酪氨酸3-单加氧酶/色氨酸5-单加氧酶激活蛋白ζ及胰岛素样生长因子-1在Luminal B型乳腺癌中的临床价值

目的:检测Luminal B型乳腺癌酪氨酸3-单加氧酶/色氨酸5-单加氧酶激活蛋白ζ(YWHAZ)和胰岛素样生长因子-1(IGF-1)蛋白表达并研究其临床价值。方法:选择2014年1月至2017年12月上海交通大学医学院附属第六人民医院诊治的312例Luminal B型乳腺癌患者为研究对象。采用采用链霉亲合素-生物素复合物法检测乳腺癌患者肿瘤组织及癌旁组织YWHAZ及IGF-1蛋白表达。分析YWHAZ及IGF-1蛋白表达与临床病理因素和预后的关系。Cox回归模型分析Luminal B型乳腺癌预后的影响因素。计数资料比较采用χ^(2)检验。Kaplan-Meier法分析YWHAZ、IGF-1蛋白表达与预后的关系,多因素Cox回归分析乳腺癌预后的影响因素。结果:Luminal B型乳腺癌肿瘤组织中YWHAZ、IGF-1蛋白阳性率显著高于癌旁组织(YWHAZ蛋白表达阳性率为77.56%比19.87%,IGF-1蛋白表达阳性率为62.50%比15.06%),差异有统计学意义(χ^(2)=205.526、147.853,P<0.05)。有淋巴结转移、Ⅲ期、人表皮生长因子受体2(Her-2)阳性乳腺癌患者肿瘤组织YWHAZ蛋白表达阳性率高于无淋巴结转移、Ⅰ~Ⅱ期、Her-2阴性乳腺癌患者(分别为88.28%比68.26%、90.70%比68.31%、86.18%比57.90%);有淋巴结转移、Ⅲ期、细胞核增殖抗原(Ki-67)阳性乳腺癌患者肿瘤组织IGF-1蛋白表达阳性率显著高于无淋巴结转移、Ⅰ~Ⅱ期、Ki-67阴性乳腺癌患者,差异有统计学意义(χ^(2)=17.862、21.800、30.367、18.562、10.088、9.725,P<0.05)。YWHAZ和IGF-1蛋白表达阳性乳腺癌患者预后良好率低于YWHAZ和IGF-1蛋白阴性患者(预后良好率分别为44.21%比60.00%、41.54%比58.12%),差异有统计学意义(χ^(2)=9.986、18.028,P<0.05)。淋巴结转移、TNM分期为Ⅲ期、YWHAZ蛋白表达阳性及IGF-1蛋白表达阳性为Luminal B型乳腺癌患者不良预后的危险因素(P<0.05)。结论:YWHAZ和IGF-1在Luminal B型乳腺癌组织中表达增加,与其不良预后有关,可用于Luminal B型乳腺癌病情及预后评估。

YWHAZ在非小细胞肺癌中的研究进展

YWHAZ隶属14-3-3蛋白家族成员,在真核细胞中普遍表达,主要作为伴侣蛋白经磷酸化伴侣相互作用的方式调控细胞信号转导、细胞周期、细胞迁移等生理功能。在病理情况下,异常表达的YWHAZ可以参与肿瘤的恶性转化。YWHAZ作为原癌基因,在包括非小细胞肺癌在内的肿瘤的发生发展中发挥重要作用。YWHAZ在非小细胞肺癌中异常高表达,YWHAZ的异常高表达与肿瘤细胞增殖抵抗凋亡、侵袭迁移和抗肿瘤药物耐药等恶性生物学行为密切相关,但其潜在的分子机制仍未完全阐明,未来仍需更多研究揭示其中的分子机制,以将YWHAZ作为潜在诊治靶点进行抗肿瘤药物开发。

转iaaM基因高衣分棉花新种质材料创制

通过配制9个杂交组合,将iaaM基因转育到综合性状较优的棉花（Gossypium hirsutum L.）品系中.对F1与F2的分析,证实iaaM基因能够显著改良衣分和马克隆值,同时对子指、铃重、单株结铃数等产量性状和纤维长度、纤维强度等纤维品质未造成负面影响.通过系谱法选育获得6个衣分高、马克隆值优良的新品系,其衣分和马克隆值分别在43.23％～47.93％和3.76～4.20.试验为棉花育种改良提供了新的种质材料.

植物生长素合成酶iaaM基因在烟草韧皮部的特异表达对其发育的影响

为探讨生长素过度合成对植物韧皮部发育的影响,利用韧皮部特异表达的拟南芥蔗糖合成酶基因启动子与色氨酸单加氧酶基因(iaaM)重组,构建载体,通过根癌农杆菌介导的叶盘转化法将其转入烟草,获得了转化的烟草植株。大多转基因烟草都表现出叶片卷曲、植株生长异常的生长素过度表型。转基因烟草植株生长较野生型烟草(对照)植株明显迟缓,但其茎横切面韧皮部细胞显著增多,排列更加紧密整齐,木质部也较早开始分化。转基因烟草茎段有大量不定根分化,其根部则在韧皮部薄壁细胞处诱生大量根原基,在不定根上有大量侧根和根毛的分化。

转iaaM高衣分棉花种质IF1-1杂种优势分析及育种应用

转iaa M(色氨酸单加氧酶基因)高衣分棉花种质已经培育出来,但应用于育种研究较少。我们利用转iaa M高衣分棉花种质IF1-1做父本、16个陆地棉品种(系)做母本,分别配制杂交组合,检测了亲本及其F1和F2群体的iaa M遗传;田间调查了材料的抗病性及农艺性状,室内考查了产量构成因子,同时进行了产量统计分析;通过系统选育结合分子辅助选择对杂交后代进行定向培育,获得了新的高衣分种质,实现了该种质的育种应用。结果表明:(1)FBP7-iaa M是1对显性基因;(2)与高衣分亲本IF1-1相比,F1和F2代衣分不具备超中与超亲优势,但与16个母本品种(系)相比,却能明显提高现有品种(系)的衣分率;(3)F1代产量尤其是皮棉产量具备较明显的超亲优势,皮棉产量优势值为13.4%,这就意味着可以选择生产上产量较高的品种与IF1-1配制杂交组合,选择高优势杂交种直接利用;(4)F1和F2代抗病性明显好于IF1-1,但与母本相比较差,所以,在杂交后代的选择中应注意观察枯萎病和黄萎病的发病情况,选择抗病性好的后代;(5)子棉产量的提高主要是通过铃重和单株铃数的增加来实现,皮棉产量的增加则是通过子棉产量与衣分的共同提高来完成;(6)杂交后代具备选择出高衣分新品系的潜力。本研究实现了将国家科技重大专项获得的第2代转基因棉花种质应用于棉花育种,对提升我国生物育种水平具有重大意义。

导入iaaM与ipt双价基因的转基因大豆检测及表达效果研究

大豆是我国的重要的油料作物和经济作物,但其单产却远远低于欧美国家,因此提高其单产育种对国民的生产实践具有重要的意义。主要通过GUS组织化学染色分析、PCR检测、Southern blot检测技术对转iaa M与ipt双价基因的T1代转基因大豆进行检测,结果表明有5个株系iaa M和ipt基因以单拷贝的形式整合进了大豆基因组。采用半定量RT-PCR检测表明有4个株系外源双价基因高效表达。最后经产量性状考种结果表明:有3个株系的表现较好,其中株系4增产12.85%。

烟草和拟南芥表皮毛中特异表达iaaM后的遗传效应

利用色氨酸单加氧酶基因iaaM与拟南芥表皮毛特异表达GL2基因启动子重组后,构建了在植物表皮毛细胞中特异表达iaaM基因的重组基因载体;采用根癌农杆菌叶盘转化法将重组基因转化到烟草WS38(对照)中,筛选和鉴定出了6株转化烟草植株;将该重组基因以根癌农杆菌花序浸渍法转至拟南芥(Colombia ecotype,对照),筛选出9株拟南芥转化植株,并对稳定转化的转基因植株表皮毛进行观察。结果表明:转基因烟草表皮毛较对照植株显著增长,其长度最长为对照的2.2倍,但转基因拟南芥表皮毛长度与对照间无显著差异。对烟草幼叶进行生长素浓度检测,转iaaM基因烟草吲哚乙酸含量显著提高,说明iaaM在烟草表皮毛细胞中表达,使其合成和积累更多的生长素;转基因拟南芥和烟草表皮毛密度均较对照显著增加,证明植物表皮毛发育模式中GL2表达的特异性受细胞内生长素的影响。

血清YWHAΗ与类风湿关节炎患者部分炎症因子、骨代谢指标及并发骨质疏松的关系

目的探讨血清酪氨酸3-单加氧酶/色氨酸5-单加氧酶激活蛋白eta(YWHAΗ)水平与类风湿关节炎(RA)患者部分炎症因子[白细胞介素-6(IL-6)、C反应蛋白(CRP)]、骨代谢指标[Ⅰ型胶原羧基端肽β特殊序列(β-CTX)、骨碱性磷酸酶(B-ALP)、Ⅰ型前胶原氨基端前肽(PⅠNP)、骨密度]及并发骨质疏松的关系。方法选取2020年7月至2021年6月于该院治疗的120例RA患者作为RA组,根据28个关节疾病活动度(DAS28)评分将RA患者分为低度组(2.6~3.2分,39例)、中度组(3.3~5.1分,46例)和高度组(>5.1分,35例),根据RA患者是否发生骨质疏松将其分为骨质疏松组(49例)和无骨质疏松组(71例)。另选取57例健康志愿者作为对照组。检测纳入研究者血清YWHAΗ、炎症因子(IL-6、CRP)、骨代谢标志物(β-CTX、B-ALP、PⅠNP和骨密度)。比较RA组和对照组、不同疾病活动度RA患者及骨质疏松组和无骨质疏松组的上述指标。比较骨质疏松组和无骨质疏松组的临床资料,选取差异有统计学意义的临床资料及血清YWHAΗ作为因变量,采用Logistic逐步回归分析RA患者发生骨质疏松的危险因素。采用Pearson相关分析血清YWHAΗ与各项检测指标的相关性。采用受试者工作特征(ROC)曲线分析YWHAΗ诊断RA并发骨质疏松的价值。结果RA组血清YWHAΗ、IL-6、CRP、β-CTX水平均高于对照组(P<0.05),B-ALP、PⅠNP水平、骨密度低于对照组(P<0.05)。重度组血清YWHAΗ、IL-6、CRP、β-CTX水平高于中度和低度组(P<0.05),B-ALP、PⅠNP、骨密度低于中度和低度组(P<0.05)。RA患者血清YWHAΗ水平与IL-6、CRP、β-CTX水平呈正相关(r=0.584、0.506、0.265,P<0.05),与B-ALP、PⅠNP、骨密度呈负相关(r=-0.595、-0.473、-0.657,P<0.05)。RA病程长、无钙剂摄入、高YWHAΗ是RA患者发生骨质疏松的危险因素(P<0.05)。YWHAΗ诊断RA并发骨质疏松的曲线下面积为0.806(95%CI:0.719~0.892),灵敏度为77.55%,特异度为83.10%。结论RA患者血清YWHAΗ水平增高,且与血清炎症因子水平增高、骨代谢紊乱及骨质疏松的发生有关。

吡咯伯克霍尔德氏菌JK-SH007吲哚-3-乙酰胺IAA合成功能及其依赖途径鉴定

【目的】探索吡咯伯克霍尔德氏菌JK-SH007(Burkholderia pyrrocinia JK-SH007)合成生长素吲哚-3-乙酸(indole-3-acetic acid, IAA)的能力,并阐明B.pyrrocinia JK-SH007存在色氨酸依赖型的吲哚-3-乙酰胺(indole-3-acetamide, IAM)IAA合成途径。【方法】使用Salkowski比色法和酶联免疫吸附法(ELISA)进行L-色氨酸对B.pyrrocinia JK-SH007合成IAA能力影响的检测;以B.pyrrocinia JK-SH007全基因组为模板,设计特异性引物克隆iaaM和iaaH基因,并使用生物信息学方法对其蛋白质和亲缘关系进行分析;通过实时荧光定量PCR方法分析B.pyrrocinia JK-SH007中的iaaM和iaaH基因在L-色氨酸处理下的差异表达。【结果】B.pyrrocinia JK-SH007菌株能够合成15.663μg·mL-1的IAA,在以L-色氨酸为前体的条件下其合成IAA的量显著增加,达到了44.404μg·mL-1。iaaM和iaaH基因均含有一个完整的开放阅读框,其中iaaM基因全长1 782 bp,编码593个氨基酸,属于Aminooxidase super family家族;iaaH基因全长1 368 bp,编码455个氨基酸,属于Amidase super family家族。在L-色氨酸的处理下,B.pyrrocinia JK-SH007中的iaaM和iaaH基因的表达量均显著增加。【结论】B.pyrrocinia JK-SH007具有合成IAA的能力,L-色氨酸对其合成IAA具有显著促进作用,且克隆得到了iaaM和iaaH基因,其在进化上具有一定的保守性,证明B.pyrrocinia JK-SH007中存在吲哚-3-乙酰胺IAA合成途径。

汉黄芩素调控Ywhaz蛋白抑制结肠癌细胞增殖及侵袭转移

目的:探讨汉黄芩素对人结肠癌细胞HCT116和HT29细胞系的增殖、侵袭能力的影响,并研究汉黄芩素对酪氨酸3/色氨酸5-单加氧酶激活蛋白(Ywhaz)蛋白水平的影响。方法:体外培养HCT116和HT29细胞系,设空白组、汉黄芩素不同浓度组(浓度分别为5,10,20,40μmol·L-1)作用不同时间后,采用细胞计数试剂盒(CCK-8)法检测汉黄芩素对结肠癌细胞增殖的影响,并用Annexin V-FITC/PI双标后流式细胞仪检测结肠癌细胞的凋亡率;穿透小室(Transwell)小室法检测处理24 h后细胞侵袭和迁移力的变化;实时荧光定量-聚合酶链式反应(q PCR)检测不同浓度汉黄芩素作用24 h后Ywhaz mRNA的水平,并运用蛋白质免疫印迹(Western blot)检测该蛋白及其磷酸化水平。结果:与空白组比较,汉黄芩素可明显抑制结肠癌细胞系的增殖,具有浓度和时间依赖性,并促进结肠癌细胞系的凋亡率,其中20和40μmol·L-1的汉黄芩素抑制细胞增殖作用显著(P<0.01),且不同浓度的汉黄芩素(10,20,40μmol·L-1)作用于结肠癌细胞后,明显降低肿瘤细胞的穿膜数(P<0.05,P<0.01),汉黄芩素可下调Ywhaz mRNA水平和蛋白水平的表达,并降低Ywhaz的磷酸化水平(P<0.05,P<0.01)。结论:汉黄芩素可显著抑制HCT116和HT29细胞系的增殖、侵袭和迁移能力,并诱导细胞凋亡,其抗肿瘤机制可能与下调Ywhaz的蛋白水平及其蛋白的磷酸化水平有关。

miRNA-185-5p通过靶向YWHAZ对人非小细胞肺癌细胞A549恶性生物学行为的影响

目的探讨微RNA(miRNA)-185-5p通过调控酪氨酸3/色氨酸5-单加氧酶激活蛋白(YWHAZ)对人非小细胞肺癌(NSCLC)细胞系A549增殖、侵袭凋亡和上皮间质转化的影响。方法获取GSE152702数据集,识别在NSCLC患者和健康者血液中差异性表达的miRNA,收集2018年7月至2019年9月在浙江大学附属第二医院确诊为NSCLC患者的癌组织及癌旁组织,使用RT-qPCR法检测miRNA-185-5p在NSCLC癌组织和细胞系中的表达情况。采用脂质体转染法,分别将miRNA-NC、miRNA-185-5p模拟物、miRNA-185-5p抑制剂和miRNA-185-5p模拟物+pcDNA3.0-YWHAZ转染至人NSCLC细胞A549中,Transwell实验检测各组A549细胞的侵袭能力,CCK-8实验检测各组A549细胞的增殖能力,脱氧核糖核酸末端转移酶介导的缺口末端标记(TUNEL)检测各组A549细胞的凋亡率,Western blot实验检测各组细胞中YWHAZ和上皮间质转化相关蛋白E-cadherin和Vimentin的表达情况。检索StarBase、Targetscan和Human protein Atlas数据库,韦恩图绘制与miRNA-185-5p含潜在互补结合位点及与NSCLC患者预后不良有关的基因。检索GEPIA数据库识别YWHAZ表达与肺鳞癌、肺腺癌患者预后的关系。生物学信息技术预测和双荧光素酶报告基因实验验证miRNA-185-5p和YWHAZ之间的关系。结果GSE152702数据集显示miRNA-185-5p在NSCLC患者中明显下调,miRNA-185-5p在NSCLC癌组织中的表达水平低于癌旁组织(P<0.01)。miRNA-185-5p在NSCLC细胞株中的表达水平低于正常人肺上皮细胞株(P<0.05),与miRNA-NC组比较,miRNA-185-5p模拟物组miRNA-185-5p表达水平明显升高(P<0.05),YWHAZ表达水平明显降低(P<0.01),miRNA-185-5p抑制剂组中miRNA-185-5p表达水平明显降低(P<0.05),YWHAZ表达水平明显升高(P<0.01)。过表达miRNA-185-5p能明显抑制A549细胞增殖、侵袭和上皮间质转化,并促进细胞凋亡(P<0.05)。GEPIA数据库显示,YWHAZ在肺鳞癌和肺腺癌患者中明显上调,且与患者预后不良有关。YWHAZ可与miRNA-185-5p靶向结合,过表达YWHAZ可部分逆转miRNA-185-5p模拟物对A549细胞增殖,侵袭和上皮间质转化的抑制作用,以及对细胞凋亡的促进作用。结论miRNA-185-5p在NSCLC癌组织及细胞中明显下调,过表达miRNA-185-5p能明显抑制A549细胞增殖、侵袭和上皮间质转化的能力,并促进细胞凋亡,其机制可能与调控YWHAZ的表达有关。