、Bcl-2反义干预组、HER-2 反义干预组、Bcl-2与HER-2基因反义寡核苷酸联合干预组,共6组。脂质体转染后不同时间分别进行电镜观察、 RT-PCR检测,以观察不同条件处理后各组细胞的凋亡、Bcl-2与HER-2基因表达有无差别。结果 Bcl-2与HER-2 基因反义寡核苷酸联合干预组,转染后出现凋亡小体和各期凋亡细胞;Bcl-2基因表达下降36％,HER-2基因表达下降51％。联合转染作用优于单反义基因转染作用。结论 Bcl-2与HER-2基因反义寡核苷酸联合转染能够促进肿瘤细胞凋亡并下调Bcl-2与HER-2基因的表达。

尼美舒利对舌鳞癌Tca8113细胞前列腺素E_2释放和生存素表达的影响

大量研究已表明，环氧化酶-2（cyclooxygenase 2，COX-2）在大多数正常组织中不表达，而在大多数人类肿瘤中过表达，与多种肿瘤的发生发展密切相关。本实验通过研究选择性COX-2抑制剂尼美舒利（Nimesulide，NIM）与人舌鳞癌Tca8113细胞前列腺素E2（PGE2）和生存素（survivin）表达间的关系，探讨NIM对人舌鳞癌细胞生物学行为影响的可能机制，为Nimesulide临床应用提供必要的理论依据。

尖吻蝮蛇毒抑瘤组分I通过增强子结合蛋白同源蛋白/半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-12途径诱导人舌鳞癌Tca8113细胞凋亡的研究

目的:探讨内质网应激途径在尖吻蝮蛇毒抑瘤组分I(antitumor component-I from Agkistrodon acutus venom,AAVC-I)诱导人舌鳞癌Tca8113细胞凋亡中的作用。方法:本实验选择人舌鳞癌Tca8113细胞作为研究对象,体外条件下传代培养取对数生长期细胞进行实验。根据实验目的设为正常对照组、二硫苏糖醇(DL-dithiothreitol,DTT)阳性对照组和AAVC-I实验浓度组。MTT法检测不同浓度的DTT和AAVC-I处理Tca8113细胞24 h后的增殖抑制作用并筛选合适的DTT阳性对照实验浓度和AAVC-I实验浓度组,采用HE染色、Annexin V-FITC/PI双荧光染色法观察细胞凋亡情况,Western blot检测内质网应激葡萄糖调节蛋白78(glucose-regulated protein 78,GRP78)、增强子结合蛋白同源蛋白(enhance-binding protein-homologous protein,CHOP)、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-12(Caspase-12)、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-9(Caspase-9)、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)的表达水平。结果:随着AAVC-I实验浓度的增加,其对Tca8113细胞的增殖抑制作用增强(P<0.05),并观察到细胞皱缩变小间隙增大,胞核浓缩,细胞破碎,出现凋亡小体,凋亡率增高(P<0.05),蛋白GRP78、CHOP、Caspase-12、Caspase-9、Caspase-3表达水平上调(P<0.05)。结论:在AAVC-I诱导人舌鳞癌Tca8113细胞凋亡中,内质网应激CHOP/Caspase-12途径发挥着正向调节作用。

人舌鳞癌TCA8113细胞在不同温度下nm23-H_1基因的表达及其意义

目的:通过测定肿瘤细胞内nm23-H,基因的表达情况,探讨高温治癌与转移抑制基因nm23-H_1之间的关系,以期阐明高温抑制肿瘤侵袭及转移的机理。方法:将人舌鳞癌细胞株Tca-8113细胞分为37℃对照组和43℃实验组,43℃组又分为10、20、30和40min共4个时间亚组。经相应的温度和时间处理后,通过MTT法、免疫组织化学技术及RT-PCR等方法对细胞进行观察、分析,以研究加热后舌癌细胞的生物学行为及nm23-H_1表达量的改变。结果:加温能抑制Tca-8113细胞的增殖活性,在43℃随着加热时间的延长,细胞中nm23-H_1表达量增加,并且在加热30min时达到最高.而在加热40min时有所下降.此变化不随加热后培养时间的延长而改变。结论:高温治疗可能是通过增加细胞中转移抑制基因nm23-H_1表达量来抑制肿瘤细胞的侵袭、转移能力;43℃加热30min可能是临床治疗的理想位点。

喜树碱抑制舌鳞癌Tca8113细胞增殖和诱导凋亡的作用

目的 研究喜树碱对舌鳞癌Tca8113细胞增殖和凋亡的作用。方法 将不同浓度的喜树碱分别作用于Tca8113细胞24、48、72h。分别用MTF法、光镜和电镜观察,流式细胞术及琼脂糖凝胶电泳法检测细胞增殖和凋亡状况。结果 喜树碱对Tca8113细胞的增殖有明显的抑制作用,且在一定的浓度范围内呈时间和浓度依赖性。最佳浓度范围为0.016～8μg/mL。镜下可见典型的凋亡细胞形态学特征。流式细胞术检测,喜树碱浓度≥1μg/mL,作用48h,可引起细胞凋亡,细胞阻滞于S期。琼脂糖凝胶电泳呈凋亡特征性梯状带。结论 喜树碱对Tca8113细胞有增殖抑制和诱导凋亡作用,其抗肿瘤机制与诱导凋亡有关。

HMME-PDT对人舌鳞癌Tca8113细胞的作用及影响因素初步研究

目的:初步探讨血卟啉单甲醚(HMME)介导的光动力疗法(HMME-PDT)对人舌鳞癌Tca8113细胞的作用及可能的影响因素。方法:以HMME作为光敏剂、发光二极管(LED)为光源的光动力疗法作用于Tca8113细胞。采用MTT法分别检测光敏剂孵育时间、光敏剂浓度、光剂量及光功率密度对Tca8113细胞抑制率的影响。HE染色观察细胞形态学改变,Hoechst 33342荧光染色观察细胞核凋亡情况。结果:细胞抑制率随光敏剂孵育时间延长而增大,呈时间依赖效应;并且随光敏剂浓度和光剂量增加而增大,呈浓度-光剂量依赖效应;在相同光剂量下,抑制率随光功率密度增加而增大,在高剂量时更明显。HE染色显示,与对照组相比,PDT处理组细胞密度明显降低,死细胞明显增多;Hoechst 33342荧光染色可见核染色质浓集、核固缩、核碎裂,出现凋亡小体,呈典型凋亡形态改变。结论:HMME-PDT能有效杀伤Tca8113细胞,光敏剂孵育时间、光敏剂浓度、光剂量及光功率密度以均是影响PDT疗效的重要因素,HMME-PDT主要通过凋亡方式诱导细胞死亡。

hTERT反义基因对舌鳞癌Tca8113细胞端粒酶活性的影响

目的研究hTERT反义基因对舌鳞癌Tca8113细胞株的影响。方法应用RT-PCR法获得反义hTERT基因并转染舌鳞癌细胞,采用TRAP-DNA测序法检测转染前后细胞的端粒酶活性,并对细胞生长速度和倍增时间进行比较。结果转染后细胞的端粒酶活性及生长速度较转染前明显下降。结论hTERT反义基因的表达可显著抑制舌鳞癌细胞的端粒酶活性和生长速度。