艾地骨化醇治疗绝经后骨质疏松症中国专家建议

艾地骨化醇是一种新型活性维生素D类似物,在1,25(OH)_(2)D_(3)基础上于2β位引入3-羟基丙氧基结构,与其他活性维生素D及类似物相比,具有更强的抑制骨吸收作用。临床证据显示艾地骨化醇治疗骨质疏松症具有良好的疗效和安全性。艾地骨化醇可增加骨质疏松症患者的骨密度,降低骨质疏松性椎体骨折和部分非椎体骨折风险,并且耐受性良好。艾地骨化醇在我国获批不久,临床经验仍需积累,中华医学会骨质疏松和骨矿盐疾病分会组织编写艾地骨化醇治疗绝经后骨质疏松症中国专家建议,以期为我国医务工作者合理使用艾地骨化醇提供帮助。

艾地骨化醇通过抑制CYR61的表达抑制骨肉瘤细胞的增殖和转移

目的探讨艾地骨化醇(eldecalcitol,ED-71)对骨肉瘤细胞增殖、转移和富含半胱氨酸蛋白61(CYR61)表达的影响。方法首先,使用Lipofectamine 2000将CYR61过表达重组pcDNA3.1质粒(pcDNA3.1-CYR61组)及阴性对照pcDNA3.1质粒(pcDNA3.1-NC组)转染到人骨肉瘤细胞系(U2OS)中,通过RT-PCR和Western blot验证转染效率。然后,将U2OS细胞分为对照组、ED-71组、ED-71+pcDNA3.1-NC组和ED-71+pcDNA3.1-CYR61组,对照组和ED-71组细胞未进行转染,ED-71+pcDNA3.1-NC组细胞转染pcDNA3.1-NC,ED-71+pcDNA3.1-CYR61组细胞转染pcDNA3.1-CYR61。转染后,对照组细胞不做药物处理,其余3组细胞用含有5 nmol/L艾地骨化醇的1640培养基培养24 h。CCK-8法和集落形成实验测定U2OS细胞的增殖能力,流式细胞术检测细胞凋亡,Transwell实验检测细胞迁移和侵袭,RT-PCR检测细胞中CYR61 mRNA水平,Western blot检测细胞中CYR61、Bax、Bcl-2、MMP-2、MMP-9、Fibronectin、E-cadherin和N-cadherin的蛋白表达水平。结果与pc-DNA3.1-NC组比较,pcDNA3.1-CYR61组细胞中CYR61的mRNA和蛋白表达水平升高(P<0.001)。与对照组比较,ED-71组中CYR61的mRNA和蛋白表达水平降低(P<0.001),OD_(450 nm)值降低(P<0.001),集落数量降低(P<0.001),细胞凋亡率升高(P<0.001),Bax蛋白表达水平升高(P<0.001),Bcl-2蛋白表达水平降低(P<0.001),迁移和侵袭细胞数降低(P<0.001),MMP-2、MMP-9和Fibronectin蛋白表达水平降低(P<0.001),E-cadherin蛋白表达水平升高(P<0.001),N-cadherin蛋白表达水平降低(P<0.001)。与ED-71+pcDNA3.1-NC组比较,ED-71+pcDNA3.1-CYR61组U2OS细胞中CYR61的mRNA和蛋白表达水平升高(P<0.001),集落数量升高(P<0.001),OD_(450 nm)值升高(P<0.001),细胞凋亡率降低(P<0.001),Bax蛋白表达水平降低,Bcl-2蛋白表达水平升高(P<0.001),迁移和侵袭细胞数升高(P<0.001),MMP-2、MMP-9和Fibronectin蛋白相对表达水平升高(P<0.001),E-cadherin蛋白表达水平降低(P<0.001),N-cadherin蛋白表达水平升高(P<0.001)。结论艾地骨化醇通过抑制CYR61的表达抑制骨肉瘤细胞的增殖和转移能力。

艾地骨化醇强制降解试验降解产物的合成

艾地骨化醇原料药在酸性、碱性、氧化、光照和高温条件下进行强制降解试验,生成(1R,2R,3R,5Z,7E)-2-(3-羟基丙氧基)-9,10-开环胆甾-5,7,10(19),24(25)-四烯-1,3-二醇(AD-1)、(1R,2R,3R,5E,6Z,8Z)-2-(3-羟基丙氧基)-9,10-开环胆甾-5(10),6,8(9)-三烯-1,3,25-三醇(AD-2)、(1R,2R,3R,5E,7E)-2-(3-羟基丙氧基)-9,10-开环胆甾-5,7,10(19)-三烯-1,3,25-三醇(AD-3)、(1R,2R,3R,5E,6E,8Z)-2-(3-羟基丙氧基)-9,10-开环胆甾-5(10),6,8(9)-三烯-1,3,25-三醇(AD-4)和(1R,2R,3R,14S,5E,6Z,8Z)-2-(3-羟基丙氧基)-9,10-开环胆甾-5(10),6,8(9)-三烯-1,3,25-三醇(AD-5)这5种降解产物。其中,AD-1和AD-5未见文献报道。该文合成了AD-1和AD-5,并优化了AD-4的合成工艺,产物经1 H NMR、13C NMR和MS结构确证。文章为艾地骨化醇的质量研究提供了一定的参考,同时为其生产、包装、贮存提供了依据。

固相萃取-HPLC法测定艾地骨化醇软胶囊中有关物质

目的:建立一种氨基固相萃取-HPLC法测定艾地骨化醇软胶囊中3个同分异构体的有关物质。方法:采用氨基固相萃取法,经乙酸乙酯-正己烷洗脱,无水乙醇提取,提取液经减压蒸干后用乙腈复溶,经ODS色谱柱(250 mm×4.6 mm, 5μm)分析,以水-乙腈为流动相,梯度洗脱,流速为1.0 mL·min^(-1),进样量为50μL,采用紫外检测器,在检测波长265 nm处检测有关物质。结果:固相萃取前处理可有效去除空白油干扰,艾地骨化醇与各杂质均可基线分离;在低温4℃条件下考察溶液稳定性,24 h时供试品溶液中各杂质面积百分比为98.6%~102.3%;杂质对照品溶液中,24 h时Tachy杂质、前体、艾地骨化醇和Trans杂质的面积百分比分别为101.2%、96.9%、98.5%和96.2%;艾地骨化醇、trans杂质、前体和tachy杂质的定量限分别为0.107、0.102、0.128、0.063μg·mL^(-1),检测限分别为0.054、0.051、0.064、0.031μg·mL^(-1);四者质量浓度分别在0.1~6.3μg·mL^(-1)、0.1~1.2μg·mL^(-1)、0.1~5.6μg·mL^(-1)和0.1~1.1μg·mL^(-1)范围内与峰面积呈良好线性关系,相关系数(n=5)分别为0.999 9、1.000、1.000和0.999 4;tachy杂质、前体和trans杂质回收率(n=6)分别为106.6%、88.6%和102.8%,RSD(n=6)分别为6.7%、3.1%和2.1%。3批样品含前体5.0%、5.0%和5.1%,杂质tachy、杂质Trans和未知单杂均未检出。结论:该方法操作简单,经济实用,安全性高,专属性强,重复性好,准确度高,为艾地骨化醇软胶囊及类似油性基质的药物质量研究提供可靠依据。

艾地骨化醇改善骨质疏松的新靶点—Mini-modeling骨形成

作为抗骨质疏松的基础用药,活性维生素D主要通过促进肠道对钙和磷的吸收,抑制甲状旁腺激素释放,维持血钙和血磷水平正常,进而保证骨骼健康。艾地骨化醇(eldecalcitol,ED-71)是活性维生素D的新型类似物,于2011年正式用于日本骨质疏松患病人群的临床治疗。艾地骨化醇不仅能够促进肠道钙吸收、抑制破骨细胞数量和活性,还可有效促进不依存于破骨细胞骨吸收的局灶性骨形成—"mini-modeling"骨形成,提升骨小梁连续性和增加骨小梁厚度,从而修复骨组织微损伤。