血小板衍生生长因子DD对人肌腱源性干细胞增殖和多向分化能力的影响

背景:慢性肩袖损伤常伴有肌腱退变和肌腱干细胞功能受损,血小板衍生生长因子DD作为一种重要的细胞因子,对干细胞增殖和分化具有调节作用。目的:探讨血小板衍生生长因子DD对人慢性肩袖损伤组织来源肌腱干细胞增殖和多向分化能力的影响。方法:获取人体慢性肩袖损伤组织标本并体外分离培养肌腱干细胞,免疫荧光染色观察细胞的骨架形态,流式检测肌腱干细胞表型表达。将肌腱干细胞分成2组:对照组不进行任何干预,血小板衍生生长因子DD组以5μg/mL血小板衍生生长因子DD干预,通过细胞增殖实验和三系分化实验评估血小板衍生生长因子DD对肌腱干细胞增殖和多向分化能力的影响。结果与结论:①血小板衍生生长因子DD组EdU阳性细胞数量较对照组显著增加(P<0.05),且肌腱干细胞更早进入快速增殖期,细胞呈对数增长;②血小板衍生生长因子DD组油红O染色、阿利新蓝染色、茜素红染色阳性面积较对照组明显增大(P<0.05);③上述结果表明,血小板衍生生长因子DD显著促进肌腱干细胞的增殖和成脂、成骨、成软骨分化。

色素上皮衍生因子在结直肠癌组织中的表达

目的探讨结直肠癌组织中色素上皮衍生因子(PEDF)的表达及其与临床病理参数及预后的关系。方法采用实时荧光定量PCR和免疫组化染色技术检测结直肠癌、淋巴结转移癌和正常肠黏膜组织中PEDF mRNA和蛋白的表达,分析PEDF的表达与临床病理参数及预后的关系。结果结直肠癌组织PEDF mRNA的相对表达量为0.115±0.023,淋巴结转移癌组织为0.201±0.063,正常肠黏膜组织为0.821±0.076(F=9.324,P=0.025),而且结直肠癌组织和淋巴结转移癌组织中PEDF mRNA相对表达量均低于正常肠黏膜组织,结直肠癌组织PEDF mRNA相对表达量低于淋巴结转移癌组织(P均<0.001)。结直肠癌患者中,PEDF蛋白低表达组患者占比为68.33%(82/120),高表达组患者占比为31.67%(38/120)。结直肠癌组织中PEDF蛋白表达与TNM分期、淋巴结转移有关(χ^(2)=57.449,P<0.001;χ^(2)=50.612,P<0.001)。PEDF低表达组患者中位生存期为30.82个月,低于高表达患者的46.89个月(Log-rankχ^(2)=18.140,P<0.001)。结论PEDF表达与结直肠癌患者的TNM分期和淋巴结转移密切相关,结直肠癌组织中PEDF低表达为结直肠癌患者预后差的风险因素。

加减驻景方对病理性近视脉络膜新生血管动物模型血管内皮生长因子及色素上皮衍生因子表达的影响

目的观察加减驻景方对病理性近视脉络膜新生血管(choroidal neovascularization,CNV)的血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)及色素上皮衍生因子(pigment epithelium-derived factor,PEDF)表达的影响,探讨中药驻景方对病理性近视CNV的干预作用。方法将3周龄雌性三色豚鼠75只随机选取15只为空白对照组,剩余豚鼠均戴头套右眼形觉剥夺诱导病理性近视,并随机分为模型组、中药组,每组各30只,右眼行氪激光光凝。于光凝后第1天开始连续灌胃21 d,中药组予驻景方3.285 g·kg-1·d-1(1.5 m L·d-1),模型组予等量的生理盐水。造模后7 d、14 d、21 d分别行免疫组织化学及RTPCR检测。结果免疫组织化学结果显示,造模完成后14 d、21 d时中药组VEGF表达的光密度值(0.130 1±0.019 6、0.055 6±0.011 9)较模型组(0.165 9±0.054 3、0.096 1±0.025 9)减少,差异均有统计学意义(P=0.006,P<0.001)。造模完成后14d及21 d时中药组PEDF表达的光密度值(0.038 9±0.004 0、0.054 3±0.008 5)较模型组(0.030 5±0.007 7、0.029 3±0.0059)增高,差异有统计学意义(P=0.026,P<0.001)。RT-PCR结果显示,VEGF mRNA、PEDF mRNA在各组中均有表达,中药组VEGF mRNA表达水平较模型组明显减弱,而PEDF mRNA的表达较模型组增强。结论中药驻景方可抑制氪激光诱导的病理性近视CNV模型中VEGF的表达,促进PEDF的表达,从而抑制CNV的形成。

色素上皮源性因子与胃癌组织血管生成和临床病理因素的关系

【目的】研究色素上皮源性因子(PEDF)和血管内皮生长因子(VEGF)在胃癌组织中的表达及与癌组织中微血管密度(MVD)的关系,探讨PEDF在胃癌组织血管生成中的作用及PEDF与胃癌临床病理因素的关系。【方法】用S-P免疫组织化学法检测82例人体胃癌组织标本中胃癌细胞内PEDF和VEGF的表达;标记CD34分子显示血管内皮细胞,并计数上述胃癌组织内的微血管密度;统计学分析上述分子标记物间的关系以及各分子标记物与胃癌临床病理因素间的关系。【结果】所有的正常胃黏膜均有PEDF表达,胃癌组织PEDF表达率约43%,VEGF表达率约54%;与高分化胃癌相比,低分化胃癌组织PEDF表达率低(P<0.05),MVD高(P<0.05);PEDF低表达的胃癌细胞易侵犯浆膜(P<0.05),易淋巴结转移(P<0.01)和远处转移(P<0.01);胃癌组织PEDF表达与MVD(P<0.01)和VEGF(P<0.01)表达呈负相关关系,VEGF表达与MVD呈正相关关系(P<0.01)。【结论】PEDF低表达和VEGF高表达可能是胃癌组织内微血管生成的分子基础,是促进胃癌细胞发生淋巴及血道转移的重要因素。

血浆色素上皮衍生因子及血管内皮生长因子含量与2型糖尿病视网膜病变相关性的研究

目的探讨2型糖尿病患者血浆色素上皮衍生因子(pigment epithelium-derived factor,PEDF)和血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)浓度变化与糖尿病视网膜病变(diabetic retinopathy,DR)的关系。方法选择门诊及住院2型糖尿病患者71例分为3组:2型糖尿病无视网膜病变(diabetes mellitus without retinopathy)即DM无DR组22例、2型糖尿病并非增殖期视网膜病变(diabetes mellitus non-proliferative DR)即DM伴NPDR组33例、2型糖尿病并增殖期视网膜病变(diabetes mellitus with proliferative DR)即DM伴PDR组16例。另选取正常志愿者(非糖尿病组)13例作为对照。收集年龄、病程等数据,采用酶联免疫吸附测定(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)法检测血浆中PEDF和VEGF水平。结果与非糖尿病组比较,DM伴NPDR和DM伴PDR组血浆中PEDF水平均明显升高(P<0.05)。2型糖尿病患者中,随着DR的发生发展,血浆中PEDF含量明显上升(P<0.05)。2型糖尿病患者各组血浆中VEGF含量差异均无统计学意义(P>0.05),与DR的发生发展亦无明显相关性。DR的发生与2型糖尿病病程有明显的相关性,而与性别、年龄无明显相关性。结论血浆中PEDF含量随着DR发生发展呈现增加的趋势,这可能与2型糖尿病病程的延长以及机体胰岛素抵抗程度增加有关。

血小板源性生长因子对人视网膜色素上皮细胞的作用

目的 观察血小板源性生长因子 (PDGF)对人视网膜色素上皮细胞 (hRPE)增殖和移行能力的影响 .方法 将体外培养的第 46代人视网膜色素上皮细胞分为DMEM组(改良型Eagle培养液 )和含有 2 0mL·L-1小牛血清的DMEM组(2 0 g·L-1DMEM ) ,每组分别加入不同浓度 (0 .1,1,5 ,10 ,5 0和 10 0 μg·L-1)的PDGF ,然后采用MTT比色法观察分析其对hRPE的增殖作用 ;应用hRPE损伤模型 ,计数进入缺损区的细胞 ,定量观察PDGF对hRPE移行的影响 .结果 ①增殖作用 :0 .110 0 μg·L-1的PDGF均能促进hRPE的增殖 ,DMEM组 10 μg·L-1时促增殖作用最明显 ,增殖率达15 3% ;2 0 g·L-1DMEM组 5 0 10 0 μg·L-1的增殖率为 174% ,作用最强 .②移行作用 :PDGF能够显著促进hRPE的移行 ,并呈剂量依赖性 ,5 0 10 0 μg·L-1时促移行能力最强 ,DMEM组移行率为 5 10 % ,2 0mL·L-1FBS +DMEM组达 6 40 % .结论 PDGF能够促进hRPE的增殖和移行 ,有血清时可以加强这种作用 。

超声联合载色素上皮源性因子免疫纳米脂质体靶向治疗脉络膜新生血管

目的研究超声联合载色素上皮源性因子(PEDF)免疫纳米脂质体对脉络膜新生血管(CNV)的靶向治疗作用。方法以CNV内皮细胞上血管内皮生长因子受体-2(VEGFR-2)为靶向位点,将其配体寡肽连接到纳米脂质体上,再反向装载PEDF,制备能与CNV内皮细胞特异性结合的免疫纳米脂质体。对48只BN大鼠右眼行半导体倍频激光(波长为532nm)光凝术建立CNV模型。光凝后7d,实验组鼠尾静脉分别注射游离PEDF、载PEDF脂质体、载PEDF免疫脂质体,联合眼局部超声波辐照20s,并设立玻璃体腔注射PEDF组和对照组。光凝后14d,脉络膜巩膜冰冻切片观察免疫脂质体对CNV的靶向性。FITC-右旋糖酐标记脉络膜巩膜铺片行新生血管定量分析。结果载PEDF免疫脂质体可特异性靶向结合CNV。CNV与FITC标记的PEDF免疫纳米脂质体结合而呈现绿色荧光,正常脉络膜血管不显现荧光。玻璃体腔注射PEDF组及鼠尾静脉注射游离PEDF、载PEDF脂质体、载PEDF免疫脂质体组CNV面积均较对照组减少,差异有统计学意义(P<0.05)。超声联合PEDF免疫纳米脂质体组对CNV的抑制作用强于玻璃体腔注射PEDF组(P<0.05)。结论动物实验证实PEDF免疫纳米脂质体可特异性结合CNV细胞,超声可增强PEDF免疫纳米脂质体对CNV的抑制作用,该方法有望为眼新生血管的治疗提供新途径。

色素上皮衍生因子对大鼠慢性高眼压视网膜神经节细胞的保护作用

目的探讨色素上皮衍生因子(PEDF)对慢性高眼压条件下大鼠视网膜神经节细胞(RGCs)的作用。方法雌性SD大鼠36只,随机分为高眼压+PEDF组(A组)、高眼压+去离子水组(B组)和假手术+PEDF组(C组),A组、B组模型的制作应用巩膜浅层静脉烧烙法建立慢性高眼压模型,C组仅剪开球结膜,不烧烙巩膜浅静脉。A组、C组在模型建立后即刻用10μL微量注射器于大鼠角膜缘后2mm处刺入玻璃体腔,抽出玻璃体2μL,再向玻璃体腔内注射0.05g/L重组大鼠PEDF2μL,B组同法注入等量的去离子水。在3d和14d后处死动物,摘除眼球,将视网膜组织行冰冻切片,用TUNEL法及Fluoro-Jade(FJ)荧光染色检测各组RGCs的凋亡和变性。结果术后3d、14d时A组和B组眼压均明显升高,与同时间点C组相比差异均有统计学意义(P<0.05);各组术后3d和14d间的眼压比较差异均无统计学意义(P>0.05)。TUNEL检测显示,A组、C组3d和14dRGCs的凋亡数目均明显少于同时间点B组(P<0.05),A组14d的凋亡细胞数明显少于3d(P<0.05)。FJ荧光染色结果显示,A组、C组3d和14d变性RGCs数均明显少于B组(P<0.05),A组14d的变性细胞数较3d时明显减少(P<0.05)。结论玻璃体腔注射PEDF可减少慢性高眼压大鼠RGCs的凋亡和变性。

玻璃体内注射色素上皮源性因子对大鼠早期糖尿病视网膜病变的保护作用

目的观察玻璃体内注射色素上皮源性因子（pigment epithelium-derived factor,PEDF）对SD糖尿病大鼠视网膜PEDF、血管内皮生长因子（vascular endothelial growth factor,VEGF）、炎性相关因子细胞间黏附分子-1（intercellular cell adhesion molecule-1,ICAM-1）和单核细胞趋化蛋白-1（monocyte chemotactic protein-1,MCP-1）以及细胞通透性相关因子紧密连接蛋白-1（zonu-la occludens-1,ZO-1）和蛋白激酶B（protein kinase B,PKB,又称Akt）表达的影响,探讨PEDF对早期糖尿病视网膜病变的保护作用。方法选取6~8周龄SD大鼠60只,随机分为4组：正常对照组（CON组）、糖尿病组（DM组）、糖尿病生理盐水注射组（DM＋NS组）和糖尿病PEDF注射组（DM＋PEDF组）。链脲佐菌素诱导建立糖尿病模型后第1周、2周、3周时,DM＋PEDF组大鼠玻璃体内注射PEDF,而DM＋NS组注射同样体积的生理盐水。第4周时处死大鼠,摘出眼球,进行视网膜组织病理学及电镜观察。并采用免疫组织化学方法检测视网膜PEDF、VEGF、ICAM-1、MCP-1以及ZO-1、Akt的表达情况。结果糖尿病大鼠均造模成功。4周糖尿病病程尚不能导致明显的视网膜新生血管形成。在透射电镜下,DM组大鼠视网膜可见神经节细胞水肿,线粒体肿胀变大,基质肿胀明显,可见大部分或全部的嵴消失,部分双侧膜融合,粗面内质网扩张,而玻璃体内PEDF注射可以明显地改善这一病理改变。DM组大鼠PEDF主要表达于视网膜神经纤维层、神经节细胞层以及内丛状层、光感受器基质以及色素上皮层、脉络膜等部位;VEGF主要表达于神经节细胞层,ICAM-1主要表达在光感受器层,MCP-1主要表达在视网膜内层细胞,包括节细胞层和内核层,ZO-1蛋白主要表达于内核层的细胞以及神经节细胞,Akt主要表达于内丛状层以及脉络膜的细胞浆中。同CON组相比,DM组、DM＋NS组视网膜中PEDF、VEGF表达差异均无统计学意义（均为P〉0.05）,而ICAM-1、MCP-1表达增加,ZO-1、Akt表达减少,差异均有统计学意义（均为P0.05）,但ICAM-1、MCP-1表达减少,ZO-1、Akt表达增多,差异均有统计学意义（均为P〈0.05）。结论 PEDF可以明显地改善糖尿病视网膜病变早期视网膜神经节细胞的损害,通过减少炎性因子和增加细胞连接蛋白而减轻血-视网膜屏障的破坏,从而对早期糖尿病视网膜病变起一定的防治作用。

非小细胞肺癌患者CT灌注成像与血浆色素上皮衍生因子、血管内皮生长因子水平的相关性

目的观察和研究非小细胞肺癌(NSCLC)患者CT灌注成像(CTPI)与血浆色素上皮衍生因子(PEDF)、血管内皮生长因子(VEGF)水平的相关性。方法选取189例疑有肺部占位病变患者作为研究对象,将其中确诊为NSCLC的患者99例作为病例组,确诊为肺部良性病变的患者90例作为对照组。对2组患者的CTPI参数和血浆PEDF、VEGFR水平进行检测和比较。结果病例组患者的各项CTPI参数均显著高于对照组(P<0.05)。病例组患者的血浆PEDF水平显著低于对照组,血浆VEGF水平显著高于对照组(P<0.05)。随着TNM分期的升高,NSCLC患者的各项CTPI参数和血浆VEGF水平逐渐升高,血浆PEDF水平逐渐下降,差异均有统计学意义(P<0.05)。直线相关分析结果显示,NSCLC患者的血浆PEDF、VEGF水平与表面通透性(PS)无相关性(P>0.05),血浆PEDF水平与CTPI参数均呈负相关(P<0.05),血浆VEGF水平与其他CTPI参数均呈正相关性(P<0.05)。结论 NSCLC患者可表现为CTPI参数水平的升高,与患者的临床分期及血浆PEDF、VEGF水平均具有一定的关联性。

新生血管性青光眼患者血清及房水中血管内皮因子和色素上皮衍生因子水平的研究

新生血管性青光眼（nonvascular glaucoma,NVG）是一种由缺血、缺氧共同作用导致的继发性青光眼,主要表现为虹膜表面及房角有新生血管[1]。

细胞色素上皮源性因子对巨噬细胞表面CD36蛋白表达的影响

目的探讨细胞色素上皮源性因子(PEDF)对小鼠动脉粥样硬化(AS)斑块内巨噬细胞及RAW264.7细胞表面CD36蛋白表达的影响。方法选取8周龄雄性Apo E^(-/-)小鼠20只,随机分为对照组、PEDF组各10只,PEDF组尾静脉注射PEDF,对照组尾静脉注射同等量的生理盐水;高脂喂养16周处死小鼠,采用免疫组化染色法检测两组主动脉根部组织巨噬细胞表面CD36蛋白表达。将RAW264.7细胞以高糖DMEM培养24 h后分为oxLDL组、ox-LDL+阴性病毒转染(G)组、ox-LDL+PEDF组、Con组。待细胞贴壁约8 h后,ox-LDL组、ox-LDL+G组、ox-LDL+PEDF组均给予ox-LDL 80μg/m L,Con组不给予ox-LDL;另将腺病毒包绕的PEDF以MIC值为30转染进ox-LDL+PEDF组细胞;应用免疫印迹法测定四组RAW264.7细胞CD36表达。结果与对照组比较,PEDF组主动脉根部AS斑块内巨噬细胞表面CD36蛋白表达降低(14.00±1.155 vs 29.00±0.577,P<0.05)。ox-LDL组、ox-LDL+G组、ox-LDL+PEDF组、Con组RAW264.7细胞CD36蛋白表达分别为0.754±0.055、0.831±0.072、0.547±0.002、0.339±0.033;与Con组比较,ox-LDL组、ox-LDL+G组CD36蛋白表达水平升高(P均<0.05);与ox-LDL组、ox-LDL+G组比较,ox-LDL+PEDF组CD36蛋白表达水平降低(P均<0.05)。结论 PEDF能有效下调巨噬细胞表面CD36的表达,可能是未来AS治疗中的潜在靶点。

色素上皮源性因子对缺血—再灌注视网膜神经节细胞的保护作用

目的:研究色素上皮源性因子(pigment epithelium derived factor,PEDF)对高眼压诱导的大鼠视网膜缺血—再灌注后视网膜神经节细胞的保护作用。方法:经眼角膜进行前房平衡盐水(BSS)灌注,维持眼内压110mmHg,以阻止视网膜正常血液灌注。60min后取出灌注针头,恢复视网膜正常血流,从而建立大鼠视网膜缺血—再灌注模型。实验分为正常非缺血组和视网膜缺血—再灌注组,后者又分为生理盐水注射对照组和PEDF注射实验组,再灌注模型建立后立即向实验组大鼠玻璃体腔内注射0.2g/LPEDF2μL。实验对照组用同样方法注射等量生理盐水。分别于注射后2d和7d进行眼球摘除,对视网膜进行光学显微镜形态学观察和Fas原位杂交免疫学分析,探讨PEDF对缺血—再灌注视网膜神经节细胞的保护作用。结果:缺血—再灌注2d时生理盐水注射组和PEDF注射组视网膜神经节细胞明显少于正常对照组(P<0.01)和(P<0.05),PEDF注射组视网膜神经节细胞数较生理盐水注射组明显较多,相比有显著性差异(P<0.05);视网膜神经节细胞计数再灌注7d后结果与2d时类似。再灌注2d生理盐水注射组Fas阳性染色细胞比PEDF注射组明显较多(P<0.05),生理盐水组比PEDF注射组阳性细胞百分率明显较高(P<0.01);再灌注7d时两组Fas阳性细胞计数无明显差异。结论:视网膜缺血—再灌注后即刻行玻璃体腔内PEDF注射可以改善视网膜神经节细胞的损伤并有一定保护作用。

人色素上皮源性因子基因真核表达载体的构建及在大鼠眼内的表达

目的构建人色素上皮源性因子(PEDF)基因真核表达载体,并观察其在大鼠眼内的表达。方法将PEDF基因克隆到真核表达载体PcDNA3.0中,采用阳离子脂质体包裹pcPEDF,注射到SD大鼠玻璃体腔内。结果测序鉴定、酶切及琼脂糖电泳分析pcPEDF中含有PEDF基因,用免疫组化方法检测证实PEDF在大鼠视网膜神经细胞中表达。结论成功的构建了含有人PEDF基因的真核表达载体,并能持续、稳定地在大鼠视网膜神经细胞中表达。

超声联合色素上皮源性因子免疫纳米脂质体对脉络膜新生血管内皮细胞靶向杀伤作用的体外研究

目的体外实验研究超声联合色素上皮源性因子(pigment epithelium derived factor,PEDF)免疫纳米脂质体对脉络膜新生血管内皮细胞的靶向杀伤作用。方法制备能与脉络膜新生血管内皮细胞特异性结合的PEDF免疫纳米脂质体。向培养恒河猴脉络膜视网膜内皮细胞系RF/6A细胞加入免疫纳米脂质体,观察其与RF/6A细胞结合的能力。激光共聚焦显微镜观察免疫纳米脂质体的细胞内化过程。分别将游离PEDF、载PEDF脂质体、载PEDF免疫脂质体和超声联合载PEDF免疫脂质体作用细胞后,MTT法检测对RF/6A细胞生长的抑制作用,流式细胞术检测凋亡,并与仅用PBS作用细胞的对照组比较。结果制备的载PEDF免疫纳米脂质体可紧密结合RF/6A细胞,3h时,载PEDF免疫脂质体布满细胞浆。包含PEDF终浓度为80mg.L-1的游离PEDF、载PEDF脂质体、载PEDF免疫脂质体和超声联合载PEDF免疫脂质体对RF/6A细胞抑制率分别为(32.79±3.62)%、(48.71±3.84)%、(57.45±4.02)%和(90.83±5.61)%,凋亡率分别为(25.05±4.06)%、(30.21±3.13)、(36.85±4.12)%和(43.13±4.37)%。提示载PEDF免疫脂质体和载PEDF脂质体的抑制细胞生长和促进细胞凋亡作用均较游离PEDF强(均为P<0.05),且载PEDF免疫脂质体的抑制生长和促进凋亡作用更强(均为P<0.05)。超声可显著提高载PEDF免疫脂质体的细胞内化能力,并增强其抑制细胞生长和促进细胞凋亡的作用。结论体外实验证实超声联合PEDF免疫纳米脂质体可靶向杀伤脉络膜新生血管内皮细胞。

色素上皮衍生因子通过抑制PI3K/Akt通路降低宫颈癌HeLa细胞活性和侵袭相关蛋白表达

目的:探讨色素上皮衍生因子(PEDF)通过抑制磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)/蛋白激酶B(Akt)信号通路,从而下调人宫颈癌HeLa细胞的活性和侵袭相关蛋白c-Met表达的相关机制。方法:选取本院病理已确诊的40例宫颈癌样本及对应的40例癌旁正常组织样本,通过免疫组织化学法检测PEDF、PI3K和p-Akt蛋白的表达。在细胞水平分为正常宫颈上皮细胞HCerEpiC组、HeLa组、HeLa+PEDF组、HeLa+PEDF+PI3K/Akt激活剂组和HeLa+PI3K/Akt抑制剂组。通过蛋白质印迹(Western blotting)检测各组细胞内PEDF、PI3K、p-Akt、Akt及c-Met蛋白的表达水平,CCK-8法检测各组细胞的活性。结果:宫颈癌样本和HeLa细胞中的PI3K/Akt通路显著激活,且PEDF表达显著下降(P<0.01)。PEDF可以显著抑制HeLa细胞中PI3K/Akt激活和细胞活性以及侵袭相关蛋白水平的增加(P<0.01)。Akt激活剂可以逆转PEDF对HeLa细胞活性和侵袭蛋白表达的影响,而激活PI3K无法改变PEDF的作用。单纯的药物抑制PI3K/Akt通路不足以模拟PEDF对HeLa细胞的作用。结论:PEDF通过PI3K/Akt双重抑制作用降低HeLa细胞活性和侵袭相关蛋白表达,这为临床上PEDF治疗宫颈癌提供了新的思路和理论依据。

膀胱癌组织中色素上皮衍生因子与雄激素受体的表达及其相关性

目的探讨膀胱癌组织中色素上皮衍生因子(PEDF)与雄激素受体(AR)的表达及其相关性。方法采用免疫组织化学染色检测30例膀胱癌组织中PEDF和AR表达,采用Pearson相关性分析PEDF表达与AR之间的关系。Real-time PCR和Western blot检测在不同浓度的雄激素处理下,膀胱癌TCCSUP细胞株中PEDF和AR的表达水平以及慢病毒介导的AR干扰后,细胞株中PEDF的表达水平。结果相关性分析表明PEDF表达与AR表达呈负相关(P=0.003)。雄激素处理后上调AR表达,抑制PEDF表达。同时,干扰AR的表达可以上调PEDF表达。结论膀胱癌组织中PEDF的表达可能受到AR表达所抑制。

色素上皮源性因子基因转染对巨噬细胞诱导大鼠增生性玻璃体视网膜病变的抑制作用及其机制

目的：探讨玻璃体腔注射色素上皮源性因子（PEDF）基因真核表达载体在增生性玻璃体视网膜病变（PVR）模型眼内的表达及作用，阐明PEDF基因转染对巨噬细胞诱导的鼠增生性玻璃体视网膜病变的抑制作用。方法：采用阳离子脂质体包裹pcDNA3-PEDF，注射到36只SD大鼠玻璃体腔内（每组大鼠的右眼为实验眼，左眼作为阴性对照眼），大鼠分为PVR对照组（仅在玻璃体腔内注射巨噬细胞诱发PVR形成）、盐水对照组（在玻璃体腔内注射生理盐水3d后注射巨噬细胞）和转染组（在玻璃体腔内注射脂质体、pcDNA3-PEDF混合物，3d后注射巨噬细胞），每组12只，应用检眼镜和全视网膜镜观察各组大鼠玻璃体和视网膜情况；HE染色光镜下观察各组大鼠玻璃体、视网膜各层结构和细胞增殖情况。结果：检眼镜和全视网膜镜观察各组大鼠PVR形成情况，玻璃体腔注射巨噬细胞后，与转染组比较，PVR对照组和盐水对照组大鼠可见玻璃体腔内增殖明显。于注射后1周见PVR对照组和盐水对照组开始出现条索样增殖，2～3周时增殖逐渐加重，并开始出现视网膜隆起，4周见全部模型眼均有明显增殖改变，有条索状增殖物牵引网膜，并出现牵拉网脱；转染组大鼠中仅1眼见玻璃体牵拉，视网膜浅脱离，余眼玻璃体无明显混浊，眼底清晰，视网膜平伏。HE染色，转染组大鼠绝大部分实验眼视网膜各层细胞结构清晰，仅发生了视网膜浅脱离的1眼可见视网膜前增殖膜，伴少量炎性细胞浸润；PVR对照组和盐水对照组大鼠玻璃体腔内可见随病程进展的炎症反应，炎症细胞聚集、成纤维细胞增殖、瘢痕形成最终导致眼球萎缩。结论：大鼠玻璃体腔注射转染PEDF可以明显抑制巨噬细胞诱导的PVR形成和发展。

靶向转染色素上皮源性因子治疗大鼠子宫内膜异位症的研究

目的:探索免疫纳米脂质体介导色素上皮源性因子(PEDF)质粒转染对子宫内膜异位症大鼠模型的治疗效果。方法:将新生血管内皮细胞表面高表达的VEGFR-2作为靶向位点,用其特异性配体寡肽ATWLPPR修饰纳米脂质体,反向装载PEDF表达质粒,制备一种新型免疫纳米脂质体载药系统ATWLPPR-IML-PEDF。以子宫内膜片异位移植法建立EM大鼠模型,随机分为对照组(n=6,移植内膜数为32)和脂质体转染组(n=6,移植内膜数为33),于造模后次日分别给予生理盐水0.1ml或ATWLPPR-IML-PEDF脂质体溶液(含PEDF质粒5mg/kg体重)0.1ml尾静脉注射。造模后3周测量病灶大小。检测病灶中PEDF融合蛋白水平,并以qRT-PCR及Western blot法检测VEGF mRNA及蛋白表达量。结果:体外实验表明,ATWLPPR-IML-PEDF能高效转染VEGFR-2阳性细胞,转染率达(91.80±0.03)%。动物实验表明,ATWLPPR-IML-PEDF一次尾静脉给药即可显著抑制子宫内膜片的异位生长,异位内膜萎缩消失率为18.18%(6/33),其余EM病灶平均体积显著低于对照组[(18.92±0.88)mm3vs(78.40±1.93)mm3,P<0.001]。脂质体转染组PEDF蛋白表达量增高的同时,EM病灶中VEGF mRNA及蛋白的表达量亦显著降低(P<0.001)。结论:载药免疫纳米脂质体ATWLPPR-IML-PEDF可有效抑制大鼠EM病灶生长,为EM的抗新生血管治疗提供了一种简便、特异、高效的新手段。

增生性瘢痕血管形成抑制作用中色素上皮衍生因子的分子克隆与真核表达

目的:克隆人色素上皮衍生因子(PigmentEpithelium-DerivedFactor,PEDF)全长cDNA,建立稳定表达人PEDF分子的哺乳动物细胞系。方法:RT-PCR获取人PEDFcDNA,序列测定后克隆入真核表达载体pCDNA3.0中,用脂质体转染入HepG2细胞,G418筛选出稳定表达细胞系,用RT-PCR与Westernblot分别检测RNA和蛋白表达水平。结果:RT-PCR扩增得到预期大小的目的条带,序列分析表明成熟肽编码区与发表序列完全一致;克隆入pCDNA3.0中得到PEDF真核表达载体,G418筛选3周后得到稳定表达细胞系,RT-PCR与Westernblot显示PEDF在HepG2细胞中有高水平表达。结论:人PEDF全长cDNA成功克隆,并在哺乳动物细胞系HepG2中获得稳定表达,为进一步研究PEDF分子对增生性瘢痕血管形成的作用奠定了理论基础。