色素通路相关基因在红背和黑背中华蜜蜂成年工蜂背板中的表达模式分析

【目的】分析红背中华蜜蜂Apis cerana cerana色素通路相关基因的表达差异,揭示红背中华蜜蜂色素形成的分子机制。【方法】采用体视显微镜观察刚出房红背中华蜜蜂和黑背中华蜜蜂(正常个体)成年工蜂的体色差异。通过同源比对鉴定中华蜜蜂成年工蜂黑色素代谢通路相关8个基因(PAH,TH,DDC,ebony,tan,aaNAT,yellow-y和laccase 2)、蝶呤通路相关4个基因(GTPCH I,SPR,PTPS和GC-1)、眼色素通路相关2个基因(vermilion和cinnabar)以及尿酸盐转运相关4个基因(BLOS2,HPS5,OK和Varp)的同源基因;运用荧光定量PCR检测上述色素通路相关基因在红背中华蜜蜂和黑背中华蜜蜂成年工蜂胸部背板和腹部体壁中的相对表达量。【结果】红背中华蜜蜂和黑背中华蜜蜂成年工蜂体色差异表现在胸部背板:红背中华蜜蜂胸部背板呈现棕红色,黑背中华蜜蜂胸部背板则为黑色。荧光定量PCR检测结果表明,胸部背板中tan,laccase 2,SPR,vermilion,cinnabar,BLOS2和OK的表达量以及腹部体壁中OK的表达量在红背中华蜜蜂成年工蜂与黑背中华蜜蜂成年工蜂间有显著性差异。【结论】红背中华蜜蜂和黑背中华蜜蜂明显的体色差异位于胸部背板,这种体色分化的现象受到蜜蜂体内黑色素、蝶呤、眼色素通路及尿酸盐转运相关基因共同作用的影响。

基因芯片筛选电针预处理心肌缺血再灌注大鼠细胞色素P450代谢通路相关差异表达基因

目的:利用基因芯片技术筛选电针预处理心肌缺血再灌注(MIR)大鼠心肌组织中细胞色素P450代谢通路相关差异表达的基因,寻找电针预处理对MIR大鼠产生保护作用的可能发生机制。方法:72只成年Wistar大鼠,雌雄各半,随机分为假手术组(Sham)、模型组(IR)、夹脊组(JJ)、内关组(NG)、阳陵泉组(YLQ)、曲池组(QC),每组12只。电针预处理组每天针刺30 min,连续针刺7 d。采用结扎左冠状动脉前降支的方法复制心肌缺血再灌注损伤模型。提取心肌组织总RNA并进行评估,根据Agilent One-Color Microarray-Based Gene Expression Analysis实验方案进行样品标记和芯片杂交,使用Agilent Feature Extraction、Gene Spring GX v12.1进行数据处理,使用标准的富集计算方法进行GO分析和Pathway分析。结果:电针预处理能够调控缺血再灌注大鼠的基因表达,其中夹脊穴组和内关穴组对细胞色素P450代谢通路相关基因影响显著,上调CYP450表氧化酶基因Cyp2b3、Cyp2c11、Cyp2b2、Cyp2s1,同时下调ω-羟化酶基因Cyp4a2、Cyp1a1、Cyp1b1,阳陵泉组和曲池组无显著性差异。结论:多个基因参与心肌缺血再灌注过程,涉及多条信号通路,电针夹脊穴和内关穴能够上调CYP2家族基因,下调CYP1和CYP4家族基因,从分子水平阐明了其对MIRI的保护作用机制。

细胞色素C氧化酶-2/前列腺素E2信号通路对老年慢性阻塞性肺疾病患者肺血管内皮细胞凋亡的作用

目的探讨细胞色素C氧化酶(Cox)-2/前列腺素E2(PG)E2信号通路对老年慢性阻塞性肺疾病(COPD)患者肺血管内皮细胞凋亡的作用。方法该行肺叶切除术的老年患者20例,根据吸烟情况和COPD诊断标准分为非吸烟非COPD组(对照组)6例,吸烟非COPD组(非COPD组)7例,吸烟且COPD组(COPD组)7例,取癌旁正常肺组织为研究标本。TUNEL法检测肺血管内皮细胞凋亡情况;免疫组化染色观察细胞中Cox-2、PGE2蛋白分布情况;RT-PCR检测Cox-2、PGE-2 mRNA表达;Western印迹检测Cox-2、PGE2蛋白的表达。结果肺血管内皮细胞凋亡指数由高到低依次为COPD组、非COPD组、对照组;Cox-2、PGE2蛋白呈棕色或棕黄色表达于肺血管内皮细胞质并在对照组中表达丰富。非COPD组、COPD组肺组织中Cox-2、PGE2 mRNA表达量明显低于对照组,COPD组明显低于非COPD组(P<0.05)。非COPD组、COPD组肺组织中Cox-2、PGE2 mRNA蛋白表达量明显低于对照组,COPD组明显低于非COPD组(P<0.05)。结论 COPD患者Cox-2、PGE2表达下调,肺血管内皮细胞凋亡增加且与吸烟相关;Cox-2/PGE-2信号通路参与介导COPD患者肺血管内皮细胞凋亡,呈负向调节。

细胞色素P450通路中GSTAL2基因在蛋鸡脾脏及MSB-1细胞中的继代表达传递现象

为探究细胞色素P450(Cytochrome P450,CYP450)通路中GSTAL2、GSTA3、HPGDS、HSD11B1a基因表达量在禽类重要免疫器官脾脏和马立克氏病肿瘤细胞系(MSB-1)的继代传递效应。研究利用病毒模拟物聚肌胞苷酸(Poly I∶C)和细菌模拟物脂多糖(LPS)分别刺激F0代蛋鸡和P0代MSB-1细胞,通过实时荧光定量PCR技术检测上述基因在F0与F1代蛋鸡脾脏及P0与P1代MSB-1细胞中的表达变化情况。结果显示:F(0P0)代、F(1P1)代Poly I∶C组脾脏、MSB-1细胞中的GSTAL2相对表达量均显著高于对照组(P<0.05),其表达趋势可在两代间传递,而GSTA3、HPGDS、HSD11B1a在F(0P0)代的相对表达趋势不能显著性传递至F(1P1)代。结果提示,在Poly I∶C刺激下,GSTAL2基因可能充当着机体对外源性物质代谢的重要角色,同时该基因表达趋势的传递现象也将为今后相关研究的开展奠定理论基础。

光照对紫叶稠李花色素苷合成调控通路的影响

为探究光照强度对紫叶稠李花色素苷合成途径上关键基因及转录因子的影响,对紫叶稠李进行80%遮光处理,通过无参转录组测序,分析差异基因表达量、功能及富集通路情况。结果表明:差异基因主要富集在类黄酮生物合成途径。对花色素苷合成途径相关的差异基因进行荧光定量PCR验证,结果显示,相对全光照条件下,遮光处理下PAL、CHS、CHI、F3H、F3’H、DFR、ANS、UFGT基因表达量下调,MYB6、MYB10转录因子表达量相对上调。

海洋线虫Litoditis marina酸性pH胁迫响应的转录组分析

工业革命以来,二氧化碳排放导致了海洋酸化。海水pH下降对无脊椎动物的生长发育、繁殖、代谢和免疫等多个生命过程产生重要影响,但海洋无脊椎动物如何感知和响应酸性pH胁迫的分子机制还很不清楚。本研究以团队建立的海洋线虫Litoditis marina品系为模型,对其在不同酸性pH条件下的表型特征及转录组数据进行了分析。结果表明,当pH从实验室最佳生长条件5.92下降到5.33时,L.marina生长发育的速度明显减慢,但依然可以产卵繁殖;但当pH下降到4.33时,L.marina的生长受到严重影响,表现为不能长成成体且不能产卵繁殖。通过转录组数据分析,发现当pH从5.92下降到4.33时,海洋线虫L.marina脂肪酸β-氧化通路基因和不饱和脂肪酸合成相关基因表达上调;表皮相关基因表达则呈现差异变化,2个nas基因和6个ptr基因表达显著上调,表皮胶原基因col类基因的表达没有发生显著变化;细胞色素P450通路相关基因、凝集素C基因和HSP70家族基因的表达量显著上调。当pH从5.92下降到5.33时,上述提到的这些上调基因中的大多数没有发生显著变化。我们发现的海洋线虫应答酸化胁迫的主要调控模式,为理解生物体能够在低pH环境中生存的分子机制提供了参考,为筛选和识别生物体响应和适应酸化胁迫的关键基因奠定了基础。

鳖龙软肝汤对肝癌细胞增殖、凋亡及Bcl-2/CytC信号通路的影响

目的探究鳖龙软肝汤对肝癌细胞系QGY细胞株增殖、凋亡的影响,并分析相关机制。方法大鼠连续5 d灌胃鳖龙软肝汤或生理盐水,获得鳖龙软肝汤含药血清、空白血清。体外培养肝癌QGY细胞并分为空白对照组(加入10%空白血清处理细胞)及低、中、高剂量含药血清组(分别加入5%、10%、20%含药血清)干预24 h。CCK-8法检测各组QGY细胞增殖能力;透射电镜观察各组QGY细胞超微结构变化;Hoechest33258荧光染色法检测细胞凋亡形态;AnnexinV/PITC双染法检测各组QGY细胞凋亡情况;免疫印迹法检测各组QGY细胞B淋巴细胞瘤-2/细胞色素C(Bcl-2/CytC)通路[Bcl-2、CytC、半胱天冬氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)]蛋白表达变化。结果透射电镜及Hoechest33258荧光染色结果显示,与空白对照组比较,低、中、高剂量含药血清组肝癌QGY细胞呈线粒体凋亡形态;与空白对照组比较,低、中、高剂量含药血清组肝癌QGY细胞增殖抑制率、凋亡率、Bax、CytC、Caspase-3蛋白水平呈浓度依赖性升高(P<0.05),Bcl-2蛋白水平呈剂量依赖性降低(P<0.05)。结论鳖龙软肝汤能够抑制肝癌QGY细胞增殖并诱导细胞凋亡,可能是通过促进Bcl-2/CytC线粒体凋亡通路活化实现的。