不同单位保存的艾氏腹水癌细胞(EAC)的某些生物学特性比较研究

目的 比较研究不同单位保种的EAC瘤株生物学特性的差异。方法 选择研究了北京市肿瘤研究所、山东省医学科学院药物研究所及武汉大学保种中心保存EAC细胞的大小 ,细胞株体外培养时对血清的依赖性 ,接种小鼠皮下建立肿瘤动物模型肿块生长曲线 ,建立的动物模型对环磷酰胺CTX治疗的敏感性等指标。结果 发现三个单位保存的EAC细胞形态及大小基本一致 ;北京EAC体外培养容易生长 ,7 5%NCS即可生长良好 ,山东及武汉EAC体外培养生长力较弱 ;皮下接种BALB c小鼠后 ,北京EAC最易生长肿瘤 ,武汉EAC次之 ,山东EAC最差 ;建立的动物模型对CTX治疗的敏感性 ,依次为北京EAC ,武汉EAC ,山东EAC ,用CTX治疗的抑瘤率相应为 82 9% ,71 9% ,50 %。结果 可见三个不同单位保种的EAC瘤细胞生物学特性确已存在显著差异。

不同单位保种的艾氏腹水癌细胞核型及DNA含量的比较研究

目的 比较研究三个单位保种的艾氏腹水癌细胞（EAC）染色体数目及DNA含量。方法 取腹腔接种EAC 6 d的KM小鼠，腹腔注射秋水仙碱，取腹水，经低渗处理，固定后涂片，染色，显微镜下染色体计数；腹水传代的EAC，用70%乙醇固定，流式细胞仪测DNA含量。结果 山东省医学科学院药物研究所（山东）、武汉大学典型培养物保藏中心（武汉）和北京市肿瘤研究所（北京）保种的艾氏腹水癌细胞株，其染色体均数分别为28.31±7.78、29.16±12.25、23.22±10.21条，方差分析表明，除北京与山东外，武汉与北京、武汉与山东两两比较有极显著差异（P<0.01）。直方图分析显示主流染色体范围分别为25-27、22-24、22-24条。北京艾氏腹水癌细胞 DNA含量最多，山东艾氏腹水癌细胞DNA含量最少。结论 三个单位的艾氏腹水癌细胞株在某些方面已出现差异。

金环蛇毒心脏毒对S180,EAC腹水癌细胞的细胞毒性作用

目的 :探讨金环蛇毒心脏毒对 S180 ,EAC腹水癌细胞的细胞毒作用。方法 :采用小白鼠腹腔和皮下接种 S180 ,EAC腹水癌细胞造成小白鼠腹水模型后腹腔注射金环蛇毒心脏毒。结果 :腹腔注射金环蛇毒心脏毒 ,能抑制肿瘤细胞的生长 ,降低接种率。但不能完全控制腹水和癌细胞的生长。体外试验表明有明显的细胞毒作用。台酚蓝染色镜检可见死细胞显著增加 ,腹水图片检查 ,给药后细胞膜破裂 ,纤维化坏死明显。结论

质子跨膜转运能够引起艾氏腹水癌细胞质膜表面质子化

荧光探针Ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｉｎ－ＰＥ在８ｍｍｏｌ／ＬＣａ２＋促进下，能够标记于艾氏腹水癌细胞质膜表面。在不影响膜结构的条件下，利用微量ＴｒｉｔｏｎＸ－１００消除膜表面与介质之间的质子浓度差，通过酸滴定实验，能够得到膜表面ｐＨ与ＦＰＥ荧光强度之间的相关曲线。根据此曲线测定了艾氏腹水癌细胞质膜表面ｐＨ：当介质ｐＨ为７．２时，其膜表面ｐＨ为６．７，其质子浓度大约为介质中的３倍，质子跨膜转运抑制剂ＣＣＣＰ和尼日利亚菌素均能消除膜表面与介质之间的质子浓度差。表明质子跨膜转运确实能够引起艾氏腹水癌细胞质膜表面质子化。

小鼠艾氏腹水癌细胞质膜质子转运活性驱动的质膜和脂质体的融合

本文在质子泵驱动膜融合模型的基础上,进一步研究了小鼠艾氏腹水癌细胞质膜质子转运活性驱动的质膜和脂质体的融合.结果表明:在对照条件下,艾氏腹水癌细胞可以利用内源底物引起质子跨膜转运,后者可以驱动细胞和脂质体的融合.CCCP和尼日利亚菌素对质膜质子转运活性的抑制率分别为69.0％和80.1％,同时膜融合程度亦分别降低了85.7％和90.4％,证明质膜质子转运活性是驱动膜融合的主要因素.与此同时,在CCCP和尼日利亚菌素的影响下,细胞膜表面电位由对照条件下的17.7mV分别升高为27.2mV和27.5mV,膜表面电荷密度由对照条件下的0.86μC/cm^2分别升高为1.37μC/cm^2和1.39μC/cm^2,提示质膜质子转运活性可能引起膜表面质子化,从而为质子泵驱动膜融合模型提供了另一个实验证据.

不同来源的艾氏腹水癌细胞株蛋白质特性的电泳及免疫组织化学比较研究

目的比较 3种来源的艾氏腹水癌 (Ehrlichascitescarcinoma,EAC)细胞蛋白质的特性。方法采用SDS 聚丙烯酰胺凝胶电泳 (polyacrylamidegelelectrophoresis ,PAGE)和免疫组织化学染色的方法观察 3种来源的EAC细胞蛋白质组成及Gai、TrkA、PDGF A、CDK2和NF κBp6 5抗体蛋白质表达。 结果电泳结果显示 ,北京来源的EAC蛋白质条带数最多 (2 8条 ) ,其次是山东来源的EAC(2 5条 ) ,武汉来源的EAC最少 (2 2条 ) ;免疫组织化学染色法测定 3个来源的EAC细胞的Gai、TrkA、PDGF A、CDK2和NF κBp6 5抗体蛋白质表达 ,结果不同来源的EAC与抗体的反应情况不同 ,山东来源的EAC 5种抗体的阳性表达分别为 0 %、 2 3.0 %、 0 %、 8.5 %和83.3%,北京来源的EAC分别为 77.8%、 6 .0 %、 9.0 %、 2 4 .0 %和 91.4 %,武汉来源的EAC分别为78.3%、4 .8%、8.0 %、2 7.8%和 10 0 %。结论 3种来源的EAC细胞蛋白质组成不仅有定量差异 ,而且有定性差异。

艾氏腹水癌细胞膜质子跨膜外转运与脂质体融合:Ca^(2+)及脂质体膜脂成份的作用

研究了Ca2 + 及脂质体膜脂成分对艾氏腹水癌细胞质膜质子跨膜转运驱动的脂质体融合中的作用。结果表明Ca2 + 促进质子跨膜转运驱动的质子跨膜转运驱动艾氏腹水癌细胞与脂质体间的融合 ,膜融合程度与膜表面电荷密度的相关曲线显示 ,在下述条件膜融合与膜表面电荷密度呈正相关 :(1)介质Ca2 + 浓度小于 6mmol/L ,脂质体磷脂组成为PE∶PC∶CL =6∶2∶2 ;(2 )介质Ca2 + 浓度为 6mmol/L ,脂质体磷脂组成为PE∶PC∶CL =6∶2∶2 ;(3)无Ca2 + 介质 ,脂质体磷脂组成为PE∶CL =8∶2 ;(4)介质Ca2 + 浓度 10mmol/L ,脂质体磷脂组成为PE∶CL=8∶2。脂质体PE/PC含量对膜融合的影响表明 ,当PE含量减少PC含量增加时 ,膜融合程度不断下降 ,提示影响膜融合的另一因素可能是生物膜结构形成“柄”融合中介体的能力。

三单位保存的艾氏腹水癌细胞株及克隆细胞蛋白质表达

目的 比较三个单位保存的艾氏腹水癌 (EAC)细胞株及克隆细胞的蛋白质表达。方法 对北京市肿瘤研究所 (北京 )保存的EAC进行克隆培养 ,从中选出 5株克隆 ;对武汉大学保种中心 (武汉 )、山东省医学科学院药物研究所 (山东 )及北京保存的EAC细胞株及 5株克隆细胞的SDS PAGE电泳图谱及免疫组化蛋白质分布进行了对比。结果 武汉、山东及北京保存的EAC的电泳条带数分别为 2 2、2 5及 2 8条 ,而克隆细胞E2G8为 2 6条带。三单位EAC瘤细胞对 5种抗体做免疫组化染色 ,与 1株抗体反应的阳性细胞比例均较高 ,差异无显著性 (P >0 0 5 ) ,与另 4种抗体反应的阳性细胞率差异有显著性 ;5株克隆细胞对 10种抗体作免疫组化染色 ,其中克隆细胞E2G8、E2F4与 7种抗体反应阳性 ,E2C6与 8种抗体反应阳性 ,E1G5、E2B5与 6种抗体反应阳性。克隆细胞一旦与某种抗体反应阳性 ,阳性细胞的比例即在 85 %以上。

对艾氏腹水癌细胞和肝、肾细胞外源血卟啉荧光观察

给接种艾氏腹水癌小鼠的腹膜腔内注射血卟啉衍生物(HPD)后,用荧光和光学显微镜检查小鼠肝、肾细胞和腹水癌细胞发射荧光情况。24小时后,发射荧光的肝细胞数稍大于其他两种细胞。以后,发射荧光的癌细胞数迅速增加,72小时,达到43.1％,此后,迅速减少,与此同时发射荧光的肾细胞数逐渐增加。癌细胞在试管内与HPD结合,2小时后,100％癌细胞发射荧光。发射明亮橘红色荧光的三种细胞,在胞浆内存在粗大颗粒,荧光较弱者,胞浆内颗粒较细而均匀。

金环蛇蛇毒对S180,EAC腹水癌细胞的细胞毒性作用

目的 探讨金环蛇毒对 S1 80 ,EAC腹水癌细胞的细胞毒性作用。 方法 采用小白鼠腹腔和皮下接种 S1 80 ,EAC腹水癌细胞造成小白鼠腹水模型后腹腔注射金环蛇毒。 结果 腹腔注射金环蛇毒 ,能抑制肿瘤细胞的生长 ,降低接种率。但不能完全控制腹水和癌细胞的生长。体外试验表明有明显的细胞毒作用。台酚蓝染色镜检可见死细胞显著增加 ,腹水图片检查给药后细胞膜破裂 ,纤维化坏死明显。 结论 能延长小白鼠存活时间。

rhTNF－α对昆明种小鼠艾氏腹水癌细胞杀伤作用的研究

昆明种小鼠腹腔接肿艾氏腹水癌细胞，３天后腹腔注射重组肿瘤坏死因子（ｒｈＴＮＦ－α），隔日１次，共４次。用药后第７日两剂量组小鼠腹水癌细胞平均浓度分别为１．３±０．２×１０（１０）／Ｌ、１．６±０．２×１０（１０）／Ｌ，比对照组２．５±０．４×１０（１０）／Ｌ大幅度降低（Ｐ＜０．０１）。苔盼兰染色结果两实验组腹水中瘤细胞平均死亡率分别为４６±６．１％、４３±５．６％，比对照组１９±３．７％显著升高（Ｐ＜０．０１）。用药小鼠平均存活时间分别为２３±３．２天、１９±３．３天，比对照组１３±３．６天有所延长。提示ｒｈＴＮＦ－α对艾氏腹水瘤细胞有杀伤作用。

离子型^(211)At致体外艾氏腹水癌细胞超微结构的改变

报道离体培养的小鼠艾氏腹水癌细胞用37—222kBq/ml的离子型^(221)At分四个剂量处理,透射电镜观察,发现细胞内膜系统受到严重辐射损伤。剂量越大,损伤越严重。辐射敏感的靶部位为细胞核(核膜)、线粒体,其形态变化最为显著。

鸦胆子油有效成分油酸对艾氏腹水癌细胞DNA合成的影响

本文利用氚—胸腺嘧啶核苷(~3H-TdR)掺入法研究了油酸对小鼠艾氏腹水癌细胞DNA合成的影响,其最高抑制强度为66.7%,揭示了油酸能够干扰艾氏腹水癌细胞DNA的合成。

玻璃化冻存小鼠艾氏腹水癌细胞的超微结构和功能研究

研究了小鼠艾氏腹水癌细胞在含有不同低温保护剂的玻璃化冻存液内，快速降温冷冻保存１～７ｄ后细胞超微结构和功能的变化．结果表明，以９０％ＶＳｌ（含１８．５％Ｗ／ＶＤＭＳＯ，１４．Ｏ％Ｗ／Ｖ乙酰胺，９．０％Ｗ／Ｖ丙二醇，４．１％Ｗ／Ｖ分子量６０００的聚乙二醇）作为冻存液，快速冻存、复温后的艾氏腹水癌细胞，存活率为７ｌ％，绝大多数细胞保持完好的超微结构，体外ＤＮＡ增殖能力仍能保持较高的水平。小鼠体内接种后的长瘤情况与新鲜对照组相比没有显著差异．因此，复苏后的艾氏腹水癌细胞可用于该癌细胞模型的接种传代．这种快速、简便的方法可应用于艾氏腹水癌细胞的深低温保存．

小白鼠艾氏腹水癌细胞Mg^(++)-ATP酶的细胞化学观察(光学及电子显微镜)

本实验采用Wachstein-Meisel显示ATP酶的方法,对小白鼠艾氏腹水癌细胞的Mg^(++)-ATP酶进行光学及电子显微镜下的细胞化学观察,见到Mg^(++)-ATP酶集中分布在癌细胞的质膜表面和线粒体内,线粒体内存在的Mg^(++)-ATP酶对戊二醛极为敏感,一经戊二醛固定后,线粒体内存在的Mg^(++)-ATP酶反应消失。但质膜上Mg^(++)-ATP酶的沉淀反应却不受戊二醛的影响,固定后仍可见到强的沉淀反应。L-半胱氨酸可加强质膜上和线粒体内ATP活性酶所产生的阳性反应,而经NaF,PCMB处理后,其阳性的沉淀反应消失。

3',5'-cAMP对不同瘤龄的艾氏腹水癌细胞内cAMP免疫荧光细胞化学反应及其磷酸二酯酶的细胞化学反应与癌细胞膜表面某些形态学变化的关系

本工作用外源性cAMP加氨茶碱对小鼠艾氏腹水癌细胞进行了多方面的研究,观察到外源性3′,5′-cAMP不仅对小鼠艾氏腹水癌细胞增殖有显著的抑制作用。在接种后第9天,看到癌细胞增殖受到抑制的同时,大多数癌细胞胞质内的cAMP免疫荧光细胞化学反应增强,癌细胞内3′,5′-cAMP磷酸二酯酶(PDE)活性受到抑制,此外,还观察到某些癌细胞表面膜上微绒毛消失或变短以及对植物凝集素的凝集反应减弱等现象,这些癌细胞的逆转表现的变化均与不同瘤龄的癌细胞有关,如经外源性cAMP处理后,cAMP-PDE活性降低出现的最早,均在接种后5~7天时最为明显,cAMP免疫荧光细胞化学反应是在接种后第9天最为显著,癌细胞表面膜上的微绒毛消失和变短的细胞比数明显增多,对植物凝集素的凝集反应减轻都是在接种后7~9天时最为显著,而cAMP对小鼠艾氏腹水癌细胞的增殖抑制作用是在接种后第9~11天最为明显。根据上述实验结果,本文讨论了外源性cAMP加氨茶碱对腹水癌细胞的抑制作用和癌细胞内cAMP荧光反应,3′,5′-cAMP-PDE活性以及癌细胞表面膜上微绒毛形态学变化的因果关系。

复方中药和3′,5′环腺苷酸(cAMP)对小鼠艾氏腹水癌细胞的抑制效果与癌细胞内cAMP含量及cAMP-PDE活性变化关系

本工作用复方白蛇酒及外源性cAMP对小鼠艾氏腹水癌进行比较实验,通过实验观察到该复方制剂和外源性3’,5’-cAMP对小鼠艾氏腹水癌细胞的增殖均有显著的抑制作用,癌细胞增殖受到抑制的同时,癌细胞内3’,5’-cAMP含量显著提高;控制cAMP水平的3’,5’-cAMP磷酸二酯酶(PDE)活性受到抑制。该复方之所以能提高癌细胞内cAMP水平可能是由于细胞内3’,5’-cAMP-PDE.活性受到抑制所致。本工作进一步将该复方组分的两部份(六味中草药和蟾蜍酒)与原复方白蛇洒分别进行实验比较,观察到前两组癌细胞内3’,5’-cAMP水平和3’,5’-cAMP-PDE的活性均未看到显著变化,本工作可为中医临床用药和疗效机理提供一定的理论依据。

补中益气汤对EAC小鼠癌细胞膜LPO含量的影响

利用测定癌细胞膜表面过氧化脂质(LPO)含量的方法,研究了补中益气汤对艾氏腹水癌(EAC)小鼠细胞膜 LPO 含量的影响。实验结果表明,补中益气汤对 EAC 小鼠癌细胞膜上 LPO 的生成有显著的对抗作用,这一作用可能是补中益气汤抑制小鼠 EAC 的作用机理之一。

补中益气汤对EAC小鼠癌细胞膜LPO含量的影响

本文利用测定癌细胞膜表面过氧化脂质(LPO)含量的方法,研究了补中益气汤对艾氏腹水癌(EAC)小鼠细胞膜 LPO 含量的影响。实验结果表明,补中苴气汤对 EAC 小鼠癌细胞膜上 LPO 的生成有显著的对抗作用,这一作用可能是补中益气汤抑制小鼠 EAC 的作用机理之一。

胸腺素对Ehrlich腹水癌细胞MI影响的研究

小鼠经Ehrlich腹水癌细胞感染后,随着瘤龄增长,胸腺组织逐渐萎缩,胸腺淋巴细胞与骨髓细胞有丝分裂指数降低,机体免疫力减弱,癌细胞有丝分裂指数持续增高,荷瘤小鼠注射胸腺素后,其骨髓细胞和胸腺淋巴细胞有丝分裂指数,在不同瘤龄期均有明显提高,而瘤细胞有丝分裂指数下降,说明外源性胸腺素能延缓胸腺萎缩,促进造血功能,提高机体免疫力,从而对肿瘤细胞的增长具有间接的抑制作用.