艰难梭状杆菌感染的研究现状

艰难梭状芽胞杆菌属于条件致病菌,是医院获得性腹泻的主要病因。艰难梭状杆菌感染的发生率呈上升趋势,患者治疗后复发率高,严重者可致死亡。本文从艰难梭菌感染的发病机制、流行病学、危险因素、治疗方面等的研究现状进行综述。

艰难梭状杆菌重组肠毒素A和B与对应天然肠毒素蛋白的功能活性比较

目的肠毒素A(TcdA)和肠毒素B(TcdB)是艰难芽孢梭状杆菌主要的毒力因子,我们对已经获得的纯化的重组蛋白TcdA和TcdB与对应的天然肠毒素蛋白的活性和功能进行了比较。方法通过光学显微镜观察重组肠毒素和对应的天然肠毒素对肠上皮细胞的细胞病变作用、蛋白印迹实验观察对Rac1蛋白的糖基化作用,以及激光共聚焦显微镜观察肠毒素对肠上皮细胞骨架的破坏作用。结果纯化得到重组蛋白肠毒素TcdA和rTcdB其分子量与天然的TcdA和TcdB蛋白大小接近,生物活性与天然的TcdB蛋白相似,TcdA和极微量TcdB具有使肠上皮细胞病变、Rac1蛋白的糖基、细胞骨架塌陷。结论艰难梭状芽孢杆菌肠毒素A和B重组蛋白具有良好的对应天然肠毒素相似的生物学功能活性。

使用Real-Time PCR粪便中检测艰难梭状芽孢杆菌

目的:探讨Real-Time PCR对粪便检测艰难梭菌的可行性。方法:以组织培养细胞毒素试验为标准,参考艰难梭菌的毒素A/B基因相应的引物和分子信标探针,对标准菌株和粪便提取的DNA实行Real-Time PCR扩增。结果:Real-Time PCR的敏感度为96.9%;特异性为100%;阳性预测值为100%;阴性预测值为98.3%。结论:Real-TimePCR与传统诊断方法相比具有快速、敏感、特异等优点,可以提高艰难梭菌的检测水平。

强效抑酸治疗与艰难梭状芽孢杆菌性腹泻

酸相关性疾病使用抑酸剂治疗较为普遍，抑酸结果是否引起艰难梭状芽孢杆菌性腹泻意见不一，本文采用文献荟萃分析方法，对此问题进行探讨，现将有关资料报告如下。

艰难梭状芽胞杆菌相关感染的治疗进展

艰难梭状芽胞杆菌是医院获得性腹泻的主要病因,其产生两种蛋白质的外毒素导致结肠黏膜损伤和炎症。感染可能是无症状,或轻度腹泻,也可导致严重的伪膜性结肠炎。诊断主要依靠粪便中艰难梭菌毒素的检出。如果严重或持续性腹泻和结肠炎,口服甲硝唑和万古霉素是治疗的首选,但它们的广泛使用可能会导致抗药性院内细菌的增殖。使用其他抗菌药物,毒素吸附剂,免疫治疗,生态治疗以及执行隔离制度也是可行的策略。

PPI引起艰难梭状芽孢杆菌性腹泻的危险因素

目的:评价治疗酸相关性疾病患者的质子泵抑制剂是引起艰难梭状芽孢杆菌性腹泻的另类危险因素。方法:查阅近期文献进行评价和分析。结果:队列研究表明艰难梭状芽孢杆菌性腹泻发生于约6.8%用过抗生素的住院患者,多自变量因素分析表明艰难梭状芽孢菌性腹泻与质子泵抑制剂的应用明显相关。结论:抗生素破坏了正常肠道菌群,公认是引起艰难梭状芽孢杆菌性腹泻的危险因素,而胃酸度降低一直被认为是其危险因素,质子泵抑制剂因为其强力的抑酸作用,可能是致艰难梭状芽孢杆菌性腹泻的独立危险因素。

克林霉素毒副作用与艰难梭状芽孢杆菌的关系

目的探讨克林霉素与艰难梭状芽孢杆菌的关系。方法2008年10月至2009年1月对应用克林霉素患者320例进行观察,了解记录出现腹泻出现,病例数、出现时间、临床症状并进行培养确诊艰难梭状芽孢杆菌感染。结果应用克林霉素患者320例68例腹泻患者艰难梭状芽孢杆菌感染31例,艰难梭状芽孢杆菌率9.68%,占腹泻发生例数45.58%。结论应用克林霉素容易造成艰难梭状芽孢杆菌引起高度重视,在临床应用中应严格掌握克林霉素的抗菌谱、适应证和用法、用量,避免滥用、过量、长时间应用等措施以免引起条件致病菌艰难梭状芽孢杆菌感染。

重组艰难梭状芽孢杆菌毒素TcdB对人体肠上皮细胞层功能的影响

利用Transwell小室体外建立人结肠细胞T84上皮细胞层,分析不同质量浓度重组艰难梭状芽孢杆菌毒素TcdB(1 000、100、10ng/mL)对上皮细胞层跨膜电阻(TER)的影响;通过免疫荧光染色分析TcdB对上皮细胞层结构的影响;运用荧光标记葡聚糖作为指示剂,检测毒素作用后上皮细胞层的旁通路渗透情况;通过细胞毒性分析,检测上皮细胞层功能受损情况下,TcdB的跨膜渗透。结果发现:重组艰难梭状芽孢杆菌毒素TcdB能引起剂量依赖性单层上皮组织跨膜电阻降低和渗透性增加,在24h内质量浓度为1 000、100、10ng/mL的TcdB能导致上皮细胞层分别丧失100%、70%、50%电阻力,同时分别引起30%、20%、10%的葡聚糖渗透;上皮细胞层受损后,大分子毒素通过旁通路的非正常跨膜渗透也增加。共聚焦分析显示上皮细胞层的细胞间紧密连接结构受损。综上所述,艰难梭状芽孢杆菌毒素TcdB介导的体外培养人T84肠上皮细胞层功能损伤主要表现为电生理学功能异常,旁通路渗透性增加,细胞间紧密连接结构破坏。

艰难梭状芽胞杆菌毒素B测定在抗生素应用者中的调查

用Hela细胞培养法调查224例用抗生素治疗及86例未用抗生素者粪中艰难梭状芽胞杆菌毒素B检出率、毒素效价及捡出率与抗生素种类的关系。结果表明多种抗生素组的检出率高于单一抗生素组,但毒素B的存在、效价与腹泻的关系,敏感性和特异性均不高,仅能配合临床资料作辅助诊断。

渝东南地区艰难梭状芽胞杆菌流行现状及高危因素的研究

目的探讨渝东南地区艰难梭状芽胞杆菌(CD)院内感染流行现状及危险因素。方法筛选并收集2012年3月渝东南地区三家医院的5783例住院患者的粪便标本,采用大便常规及CD的A和B毒素ELISA法检测大便标本。分析CD院内感染的流行情况及危险因素。结果渝东南地区CD院内感染发病率为0.40%。其中,黔江中心医院发病率为0.38%;酉阳县人民医院发病率为0.42%;彭水县人民医院发病率为0.40%。三家医院相比,差异无统计学意义(P>0.05)。使用抗生素患者发病率为2.1%,与未使用抗生素患者(发病率0.1%)相比,差异有统计学意义(P<0.05)。使用免疫抑制剂与未使用免疫抑制剂患者相比,差异有显著统计学意义(P<0.01)。重大手术患者与无重大手术患者相比,差异有显著统计学意义(P<0.01)。结论渝东南地区CD院内感染发病率为0.40%。使用抗生素及免疫抑制剂、重大手术患者均为CD院内感染高发人群。

艰难梭状芽胞杆菌感染的危险因素分析

目的探讨艰难梭状芽胞杆菌感染的高危易感因素,为提高艰难梭状芽胞杆菌感染评估能力提供参考依据。方法选取2018年5月至2020年3月于四川大学华西医院住院接受治疗的296例患者为研究对象,其中临床表现为腹泻且粪便中艰难梭状芽胞杆菌阳性的134例住院患者作为感染组;同期明确为无艰难梭状芽胞杆菌感染的住院患者162例作为对照组。收集整理两组一般资料;采用全自动生化分析仪检测两组肌酐、丙氨酸氨基转移酶、白蛋白水平,全自动血液分析仪检测两组白细胞计数;采用单因素和多因素logistic回归分析影响患者艰难梭状芽胞杆菌感染的因素。结果感染组白细胞计数、发热、非酒精性脂肪性肝病、呼吸系统疾病、心血管疾病、胃肠道疾病、恶性肿瘤、重症监护病史、药物治疗情况(包括化疗、喹诺酮类使用、碳青霉烯类使用、胃酸抑制剂使用、头孢菌素)使用比例高于对照组,白蛋白水平低于对照组,差异均有统计学意义(P<0.05);多因素logistic回归分析结果显示,非酒精性脂肪性肝病、使用喹诺酮类药物是影响艰难梭状芽胞杆菌感染的独立危险因素(P<0.05)。结论非酒精性脂肪性肝病、使用喹诺酮类药物是艰难梭状芽胞杆菌感染的易感因素,对于临床预防艰难梭状芽胞杆菌感染可能有较高的参考价值。

机械通气患者艰难梭状芽孢杆菌感染危险因素及预后分析

目的探讨机械通气患者艰难梭状芽孢杆菌感染的危险因素,并分析其预后,为临床预防及治疗提供理论依据。方法自2017年1月至2017年12月,连续性收集无锡市第二人民医院收治的机械通气患者382例,常规进行艰难梭状芽孢杆菌检测,共49例患者发生艰难梭状芽孢杆菌感染,分析不同临床特征患者艰难梭状芽孢杆菌感染率及危险因素,同时使用多因素回归分析探讨艰难梭状芽孢杆菌感染对患者院内死亡的影响。结果使用抗生素≥3种、急性生理功能与慢性健康状况评分系统Ⅱ(acute physiology and chronic health evaluationⅡ,APACHEⅡ)评分≥20分、序贯器官衰竭评估(sequential organ failure assessment,SOFA)评分≥4分、机械通气时间≥14天、多器官功能衰竭、质子泵抑制剂使用时间≥14天、住院天数≥30天及死亡的患者艰难梭状芽孢杆菌感染率均显著升高(P_均<0.05)。多因素Logistic回归分析显示:APACHEⅡ评分≥20分、死亡、多器官功能衰竭、使用抗生素≥3种、机械通气时间≥14天是导致机械通气患者艰难梭状芽孢杆菌感染的危险因素(P_均<0.05)。多因素Logistic回归分析显示艰难梭状芽孢杆菌感染是机械通气患者院内死亡的危险因素(P<0.05)。结论机械通气患者艰难梭状芽孢杆菌感染率较高,可导致患者院内死亡率升高,应常规检测并加强干预。

60例脓毒性休克患者并发艰难梭状芽孢杆菌感染的危险因素分析及其防治措施

目的:分析脓毒性休克患者并发艰难梭状芽孢杆菌感染的危险因素及其预防措施。方法:选取医院2016年8月-2019年8月间收治的脓毒性休克患者60例资料,分析其艰难梭状芽孢杆菌感染的发生与相关因素关系。结果:60例脓毒性休克患者中,并发艰难梭状芽孢杆菌感染发生率为75.00%;经Logistic分析,急性与慢性健康评分(APACHEⅡ)的评分值≥20分、实施机械通气、血乳酸水平≥4 mmol/L、抗菌药物使用时长≥14 d均为影响艰难梭状芽孢杆菌感染发生的危险因素,而实施血液净化对预防艰难梭状芽孢杆菌感染发生具有保护因素(P<0.05)。结论:APACHEⅡ评分值≥20分、实施机械通气、血乳酸水平≥4 mmol/L、抗菌药物使用时长≥14 d均属于脓毒性休克并发艰难梭状芽孢杆菌感染的危险因素;而血管活性药物使用时长≥7 d、实施血液净化为保护因素,临床应密切关注导致其感染的危险因素,以降低其感染的发生率。

艰难梭状芽胞杆菌无症状携带者可能会导致感染暴发

据Medscape．com10月18日报道（原载Clin Infect Dis 2007；45：992—998），一项研究表明，艰难梭状芽胞杆菌无症状携带者经常从皮肤排出病菌并污染周围坏境，从而导致疾病的传播。

胃酸抑制药的使用与社区获得性艰难梭状芽胞杆菌相关疾病的危险性

背景：近来的报道提示，艰难梭状芽胞杆菌相关疾病的发生增多，严重程度加重。我们对社区胃酸抑制药的使用是否与这种疾病的危险性增加有关进行了评估。 目的：在社区人群中确定胃酸抑制药的使用是否会增加艰难梭状芽胞杆菌相关疾病的危险性。 设计、地点及病例：利用英国全科研究数据库（General Pratice Research Database，GPRD）进行2项人群病例对照研究。在第一项研究中，我们检出了1994-2004年记录的所有1672例艰难梭状芽胞杆菌相关疾病患者，他们在每个诊所至少已登记2年。根据就诊时间和就诊诊所为每例患者匹配10例对照者。在第二项研究中，病例为既往没有住过院的社区获得性患者，根据诊所和年龄与既往没住过院的对照者进行配对。 主要观测指标：与胃酸抑制药使用相关的艰难梭状芽胞杆菌相关疾病的发生率及其危险性。 结果：在全科研究数据库中，全科医生诊断的艰难梭状芽胞杆菌相关疾病患者的发生率从1994年的低于1／10万升至2004年的22／10万。艰难梭状芽胞杆菌相关疾病与目前使用质子泵抑制剂的校正比值比（rateratio）为2．9（95％可信区间[confidence interval，CI]，2．4—3．4），与H2受体拮抗剂的比值比为2．0（95％CI，1．6-2．7）。使用非甾体类抗炎药也能使危险上升（比值比，1．3；95％CI，1．2-1．5）。 结论：抑酸治疗（特别是质子泵抑制剂的使用）与社区获得性艰难梭状芽胞杆菌感染的危险增加有关。非甾体类抗炎药的使用也增加这一危险，对于这一意外结果尚需开展进一步研究。

异基因造血干细胞移植过程中患者艰难梭菌感染与肠道微生态失调关系的临床研究

本研究探讨异基因造血干细胞移植(allogeneic hematopoietic stem cell transplantation,allo-HSCT)过程中患者艰难梭菌相关性腹泻(clostridium difficile associated diarrhea,CDAD)与肠道微生态的关系,了解肠道微生态失衡的临床特征,寻找有效防治措施,保护肠道菌群,减少细菌易位及感染的发生。对44例allo-HSCT后腹泻患者采用艰难梭菌毒素A&B检测试剂盒进行毒素检测,采用厌氧培养方法进行艰难梭菌的分离、鉴定。对患者粪便标本进行肠道微生态研究;采用光冈复合式法对目的菌群(双歧杆菌、乳酸杆菌、类杆菌、消化链球菌、产气荚膜梭菌、肠杆菌、肠球菌、酵母菌)进行定性定量分析。结果表明:44例腹泻患者中共检测出12例艰难梭菌阳性,阳性率为27.27%;CDAD的发生与使用抗生素或化疗药物有关;CDAD患者的肠道微生态发生了明显变化,表现为乳酸杆菌、双歧杆菌、类杆菌、肠杆菌等细菌数量明显下降;对CDAD用万古霉素、甲硝唑等药物并配合给予益生菌治疗效果好,但有一定复发率(16.67%)。结论:allo-HSCT并发CDAD与肠道微生态的改变有关,应用敏感抗生素治疗的同时应积极扶植肠道菌群,这样的治疗有利于改善病情和减少复发。

中国部分地区艰难梭菌PCR-核糖体分型及毒素基因多态性研究

目的了解中国部分地区艰难梭菌聚合酶链反应(PCR)-核糖体型别分布及其A、B毒素基因多态性,为建立适宜中国的艰难梭菌分子检测和分子分型技术提供基础数据,同时在基因水平上为艰难梭菌感染导致的复杂临床表现提供依据。方法对中国3个城市(北京、广州、济南)分离的64株艰难梭菌临床株进行PCR-核糖体分型,并对不同型别的26株代表菌株的A、B毒素基因进行扩增测序。结果 64株艰难梭菌中,毒素基因型以A+B+型(45株,70.31%)为主,A-B+型19株(29.69%)。共存在9种PCR-核糖体型别,以017型(21株,32.81%)为主要型别,其次为001型(13株,20.31%)、012型(11株,17.19%)。A-B+菌株中,14株(73.68%)是017型,1株是001型。A、B毒素基因呈现一定的多态性,其中有7种A毒素序列型别(TSTA),6种B毒素序列型别(TSTB),8种A、B毒素序列型别组合(TSTG)。结论我国部分地区的艰难梭菌可能以PCR-核糖体017型为主,A、B毒素基因在菌株间存在多态性,且核糖体型别与毒素基因多态性间存在相对应的关联。应进一步扩大菌株数量和范围,探寻适合我国的分子检测和分子分型方法,从而帮助医院更好地预防和控制艰难梭菌感染。

艰难梭菌的检测及临床分析

目的：了解我院艰难梭菌的感染流行情况,为防控院感爆发提供理论依据.方法：收集2016～2017年期间住院腹泻患者的大便标本,用艰难梭菌鉴别培养基显色培养,通过筛查菌落形态、 镜检,最终依赖质谱鉴定.同时对大便标本使用酶联荧光免疫测定艰难梭菌毒素A/B.收集阳性患者的临床资料,分析艰难梭菌感染相关的危险因素.结果：收集的大便标本经厌氧培养及鉴定,艰难梭菌培养阳性率为16.5％,艰难梭菌毒素检出率为12.3％,差异无统计学意义.单因素分析发现头孢一代、 头孢三代、 抗生素联用是引起艰难梭菌感染的潜在危险因素.多因素分析发现头孢三代的使用是感染艰难梭菌的独立危险因素.结论：我院艰难梭菌存在一定流行情况,同时存在易感因素,应严密监测,积极预防及控制.

实时荧光定量PCR法检测人粪便中艰难梭状芽孢杆菌

目的摸索并明确实时荧光定量PCR技术检测人体肠道粪便中艰难梭状芽孢杆菌的方法。方法用16S rRNA real-time PCR方法检测喘息患儿与正常儿童肠道内梭状芽孢杆菌的数量。结果常规PCR扩增出艰难梭状芽孢杆菌16S rRNA部分基因片段长度为500 bp^750 bp,测序结果正确,符合预期,成功构建了艰难梭状芽孢杆菌实时荧光定量PCR中的标准品,生成的标准曲线r2>0.995;实时荧光定量PCR产物的溶解曲线为单峰,表明实时荧光定量PCR的特异性强。对待测80份样本分批进行荧光定量PCR检测,各组间标准品Ct值的变异系数(CV)为4.96%、3.45%、2.46%、2.43%和2.75%。80份儿童粪便样本中艰难梭状芽孢杆菌含量的对数值为3.70±2.71(copy/g湿便)。结论本研究表明,实时荧光定量PCR方法操作简便、灵敏度高、特异性强、自动化程度高,适用于人体粪便中艰难梭状芽孢杆菌含量的检测。