基于凝胶渗透色谱-激光光散射联用技术的聚天冬氨酸分子量测定方法的建立

目的建立利用凝胶渗透色谱-激光光散射联用技术(gel permeation chromatography-multi-angle light scattering,GPC-MALS)对聚天冬氨酸分子量及分子量分布进行测定的方法。方法以市售聚天冬氨酸产品为样品,研究凝胶色谱柱的类型和样品浓度对检测结果的影响,利用GPC-MALS同时测定聚天冬氨酸的数均分子量、重均分子量和分子量分布等参数。结果采用Shodex Protein KW-803凝胶色谱柱,样品浓度为18.5 mg/m L时,可以得到较好的实验结果,聚天冬氨酸分子量和分子量分布测定的相对标准偏差分别为1.8%和0.7%。结论该方法操作简单,精密度良好,适用于聚天冬氨酸分子量及分子量分布的测定。

甘氨酸对淀粉酶产色链霉菌Cbγ4产ε-聚赖氨酸的影响

为了研究甘氨酸对淀粉酶产色链霉菌Cbγ4产ε-聚赖氨酸的影响,在种子培养阶段添加不同浓度的甘氨酸。结果表明,在种子培养初期添加3 g/L甘氨酸,天冬氨酸激酶活性会明显提高,ε-聚赖氨酸最高可积累0.51g/L,比对照组高27.5%。5L自控式发酵罐发酵ε-聚赖氨酸试验中,种子液中添加甘氨酸组比对照组明显提高了菌体耗糖速度,缩短了达到最高生物量的积累时间,ε-聚赖氨酸产量也提高至12.87g/L,糖酸转化率也比对照组提高了30.6%。因此甘氨酸可作为一种新型营养物质用于ε-聚赖氨酸的生产。

ε-聚赖氨酸高产菌株的诱变选育

ε-聚赖氨酸(ε-PL)是一种L-lysine同聚物,主要由链霉菌科和麦角真菌产生。但是,ε-PL野生菌株的生产能力较低,这一定程度上制约对它的进一步研究和利用。对于包括链霉菌在内的大多数细菌,ε-PL的前体物lysine一般是通过天冬氨酸途径合成的。这条途径中的第一个关键酶Ask活性会受到氨基酸终产物的调节。而且,天冬氨酸还可以反馈抑制上游磷酸烯醇式丙酮酸脱羧酶的活性。为了解除上述反馈调节,提高ε-PL产生菌的产量,我们利用(SG+Gly+L-lysine+AHV)复合抗性,筛选出一种高产菌株L9。最终,我们得到了一株淀粉酶产色链霉菌(Streptomyces diastatochromogenes)L9,其摇瓶产量为0.69g/L,比出发菌株高13%。经代传稳定性研究证明其产酸量和抗性标记均可稳定遗传。

植物色氨酸-天冬氨酸重复序列蛋白响应逆境胁迫的调控作用

干旱、盐渍、低温等逆境胁迫会严重影响植物的正常生长发育，导致植物的许多响应基因被诱导表达，其蛋白质产物能够保护植物免受胁迫的伤害。色氨酸一天冬氨酸重复序列蛋白（wD40蛋自）在植物中广泛存在，参与植物体内众多代谢反应的调控，如花的发育、开花、花青素的生物合成、激素响应、渗透胁迫等。WD40蛋白含有40-60个氨基酸的保守的wD重复序列，其c末端为色氨酸．天冬氨酸（Trp-Asp，WD），形成一个p螺旋桨（p—propeller）结构，通过调节多蛋白复合体的组装而影响蛋白质与蛋白质、蛋白质与DNA间的相互作用。本文综述植物WD40蛋白响应逆境胁迫的调控作用。

谷氨酸系统相关药物在难治性强迫症治疗中的应用进展

目前,选择性5-羟色胺再摄取抑制剂(SSRIs)是治疗强迫症的主要药物,但这些药物的疗效有限。经过两种或两种以上SSRIs足量足疗程治疗仍无效果的强迫症属于难治性强迫症,人们正在不断探索治疗难治性强迫症更有效的方法。谷氨酸系统失调与强迫症发病有关,参与强迫症的病理生理过程,且很多谷氨酸系统的调节药物被用于难治性强迫症的治疗,如N-甲基-D-天冬氨酸受体(NMDAR)拮抗剂和NMDAR激动剂等,其中一些药物也显示出显著的效果,这为难治性强迫症提供了新的治疗选择。

含有精-甘-天冬氨酸序列的环肽与大鼠肝星状细胞体外结合的特性

目的探讨人工合成的含有精-甘-天冬氨酸(Arg-Gly-Asp,RGD)序列的环八肽(cRGD) 与大鼠肝星状细胞(HSC)体外的结合特点。方法采用异硫氢酸荧光素(FITC)标记环八肽(FITC- cRGD);流式细胞仪测定其与大鼠HSC体外结合的荧光强度;荧光显微镜观察FITC-cRGD在HSC内的定位;用氚标记的cRGD(3H-cRGD)与HSC进行受体的放射性配基结合分析,Scatchard作图法计算二者结合的平衡解离常数(Kd)和每个细胞上的最大结合位点数(Bmax)。同时,FITC标记的环肽(cAGA)作为阴性对照肽。结果FITC-cRGD与活化的大鼠HSC的结合具有可饱和性、浓度与时间依赖性以及未标记的cRGD对FITC-cRGD具有竞争性抑制作用。FITC-cRGD荧光主要集中在HSC胞浆中,尤其是胞浆近核周区。受体放射性配基结合分析经Scatchard作图提示Kd为7.05×109mol/L,Bmax约为6.79 ×105。与阴性对照肽相比,RGD序列对识别HSC起重要作用。结论HSC表面具有可供含有RGD序列人工合成环肽结合的位点;制备的含有RGD序列的环肽符台特异性配体的标准;FITC标记不影响环肽生物学活性。

低频重复经颅磁刺激预处理对氯化锂-匹鲁卡品致痫大鼠痫性发作及B细胞淋巴瘤／白血病基因-2、自杀因子和半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3蛋白表达的影响

目的探讨低频重复经颅磁刺激（rTMS）预处理的抗痫作用及其与抗海马细胞凋亡的相关性。方法将健康成年Wistar大鼠30只分为rTMS预处理组、假刺激组及空白对照组，每组10只。rTMS预处理组行低频rTMS（0．5Hz、75％阈强度、20次／串、5串／d）预处理，假刺激组予以相同次数、声音相似的“假性”刺激，连续7d后，制作氯化锂-匹罗卡品诱导癫痫持续状态模型。观察各组大鼠痫性发作潜伏期及痫性发作程度，以免疫组织化学法观察各组大鼠海马CA1区B细胞淋巴瘤／白血病基因-2（Bcl-2）、自杀因子（Fas）及半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3（Caspase-3）蛋白的平均阳性反应细胞数及阳性反应细胞平均光密度。结果rTMS预处理组与假刺激组相比，痫性发作潜伏期显著延长、发作程度减轻（P〈0．01），各时点Bcl-2蛋白表达增加，Fas及Caspase-3蛋白表达减少。结论低频rTMS预处理具有抗痫作用，其机制可能与其调节海马区Bcl-2、Fas及Caspase-3蛋白表达水平，从而保护神经元有关。

采用^99Tcm标记的新精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸多肽序列显示胶原诱导性关节炎大鼠滑膜血管翳形成的研究

目的观察放射性^99Tcm标记的新精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸多肽序列（^99Tcm-3P4-RGD2）在胶原诱导性关节炎（CIA）大鼠体内的分布与显像，探索单光子放射型计算机断层扫描仪（SPECT）下^99Tcm-3P4-RGD2成为RA治疗前后监测滑膜血管翳新生血管新标记物的可能性。方法建立Ⅱ型胶原诱导性鼠关节炎模型，分别设贝伐单抗（bevacizumab，商品名Avastin）治疗组、重组人Ⅱ型肿瘤坏死因子受体．抗体融合蛋白（rhTNFR：Fc）治疗组和空白对照组，观察治疗前后3组大鼠足垫厚度变化，评估关节炎指数积分和^99Tcm-3P4-RGD2体内分布情况，计算四肢放射性核素平均计数率靶区摄取计数／纵隔摄取计数（T/NT）。酶联免疫吸附试验（ELISA）同步检测不同治疗组CIA大鼠治疗前后血清血管内皮生长因子（VEGF）表达水平。治疗完毕后将大鼠处死行后足远端趾间关节病理切片，分别做苏木素-伊红（HE）、番红O染色并评价关节炎病理损伤评分。免疫组织化学法检测3组大鼠滑膜组织中VEGF表达水平，半定量积分法评价VEGF染色结果。统计方法采用配对样本t检验。结果3组造模成功CIA大鼠四肢关节部位可出现异常放射性浓聚，其值分别为1．40±0．17，1．32±0．20，1．30±0．08，经过贝伐单抗和rhTNFR：Fc治疗后删T值均下降，分别为0．43±0．14，0．40±0．12差异有统计学意义（t=17．710，16．812，P〈0．05）。随着贝伐单抗和rhTNFR：Fc治疗后，滑膜血管翳新生血管减少，大鼠足垫厚度变化、关节炎指数积分和血清VEGF表达水平均随之下降，其T／NT值与上述指标呈正相关（贝伐单抗治疗组r=0．753，0．800，0．892，P〈0．01；rhTNFR：Fc治疗组r=0．701，0．502，0．481，P=0．001，0．024，0．032）。结论CIA大鼠尾静脉注射99Tcm-3P4-RGD2后，可较好地显示大鼠四肢关节病变部位，99Tcm-3P4-RGD2有可能会成为新型的RA治疗前后监测滑膜血管翳新生血管的显像剂。

精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸序列修饰对流感病毒溶瘤能力的影响

目的探讨精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸(RGD)序列修饰对流感病毒溶瘤能力的影响。方法采用流感病毒反向遗传操作体系,将含PB2、PB1、PA、HA、NP、NA、M和NS的质粒PHW200(八质粒)及经RGD修饰的八质粒分别共转染293T细胞,拯救出野生型和重组RGD流感病毒。采用胶体金法试纸条进行鉴定,血凝试验检测病毒效价,PCR法检测病毒传代稳定性,噬斑试验检测病毒滴度。用拯救的两种流感病毒感染不同细胞(B16-F10、A549、TC-1、CT26、4T1和Vero细胞),检测细胞活力和细胞中乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)释放率。用B16-F10细胞注射小鼠,建立小鼠黑色素瘤模型后,分别注射两种流感病毒及PBS,隔1 d给药1次,共5次,肿瘤细胞接种后19 d,测量肿瘤大小;肿瘤细胞接种后25 d,统计小鼠存活数量。结果野生型和重组RGD流感病毒经胶体金法试纸条鉴定均为阳性,血凝效价分别为1∶2^(8)和1∶2^(9),传代稳定性良好,病毒滴度分别为3×10^(7)和1.8×10^(7) PFU/mL。两种流感病毒感染后B16-F10和A549细胞活力均大幅降低,其他细胞活力变化较小;与相应野生型流感病毒组比较,重组RGD流感病毒组B16-F10细胞中LDH释放率明显升高(P<0.05),A549细胞略升高,但差异无统计学意义(P>0.05),其他细胞均较低。与PBS组比较,两种流感病毒组小鼠肿瘤大小明显减小(P<0.001),小鼠存活率明显升高(P<0.05)。结论RGD修饰的流感病毒对B16-F10具有较好的亲嗜性,且溶瘤能力增强。本研究为溶瘤流感病毒在肿瘤治疗中的应用奠定了基础。

N-甲基-D-天冬氨酸受体2A亚单位基因与精神分裂症的连锁分析

目的 了解N 甲基D 天冬氨酸受体2A亚单位基因(NR2A)与精神分裂症的连锁关系。方法 选取NR2A亚单位基因所在区域的3个微卫星标志[D16s407、D16s3 075及NR2A启动子区的1个(GT)重复序列],对中国汉族81个独立精神分裂症受累同胞对及其家系成员共324个个体作基因分型,其中男166名,女158名,患病同胞对81个162例。采用受累同胞对法对分型资料进行非参数连锁分析。结果 324人的两点、多点非参数分析最大LOD值均位于D16s407,分别为2 643(P=0 004), 2 504(P=0 005),均大于2 2。结论 NR2A基因微卫星标志与精神分裂症存在提示性连锁关系,NR2A基因可能为精神分裂症的易感基因之一。

天冬氨酸116在光驱质子泵古紫质-4中的作用研究

古紫质-4(archaerhodopsin-4,aR4)是一种存在于嗜盐菌(Halobacterium sp.)XZ515细胞膜上含有类胡萝卜素发色团的细菌类光敏受体蛋白,与细菌视紫红质(bacteriorhodopsin,bR)具有类似的三聚结构和光驱质子泵功能。已有研究表明,bR蛋白D螺旋上具有保守性的天冬氨酸115(aspartic acid 115,D115)的去质子化会影响其质子泵功能,但其等位残基D116在aR4中的作用尚未见报道,特别是与D螺旋存在相互作用的类胡萝卜素发色团是否会对其功能存在影响更不得而知。本研究通过基因定点突变技术将aR4中的D116突变为极性不同的N116和A116以及bR的等位突变,采用紫外-可见光吸收光谱、闪光光解光谱和酸碱滴定等方法对比研究D115/D116突变对bR和aR4结构及光循环动力学的影响。研究结果表明,D116在aR4中的作用与D115在bR中的作用有所不同,且受类胡萝卜素发色团菌红素的影响。本研究有助于进一步认识含类胡萝卜素发色团的光敏受体蛋白D螺旋和菌红素的作用,同时也为研究其他双发色团微生物视紫红质家族蛋白的结构功能提供依据。

犬尿喹啉酸研究进展

犬尿喹啉酸(kynurenic acid,KYNA)是色氨酸(Trp)的代谢产物之一,广泛分布于哺乳动物的体液和中枢神经系统中,能拮抗兴奋性氨基酸(EAA)和烟碱受体,与某些神经系统、眼科、肾脏、免疫性等疾病都有关联。本文就KYNA的生化特性与相关疾病关系作一简单综述。

甲磺酸双氢麦角毒碱在神经系统疾病治疗中的应用建议

甲磺酸双氢麦角毒碱(喜得镇)于1949年正式用于临床。多年来,基础与临床的研究表明,此药可增加脑血流量和氧供给量,改善脑微循环;通过抑制红细胞聚集,促进纤维蛋白溶解,降低二磷酸腺苷诱导的血小板聚集,改善血液流变学,起到调节凝血功能、降纤和抗小板的作用,用于缺血性脑血管病的预防及治疗;还具有调节多种神经递质的作用,可拮抗肾上腺素能亢进、具有类多巴胺激动、5-羟色胺激动作用,增加脑内乙酰胆碱递质含量;还可影响脑代谢、促进脑细胞对葡萄糖和氧的利用,可用于老年性痴呆、血管性痴呆及认知功能障碍患者的治疗。近年来,随着临床及药理学的发展,对甲磺酸双氢麦角毒碱在神经系统疾病中的作用,应该有新的解读及评价,以利临床医师对此类药物形成完整而正确的认识。甲磺酸双氢麦角毒碱在不同的神经系统疾病治疗中担当不同角色。对全身血管病变(如高血压、动脉粥样硬化症等)引起的脑缺血性改变,应该以控制血压为主,甲磺酸双氢麦角毒碱治疗为辅,利用其α_1受体阻滞作用,扩张脑血管,达到增加脑血流量的效果。对于偏头痛间歇期,该药和此类其他药物相似,具有调节血管内皮细胞及平滑肌收缩功能,起到预防头痛发作的效果。关于认知功能障碍的防治,神经内科专家首先明确指出,痴呆是一个不可逆的疾病过程,凡经临床大样本对照研究证明能延缓痴呆发展的药物,都应视为临床有效。甲磺酸双氢麦角毒碱的基础研究提示,该药具有多巴胺受体和5-羟色胺受体兴奋作用,并可提高海马区N-甲基D-天冬氨酸受体的表达水平。临床多项研究也提示,甲磺酸双氢麦角毒碱能改善认知功能,尤其对脑卒中后认知功能损害,有延缓痴呆发生、发展的效果。神经内科临床药物多种多样,选择针对疾病的治疗药物并不难,难的是准确选择对全身状况改善的同时,对疾病治疗也能获益的药物。

米氮平对奥沙利铂诱导大鼠神经病理性疼痛及脊髓NMDAR-2B表达的影响

目的探讨米氮平对奥沙利铂引起的神经病理性疼痛的疗效及可能机制。方法 40只SD大鼠随机均分为葡萄糖+吐温80(C组)、奥沙利铂+吐温80(O组)、奥沙利铂+米氮平10mg/kg组(M1组)、奥沙利铂+米氮平20mg/kg组(M2组)和奥沙利铂+米氮平30mg/kg组(M3组)。每天分别给予大鼠口服吐温80和米氮平10、20、30mg/kg,28d后测各组大鼠的热刺激缩足潜伏期(TWL)和机械性缩足阈值(MWT)。然后重新选取32只SD大鼠,随机均分为葡萄糖+生理盐水+吐温80(C组)、奥沙利铂+生理盐水+吐温80(O组)、奥沙利铂+生理盐水+米氮平20mg/kg(M组)和奥沙利铂+WAY100635+米氮平20mg/kg(W组)。W组在给予米氮平灌胃前30min腹腔注射1mg/kgWAY100635,连续应用28d后测各组大鼠的MWT。同时应用westernblot检测脊髓N-甲基-D-天冬氨酸受体2B(NMDAR-2B)即NR2B的表达。结果在冷水缩尾测试中,其他四组大鼠的TWL在第3天和第10、17、24天明显低于C组(P<0.05或P<0.01)。奥沙利铂注射后第7、14、21、28天,O组大鼠MWT明显低于C组(P<0.05)。治疗后第14、21、28天,M2和M3组大鼠MWT明显高于O组(P<0.05)。预先给予WAY100635,在奥沙利铂注射后第14、21、28天,W组大鼠MWT明显低于M组(P<0.05)。O组脊髓水平NR2B表达明显高于C组(P<0.05),M2和M3组明显低于O组(P<0.05)。预先给予WAY100635,W组脊髓水平NR2B表达明显高于M组(P<0.05)。结论奥沙利铂引起的触觉痛觉异常与脊髓NR2B表达增高有关,米氮平可能通过5-HT1A受体减轻触觉痛觉异常和上调NR2B表达;但米氮平对冷痛觉过敏无明显改善。

白色念珠菌经组织蛋白酶B途径诱导小鼠腹腔巨噬细胞NLRP3炎性体表达

目的探讨含热蛋白结构域3富含亮氨酸重复序列的核苷酸结合寡聚化结构域(NLRP3)在白色念珠菌诱导的小鼠腹腔巨噬细胞促炎性细胞因子产生中的作用及其激活途径。方法体外培养小鼠腹腔巨噬细胞,将其分为空白对照组、CA-074Me组、白色念珠菌组、白色念珠菌+10-6mol·L-1CA-074Me组和白色念珠菌+10-5mol·L-1CA-074Me组。实时荧光定量聚合酶链反应检测细胞内NLRP3 mRNA表达,Western blot检测细胞内溶酶体组织蛋白酶B(cathepsin B)和胱天蛋白酶-1(caspase-1)p20蛋白质水平,酶联免疫吸附试验测定各组细胞培养上清液中白细胞介素-1β(IL-1β)水平。结果白色念珠菌组细胞内NLRP3 mRNA表达、cathepsin B和caspase-1 p20蛋白表达、细胞培养上清液中IL-1β水平均显著高于空白对照组(P<0.01)。加入10-5mol·L-1CA-074Me干预后,细胞内NLRP3mRNA表达、cathepsin B和caspase-1 p20蛋白的表达及细胞培养上清液中IL-1β水平与白色念珠菌组比较显著降低,差异有统计学意义(P<0.01)。结论白色念珠菌通过活化cathepsin B诱导巨噬细胞NLRP3的表达、caspase-1的活化和IL-1β的分泌。

整合素α_vβ_3靶向PET探针^(18)F-c(RGDfK)在Cu(Ⅰ)催化体系中的点击合成

通过2-叠氮乙基对甲苯磺酸酯的18F-亲核取代反应,制备了[18F]2-氟叠氮乙烷,并与丙炔酸修饰的c(RGDfK)反应,采用常用的CuSO4/NaVc催化体系,并尝试了CuI(s)和CuI/NH4OH 2种催化体系,通过点击化学方法合成了整合素αvβ3靶向PET探针[18F]氟乙基-1,4-取代1,2,3-三唑c(RGDfK)[18F-c(RGD-fK)].在CuSO4/NaVc的催化下,18F-c(RGDfK)的总合成时间约为60 min,总收率62%(从[18F]F-起计,经过衰变校正).实验结果表明,点击化学方法高效便捷,适于多肽的18F标记.

版纳微型猪近交系LRWD1基因克隆及功能生物信息学分析

LRWD1基因在精子形成过程中起重要作用。从Gen Bank下载猪及近缘物种的LRWD1 mRNA序列作为参考序列,设计特异引物扩增版纳微型猪近交系(BMI)LRWD1基因。对蛋白质序列进行功能生物信息学分析,构建多物种系统进化树。研究获得了BMI LRWD1 1 944 bp的编码区序列(Gen Bank登录号:KU705639,对应的氨基酸登录号:AOC89057),编码647个氨基酸,蛋白质分子量(Mw)为71.40 k D,等电点(p I)为7.52。功能生物信息学分析表明LRWD1蛋白质存在2个保守结构域,无跨膜结构,无信号肽序列;N末端和C末端均疏水;有6类功能活性位点,位于细胞质的概率是70.6%。系统进化分析表明,BMI与狗、大熊猫的亲缘关系最近。研究结果将为进一步研究LRWD1基因在猪精子发生方面的作用及功能奠定基础。

快速起效抗抑郁药研发策略:单胺(5-HT)-非单胺(Glu/GABA)长反馈神经环路候选假说的提出

抑郁症已成为全球性严重的公共卫生问题,目前临床一线抗抑郁剂大多是基于经典的“单胺假说(策略)”研发的,这些药物普遍存在起效缓慢、有效率不高、损伤认知和致自杀倾向等缺陷,因此,突破经典单胺策略框架,发展快速起效、兼可增强认知和低毒副作用抗抑郁药物是目前全球性重大需求和方向。2019年,S-氯胺酮和别孕烯醇酮(brexanolone)等快速起效抗抑郁药的上市为基于N-甲基-D-天冬氨酸(NMDA)和γ-氨基丁酸A(GABAA)等受体的非单胺策略开辟了全新的前景。目前快速起效抗抑郁药研发总体趋势主要有二:即基于优化多靶标的单胺策略(现代单胺策略)和基于谷氨酸(Glu)-GABA平衡调控的非单胺策略。根据本实验室和国外同行的研究,我们提出单胺-非单胺即“5-羟色胺(5-HT)-Glu/GABA长反馈神经环路”候选假说,认为脑内单胺调控机制(如5-HT神经元,位于中缝核)与非单胺调节机制(Glu/GABA神经元,位于前额皮质等脑区)均是快速起效抗抑郁药机制的一部分,二者共同组成长反馈神经环路,介导前额皮质和海马等效应脑区快速增强的突触可塑性。基于该环路提出5个方面抗抑郁快速起效的候选策略:①通过解除GABA中间神经元对Glu锥体神经元的抑制或直接激活Glu锥体神经元,实现快速兴奋/抑制(E/I)平衡;②借助5-HT1A等受体同时调控5-HT神经元活性和兴奋/抑制平衡(同时增强单胺-非单胺环节);③直接激活哺乳动物西罗莫司(雷帕霉素)靶蛋白复合物1(mTORC1),快速增强脑源性神经营养因子(BDNF)-mTOR通路;④刺激脑内BDNF的快速释放。⑤正向变构调节GABAA受体。希望这些思路和策略为进一步发现快速抗抑郁候选靶标提供有益的借鉴。

APRI与5-HT水平对肝切除术后肝衰竭发生的预测价值和影响因素分析

目的探讨肝切除术后发生肝功能衰竭的影响因素及天冬氨酸转氨酶/血小板比值(APRI)与外周血5-羟色胺(5-HT)水平对其预测价值。方法选取105例行肝切除术患者的临床资料进行回顾性分析,选取时间为2017年2月至2020年3月,根据术后是否发生肝功能衰竭分为A组(肝功能衰竭,n=21)与B组(未出现肝功能衰竭,n=84),分析影响肝功能衰竭的相关因素,评估APRI、5-HT预测肝切除术后发生肝功能衰竭的AUC值、敏感度、特异度。结果105例受试者中,经肝切除术治疗后出现肝功能衰竭共21例(20.00%),其中依据肝功能衰竭分级:A级14(66.67%)、B级5(23.81%)、C级2例(9.52%)。21例肝功能衰竭患者中经随访6个月,出现1例死亡(4.76%)。单因素分析显示,A组与B组在性别、体质量、高血压、糖尿病、术前ALT、术前AST、肿瘤数目、肝门阻断时间比较中,差异无统计学意义(P>0.05);而在年龄、肿瘤直径、术前PT、术前白蛋白、术前Child-Pugh分级、手术时间、失血量、肝切除范围比较中,差异具有统计学意义(P>0.05)。二分类Logistic回归分析显示,年龄、肿瘤直径≥10 cm、术前PT、术前白蛋白、术前Child-Pugh分级为C/B级、手术时间、失血量>1000 mL、大范围肝切除为影响肝切除术患者术后发生肝功能衰竭的危险因素。A组术前APRI、5-HT高于B组(P<0.05)。ROC曲线分析显示,APRI、5-HT预测肝切除术后发生肝功能衰竭的AUC分别为(0.996、0.853,P<0.05);敏感度分别为100.00%、81.00%,特异度分别为95.20%、84.50%。结论年龄、肿瘤直径、术前PT、术前白蛋白、术前Child-pugh分级、手术时间、失血量、肝切除范围是影响肝切除术后发生肝功能衰竭的危险因素;可通过术前行APRI、5-HT检测,为预测肝功能衰竭的发生提供参考。

RGD和泊洛沙姆F127共修饰载多西紫杉醇脂质体的制备及体外抗卵巢癌的初步研究

目的制备精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸三肽序列(RGD)和泊洛沙姆F127共修饰载多西紫杉醇脂质体(DTX-F127-RGD-LP)并研究其对卵巢癌体外抗肿瘤效应。方法采用薄膜水化法制备DTX-F127-RGD-LP,通过电镜测定其形态,并进行粒径、电位、包封率、载药量等表征的测定及体外稳定性的考察;以香豆素6为荧光探针考察SKOV3细胞对修饰的脂质体的摄取情况,通过加入不同的内吞抑制剂研究修饰的脂质体的摄取机制;采用MTT法及结晶紫染色法考察修饰的脂质体对SKOV3细胞的毒性。结果DTX-F127-RGD-LP粒径为(107.2±0.67)nm,电位为-(19.7±0.4)mV,包封率为86.4%,载药量为2.7%,体外稳定性良好。RGD和泊洛沙姆F127修饰后显著增加SKOV3细胞对脂质体的摄取量,DTX-F127-RGD-LP的内吞主要通过小窝蛋白、巨胞饮以及整合素蛋白途径摄取进入细胞。与未修饰的脂质体相比,DTX-F127-RGD-LP对SKOV3细胞毒性最大,结晶紫染色法的结果与MTT结果一致,经计算DTX-F127-RGD-LP的IC50值为0.039μg·mL^(-1)。结论DTX-F127-RGD-LP能显著增强体外卵巢癌细胞的摄取,提高体外抗卵巢癌效应。