RNAi法分析香菇色氨酸合酶基因的功能

色氨酸合酶(tryptophan synthase,TrpB)是生物体内一种重要的功能蛋白,在生物抗逆应激反应过程中发挥着重要的调控作用。本研究以香菇(Lentinula edodes)耐热栽培菌株S606为实验材料,采用双向启动子(Leactin和Legpd)启动LetrpB蛋白β亚基功能结构域的反向互补片段(400 bp),构建了LetrpB基因的RNAi载体,利用农杆菌介导法将该载体转入香菇菌丝中,在潮霉素培养基上筛选转化子,再通过PCR检测片段是否插入,获得了稳定的阳性转化子。实时荧光定量PCR结果显示,与野生型菌株相比,转化子的LetrpB基因表达量显著下调,转化子LeALDH、LeamiE等基因的表达量也显著下调,而LeYuccA的表达量显著上调。40℃高温处理24 h后,野生型S606的菌丝体在25℃条件下可以恢复生长,而RNAi转化子的菌丝体则不能恢复生长。研究结果表明,香菇菌株S606的LetrpB基因参与了热胁迫应激反应。

鼠伤寒沙门氏菌JL65色氨酸合酶trpB基因的克隆、测序和相关特性的研究

用ＰＣＲ方法从鼠伤寒沙门氏菌（Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ ｔｙｐｈｉｍｕｒｉｕｍ）ＪＬ６５染色体ＤＮＡ中扩 增了ｔｒｐＢ基因片段，克隆到ｐＢｌｕｅｓｃｒｉｐｔ Ⅱ ＳＫ（＋）质粒上，并用双脱氧未端终止法测定了其 核苷酸序列．ＪＬ６５ｔｒｐＢ基因和ＷＴ Ｓ．ｔｙｐｈｉｍｕｒｉｕｍ ｔｒｐＢ基因作比较后，发现仅有３处的核苷 酸差异，其中ｔｒｐＢ基因在的１００位由Ｃ突变为Ａ，１１１位由Ｇ突变为Ａ，１０３０位由Ｇ突变为 Ａ，导致３４位氨基酸残基Ａｒｇ变为Ｓｅｒ，３４４位的Ｇｌｙ变为Ａｒｇ，氨基酸性质均发生变化．说明 是 ｔｒｐＢ１００，ｔｒｐＢ１０３０两处核苷酸的突变使ＪＬ６５的β亚基发生改变，并可能导致ＪＬ６５的冷 敏感．根据互补试验及酶活测定结果，初步将ＪＬ６５ｔｒｐＢ归类于“可修复”的错义突变型．

喜树幼苗中喜树碱及其代谢相关酶类的分布

目的分析当年生喜树Camptotheca acuminata幼苗各部位中喜树碱的量及其生物合成途径中色氨酸合酶(TSB)和色氨酸脱羧酶(TDC)的活性。方法用HPLC检测温室内不同氮素形态下砂培喜树幼苗各部位中喜树碱的量及TSB和TDC活性。结果不同氮素形态下喜树幼苗幼叶中喜树碱量明显高于其他器官(P<0.01),其次为茎皮和成叶,根中的最低。TSB活性在不同氮素形态下以幼叶最高,茎皮、成叶和根依次减弱,与喜树碱量呈现良好的器官对应性。不同氮素形态下TDC活性的最高部位为茎皮,其次为幼叶,成叶和根很低,与喜树碱的量缺乏器官对应性。结论当年生喜树幼苗喜树碱量以及TSB和TDC活性存在明显的组织器官特异性,喜树碱的量和TSB活性最高部位为幼叶,茎皮中TDC活性最大。