超声联合载色素上皮源性因子免疫纳米脂质体靶向治疗脉络膜新生血管

目的研究超声联合载色素上皮源性因子(PEDF)免疫纳米脂质体对脉络膜新生血管(CNV)的靶向治疗作用。方法以CNV内皮细胞上血管内皮生长因子受体-2(VEGFR-2)为靶向位点,将其配体寡肽连接到纳米脂质体上,再反向装载PEDF,制备能与CNV内皮细胞特异性结合的免疫纳米脂质体。对48只BN大鼠右眼行半导体倍频激光(波长为532nm)光凝术建立CNV模型。光凝后7d,实验组鼠尾静脉分别注射游离PEDF、载PEDF脂质体、载PEDF免疫脂质体,联合眼局部超声波辐照20s,并设立玻璃体腔注射PEDF组和对照组。光凝后14d,脉络膜巩膜冰冻切片观察免疫脂质体对CNV的靶向性。FITC-右旋糖酐标记脉络膜巩膜铺片行新生血管定量分析。结果载PEDF免疫脂质体可特异性靶向结合CNV。CNV与FITC标记的PEDF免疫纳米脂质体结合而呈现绿色荧光,正常脉络膜血管不显现荧光。玻璃体腔注射PEDF组及鼠尾静脉注射游离PEDF、载PEDF脂质体、载PEDF免疫脂质体组CNV面积均较对照组减少,差异有统计学意义(P<0.05)。超声联合PEDF免疫纳米脂质体组对CNV的抑制作用强于玻璃体腔注射PEDF组(P<0.05)。结论动物实验证实PEDF免疫纳米脂质体可特异性结合CNV细胞,超声可增强PEDF免疫纳米脂质体对CNV的抑制作用,该方法有望为眼新生血管的治疗提供新途径。

兔虹膜色素上皮细胞和视网膜色素上皮细胞血管内皮生长因子及其受体FLK-1 mRNA表达的对比研究

目的 研究血管内皮生长因子 (VEGF)及其受体 (FLK 1)mRNA在健康兔眼虹膜色素上皮 (IPE)细胞和视网膜色素上皮 (RPE)细胞中的表达特征 ,探讨IPE细胞代替RPE细胞用于自体移植治疗年龄相关性黄斑变性 (ARMD)及RPE异常相关疾病的可行性。方法 分离成年健康有色家兔的IPE细胞和RPE细胞 ,采用逆转录聚合酶链反应 (RT PCR)检测其VEGF及其受体FLK 1mRNA的表达情况。结果 兔眼IPE细胞和RPE细胞均可表达VEGF和FLK 1mRNA。IPE细胞的VEGF和FLK 1mRNA含量低于RPE细胞。IPE细胞的VEGFmRNA的表达量约为RPE细胞的 4 4 6 2 % ,FLK 1mRNA的表达量约为RPE细胞的 5 2 36 % ,差异均有显著意义 (P <0 0 0 1)。结论IPE细胞VEGF及其受体FLK 1mRNA的表达水平比RPE细胞低 ,IPE细胞代替RPE进行细胞移植可能更为有利。

HIF-1α的RNA干涉可引起缺氧条件下人角膜上皮细胞VEGF表达下调和PEDF表达上调

目的探讨shRNA干扰HIF-1α表达对缺氧条件下人角膜上皮细胞(h CEC)血管内皮生长因子(VEGF)和色素上皮衍生因子(PEDF)表达的影响。方法针对HIF-1αmRNA序列靶点设计及合成3个小发夹RNA(shRNA),分别在体外转染自发永生化人角膜上皮细胞(S-ihCEC),转染后的S-ihCEC在1 mmol/L Co Cl2中缺氧诱导培养6 h,实时定量PCR检测HIF-1α、VEGF、PEDF的mRNA表达,Western blot法检测HIF-1α、VEGF的蛋白表达,ELISA检测PEDF的水平。结果与缺氧组比较,转染HIF-1αshRNA的S-ihCEC中HIF-1αmRNA表达下调、HIF-1α蛋白表达下调,VEGF mRNA表达下调、VEGF蛋白表达下调,PEDF mRNA表达上调(1. 22±0. 18)倍,PEDF水平升高。结论针对HIF-1α的shRNA能有效干扰S-ihCEC中HIF-1α的表达,并下调VEGF表达、上调PEDF的表达。

VEGF和PEDF在增殖性糖尿病视网膜病变中的研究进展

增殖性糖尿病视网膜病变(proliferative diabetic retinopathy,PDR)是一种以眼内新生血管形成为特征的糖尿病并发症。眼内新生血管的形成是当今世界主要致盲原因之一。血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)与色素上皮衍生因子(pigment epitheliumderived factor,PEDF)作为眼内新生血管形成最主要的细胞因子,近年来成为研究热点。本文就VEGF和PEDF在PDR中的研究进展进行综述。

氧致视网膜病变鼠血清及视网膜PEDF和VEGF不同时程表达的研究

目的探索血清及局部视网膜组织中PEDF、VEGF的变化在氧致视网膜病变大鼠中的作用。方法将48只7D龄SD大鼠新生乳鼠分为实验组与对照组。实验组置于浓度为75%的高氧环境中生活5d后,返回正常环境饲养,对照组于正常环境中饲养。17d及22d龄时分别行视网膜造影铺片,苏木精-伊红染色计数突破内界膜内皮细胞数,免疫组化检测视网膜PEDF、VEGF的表达,血清酶联免疫吸附试验(ELASA)检测两者血清的表达。结果实验组分别与相应对照组相比,视网膜呈缺血缺氧性增殖性表现,突破视网膜内界膜的内皮细胞数明显增加,差异有统计学意义(P<0.01);17d龄模型组视网膜VEGF染色明显增强,阳性率增加(P<0.01);22d龄模型组PEDF染色较17d龄减弱,阳性率减少(P<0.01);各组血清VEGF浓度差异无统计学意义(P>0.05);17d龄模型组血清PEDF浓度较17d正常组明显减少(P<0.01),22d龄模型组较17d龄血清PEDF增加(P<0.01)。结论血清内PEDF浓度的明显降低,视网膜组织局部VEGF的异常高表达,使血清及局部组织内PEDF/VEGF平衡的破坏可能是视网膜血管增殖性变化的重要机制。

2型糖尿病患者房水中VEGF及PEDF水平的研究

目的探讨2型糖尿病患者与健康人房水中血管内皮生长因子及视网膜色素上皮源性因子水平是否存在差异。方法糖尿病患者组39例39只眼,存在糖尿病性视网膜病变(diabetic retinopathy,DR)患者18例18只眼,无DR患者21例21只眼,老年性白内障患者20例20只眼作为对照组。用酶联免疫吸附法检测房水中VEGF及PEDF的水平。结果在2型糖尿病组中存在DR及无DR患者房水中VEGF浓度分别为(1 241.39±274.71)pg/ml及(1 183.31±231.12)pg/ml,与对照组[(951.47±280.39)pg/m1]相比,差异有统计学意义(P=0.004,P=0.013)。对照组、DR组及无DR组患者PEDF浓度分别为(40.11±15.87)ng/ml、(50.13±46.73)ng/ml、(34.68±4.77)ng/ml,与对照组相比,无DR患者房水中PEDF浓度明显降低(P=0.042)。对照组、DR组及无DR组患者房水中VEGF/PEDF分别为26.15±11.92、32.41±12.11、34.58±7.97,与对照组相比,其余两组患者房水中VEGF/PEDF明显升高(P=0.038,P=0.002)。结论糖尿病患者房水中VEGF水平及VEGF/PEDF升高,提示2型糖尿病患者房水中VEGF与PEDF的失衡可能与糖尿病性视网膜病变的发生、发展有关。

GM-CSF在兔动脉粥硬化非梗死模型颅内血管生成中的作用及其机制的探讨

目的观察预防性给予"兔动脉粥硬化非梗死模型"GM-CSF治疗诱导颅内血管生成后,是否可以改善全脑血液循环状态,同时对其可能的调节机制进行初步探讨。方法 40只雄性新西兰大白兔随机分为对照组(ctr)、动脉粥样硬化组(AS)、生理盐水治疗组(NS)、GM-CSF治疗组(GM-CSF),每组10只,各组均进行右侧锁骨下动脉椎动脉开口近端结扎手术。先检测脑血管血液动力学指标(CVHI)的变化。再利用Western Blot检测缺血敏感区域脑组织血管内皮生长因子(VEGF)及色素上皮衍生生长因子(PEDF)蛋白的表达情况。结果 CVHI检测显示,GM-CSF组较AS组及NS组颈动脉Vmin有所增快(P<0.01),同时,GM-CSF组的Wv和Rv值较AS及NS组显著降低(P<0.01)。AS和NS组的缺血敏感区域脑组织PEDF、VEGF蛋白的表达较ctr组均有所增加(P<0.01);GM-CSF组PEDF表达较AS及NS组明显被抑制(P<0.01),而GM-CSF组VEGF蛋白的表达则高于其他3组(P<0.05)。结论预防性皮下注射GM-CSF,可以促进兔动脉粥样硬化非梗死模型颅内血管生成及侧枝循环的建立,进而改善全脑血液循环状态。另外,本研究发现,GM-CSF可能干预了血管平衡系统中关键因子PEDF及VEGF的表达。这可能是GM-CSF诱导颅内血管生成的重要的机制之一。

PPARα激动剂对高糖刺激的肾系膜细胞PEDF和VEGF mRNA表达的影响

目的:研究色素上皮细胞衍生因子(PEDF)和血管内皮生长因子(VEGF)在糖尿病肾病中的作用以及PPARα激动剂与糖尿病肾病的关系。方法:将培养的大鼠HBZY-1肾小球系膜细胞株分为6组,高糖作为刺激因子,PPARα激动剂WY14643作为干预因素。分别设正常组,高糖组,高糖加WY14643治疗组(包括不同的WY14643浓度)以及高糖加WY14643溶剂对照组。用实时定量PCR法测定各组系膜细胞PEDF以及VEGF mRNA表达。结果:(1)与正常组相比较,高糖组肾系膜细胞PEDF mRNA的表达明显降低,而WY14643可逆转高糖导致的肾系膜细胞PEDF mRNA表达的降低。(2)高糖组肾系膜细胞VEGF mRNA的表达较正常组明显增加,而WY14643可减少高糖导致的肾系膜细胞VEGF mRNA表达的增加。结论:高糖可抑制大鼠肾系膜细胞PEDF并增加VEGF的表达,而PPARα激动剂可在一定程度上逆转高糖导致的这种改变。

大鼠脑缺血后PEDF表达及替米沙坦调控作用的研究

目的动态观察大鼠脑缺血后色素上皮源性生长因子(PEDF)的表达变化,并探讨替米沙坦的调控机制。方法线栓法建立大脑中动脉闭塞(MCAO)大鼠模型。实验1,动态观察PEDF蛋白和基因表达;实验2,替米沙坦干预,采用Western blot和qR-T PCR观察PEDF基因和蛋白变化,比较各组脑梗死体积、患侧脑水肿和神经功能。结果 MCAO后24h开始,PEDF表达明显减少。替米沙坦通过激活过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPARγ)上调PEDF,明显改善神经功能缺失,减轻脑水肿,减小梗死体积。结论调控内生性PEDF表达可能是治疗脑缺血的新靶点。

角膜碱烧伤羊膜移植后VEGF、PEDF及NF-κB的表达变化

目的探讨角膜碱烧伤保存羊膜移植的抗炎及抗新生血管的作用及其作用机制。方法健康昆明小鼠角膜碱烧伤模型160只,随机分为常规治疗组(A组,80只)和常规治疗联合羊膜移植治疗组(B组,80只)。两组均以右眼为实验眼。实验第3、7、10和14d,每组随机抽取20只应用免疫组织化学染色检测角膜中血管内皮细胞生长因子(VEGF)、色素上皮衍生因子(PEDF)及核转录因子(NF-κB)的表达。结果(1)实验第3、7dB组VEGF和NF-κB的表达较A组降低(均P<0.05);第10、14dA组与B组比较VEGF和NF-κB的表达无显著性差异(均P>0.05)。(2)在第3、7、10和14d两组间PEDF的表达差异均无统计学意义(P>0.05)。(3)两组中,NF-κB和VEGF表达均呈正相关(P<0.05)。结论(1)保存羊膜可能是通过抑制角膜中NF-κB和VEGF两种因子的表达起抗炎、抗新生血管作用。(2)保存羊膜并不通过增强角膜中PEDF的表达来抑制角膜新生血管。