色钉菇乙酸乙酯提取物对帕金森病模型小鼠黑质多巴胺神经元的保护作用

目的:探讨色钉菇乙酸乙酯提取物能否改善帕金森病(PD)小鼠的行为症状以及对黑质多巴胺(DA)能神经元保护作用。方法:以成年C57BL/6小鼠为对象,设置空白对照组、MPTP模型组和100 mg/kg、200 mg/kg、400 mg/kg三个剂量的色钉菇乙酸乙酯提取物的干预组。通过站立次数和爬杆得分等指标评价行为症状,以TH的免疫荧光方法检测存活的黑质DA能神经元,FJC染色法显示黑质致密部变性的DA能神经元。结果:在行为上,实验处理之前各组之间无显著性差异(P>0.05);而实验处理后,于站立次数指标上,400 mg/kg剂量干预组显著地高于实验对照组(P<0.05),与空白对照组无显著性差异(P>0.05);在爬杆得分指标上,200 mg/kg组和400 mg/kg组均显著地高于实验对照组(P<0.05),但与空白对照组无显著性差异(P>0.05)。在TH标记的黑质多巴胺能神经元数量上,只有400 mg/kg组显著地高于实验对照组(P<0.05),与空白对照组无显著性差异(P>0.05)。而FJC标记的变性细胞只在MPTP组、100 mg/kg和200 mg/kg组表达,空白对照组和400 mg/kg组未见FJC阳性细胞。结论:色钉菇乙酸乙酯提取物能显著地改善PD的行为症状和保护黑质DA能神经元,且呈剂量依赖性。

色钉菇乙酸乙酯提取物对脂多糖损伤的多巴胺能神经元的保护作用

目的探讨不同剂量的色钉菇乙酸乙酯提取物对帕金森病(PD)模型小鼠多巴胺能神经元的保护作用。方法以昆明小鼠为实验材料,将脂多糖(LPS)定位注射至黑质内复制PD模型。30只小鼠随机分为假手术对照组、LPS实验对照组、低剂量实验组(LPS+100mg/kg)、中剂量实验组(LPS+200mg/kg)和高剂量实验组(LPS+400mg/kg),每组6只。用免疫荧光方法显示多巴胺能神经元和星形胶质细胞,荧光显微镜下观察、计数黑质内的阳性细胞数。结果 LPS实验对照组小鼠的黑质内,多巴胺能神经元数量少于假手术组(P<0.05),且细胞胞体变圆,突起变短;星形胶质细胞胞体增大,多呈激活形态。低剂量实验组与中剂量实验组小鼠黑质内的多巴胺能神经元数量多于LPS实验对照组(P<0.05),星形胶质细胞密度降低;高剂量实验组小鼠黑质内的多巴胺能神经元数量与实验组差异无统计学意义(P>0.05)。结论低剂量与中剂量的色钉菇乙酸乙酯提取物能够抑制星形胶质细胞的激活,对LPS导致的多巴胺能神经元损伤有显著保护作用。

液相色谱-质谱联用技术分析秦巴硒菇提取物活性成分及其治疗慢性粒细胞白血病的网络药理学研究

目的 利用液相色谱质谱联用和网络药理学、分子对接技术探讨秦巴硒菇提取物治疗慢性粒细胞白血病(chronic myeloid leukemia, CML)的潜在活性靶点及相关信号通路,并通过体外实验进一步验证。方法 应用液相色谱质谱分析秦巴硒菇提取物的活性成分,通过Swiss Target Prediction数据库预测药物靶点;从GeneCards、DisGeNET数据库获取CML的疾病靶点。筛选出药物和CML的共同靶点,通过STRING数据库进行蛋白质互作分析,利用Cytoscape软件构建蛋白互作网络图,并通过DAVID数据库进行GO和KEGG通路富集分析。分别应用DockThor和Pymol进行分子对接及可视化处理。利用CCK-8法测定秦巴硒菇提取物对K562细胞的增殖抑制作用,Western blot验证其对相关蛋白及磷酸化水平的影响。结果 秦巴硒菇提取物活性成分共126种,药物和疾病共同靶点172个;KEGG通路分析结果显示PI3K/Akt/mTOR信号通路可能在治疗CML疾病中起到关键作用。秦巴硒菇提取物在K562细胞中24、48 h的IC50分别为1.86、1.48 g·L^(-1),秦巴硒菇提取物可抑制PI3K、Akt、mTOR蛋白磷酸化水平。结论 秦巴硒菇提取物可通过多成分、多通路、多靶点、多种方式协同作用治疗CML,其作用机制可能与调控PI3K/Akt/mTOR信号通路有关。

两色金鸡菊乙酸乙酯提取物对STZ诱导的糖尿病SD大鼠的影响

目的观察两色金鸡菊乙酸乙酯提取物对糖尿病大鼠糖脂代谢及肝脏、肾脏功能的影响。方法高糖高脂喂养联合腹腔注射链脲佐菌素(streptozotocin,STZ)建立2型糖尿病SD大鼠模型,成模大鼠随机分6组(正常组、模型组、两色金鸡菊乙酸乙酯提取物高、中、低3个剂量组0.15、0.3、0.6 g·kg-1、阳性药二甲双胍0.16 g·kg-1组)。正常组和模型组灌胃生理盐水,其余组每天灌胃给药两色金鸡菊提取物,每周测体重及随机血糖,给药4周后处死,收集大鼠血清,检测血脂四项、肝功肾功指标、血清胰岛素及糖化血红蛋白水平。结果两色金鸡菊乙酸乙酯提取物可有效降低糖尿病大鼠的随机血糖和糖化血红蛋白及血清甘油三酯、低密度脂蛋白、血清总蛋白、血肌酐及血尿酸水平,同时能升高糖尿病大鼠血清白蛋白的含量。结论两色金鸡菊乙酸乙酯提取物能降低糖尿病SD大鼠的血糖血脂,保护其肝肾功能。

色钉菇乙酸乙酯相对SH-SY5Y细胞的保护作用

目的探讨色钉菇乙酸乙酯提取物对1-甲基-4-苯基吡啶离子(MPP+)诱导损伤的多巴胺能神经元的保护作用。方法以SH-SY5Y细胞系为对象,首先测定MPP+孵育48 h时的半致死量(IC50)。然后用25mg/L、50mg/L、100mg/L等剂量的乙酸乙酯提取物预先孵育4 h,随后加入1.0mmol/L(IC50值)MPP+孵育48 h。通过MTT法检测细胞活性;Hoechst染色法、AnnexinⅤ-FITC/PI双染法流式细胞术检测法观察细胞凋亡情况。利用DCFHDA检测色钉菇乙酸乙酯提取物对细胞内活性氧(ROS)水平的影响。结果 1.0mmol/L MPP+孵育48 h时达到半致死剂量,MPP+的损伤浓度确定为1.0mmol/L。预先经色钉菇乙酸乙酯相(50mg/L)孵育,可显著提高SH-SY5Y细胞的活力,降低细胞凋亡率。MPP+损伤后ROS水平急剧升高,而25mg/L、50mg/L、100mg/L乙酸乙酯提取物干预后ROS水平下降。结论 50mg/L色钉菇乙酸乙酯相可显著减轻MPP+对SH-SY5Y细胞的毒性损伤,具有显著的保护作用。

海蛾乙酸乙酯提取物的分离纯化及抗肿瘤活性分析

通过高效液相色谱技术建立海蛾乙酸乙酯提取物的分离纯化方法,采用新型半制备色谱条件收集组分,获得A1,A2,A3,A4,A5,A6等6个单组分,采用MTT法测定各组分对肿瘤细胞的增殖抑制作用.实验结果表明,A5、A6组分对He La细胞的增殖抑制作用最为显著.流式细胞术Annexin V/PI双染检测细胞凋亡情况发现,组分A5、A6对He La细胞的增殖抑制作用可通过诱导He La凋亡途径实现.对样品进行核磁共振以及质谱分析,初步推测A5为芳香族有机化合物,A6为甾体类或萜类有机化合物.

新疆石榴皮乙酸乙酯提取部位的制备和初步鉴定

目的对新疆石榴皮的乙酸乙酯提取部位进行制备和鉴定。方法用乙酸乙酯回流提取制备浸膏,用化学显色法和薄层色谱法对提取物进行鉴定。结果最佳提取条件:固液比1∶20,提取温度80℃,提取次数3次,提取时间分别为3、2、1.5h,出膏率4.3%;系统预试验结果显示,提取物可能含有黄酮类、生物碱、有机酸、酚类和挥发油等成分;以展开剂为正丁醇-醋酸-水(4∶1∶8)的硅胶薄层色谱板上显示4个鲜明的薄层斑点(Rf=0.3～0.5)。结论为新疆石榴皮乙酸乙酯提取部位的制备、化学成分分析、质量标准研究及抗糖尿病产品开发奠定重要基础。

虎奶菇菌丝体提取物对肺癌细胞增殖的影响

对珍稀食药用菌虎奶菇(Pleurotus tuber-regium)菌丝体培养条件进行优化,并通过MTT试验验证了其菌丝体提取物对肺癌细胞增殖的影响。结果发现,其液体培养基中大豆饼粉的浓度为10 g·L^-1、pH为6.8,培养时间为168 h时,液体培养获得的菌丝体干重为17.5 g·L^-1;虎奶菇乙酸乙酯及正丁醇提取物浓度在6.25μg·mL^-1和800.00μg·m L^-1时,对肺癌细胞增殖的抑制率最高分别为84.51%和93.13%,计算IC50值分别为252.62μg·m L^-1和108.25μg·mL^-1。

HPLC-MSn法分析当归乙酸乙酯提取物在大鼠体内的代谢产物

目的:探讨当归乙酸乙酯提取物的抗凝血活性药效物质及其显效形式。方法:采用高效液相色谱-二极管阵列-电喷雾飞行时间质谱联用(HPLC-DAD-ESI-IT-TOF-MSn)技术对当归乙酸乙酯提取物的化学成分进行鉴别,并对其在大鼠体内的代谢产物进行分析。色谱柱为Agilent Zorbax SB-C18(250 mm×4.6 mm,5μm),柱温为28℃,流动相为0.1%甲酸水-甲醇(梯度洗脱),流速为1.0 ml/min,检测波长为280 nm。结果:通过对当归乙酸乙酯提取物的成分进行分析,共指认出22个化合物,其中当归相关研究中首次报道的化合物为4,7-二羟基-3-丁基苯酞;从大鼠含药尿液中共指认出18个化合物,包括原形成分4个,以及当归相关研究中首次报道的代谢产物14个,其中新化合物2个,分别为N,N-4,5-alkene-ligustilide-6/7-O-sulphate和6,7-dihydrosenkyunolide F-9-sulphate-6/7-thiol。结论:该方法能准确、快速地从复杂的生物样品中筛选和鉴定相关代谢产物,可为阐明当归抗凝血活性的药效物质及显效形式(原形、代谢产物或两者兼有)提供化学依据。

高效液相色谱/串联质谱法同时测定虾中氯霉素、甲砜霉素和氟甲砜霉素残留量

用高效液相色谱/串联质谱(LC/MS/MS)同时测定虾中的氯霉素(CAP)、甲砜霉素(TAP)和氟甲砜霉素(FF).均质后的虾样品,采用碱化乙酸乙酯提取.浓缩提取物经液-液分配(LLP)去除脂肪,C18固相萃取(SPE)柱净化后,采用LC/MS/MS电喷雾电离(ESI),负离子,多反应监测(MRM)模式检测,外标法定量.检出限为:氯霉素和氟甲砜霉素0.01 ng/g;甲砜霉素为0.05 ng/g.在添加浓度0.1～2.0 ng/g范围内,氯霉素回收率为73.9%～96.0%;甲砜霉素回收率为78.6%～99.5%;氟甲砜霉素回收率为74.9%～103.7%;相对标准偏差(RSD)均小于6.4%.

两色金鸡菊对糖尿病大鼠肾脏纤维化RhoA/ROCK/Nox4信号通路的影响

目的观察两色金鸡菊对糖尿病大鼠肾功能损伤及肾脏纤维化的影响,探讨其作用机制。方法 SD大鼠以高脂高糖饲料联合小剂量链脲佐菌素诱导建立糖尿病大鼠模型。将60只大鼠随机分为正常组、模型组、阳性药组和两色金鸡菊高、中、低剂量组,每组10只。各给药组给予相应剂量药物灌胃4周。Masson染色观察大鼠肾脏纤维物质沉积的变化;放射免疫法检测大鼠早期肾损伤各指标的水平;免疫组化检测大鼠肾组织RhoA、p-MYPT、Nox4、平滑肌肌动蛋白-α(α-SMA)的蛋白表达。结果与正常组比较,模型组大鼠肾脏纤维物质沉积、尿微量白蛋白、α1-微球蛋白(α1-MG)、β2-巨球蛋白(β2-MG)水平显著升高,RhoA、p-MYPT、Nox4、α-SMA蛋白表达显著升高(P<0.01);与模型组比较,两色金鸡菊高、中、低剂量组均不同程度地改善大鼠肾脏纤维物质的沉积,抑制尿液微量白蛋白、α1-MG、β2-MG表达水平,肾组织RhoA、p-MYPT、Nox4、α-SMA蛋白表达显著降低(P<0.05,P<0.01)。结论两色金鸡菊乙酸乙酯提取物可能通过RhoA/ROCK/Nox4信号通路抑制模型大鼠肾组织α-SMA的表达、肾脏纤维物质沉积,进而减轻模型大鼠早期肾脏损伤。

桔梗乙酸乙酯提取段对酒石酸泰乐菌素在小鼠血浆和肺组织中药动学的影响

采用高效液相色谱法(HPLC)测定不同时间点小鼠血浆和肺组织中酒石酸泰乐菌素的浓度,运用PKsolver程序及SPSS13.0统计软件处理和分析数据,计算相关药代动力学参数。结果显示:与对照组相比,乙酸乙酯组半衰期(t1/2)变短,Cmax增大、,药时曲线下面积(AUC)增加、Tmax与平均滞留时间(MRT0-inf_obs)缩短,而表观分布容积(Vz/F_obs)与消除率(Cl/F_obs)变小;肺组织分布图显示药物浓度高于对照组。结果表明:桔梗乙酸乙酯提取活性段对酒石酸泰乐菌素在小鼠体内的药动学特征有较大影响,表现为加快了酒石酸泰乐菌素的吸收速度,并增加了吸收程度;但药物在体内分布变窄,却增加了其在肺中的药物浓度。

两色金鸡菊提取物对大鼠肾小球系膜细胞增殖及纤维化因子表达的影响

目的:本研究通过高糖诱导的大鼠肾小球系膜细胞建立糖尿病肾病的体外模型,观察两色金鸡菊乙酸乙酯提取物(ethyl acetate extract of Coreopsis tinctoria,AC)对模型中细胞增殖及纤维化因子表达的影响。方法:采用AC对高糖诱导大鼠肾小球系膜细胞进行干预,将细胞分为正常组,模组组,AC不同质量浓度(25,50,100,150 mg·L^(-1))组。采用噻唑蓝(MTT)比色法,细胞增殖与活性检测(CCK8)法检测AC不同质量浓度对高糖诱导大鼠肾小球系膜细胞增殖的抑制作用;采用实时荧光定量PCR(Real-time PCR),蛋白免疫印迹法(Western blot)进一步观察AC不同质量浓度对肾脏纤维化蛋白转化生长因子-β_1(TGF-β_1),胶原蛋白Ⅳ(CollagenⅣ),纤维连接蛋白(FN)表达的影响。结果:AC 50,100,150 mg·L^(-1)组均能抑制高糖诱导大鼠肾小球系膜细胞的增殖(P<0.01);AC 25,100,150 mg·L^(-1)质量浓度组显著降低细胞中TGF-β_1的mRNA与蛋白表达水平(P<0.01);AC 100,150 mg·L^(-1)质量浓度组显著抑制细胞中CollagenⅣmRNA与蛋白的表达水平(P<0.01);AC 50,100,150 mg·L^(-1)质量浓度组显著抑制细胞中FN mRNA与蛋白的表达水平(P<0.01)。结论:两色金鸡菊乙酸乙酯提取物可能通过抑制大鼠肾小球系膜细胞增殖及纤维化因子表达发挥其对糖尿病肾病肾脏保护作用。

肺炎合剂的质量标准研究

目的对肺炎合剂的原质量标准进行复核、改进及提高,以便更好的控制药品质量。方法采用薄层色谱法(TLC),对肺炎合剂中连翘、紫苏子进行定性鉴别;以乙酸乙酯为提取溶剂,对肺炎合剂进行提取物含量测定的研究;采用中国药典方法,对肺炎合剂中含有的重金属、砷盐状况进行考察。结果肺炎合剂中连翘、紫苏子的薄层特征明显,阴性对照无干扰。肺炎合剂乙酸乙酯提取物含量测定方法简便,重现性好。三批肺炎合剂重金属含量均小于10μg/ml,砷盐含量均小于2μg/ml。结论肺炎合剂中连翘、紫苏子薄层色谱鉴别,方法可靠,重现性好。肺炎合剂乙酸乙酯提取物含量测定方法简便,重现性好,可作为肺炎合剂的质控方法之一。

皱环球盖菇不同极性萃取物抗氧化活性比较及成分分析

为考察皱环球盖菇子实体的抗氧化活性,利用溶剂萃取法得到皱环球盖菇子实体二氯甲烷、乙酸乙酯、正丁醇和水4种不同极性萃取物,选用二苯基三硝基苯肼自由基(DPPH)法、羟基自由基法和还原力法对4种萃取物进行体外抗氧化活性分析。结果表明,乙酸乙酯萃取物显示了最强的抗氧化活性;通过超高效液相色谱串联三重四级杆飞行时间质谱法(UPLC-Triple-TOF/MS)分析了皱环球盖菇乙酸乙酯萃取物中化学组成,从中鉴定出9种化合物,多数为核苷类物质,具有很好的抗氧化活性。研究结果为皱环球盖菇的开发提供了理论依据和技术支持。

新疆两色金鸡菊抗脂质过氧化及清除亚硝酸盐和阻断亚硝胺形成的能力

目的考察新疆两色金鸡菊的乙酸乙酯和正丁醇提取物抗脂质过氧化及清除亚硝酸盐和阻断亚硝胺形成的能力。方法采用响应面优化工艺条件提取新疆两色金鸡菊。提取物经石油醚萃取后,剩余水相分别用乙酸乙酯和正丁醇萃取,获得乙酸乙酯提取物(EAE)和正丁醇提取物(BE)。采用硫代巴比妥酸法测定提取物的抗脂质过氧化能力;采用盐酸萘乙二胺法测定提取物清除亚硝酸盐和抑制亚硝胺形成的能力。结果在亚油酸反应体系下,测得EAE和BE的抗脂质过氧化能力(SC_(50))分别为443.96±11.24、840.29±16.38μg·m L^(-1)。EAE的抗脂质过氧化能力与阳性对照维生素C之间无显著性差异;但显著弱于阳性对照叔丁基对羟基茴香醚。采用大鼠肝细胞匀浆反应体系测得的结果分别为23.59±3.67、60.37±4.27μg·m L^(-1)。EAE的抗脂质过氧化能力强于维生素C;但显著弱于叔丁基对羟基茴香醚。在清除亚硝酸盐和阻断亚硝胺形成的能力中,EAE和BE清除亚硝酸盐的能力(SC_(50))分别为122.10±1.03、118.23±1.30μg·m L^(-1);阻断亚硝胺形成的能力分别为2.3629±0.0113、2.1828±0.0107 mg·m L^(-1)。两种提取物清除亚硝酸盐和阻断亚胺形成的能力与叔丁基对羟基茴香醚之间无显著性差异,但均弱于维生素C。结论新疆两色金鸡菊的EAE具有很强的抗脂质过氧化能力,同时具有一定清除亚硝酸盐和阻断亚硝胺形成的能力。

从毛子角蒿分离得到新的倍半萜成分：绝对构型及生物学评价

作者从毛子角蒿中分离得N4种新的倍半萜（1—4）和一种已知的倍半萜，并且评估了所有化合物对细胞内钙离子流量、NO产生及人癌细胞的抑制活性。干燥的毛子角蒿植物粉末（20kg），用95％的乙醇室温提取，得到乙醇提取物（3kg），将乙醇提取物悬浮于水中，用石油醚、乙酸乙酪、正丁醇依次萃取，乙酸乙酯提取物（75g）经硅胶柱色谱分离，用三氯甲烷／甲醇梯度洗脱，得到部分A-F。

Ak．Phragmipediumcalurum中分离得到的苯丙素型化合物及其抗增殖活性

作者从Phragmipedium calurum中分离得到7种二苯乙烯苷类成分及1种alkylresorcinol，并且评估了其对多种人癌细胞株的抗增殖活性。Phragmipediumcalurum粗粉（60g干重），用乙醇／乙酸乙酯（1：1，v／v）提取，得到干燥提取物。提取物经硅胶柱色谱分离，用己烷／乙酸乙酯（3：1），己烷／乙酸乙酯（1：1），乙酸乙酯，乙酸乙酯／甲醇（7：3），乙酸乙酯／甲醇（1：1）洗脱。每种洗脱液中分离得到3-4个部分。己烷／乙酸乙酯（1：1）洗脱液，干燥后，经C18固相柱色谱（SPE）分离，用甲醇／水（1：1）平衡，用甲醇（30m1）洗脱。

从辐毛鬼伞中分离得到新的Guanacastane型二萜类化合物

作者从辐毛鬼伞中分离鉴定出13种苷类化合物，命名为radianspenesA．M，其中包括3种含内酰胺取代基的皂苷（化合物10．12）和一个二聚体（化合物13）。辐毛鬼伞M65菌株经PDA固体培养基培养，基质经乙酸乙酯／甲醇／乙酸提取，得9．3g提取物。提取物经反向MPLC色谱分离，甲醇／水系统分离，得到部分2S、2．5S。部分2S、2．5S分别经反向硅胶柱、SephadexLH-20、硅胶柱色谱分离（石油醚／乙酸乙酯洗脱），

从大果刺篱木中分离得到酚苷FlacourtosidesA—F

作者从大果刺篱木中分离得到6种化合物（FlacourtosidesA-F），并评估了其抗病毒活性。取大果刺篱木茎皮（1．8kg）经乙酸乙酯和甲醇提取，浓缩，得乙酸乙酯提取物（17．4g）。乙酸乙酯提取物经硅胶柱色谱分离，用正庚烷／丙酮／甲醇洗脱，得剑25个部分。部分18（286mg）经半制备C18柱色谱分离，