吸毒人群尿液、血液平行检测艾滋病病毒1型抗体结果分析

目的 利用吸毒人群尿液和血液标本比较不同方法检测艾滋病病毒1型(HIV-1)抗体结果的一致性。方法 平行采集强制戒毒所234名吸毒者的尿液和血液标本,应用酶联免疫吸附试验(ELISA)分别测定不同标本中HIV-1抗体。结果234人中5人血液标本HIV-1抗体为阳性,其平行尿液标本中4人阳性,另1人蛋白印迹试验确认为阴性。结果显示:两种标本检测HIV-1抗体的符合率为99.6％。结论 尿液标本ELISA试剂的检测结果是可靠的。

新入伍人群单纯疱疹病毒Ⅰ型血清抗体检测分析

目的了解入伍新兵人群中单纯疱疹病毒Ⅰ型(HSV-Ⅰ)感染IgG抗体的流行分布,为预防提供科学依据。方法利用酶联免疫吸附试验(ELISA)对本区近4年来自8个省市的360名入伍新兵血清进行HSV-ⅠIgG抗体检测。结果2002,2004,2006,2008年各年入伍新兵血清HSV-ⅠIgG抗体阳性率呈下降趋势,分别为90.00%,86.67%,85.55%,84.44%,平均86.67%;地区间差别明显,广西(96.00%)和江苏(92.98%)较高,甘肃(74.42%)和湖北(78.13%)较低;入伍前工作与否者的抗体阳性检出率差异无统计学意义。结论入伍新兵人群中HSV-Ⅰ感染水平较高,呈逐年降低趋势并有非常显著性地区差异;新兵入伍期间,应采取健康教育等有效预防措施,降低人群HSV-Ⅰ感染水平。

脊髓灰质炎病毒Ⅰ型单克隆抗体的制备

目的:为建立脊灰病毒Sabin株Ⅰ型特异的单克隆抗体.方法:以Vero细胞增殖病毒并用蔗糖密度梯度离心法纯化后,用病毒免疫SPF级Balb/c小鼠.取小鼠免疫脾淋巴细胞与SP2/0-Ag14骨髓瘤细胞进行细胞融合,通过间接ELISA法筛选抗体阳性的杂交瘤细胞,并用有限稀释法克隆化.用细胞培养法制备脊灰病毒单抗,并以中和试验测定单抗效价.结果:获得了8株分泌抗脊灰病毒Sabin株Ⅰ型单克隆抗体的杂交瘤细胞株,其中1株G8G7能够稳定分泌抗体.间接ELISA法测得单抗的效价为1:8,中和试验测得中和抗体的效价为1:58.结论:G8G7分泌的抗体为抗脊灰病毒Sabin株Ⅰ型特异的单克隆抗体.

鸭肝炎病毒Ⅰ型基因片段的原核表达及单克隆抗体的制备

根据Genebank上已报道的鸭肝炎病毒Ⅰ型基因的全长序列,设计了1对引物,通过RT-PCR方法扩增出特异的DHV-Ⅰ基因片段;将该片段克隆入原核表达载体pET-28a,转化大肠杆菌Rosetta-gami(DE3),并用IPTG诱导表达后,通过Ni柱纯化,获得了表观分子量在20kD左右的融合表达蛋白;将表达纯化后的蛋白作为抗原,免疫BALB/c健康小鼠,筛选和制备了1株DHV-Ⅰ单克隆抗体细胞株。Western-blot及ELISA分析表明:表达的重组蛋白均能与鸭DHV-Ⅰ阳性血清和制备的DHV-Ⅰ单克隆抗体产生反应。同时,制备的DHV-Ⅰ单克隆抗体除了能与重组蛋白反应,还能识别天然的DHV-Ⅰ病毒蛋白。

鸽Ⅰ型副粘病毒病 HI抗体水平消长规律的研究

对鸽Ⅰ型副粘病毒病的ＨＩ抗体水平动态进行了调查，发现乳鸽母源抗体水平在１０日龄时最高，达４．４ｌｇ２；鸽Ⅰ型副粘病毒病油苗一免后可保持４个月的较高抗体水平；二免后可保持近１年的高抗体水平；三免之后激发的抗体水平只能保持半年的较高水平。由此提出鸽Ⅰ型副粘病毒病的合理免疫程序。

鸽Ⅰ型副黏病毒F蛋白单克隆抗体的制备及鉴定

为了制备鸽Ⅰ型副黏病毒融合蛋白(F蛋白)的单克隆抗体,以鸽Ⅰ型副黏病毒F基因抗原重组蛋白免疫BALB/C小鼠,得到能稳定分泌抗F蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞3株。对效价最高的一株进行特性测定,结果显示其腹水抗体效价达到6.4×104以上,细胞培养上清液的效价达1︰800,其抗体亚类为lg G 2b,轻链为κ链,染色体数目为98条;血凝抑制试验显示单抗没有血凝抑制效价;间接ELISA进行特异性试验表明单抗与鸡传染性支气管炎病毒、鸡减蛋综合征病毒、鸡马立克氏病病毒、猪瘟病毒、猪传染性胃肠炎病毒、羊痘病毒、大肠杆菌、沙门氏菌没有交叉反应,而与鸡新城疫病毒具有较强的交叉反应。PPMV-1 F蛋白单克隆抗体的制备为鸽Ⅰ型副黏病毒病新诊断方法的建立奠定了基础。

人免疫缺陷病毒Ⅰ型Vif蛋白的原核表达、纯化及单克隆抗体制备

目的:克隆、表达、纯化人免疫缺陷病毒Ⅰ型(HIV-1)Vif蛋白,制备其单克隆抗体。方法:提取感染了HIV的细胞基因组DNA,PCR扩增vif基因,插入表达载体pET32a,转化大肠杆菌BL21(DE3)获得工程菌株,IPTG诱导蛋白表达,Western印迹鉴定目的蛋白,亲和层析纯化目的蛋白;免疫BALB/c小鼠,制备单克隆抗体。结果:构建了Vif蛋白的原核表达载体vif-pET32a,并在大肠杆菌中获得高表达,目的蛋白以包涵体形式存在;纯化获得高纯度的重组Vif蛋白,蛋白浓度可达0.56mg/mL;建立了抗Vif蛋白单克隆抗体细胞株,制备了腹水,滴度可达1∶16×106,抗体纯化后保持了活性和特异性。结论:在原核表达系统中表达、纯化了重组Vif蛋白,制备了针对Vif蛋白的单克隆抗体,为研究Vif蛋白的功能和抗原性奠定了基础。

Ⅰ群4型禽腺病毒卵黄抗体在鸡体内的消长规律

将Ⅰ群4型禽腺病毒卵黄抗体注射到SPF鸡体内,通过测定不同时间点鸡血清的抗体效价,确定卵黄抗体在体内的消长规律。结果发现,注射后6 h即可在实验鸡体内检测到较高水平的抗体,平均中和效价达到1:82,12 h抗体水平达到高峰,平均中和效价为1:124,然后逐渐降低,到12 d抗体平均效价降至1:13。卵黄抗体注射后3、6、9、12 d,利用Ⅰ群4型禽腺病毒进行攻毒试验,结果显示,抗体注射后6 d(体内平均中和抗体为1:36)能起到完全保护作用,9 d(体内平均中和抗体为1:22)只能产生部分保护作用,12 d(体内平均中和抗体为1:13)完全起不到保护作用。

Ⅰ型牛疱疹病毒VP22蛋白原核表达及多克隆抗体制备

为制备Ⅰ型牛疱疹病毒(BHV-1)VP22蛋白抗体,选用国内分离株BHV-SHJS,在其UL49基因核酸序列第517至747位间设计引物扩增目的片段,构建pET-28a-UL49(172-249 aa)原核表达载体,转化载体至BL21(DE3)感受态细胞;经IPTG诱导表达并纯化VP22(172-249 aa)融合蛋白后;用该融合蛋白作抗原,以皮下注射的方式免疫Balb/c小鼠制备多克隆抗体;经间接ELISA、Western blot及间接免疫荧光(IFA)方法检测其灵敏度和特异性。结果表明,表达的VP22蛋白以包涵体形式存在;ELISA测定结果显示,制备的VP22蛋白抗体效价达到1∶16000;Western blot和IFA结果显示,制备的多克隆抗体能与BHV-SHJS VP22特异性结合,具有良好的反应原性。试验结果为后期BHV-1感染宿主细胞在机制方面的研究和VP22功能的探究奠定了基础。

Ⅰ群4型禽腺病毒蛋黄抗体中和效价与攻毒保护相关性研究

为了研究Ⅰ群4型禽腺病毒蛋黄抗体中和效价与攻毒保护的相关性,取3批实验室试制抗体,分别通过预防试验和紧急预防试验模型进行抗体中和效价与靶动物攻毒保护力相关性试验。预防试验:21日龄SPF鸡经颈背部皮下注射中和效价分别为1:64、1:128、1:256的蛋黄抗体,每只0.5 mL,168 h后接种Ⅰ群4型禽腺病毒检验用强毒,观察10日。紧急预防试验:先给21日龄SPF鸡接种Ⅰ群4型禽腺病毒检验用强毒,36 h后经颈背部皮下注射不同中和效价的抗体,每只0.5 mL,观察10日。结果表明:当中和效价为1:128时,攻毒保护率均达到80%以上;当中和效价为1:256时,攻毒保护率均达到90%以上。故本研究结果表明,抗体效价不低于1:128时可有效抵御Ⅰ群4型禽腺病毒的攻击。

用B病毒ELISA和人单纯疱疹病毒Ⅰ型酶免疫法检测食蟹猴血清中B病毒相关抗体的研究

采用B病毒 (BV)作为抗原的ELISA法和人单纯疱疹病毒I型 (HSV -1 )的酶免疫 (EIA)法分别检测食蟹猴血清中BV抗体和BV相关抗体 ,结果BVELISA法和HSV -1EIA法阳性检出率均为 1 0 9% (5 /46) ,两者符合率为 1 0 0 %。这一结果为食蟹猴的BV抗体监测和进出口检验提供参考。

肝肾微粒体Ⅰ型抗体阳性的慢性丙型肝炎患者病毒复制水平低

大多数肝肾微粒体抗体(抗-LKM1)阳性的成人患者,血清抗-HCV和HCV RNA常阳性。然而,这些患者中丙型肝炎病毒(HCV)感染在进展性肝损害中所起的作用及HCV感染与抗-LKM1之间的关系如何仍存在着争论。本文作者采用竞争性逆转录PCR(cRT-PCR)法测定了抗-LKM1和抗-HCV均阳性的患者血清中的HCV RNA病毒滴度。

汕头市部分人群中嗜人T细胞I型病毒抗体的检测

汕头市部分人群中嗜人Ｔ细胞Ｉ型病毒抗体的检测杨棉华，陈国敏，庄春兰，余秀葵，曾毅关键词人Ｔ细胞Ｉ型病毒（ＨＴＬＶ－１），白血病／淋巴瘤，抗体检测直到１９８０年，美国和日本的科学家才分离出第一个人类逆转录病毒ＨＴＬＶ－Ｉ［１，２］，发现ＨＴＬＶ－Ｉ与人...

猫疱疹病毒Ⅰ型US3基因的原核表达及多克隆抗体的制备

为制备猫疱疹病毒Ⅰ型(FHV-1)US3蛋白的多克隆抗体,本研究通过PCR方法扩增US3基因,将其克隆至原核表达载体pET-32a中,构建重组质粒pET-US3;然后转化大肠杆菌BL21(DE3),经1mmol/L IPTG诱导表达His-US3重组蛋白。SDS-PAGE和Western blot试验表明,该重组蛋白为可溶性表达,并且具有较好的反应原性。将切胶纯化后的重组蛋白免疫小鼠制备多克隆抗体,并通过间接ELISA检测其效价达1:10,000以上。Western blot和间接免疫荧光试验显示,多克隆抗体能够与US3蛋白特异性结合。US3多克隆抗体的制备为US3缺失株的检测及进一步研究US3蛋白的生物学功能奠定了基础。

ELISA法检测人体血清中HIV-1+2型抗体结果不确定度评定

目的 对酶联免疫吸附试验 (ELISA)法检测人体血清中艾滋病病毒 (HIV) 1+2型抗体结果的不确定度进行评定 ,降低初筛试验出现假阴性结果的风险。方法 按照JJF10 5 9- 1999《测量不确定度评定与表示》 ,对采用ELISA法、使用生物梅里埃中国有限公司提供的HIV 1+2型抗体检测诊断试剂盒 ,进行人体血清中HIV 1+2型抗体检测 (初筛 )结果所产生的不确定度进行评定。结果 通过对影响检测结果不确定度分量的分析和量化 ,求出被测量的标准不确定度 [uc(ΔA) =0 0 0 5 ]和扩展不确定度 (U =0 0 10 ,k=2 ) ,给出各分量对检测结果不确定度的相对贡献 ,对检测结果进行了表述 (ΔA =0 191 0 0 97 0 0 10 ,k=2 )。结论 用包含有测量不确定度的结果对检测结果做完整表述 ,可为避免假阴性结果的出现提供科学依据。

固相阻断ELISA法检测口蹄疫病毒O型抗体的不确定度评定

目的:以口蹄疫病毒O型抗体(固相阻断ELISA法)检测的不确定度评定为例,以两种方法评定检测的不确定度。方法:分别使用“影响因素分析法”和“对照样品法”对检测口蹄疫病毒O型抗体的不确定度进行评定。结果:“影响因素分析法”的合成不确定度为0.1297,扩展不确定度为0.2593;“对照样品法”的合成不确定度为0.1040,扩展不确定度为0.2080。结论:对新方法进行不确定度评定时,“影响因素分析法”更适用,可帮助检测员更了解试验过程及注意事项,而“对照样品法”直接评估该试验过程的合成不确定度,减少大量计算过程,快速得出结论。

鹅Ⅰ型禽副黏病毒F基因重组质粒的构建及其DNA免疫

通过RT PCR扩增出鹅Ⅰ型禽副黏病毒GPMV/QY97 1株F蛋白基因的cDNA ,并将F基因cDNA克隆到含CMV启动子的pCI载体上 ,构建这一基因的真核表达质粒pC GPMVF ,以此质粒肌肉注射 3周龄非免疫鸡 ,并分别于免疫后第 2、4、6周通过ELISA方法检测抗体水平。结果证明 ,用重组质粒pC GPMVF免疫鸡 。

太子参须对禽Ⅰ型副黏病毒疫苗的增强作用

为了探讨不同剂型太子参须对禽I型副黏病毒灭活疫苗免疫效果的影响,本试验将240只4日龄雏番鸭随机分成3个太子参须试验组(太子参须针剂组、太子参须颗粒组、太子参须提取干粉组)和未给药免疫组,除未给药免疫组外,其他组按每天每只鸭0.5 mL或0.5 g口服给药,连用7 d。7日龄时,各组番鸭均颈背部皮下注射禽I型副黏病毒灭活疫苗,于不同时间点进行体重测定、抗体检测、免疫器官指数测定。结果显示,与未给药免疫组相比,各太子参须试验组免疫21 d后的体重显著升高(P<0.05),且太子参须提取干粉组至免疫后35 d仍最优;免疫后14、21、28 d和35 d,太子参须提取干粉组的抗体水平显著提升(P<0.05);免疫后5 d和7 d,各太子参须试验组番鸭平均胸腺指数显著增高(P<0.05),至免疫后21 d,太子参须针剂组番鸭平均胸腺指数仍显著增高(P<0.05);免疫后5、7、14 d和21 d,太子参须提取干粉组番鸭的平均脾脏指数和平均法氏囊指数均显著增高(P<0.05)。结果表明,太子参须提取干粉组对禽I型副黏病毒番鸭体重、抗体水平、免疫器官指数有显著促进作用。本试验为太子参须制剂对禽I型副黏病毒疫苗的增强效果和临床应用提供参考依据。

不同禽源的禽Ⅰ型副黏病毒株毒力、免疫原性及抗原相关性研究

从病死的鸡、鹅、鸽中分离到3株禽I型副黏病毒(CPMV、GPMV、PPMV)。毒力测定结果显示,CPMV、GPMV的毒力与鸡新城疫病毒(NDV)F48E9株的毒力相似,为强毒型;PPMV的毒力与鸡NDVLaSota株的毒力相似,为自然弱毒株。对该分离株F基因裂解位点的序列分析结果表明,CPMV、GPMVF裂解位点氨基酸序列为112K-R-Q-K-R-F117,符合强毒株的序列特征;PPMV F裂解位点氨基酸序列为112G-R-Q-G-R-L117,属于弱毒株的特征性序列。将该3株病毒制成灭活疫苗,分别免疫鸡,结果都能诱导鸡体产生较高水平的HI抗体;再分别以CPMV、GPMV攻击免疫鸡群,结果显示免疫鸡群可得到保护,而非免疫鸡群被攻击后全部致死。用HI方法检测3株病毒与Lasota株之间的交叉血凝抑制试验,结果表明LaSota与GPMV两毒株间的抗原性无明显差异,LaSota与CPMV、PPMV两毒株间的抗原性有较小的差异。本研究将有助于进一步开展禽Ⅰ型副黏病毒的致病机制和新型疫苗等方面的研究。

对HIV流行地区人群抗庚型肝炎病毒抗体的调查

目的 在艾滋病病毒 (HIV)流行地区调查庚型肝炎 (庚肝 )病毒 (HGV)的感染率 ,并探讨其对HIV /AIDS患者病情进展的影响。方法 对某HIV流行地区 647名村民询问病史 ,检测血清抗 HGV和抗 HIV。结果 647人中检测出抗 HGV 3 3 3例 ( 51 5% ) ,抗 HIV 3 2 8例 ( 50 7% ) ,混合感染HGV和HIV 2 10例 ( 3 2 5% ) ;其中≥ 2 0岁、有供血浆史或HIV感染者是HGV感染的高危人群。HIV感染合并HGV人群与不合并感染HGV人群相比较 ,其患AIDS或AIDS死亡者所占比例较低。结论 供血浆传播是造成该地区HGV和HIV流行的主要原因 。